專利名稱：一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
酯酶亦稱羧基酯酶，是指可以水解羧酯鍵的酶，但該酶也能催化合成低級(jí)脂肪酸酯。由于該酶既能催化酯的合成，又能催化酯的分解。因此，白酒業(yè)習(xí)慣稱之為酯化酶或酯分解酶。己酸乙酯是濃香型白酒的主體香味物質(zhì)，也是曲酒優(yōu)質(zhì)品率低的主要限制因素。 己酸和乙醇在酯化酶作用下合成己酸乙酯。是己酸乙酯合成的主要途徑。而酯化酶則是大曲微生物的代謝產(chǎn)物，酯化酶在大曲中含量多少?zèng)Q定了大曲的質(zhì)量，酯化酶在白酒生產(chǎn)中能卓有成效地提高了出酒率；突出了濃香型白酒己酸乙酯的主體香；酒體協(xié)調(diào)，促進(jìn)了酯化反應(yīng)；較好地解決了酒質(zhì)和出酒率的矛盾；產(chǎn)酒醇甜，賦予成品酒良好的風(fēng)味。因此，對(duì)大曲中酯化酶產(chǎn)生菌進(jìn)行研究，篩選出酯化能力強(qiáng)的菌株，對(duì)其生長繁殖、產(chǎn)酶特性以及營養(yǎng)需求進(jìn)行研究，既可以指導(dǎo)大曲生產(chǎn)以提高大曲品質(zhì)，而提高白酒的優(yōu)質(zhì)品率。同時(shí)也可以此為出發(fā)菌株進(jìn)行育種，以獲得酯化能力更強(qiáng)的菌株用于強(qiáng)化曲的生產(chǎn)，因此具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，有利于改善大曲品質(zhì)、提高白酒優(yōu)質(zhì)品率。本發(fā)明促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，按以下步驟進(jìn)行一、將酒香酵母接種到斜面培養(yǎng)基上，于25 30°C培養(yǎng)35 40h，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養(yǎng)基中，于、150r/min搖床培養(yǎng)Mh，得種子液；三、將種子液按10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，通氣量為20 30mL，于、150r/min搖床培養(yǎng)35 37h，得培養(yǎng)物，即完成促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法；其中步驟一中每升斜面培養(yǎng)基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g 酵母浸膏、15 20g瓊脂和余量的蒸餾水組成，pH為6.0;步驟二中每升種子培養(yǎng)基由Ig 葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟三中每升發(fā)酵培養(yǎng)基由6g橄欖油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5g K2HP04、0. 5gMgS04. 7H20和余量的蒸餾水組成， 發(fā)酵培養(yǎng)基的初始PH值為6 8。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)使用本發(fā)明的方法培養(yǎng)釀酒酵母菌，產(chǎn)酶量高，酶活達(dá)到105 163U/L。本發(fā)明方法與早前已有的方法相比，使酯化酶的活力有較大的提高，從而增加經(jīng)濟(jì)效益、降低生產(chǎn)成本，具有良好的應(yīng)用前景。有利于改善大曲品質(zhì)、提高白酒優(yōu)質(zhì)品率，對(duì)中國白酒質(zhì)量的提高，發(fā)展生態(tài)食品具有重要意義。同時(shí)也可以此為出發(fā)菌株進(jìn)行育種，以獲得酯化能力更強(qiáng)的菌株用于強(qiáng)化曲的生產(chǎn)，且本方法對(duì)酯化酶酶學(xué)特性的進(jìn)一步研究及提高工藝控制的科學(xué)性至關(guān)重要。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，按以下步驟進(jìn)行 一、將酒香酵母接種到斜面培養(yǎng)基上，于25 30°C培養(yǎng)35 40h，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養(yǎng)基中，于、150r/min搖床培養(yǎng)Mh，得種子液；三、將種子液按 10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，通氣量為20 3011^，于^°C、150r/min搖床培養(yǎng)35 37h，得培養(yǎng)物，即完成促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法；其中步驟一中每升斜面培養(yǎng)基由 Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏、15 20g瓊脂和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟二中每升種子培養(yǎng)基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟三中每升發(fā)酵培養(yǎng)基由6g橄欖油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5g K2HP04、0. 5g MgSO4. 7H20 和余量的蒸餾水組成，發(fā)酵培養(yǎng)基的初始PH值為6 8。步驟一中所述酒香酵母為Brettanomyces custersianus，在《富含β -葡萄糖苷酶的酒香酵母在釀酒領(lǐng)域中的應(yīng)用》(葛有輝、王德良、曹健，釀酒科技，2011年第2期)中公開。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中于培養(yǎng) 36h。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟三中通氣量為22 ^mL。其它與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟三中通氣量為25mL。其它與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至四之一不同的是步驟三中于 280C、150r/min搖床培養(yǎng)36h。其它與具體實(shí)施方式
