專利名稱：一種常染色體隱性遺傳性共濟失調(diào)相關(guān)基因的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子病理學領(lǐng)域，涉及一種常染色體隱性遺傳性共濟失調(diào)(autosomal recessive cerebellar ataxia, ARCA)亞型的相關(guān)基因CHIP(突變型)(下文中也稱為 “CHIP基因”或“STUB1基因”)。本發(fā)明還涉及含有所述常染色體隱性遺傳性共濟失調(diào)亞型相關(guān)基因突變型的重組載體、含有該重組載體的重組細胞以及所述基因的編碼蛋白。
背景技術(shù)：
常染色體隱性遺傳共濟失調(diào)(autosomalrecessive cerebellar ataxia, ARCA) 是一組罕見的、具有高度臨床和遺傳異質(zhì)性的神經(jīng)退行性疾病。目前已發(fā)現(xiàn)有近百種ARCA 亞型，其典型特征是多在30歲之前發(fā)病，根據(jù)種族不同其發(fā)病率約為I 4/10萬。其臨床表現(xiàn)多樣，且不同亞型有著較大差異，可累及到神經(jīng)、心血管、內(nèi)分泌、骨骼等多個系統(tǒng)， 以平衡障礙、軀干或肢體的姿勢或運動性震顫、構(gòu)音障礙、吞咽困難、眩暈、復視等為主要表現(xiàn)，也可伴有其他多種表現(xiàn)，如視網(wǎng)膜病、周圍神經(jīng)病、不自主運動、認知功能障礙或癲癇
坐寸o按照ARCA已知的發(fā)病機制，主要可分為5種類型線粒體共濟失調(diào)、代謝性共濟失調(diào)、DNA修復損傷導致的共濟失調(diào)、先天性共濟失調(diào)和退行性共濟失調(diào)。但尚有很多亞型無法歸類到以上5個類別中。目前已克隆出ARCA不同亞型的50多種不同的致病基因，例如 FRDA、POLG、C10orf2、a_TTP、MTP、PHYH、PEX7、ATM、MREl 1A、APTX、SETX、TDPl、ATCAY、SACS、 SILl...但由于ARCA分類繁多，部分亞型僅有個例報道，且ARCA家系相對較少而且家系內(nèi)患者較少，因此難以精確定位致病基因。新的致病基因的發(fā)現(xiàn)，有利于進一步研究發(fā)病機制及研發(fā)新藥。CHIP 基因又名 STUBl (STIP1 homologous and u box-containing protein I),定位于16pl3. 3，含有7個編碼區(qū)和2個非翻譯區(qū)，mRNA全長1646bp，57 968bp是其開放閱讀框，在不同物種進化過程中較為保守，編碼一個由303個氨基酸殘基構(gòu)成的分子量大小為35KDa的CHIP蛋白單體。CHIP基因的編碼產(chǎn)物熱休克蛋白70羧基端作用蛋白(carboxyl terminus of Hsc70interacting protein, CHIP)是Ballinger CA.等人發(fā)現(xiàn)的同時具有輔助伴侶分子和泛素連接酶功能的蛋白質(zhì)。CHIP蛋白幾乎在所有的器官中都有表達，但在代謝活性高或蛋白質(zhì)更新速度較快的器官組織如骨骼肌、心臟和腦中高表達，而在胰腺、肺、肝、胎盤和腎臟中的表達水平相對較低。CHIP蛋白由TPR、U_box及中間螺旋區(qū)等具有特征性的結(jié)構(gòu)域組成，它通過TPR結(jié)構(gòu)和熱休克蛋白相互作用，而通過U-box實現(xiàn)泛素化連接酶功能。CHIP蛋白作為輔助分子伴侶蛋白和泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin proteasome system, UPS)通路間的中間分子，將分子伴侶系統(tǒng)和UPS有效結(jié)合在一起，一旦分子伴侶系統(tǒng)恢復錯誤折疊蛋白失敗， CHIP將發(fā)揮其泛素連接酶的功能將分子伴侶的底物泛素化，促進其降解，因此CHIP在選擇異常蛋白質(zhì)是否進行降解的過程中發(fā)揮了重要的作用。蛋白質(zhì)的錯誤折疊和聚集是很多神經(jīng)退行性疾病共有的病理特征，因此CHIP與帕金森氏病、阿爾茨海默病、遺傳性共濟失調(diào)等疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)系。此外，CHIP作為TGF-P /BMP信號途徑中關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子 Smads的相互作用蛋白，可能在TGF-P信號傳導途徑中發(fā)揮重要作用。CHIP還與p53、ASKl 激酶、雄激素/雌激素的代謝和功能有著緊密的聯(lián)系。
