專利名稱：α-羥酸去消化的方法及菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雙菌耦聯(lián)催化外消旋α -羥酸生產(chǎn)手性α _羥酸的方法，以及該過程中用到的新菌株。
(ニ)
背景技術(shù)：
光學(xué)活性的α -羥酸是指手性碳上帶有羥基同時帶有羧基的ー類化合物，是重要的手性“砌塊”，可用于不對稱合成大量生物活性分子。在這類化合物中，光學(xué)純扁桃酸在商業(yè)角度上被認為是最重要的代表。扁桃酸又稱a-羥基苯こ酸、苯こ醇酸、苦杏仁酸，其R型和S型的結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種雙菌耦聯(lián)催化外消旋α-羥酸生產(chǎn)手性α-羥酸的方法，所述方法包括以式(I)所示的α-羥酸外消旋體為底物，以(S)-a-羥酸脫氫酶和(R)-酮酸還原酶為催化劑，在20 50°C、pH6. O 9. O緩沖液中進行反應(yīng)10 48小時，制得相應(yīng)(R) - α -羥酸；所述(S)- α -輕酸脫氫酶來自銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa) CCTCC No M 2011394或中華根瘤菌(Sinorhizobium sp.)CCTCC No M 2011391的含酶菌體細胞，所述(R)-酮酸還原酶來自葡萄釀酒酵母(Saccharomyces ellipsoideus)CCTCC NO M 2011393的含酶菌體細胞；
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述緩沖液所述緩沖液為下列之一pH6.O 6. 6的檸檬酸緩沖液、pH 6. 5 7. 8的磷酸鹽緩沖液或ρΗ7· 4 9. O的Tris-HCl緩沖液。
3.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述緩沖液中底物初始濃度為O.8 30g/L。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述緩沖液中底物初始濃度為I 20g/L。
5.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述緩沖液中還添加有10 50g/L的輔助底物甘油。
6.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于緩沖液中所述含酶菌體細胞各自添加量以濕重計分別為10 50g/L。
7.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于轉(zhuǎn)化反應(yīng)結(jié)束后，轉(zhuǎn)化液用HCl將pH調(diào)至1.0，經(jīng)こ酸こ酯萃取后，減壓蒸發(fā)，將得到的固體溶解于苯或こ酸こ酷，進行重結(jié)晶，析出的晶體過濾后，置于蒸發(fā)皿中干燥，得到光學(xué)純的α-羥酸。
8.一株產(chǎn)(R)-酮酸還原酶菌株-葡萄釀酒酵母(Saccharomyces ellipsoideus)ZJB111，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號CCTCC No M 2011393，保藏日期2011年11月13日。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種雙菌耦聯(lián)催化外消旋α-羥酸生產(chǎn)手性α-羥酸的方法，所述方法包括以式(I)所示的α-羥酸外消旋體為底物，以(S)-α-羥酸脫氫酶和(R)-酮酸還原酶為催化劑，在20～50℃、pH 6.0～9.0緩沖液中進行反應(yīng)10～48小時，制得相應(yīng)(R)-α-羥酸；本發(fā)明以外消旋α-羥酸為底物，通過生物轉(zhuǎn)化法去消旋化合成手性α羥酸，反應(yīng)條件溫和，對環(huán)境的污染少，減少了中間產(chǎn)物的提取步驟，產(chǎn)率和對應(yīng)體過量值較高，分別達到90％和99％以上。
文檔編號C12R1/41GK102660624SQ201210109160
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月13日
發(fā)明者張雅琴, 沈寅初, 薛亞平, 鄭裕國 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)