專利名稱：一種檢定影響纖維素酶作用因素的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢定影響纖維素酶作用因素的檢測(cè)方法。ニ背景技術(shù)：
迄今為止，纖維素酶總活力的測(cè)定方法仍采用濾紙法，濾紙法的好處在于可以從直接觀察到的濾紙的崩解和單糖的定量?jī)蓚€(gè)方面得到纖維素酶活力的大小變化。在研究檢定影響纖維素酶作用的因素時(shí)，這一方法更是被普遍采用。在研究影響纖維素酶作用因素的方法中，通常是將待檢定的影響因素物質(zhì)溶解在含纖維素酶的溶液中，然后用濾紙法檢測(cè)纖維素酶活力的變化。由于待檢定的物質(zhì)在溶液中的溶解性會(huì)出現(xiàn)變化，特別是無(wú)法直觀說(shuō)明待檢定物質(zhì)是否是因?yàn)楹屠w維素作用，而不是和纖維素酶作用而影響到纖維素酶的活力。因?yàn)樘幵诶w維素酶溶液中的待檢定物質(zhì)有可 能和纖維素酶結(jié)合，也可能是和纖維素結(jié)合，也可能同時(shí)和纖維素、纖維素酶結(jié)合。例如無(wú)法具體說(shuō)明從長(zhǎng)期存放的秸桿中提取得到蛋白質(zhì)是否、如何影響纖維素酶水解秸桿中的纖維素。在生物質(zhì)こ醇技術(shù)的研究中，需要一種直觀、簡(jiǎn)單、快速、廉價(jià)的能夠用于掲示生物質(zhì)中影響纖維素酶作用的物質(zhì)的檢測(cè)方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決上述背景技術(shù)中的不足之處，提供一種檢定影響纖維素酶作用因素的檢測(cè)方法，其縮短測(cè)試周期、降低實(shí)驗(yàn)成本、操作分析簡(jiǎn)便、提高實(shí)驗(yàn)精確并保障數(shù)據(jù)重現(xiàn)性。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種檢定影響纖維素酶作用因素的檢測(cè)方法，其特征在于所述的檢測(cè)方法為首先將影響纖維素酶作用的物質(zhì)和濾紙結(jié)合，再加入纖維素酶溶液進(jìn)行纖維素水解，觀察濾紙的崩解速度和檢測(cè)單糖的生成量。所述的影響纖維素酶作用的物質(zhì)為蛋白質(zhì)、酶或木質(zhì)素。所述結(jié)合的方式為滴加或涂抹。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和效果如下
1、本發(fā)明可以明確知道何種成分和纖維素結(jié)合而影響了纖維素酶作用；
2、本發(fā)明可以用于蛋白質(zhì)、木質(zhì)素、半纖維素及其它生物質(zhì)組分對(duì)纖維素酶作用的研
究;
3、本發(fā)明操作方便、準(zhǔn)確性較高、可用于實(shí)驗(yàn)室快速測(cè)定。具體實(shí)施例方式 一種檢定影響纖維素酶作用因素的檢測(cè)方法，所述的檢測(cè)方法為首先將影響纖維素酶作用的物質(zhì)(蛋白質(zhì)、酶、木質(zhì)素及其他影響纖維素酶作用的物質(zhì))和濾紙結(jié)合(結(jié)合的方式為滴加或涂抹)，再加入纖維素酶溶液進(jìn)行纖維素水解，觀察濾紙的崩解速度和檢測(cè)單糖的生成量。本發(fā)明提取農(nóng)作物秸桿中的蛋白質(zhì)，然后將提取得到的蛋白液與纖維素酶共同作用于純纖維素的水解。
上述農(nóng)作物秸桿為采摘后常溫下貯存半年的小麥秸桿。提取蛋白質(zhì)的方法是將采摘后常溫下貯存半年的小麥秸桿，用高速粉碎機(jī)打成粉末，過(guò)60目篩，稱取5. Og該粉末于研缽中，加入一定量(pH4. 8，50mM醋酸鈉緩沖液，30mM抗壞血酸)的研磨緩沖液進(jìn)行研磨，水洗直至濾液澄清，濾渣即制得的細(xì)胞壁組織。將處理過(guò)的麥桿細(xì)胞壁組織放于IOOml小燒杯中，然后按照1:10添加SDS裂解緩沖液，在30°C條件下浸提過(guò)夜(12h)，次日將浸提液4°C，10000轉(zhuǎn)離心15min得到上清液。在上清液中緩慢加入等體積預(yù)冷(_20°C)的95%こ醇，冰浴攪拌lOmin，然后置于冰箱中2小時(shí)。4°C, IOOOOrpm離心IOmin獲得こ醇沉淀物，將沉淀物中的こ醇揮發(fā)干以后加入2到3倍體積PH4. 8的醋酸-醋酸鈉緩沖液，再置于冰浴上振蕩IOmin后，于冰箱內(nèi)靜置2小吋，最后4°C, 10000轉(zhuǎn)離心15分鐘，舍棄不溶性物質(zhì)，得到的上清液即提取得到的蛋白質(zhì)。SDS裂解緩沖液配方如下__
權(quán)利要求
1.一種檢定影響纖維素酶作用因素的檢測(cè)方法，其特征在于所述的檢測(cè)方法為首先將影響纖維素酶作用的物質(zhì)和濾紙結(jié)合，再加入纖維素酶溶液進(jìn)行纖維素水解，觀察濾紙的崩解速度和檢測(cè)單糖的生成量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種檢定影響纖維素酶作用因素的檢測(cè)方法，其特征在于所述的影響纖維素酶作用的物質(zhì)為蛋白質(zhì)、酶或木質(zhì)素。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢定影響纖維素酶作用因素的檢測(cè)方法，其特征在于所述結(jié)合的方式為滴加或涂抹。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢定影響纖維素酶作用因素的檢測(cè)方法，檢測(cè)方法為首先將影響纖維素酶作用的物質(zhì)(蛋白質(zhì)、酶、木質(zhì)素及其他影響纖維素酶作用的物質(zhì))和濾紙結(jié)合(結(jié)合的方式為滴加或涂抹)，再加入纖維素酶溶液進(jìn)行纖維素水解，觀察濾紙的崩解速度和檢測(cè)單糖的生成量。其能快速、直觀和準(zhǔn)確檢定影響纖維素酶作用效果的物質(zhì)。
文檔編號(hào)C12Q1/34GK102676635SQ20121014437
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月11日
發(fā)明者張濤, 王聯(lián)結(jié) 申請(qǐng)人:陜西科技大學(xué)