目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)CHIP基因突變與某種特異性的疾病直接相關(guān)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的ARCA亞型的致病基因的5種突變基因型，提供含有所述ARCA亞型致病基因CHIP突變型的重組載體、含有上述重組載體的重組細胞、所述 ARCA相關(guān)基因的編碼蛋白以及能夠檢測突變基因型的試劑盒。發(fā)明人應用全基因組外顯子測序結(jié)合候選基因篩查的方法在一個ARCA家系(A家系)中發(fā)現(xiàn)一種ARCA亞型相關(guān)基因CHIP的一種新的突變——CHIP基因三號外顯子區(qū)域
c.493C > T(P. L165F)的純合突變，導致其493位堿基C突變?yōu)門，其編碼蛋白氨基酸序列第165位的亮氨酸(L)突變?yōu)楸奖彼?F)，具體序列如SEQ ID NO :2所示。該氨基酸位點位于CHIP蛋白的TPR和Ubox中間的鏈接區(qū)域。此兩點正?；蚪M參考序列為C，患者兩點均突變?yōu)門。通過對家系所有成員進行CHIP基因突變檢測，發(fā)現(xiàn)A家系中的其他患者均有該位點純合突變，而家系中部分正常人為該位點雜合突變，為攜帶者，說明CHIP基因突變在該家系中與疾病表型共分離。發(fā)明人又對另外兩個ARCA家系，進行CHIP基因的突變檢測，其中B家系中發(fā)現(xiàn) CHIP基因的另外兩種新的突變——第一個位點c. 389A > T (P. N130I)，其389位堿基A突變?yōu)門，其編碼蛋白氨基酸序列中第130位的天冬酰胺(N)突變?yōu)楫惲涟彼?I)，具體序列如SEQ ID N0:3所示。其編碼的氨基酸天冬酰胺及其附近位點位于保守區(qū)域；第二個位點
c.441G > T (P. W147C)，其441位堿基G突變?yōu)門，導致CHIP基因編碼的氨基酸序列中第147 位的色氨酸(W)突變?yōu)榘腚装彼?C)。具體序列如SEQ ID N0:4所示。其編碼的氨基酸色氨酸及其附近位點位于保守區(qū)域?；颊遚. 389A > T(P. N130I)和c. 441G > T(P. W147C) 復合雜合突變，患者父親和弟弟c. 389A > T(P. N130I)雜合突變；患者母親c. 441G >T(P. W147C)雜合突變。在C家系中也發(fā)現(xiàn)了兩種新的突變——第一個位點C.621C > G(P.Y207X)，導致其621位C突變?yōu)镚，發(fā)生截短突變，使得CHIP基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中編碼第207位的酪氨酸 (Y)的密碼子突變?yōu)榻K止密碼子。具體序列如SEQ ID N0:5所示。第二個位點在c. 707G > C(P. S236T)，其707位G突變?yōu)镃，導致CHIP基因編碼的氨基酸序列中第236位的絲氨酸
(S)突變?yōu)樘K氨酸(T)。具體序列如SEQ ID N0:6所示?；颊邽閮晌稽c復合雜合突變，患者弟弟和母親為c. 707G > C(P. S236T)雜合突變，患者父親為c. 621C > G(P. Y207X)雜合突變，家系中其余正常人未發(fā)現(xiàn)突變。說明CHIP基因突變在該家系中與疾病表型共分離。隨后的500名正常人的CHIP基因突變檢測中未發(fā)現(xiàn)上述突變，排除了單個核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP)的可能性,從而確定CHIP基因是一種 ARCA亞型的致病基因。正常人的CHIP基因序列如SEQ ID NO 1所示。