專利名稱：綠豆用于制備ace抑制劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品領(lǐng)域，具體地說，是關(guān)于綠豆用于制備血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin Converting Enzyme, ACE)抑制劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
綠豆(學(xué)名Vigna radiata)是ー種豆科、蝶形花亞科豇豆屬 植物，原產(chǎn)印度、緬甸地區(qū)?，F(xiàn)在東亞各國普遍種植，非洲、歐洲、美國也有少量種植，中國、緬甸等國是主要的綠豆出口國。種子和莖被廣泛食用。綠豆是ー種高蛋白、中淀粉、低脂肪的藥食同源作物，每IOOg干物質(zhì)含有22 26g蛋白質(zhì)，是禾谷類的2倍，含淀粉50g左右，膳食纖維6. 4g左右，脂肪含量低，僅占1%。此外，緑豆中還含有豐富的維生素及微量元素，維生素BI是雞肉的17. 5倍，維生素B2是禾谷類的2 4倍，磷是禾谷類及豬肉、雞肉、魚、雞蛋的2倍，鈣是禾谷類的4倍，還含有鐵、硒、鎂、鋅等微量元素。緑豆?fàn)I養(yǎng)成分全面，不僅蛋白質(zhì)含量高，而且蛋白質(zhì)功效比高，居各種豆類之首，蛋白質(zhì)中氨基酸種類齊全且構(gòu)成比例較好，尤其以賴氨酸含量較為豐富。ACE (血管緊張素轉(zhuǎn)化酶,Angiotensin Converting Enzyme)在人體內(nèi)的作用是將血管緊張素 I (Angiotensin I Converting Enzyme)轉(zhuǎn)化成血管緊張素 II (Angiotensin
IIConverting Enzyme)，而血管緊張素II為強(qiáng)烈的血管收縮物質(zhì)，可使血管收縮，從而使體內(nèi)血壓升高。此外，ACE還可以失活體內(nèi)調(diào)節(jié)血壓的舒緩激肽，也從而使體內(nèi)血壓升高。ACE是ー種金屬肽酶，含有2個(gè)結(jié)合Zn2+的位點(diǎn)，即所謂“必須結(jié)合位點(diǎn)(Obligatory Binding Site)”。Zn2+結(jié)合位點(diǎn)是ACE催化反應(yīng)的活性基團(tuán)所在部位。各種ACE抑制物的共同作用是與ACE活性部位的Zn2+結(jié)合，使之失活。降血壓肽是由數(shù)個(gè)氨基酸組成的肽，是對(duì)ACE活性區(qū)域親和カ較強(qiáng)的競爭性抑制齊U，它們與ACE的親和カ比血管緊張素轉(zhuǎn)化酶I (AngI)或舒緩激肽更強(qiáng)，而且也較不容易從ACE結(jié)合區(qū)釋放，降低ACE活性或使其失去活性，從而阻礙ACE催化血管緊張素I轉(zhuǎn)化成血管緊張素II，使血管不收縮，以及催化水解舒緩激肽成為失活片段的兩種生化反應(yīng)過程，起到降血壓的作用。到目前為止，未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于利用緑豆制備ACE抑制物或降血壓藥物的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)的發(fā)明人在長期研究緑豆的用途的過程中發(fā)現(xiàn)，緑豆的水解產(chǎn)物具有明顯的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制活性。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種綠豆用于制備血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明，所述綠豆為綠豆經(jīng)蛋白酶水解后的產(chǎn)物。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，所述蛋白酶選自胃蛋白酶，胰蛋白酶，或者它們的組
ロ O
基于綠豆具有抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性的作用，緑豆可進(jìn)ー步用于開發(fā)具有降血壓功能的食品或保健品本發(fā)明為緑豆的開發(fā)利用開辟了一條全新的途徑，具有非常廣泛的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的降血壓多肽的制備方法作進(jìn)ー步詳細(xì)說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于實(shí)施本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中，ACE抑制活性的測定原理及方法步驟如下緑豆的蛋白水解物(多肽)的ACE抑制活性測定采用體外模擬測定，體外ACE抑制率測試原理為底物馬尿酰組氨酰亮氨酸(HHL)在ACE酶的催化作用下，可以生產(chǎn)馬尿酸(Hip)和ニ肽，通過液相的方法測定馬尿酸的含量，進(jìn)而可以間接測定ACE酶的酶活；而ACE抑制劑的存在可以抑制ACE酶的活性，致使Hip的生成減少，從而間接反映了 ACE抑制肽的活性。測試ACE抑制率的方法步驟如下選取EP管作為反應(yīng)器，編號(hào)0、1、2、3等。O號(hào)管加入15 μ L去離子水為對(duì)照，I、2、3等管加入15 μ L的ACE抑制劑。然后各管內(nèi)均加入15 μ L的底物HHL，37°C溫浴5min后，加入5 μ L的ACE酶啟動(dòng)反應(yīng)，在37°C水浴中反應(yīng)40min。反應(yīng)結(jié)束后，加入300 μ L IM HCl終止反應(yīng)。反應(yīng)液進(jìn)行高速離心，過4. 5μπι的濾頭，然后進(jìn)行高效液相色譜(HPLC)測定。HPLC條件是10%こ腈90%水(O. 1%TFA)，檢測波長228nm，柱溫30°C，上樣量20yL ;ACE抑制率(X)按下式計(jì)算X= (A 對(duì)照-Al) /A 對(duì)照 X 100%式中X—ACE抑制率(％) A對(duì)照一對(duì)照組生成Hip的峰面積Al—實(shí)驗(yàn)組生成Hip的峰面積實(shí)施例I_8、綠豆多肽水解物的制備取緑豆，洗浄，搗碎研磨后收集，取一定量的緑豆粉末，進(jìn)行干燥，得干燥的緑豆粉。按表I所示，對(duì)獲得的干燥緑豆粉分別用不同組合的蛋白酶進(jìn)行處理，具體如下稱取2g粉末,配制成20mg/ml的溶液,按照表I的蛋白酶水解條件，調(diào)pH值至相應(yīng)的酶反應(yīng)PH條件，加入相應(yīng)的酶O. 1% (w/v)，在相應(yīng)的反應(yīng)溫度下水浴酶解O. 17^10小吋，攪拌。當(dāng)使用兩種不同蛋白酶處理時(shí)，在第一種蛋白酶酶解結(jié)束后，煮沸IOmin滅酶活，再進(jìn)行第二種蛋白酶的處理步驟。終止反應(yīng)后，調(diào)節(jié)PH至7，水解物離心(12000r/min,lOmin)，取上清液，在_40°C冷凍干燥，收集水解物粉末。表I、不同蛋白酶水解條件
實(shí)施例酶的組合I溫度(°C) Γ~ρ 時(shí)間(hr)
I胃蛋白酶371.5O. 1權(quán)利要求
1.綠豆用于制備血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述綠豆為綠豆經(jīng)蛋白酶水解后的產(chǎn)物。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛋白酶選自胃蛋白酶，胰蛋白酶，或者它們的組合。
4.綠豆用于制備降血壓食品或保健品的應(yīng)用，其特征在于，所述降血壓食品或保健品用于抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種綠豆用于制備血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述綠豆為綠豆經(jīng)蛋白酶水解后的產(chǎn)物。本發(fā)明為綠豆的開發(fā)利用開辟了一條全新的途徑，具有非常廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A23L1/20GK102626206SQ20121013771
公開日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月4日
發(fā)明者吳燕玲, 張旭晟, 方明, 李瑩, 李鵬, 杜磊, 束雯婷, 王波, 謝靜莉, 鄧高靜 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)