一至四之一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟三中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值為7。其它與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，按以下步驟進(jìn)行一、將酒香酵母接種到斜面培養(yǎng)基上，于培養(yǎng)36h，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養(yǎng)基中，于^°C、150r/min搖床培養(yǎng)Mh，得種子液；三、將種子液按 10 %的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，通氣量為25mL，于、150r/min搖床培養(yǎng)36h，得培養(yǎng)物，即完成促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法；其中步驟一中每升斜面培養(yǎng)基由Ig葡萄糖、 5g蛋白胨、5g酵母浸膏、15g瓊脂和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟二中每升種子培養(yǎng)基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸餾水組成，pH為6.0;步驟三中每升發(fā)酵培養(yǎng)基由6g橄欖油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5g K2HP04、0. 5gMgS04. 7H20和余量的蒸餾水組成，發(fā)酵培養(yǎng)基的初始PH值為7。將經(jīng)本實(shí)施方式方法培養(yǎng)獲得的培養(yǎng)物取出，經(jīng)4000r/min離心20min，取上清液即為粗酶液。取IOmL環(huán)己烷、3. 65mL乙醇、6. 25mL己酸(所有試劑每500mL加入30g無水硫酸鈉)和0. 2mL粗酶液，酯化反應(yīng)在密閉IOOmL錐形瓶中進(jìn)行，反應(yīng)溫度為36°C，24h后取上清液0. 5mL于50mL錐形瓶中，加入5mL水，2滴酚酞，用0. 05mol/L NaOH滴定至終點(diǎn)， 測定己酸的消耗量。得到酶活為163U/L。
權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，其特征在于促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，按以下步驟進(jìn)行一、將酒香酵母接種到斜面培養(yǎng)基上，于25 30°C培養(yǎng)35 40h，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養(yǎng)基中，于^°C、150r/min搖床培養(yǎng)Mh，得種子液；三、將種子液按10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，通氣量為20 30!^，于^°C、150r/min搖床培養(yǎng)35 37h，得培養(yǎng)物，即完成促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法；其中步驟一中每升斜面培養(yǎng)基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏、15 20g瓊脂和余量的蒸餾水組成，PH為6.0 ；步驟二中每升種子培養(yǎng)基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸餾水組成，pH為6. 0 ；步驟三中每升發(fā)酵培養(yǎng)基由6g橄欖油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5gK2HP04、0. 5g MgSO4. 7H20和余量的蒸餾水組成，發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值為6 8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟一中于培養(yǎng)36h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟三中通氣量為22 ^mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟三中通氣量為25mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟三中于 、150r/min 搖床培養(yǎng) 36h。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟三中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的初始PH值為7。
全文摘要
一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，涉及一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法。本發(fā)明提供一種促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法，有利于改善大曲品質(zhì)、提高白酒優(yōu)質(zhì)品率。方法一、將酒香酵母接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得活化的菌種；二、挑取活化的菌種接入種子培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)，得種子液；三、將種子液按10％的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)，得培養(yǎng)物，即完成促進(jìn)酒香酵母菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)方法。使用本發(fā)明的方法培養(yǎng)釀酒酵母菌，產(chǎn)酶量高，酶活達(dá)到105～163U/L。
文檔編號(hào)C12N9/18GK102559634SQ201210060878
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月9日
發(fā)明者盧嫚, 宋北, 廣慧, 彭麗杰, 楊雪辰, 王繼華 申請(qǐng)人:哈爾濱師范大學(xué)