本發(fā)明提供了一種如SEQ ID NO :2所示的人類CHIP基因突變序列，所述CHIP基因第493位堿基C突變?yōu)門。進一步，本發(fā)明提供了一種如SEQ ID NO :3所示的人類CHIP基因突變序列，所述 CHIP基因第389位堿基A突變?yōu)門。進一步，本發(fā)明提供了一種如SEQ ID NO :4所示的人類CHIP基因突變序列，所述 CHIP基因第441位堿基G突變?yōu)門。進一步，本發(fā)明提供了一種如SEQ ID NO :5所示的人類CHIP基因突變序列，所述 CHIP基因第621位堿基C突變?yōu)镚。進一步，本發(fā)明提供了 一種如SEQ ID NO :6所示的人類CHIP基因突變序列，所述 CHIP基因第707位堿基G突變?yōu)镃。正常CHIP基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO. 7所示。本發(fā)明提供了如SEQ ID NO. 2所示基因突變序列對應的氨基酸序列(SEQ ID NO. 8)，所述氨基酸序列第165位的亮氨酸(L)突變?yōu)楸奖彼?F)。進一步，本發(fā)明提供了如SEQ ID NO. 3所示基因突變序列對應的氨基酸序列(SEQ ID NO. 9)，所述氨基酸序列第130位的天冬酰胺(N)突變?yōu)楫惲涟彼?I)進一步，本發(fā)明提供了如SEQ ID NO. 4所示基因突變序列對應的氨基酸序列(SEQ ID NO. 10)，所述氨基酸序列第147位的色氨酸(W)突變?yōu)榘腚装彼?C)。進一步，本發(fā)明提供了如SEQ ID NO. 5所示基因突變序列對應的氨基酸序列(SEQ ID NO. 11)，所述氨基酸序列于第207位的原本為酪氨酸(Y)處提前終止。進一步，本發(fā)明提供了如SEQ ID NO. 6所示基因突變序列對應的氨基酸序列(SEQ ID NO. 12)，所述氨基酸序列第236位的絲氨酸(S)突變?yōu)樘K氨酸(T)。進一步，本發(fā)明提供了一種檢測上述CHIP基因突變型的方法，包括如下步驟(I)對基因材料進行聚合酶鏈擴增反應，獲取產(chǎn)物；(2)對產(chǎn)物進行核苷酸序列測定，以確定所述生物樣本中是否含有CHIP基因的突變；其中，步驟(I)中所述聚合酶鏈擴增反應采用的擴增引物對選自SEQ ID NO. 2、3、
4、5和6表示的序列中突變位點前后15-30bp長的序列，優(yōu)選為如SEQ ID NO 13-22所示的序列；本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以根據(jù)聚合酶鏈擴增反應的要求，設(shè)計更多種的引物，以擴增出包含本發(fā)明所述變異的核苷酸序列。聚合酶鏈擴增反應程序為(1)用SEQ ID NO. 13-16 所示序列的引物對來檢測CHIP基因的I號和2號外顯子，其反應條件為94°C熱啟動2min， 再按以下的過程循環(huán)33次94°C變性30s，然后降溫至64°C退火30s，72°C 30s。再保持 72°C 7min，然后降至4°C保持；(2)用SEQ ID NO. 17和SEQ ID NO. 18所示序列的引物對來檢測CHIP基因的3號外顯子，其反應條件為94°C熱啟動2min，再按以下的過程循環(huán)32次 94°C變性30s，然后降溫至58°C退火30s，72°C 30s。再保持72°C 7min，然后降至4°C保持；
(3)用SEQ ID NO. 16和SEQ ID NO. 20所示序列的引物對來檢測CHIP基因的4、5、6號外顯子，其反應條件為94°C熱啟動2min，再按以下的過程循環(huán)33次94°C變性30s，然后降溫至61°C退火30s，72°C 45s。再保持72°C 7min，然后降至4°C保持；⑷用SEQ ID NO. 21和 SEQ ID NO. 22所示序列的引物對來檢測CHIP基因的7號外顯子，其反應條件為94°C熱啟動2min，再按以下的過程循環(huán)33次94°C變性30s，然后降溫至62°C退火30s，72°C 30s。再保持72°C 7min，然后降至4°C保持。
進一步，本發(fā)明提供了一種檢測上述CHIP基因突變型的試劑盒，包括聚合酶鏈反應試劑，如dNTP、用于PCR反應的DNA聚合酶及其緩沖液；聚合酶鏈反應擴增體系中所適應的引物對，序列如SEQ ID NO :13-22所示。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，以上組分僅是示意性的，例如，所述的引物可以依據(jù)已知的核苷酸序列設(shè)計，通常為15-30個堿基，GC含量為 45-50%左右，在適當?shù)臏囟认屡c末端特異性結(jié)合，其可利用專門的計算機程序設(shè)計，所述的用于PCR反應的DNA聚合酶是能夠用于PCR擴增的酶。試劑盒的反應體系為(1)用SEQ ID NO. 13和SEQ ID NO. 14所示序列的引物對來檢測CHIP基因的I號外顯子，其反應體系為每組分用量LA tag酶0. lul，正反向引物分別為0. 2ul，gDNA模板(50ng/ul) lul, ddH20
3.lul, dNTPs 0.4ul，2XGC bufferl 5ul。(2)分別用 SEQ ID NO. 15-22 所示序列的引物對來檢測CHIP基因的2-7號外顯子，其反應體系為每組分用量SYBR酶7. 5ul，正反向引物分別為 0. 75ul, gDNA 模板(50ng/ul) I. 5ul, ddH20 4. 5ul。本發(fā)明還提供了含有CHIP突變型基因的重組載體以及含有重組 載體的重組宿主細胞，其中，重組載體由空載體p3x-flag—CMV-myC-24和插入該空載體的CHIP突變型基因組成；重組宿主細胞的宿主細胞為HEK293細胞。人工拼接合成CHIP野生型基因DNA雙鏈片段(SEQ ID NO. I)后，在其兩端分別添加酶切位點，其序列分別為SEQ ID NO. 31和SEQ ID NO. 32。用Nestled PCR的方法分別合成5種CHIP突變型基因DNA片段。之后將CHIP野生型和突變型基因DNA片段分別轉(zhuǎn)導入質(zhì)粒p3x-flag—CMV-myC-24中，然后用相同質(zhì)粒濃度的 p3x_flag—CMV-myc-24 空載體，p3x_flag-CMV-myc-24-chip 野生型質(zhì)粒及 5 種 CHIP 突變型的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染J1EK293細胞。最后對轉(zhuǎn)染后的HEK293細胞進行檢測。 在HEK293細胞中轉(zhuǎn)染了相同質(zhì)粒濃度的p3x_f lag—CMV-myc-24空載體， p3x-flag-CMV-myc-24-chip野生型質(zhì)粒及5種CHIP突變型的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染48h后提取蛋白， western-blot檢測flag-chip融合蛋白的表達。結(jié)果顯示CHIP基因突變型的蛋白表達水平與野生型相同。SODl (G85R)是E3連接酶CHIP的已知底物(文獻已報道)，在EGFP-S0D1 (G85R) 的穩(wěn)定表達細胞系J1EK293細胞中，轉(zhuǎn)染野生型CHIP可導致EGFP-S0D1(G85R)降解。但轉(zhuǎn)染5種CHIP突變型的細胞組降解EGFP-S0D1 (G85R)的能力下降，底物表達水平高于轉(zhuǎn)染野生型CHIP質(zhì)粒組。將轉(zhuǎn)染了 CHIP (SEQ ID NO. I)及其突變體(SEQ ID NO. 2、3、4、5、6)的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染RFP-SODl (G85R)的穩(wěn)定表達細胞系HEK293細胞，發(fā)現(xiàn)CHIP及其突變體均表達在細胞質(zhì)中，且和RFP-SODl (G85R)均存在共定位。在EGFP-SODI (G85R)的穩(wěn)定表達細胞系中，相同質(zhì)粒濃度的 p3x-f lag—CMV-myc-24 空載體，p3x_f lag-CMV-myc-24-chip 野生型質(zhì)粒及 5 種 CHIP 突變型質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染24h后，用5mM MG132處理16小時后，用GFP抗體進行免疫共沉淀實驗，轉(zhuǎn)染野生型CHIP (SEQ ID NO. I)的細胞中能增加EGFP-S0D1(G85R)的多聚泛素鏈，而轉(zhuǎn)染其他突變體的細胞則能減少其多聚泛素鏈，同時能看到底物EGFP-S0D1 (G85R)和野生型CHIP是結(jié)合的，而SEQ ID NO. 8所示的CHIP突變型結(jié)合底物的能力下降，SEQ ID NO. 11所示CHIP 突變型則不能結(jié)合底物EGFP-SODI (G85R)。根據(jù)本發(fā)明提供的CHIP基因序列變異的位點，應用本發(fā)明的試劑盒，對三個ARCA 家系中的個體進行了檢測。結(jié)果顯示一個家系所有的ARCA患者都具有SEQ ID NO. 2所示純合突變，先證者父親、母親、奶奶、哥哥為SEQ ID NO. 2所示雜合突變；一個家系中的ARCA患者具有SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4所示的復合雜合突變，其父親和弟弟具有SEQ ID NO. 3 所示雜合突變，其母親具有SEQ ID NO. 4所示雜合突變；還有一個家系中的ARCA患者具有 SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 6所示的復合雜合突變，其弟弟和母親具有SEQ ID NO. 6所示雜合突變，其父親具有SEQ ID NO. 5所示的雜合突變。而各家系其余正常人個體和500名正常對照都沒有上述突變。
本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了 CHIP基因突變可以導致ARCA的發(fā)病。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)并克隆了 ARCA亞型的致病基因CHIP的5種突變基因型，對ARCA 的發(fā)病機制的研究以及診斷、產(chǎn)前診斷和治療提供了分子理論基礎(chǔ)。同時對這種ARCA亞型致病基因CHIP的野生及突變型分子功能的研究也可以為CHIP的其他相關(guān)功能如其在信號傳導途徑中的作用等的研究提供新的思路。本發(fā)明的試劑盒能簡便、快捷、高效地檢測CHIP的5種基因突變型。


圖I為突變序列SEQ ID NO. 2的示意圖；圖2為突變序列SEQ ID NO. 3和4的不意圖；圖3為突變序列SEQ ID NO. 5和6的不意圖；圖4為A、B、C三個家系的家系圖；圖5為CHIP野生型及其突變型蛋白在細胞中的表達水平；圖6為CHIP野生型及其突變型蛋白降解底物能力示意圖；圖7為CHIP野生型及其突變型蛋白結(jié)合底物的能力及其泛素連接酶功能研究示意圖；圖8為CHIP野生型及其突變型蛋白的亞細胞定位及與底物RFP-SODl (G85R)共定位示意圖。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進行更為詳細的描述，但是以下描述僅用于對本發(fā)明進行解釋性說明，并不對本發(fā)明的保護范圍進行任何的限制，本發(fā)明的保護范圍僅以權(quán)利要求書限定的范圍為準。實施例I :CHIP基因突變chrol6 :671573 ;1，C/T的檢測方法(I)標本采集與處理。發(fā)明人對家系A(chǔ)中5名正常人(男3名、女2名)、4名ARCA 患者(男I名，女3名)進行詳細的病史、家族史的調(diào)查及全面的體格檢查和相關(guān)輔助檢查。 在簽署知情同意書以后，每人取肘靜脈血10ml(枸櫞酸鈉抗凝)，4°C保存，兩周內(nèi)依照《分子克隆》第二版從血液中提取DNA的方法提取DNA。(2)對樣本DNA目標片段進行PCR體外擴增。根據(jù)ARCA相關(guān)基因序列SED ID NO. 23設(shè)計如下引物；正向引物；F:5’ -GACGGGCAGTCTGTGAAGG-3’ (SED ID NO. 13)反向引物；R:5’ -CATCACCCTCGTGGTTTCG-3，(SED ID NO. 14)反應體系和反應條件如下表1、2所示
表IPCR反應體系
權(quán)利要求
1.一種分離的常染色體隱性遺傳性共濟失調(diào)相關(guān)基因突變型，其具有SEQ ID NO. 2、3、 4、5或6所示的序列。
2.一種分離的蛋白，具有SEQ ID NO 8、9、10、11或12表示的氨基酸序列。
3.—種檢測權(quán)利要求I所述基因突變型的方法，包括如下步驟(1)對基因材料進行聚合酶鏈擴增反應，獲取產(chǎn)物；(2)對產(chǎn)物進行核苷酸序列測定；其中，步驟(I)所采用的擴增引物對選自SEQ ID NO. 2、3、4、5和6表示的序列中突變位點前后15-30bp長的序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟(I)所采用的擴增引物對選自 SEQ ID NO. 13-22所示的序列。
5.如權(quán)利要求4所述的檢測方法，其特征在于，其聚合酶鏈擴增反應程序為用SEQ ID NO. 13-16所示序列的引物對來檢測CHIP基因的I號和2號外顯子時，其反應條件為94°C熱啟動2min，再按以下的過程循環(huán)33次94°C變性30s，然后降溫至64°C退火30s，72°C 30s ;再保持72°C 7min，然后降至4°C保持；用SEQ ID NO. 17和SEQ ID NO. 18所示序列的引物對來檢測CHIP基因的3號外顯子時，其反應條件為94°C熱啟動2min，再按以下的過程循環(huán)32次94°C變性30s，然后降溫至 58°C退火30s，72°C 30s ;再保持72°C 7min，然后降至4°C保持；用SEQ ID NO. 19和SEQ ID NO. 20所示序列的引物對來檢測CHIP基因的4、5、6號外顯子時，其反應條件為94°C熱啟動2min，再按以下的過程循環(huán)33次94°C變性30s，然后降溫至61°C退火30s，72°C 45s ;再保持72°C 7min，然后降至4°C保持；用SEQ ID NO. 21和SEQ ID NO. 22所示序列的引物對來檢測CHIP基因的I號外顯子時，其反應條件為94°C熱啟動2min，再按以下的過程循環(huán)33次94°C變性30s，然后降溫至 62°C退火30s，72°C 30s ;再保持72°C 7min，然后降至4°C保持。
6.一種用于檢測權(quán)利要求I所述基因突變型的檢測試劑盒，其特征在于，引物對選自 SEQ ID NO. 2、3、4、5和6表示的序列中突變位點前后15-30bp長的序列中至少一對引物對。
7.一種用于檢測權(quán)利要求I所述基因突變型的檢測試劑盒，其特征在于，含有的引物對為SEQ ID NO. 13-22所示的序列中至少一對引物對。
8.按照權(quán)利要求6或7所述的試劑盒，其特征在于，其反應體系如下用SEQ ID NO. 13和SEQ ID NO. 14所示序列的引物對來檢測CHIP基因的I號外顯子時，其反應體系為每組分用量LA tag酶0. lul，正反向引物分別為0. 2ul，gDNA模板(50ng/ ul) lul, ddH20 3. lul, dNTPs 0. 4ul,2XGC bufferl 5ul ；分別用SEQ ID NO. 15-22所示序列的引物對來檢測CHIP基因的2-7號外顯子時， 其反應體系為每組分用量SYBR酶7. 5ul，正反向引物分別為0. 75ul，gDNA模板(50ng/ ul) I. 5ul, ddH20 4. 5ul。
9.一種重組載體，由空載體和插入該空載體的目的基因組成，其特征在于，所述空載體為p3X-flag—CMV-myc-24，所述目的基因為權(quán)利要求I所述的突變型序列。
10.一種重組宿主細胞，其特征在于，所述重組宿主細胞含有權(quán)利要求9所述的重組載體，所述宿主細胞為HEK293。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新的ARCA亞型的致病基因的5種突變基因型，還公開了含有所述ARCA亞型致病基因CHIP突變型的重組載體、含有上述重組載體的重組細胞、所述ARCA相關(guān)基因的編碼蛋白以及能夠檢測突變基因型的試劑盒。
文檔編號C12N5/10GK102618559SQ20121007249
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月19日
發(fā)明者唐北沙, 夏昆, 李家大, 江泓, 王俊嶺 申請人:中南大學湘雅醫(yī)院