專利名稱：一種動物組織樣的基因組dna提取試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種動物組織樣的基因組DNA提取試劑盒，尤其是能快速、安全、穩(wěn)定的提取動物各種組織樣中的DNA，所用試劑經濟、安全，屬于生物技術領域。
背景技術：
基因組DNA主要指單倍體細胞中包括編碼序列和非編碼序列在內的全部DNA分子，主要存在于細胞核、線粒體、葉綠體內。基因組DNA的提取是許多分子生物學實驗的基礎，如普通PCR、PCR-RFLP,PCR-SSCP 和 Southern bot 等。傳統(tǒng)提取基因組DNA的方法步驟繁瑣，花費時間較長，如果提取較多頭動物組織 樣時，會耗費大量的人力物力。提取基因組DNA的方法主要包括酚仿抽提法、濃鹽法、陰離子去污劑法等。總的方法和原理為
碎化組織樣采用眼科剪剪碎法、液氮研磨法或勻漿器研磨法將動物組織樣碎化。消化蛋白質采用SDS或苯酚等蛋白變性劑水浴消化蛋白質，分解掉盡可能多的蛋白質。分離析出DNA :先將DNA和RNA這兩種核酸中的RNA去除，再將DNA與蛋白質中的蛋白質去除，后用等體積的異丙醇或無水こ醇使DNA析出。洗滌干燥DNA :通過70%こ醇洗滌2次DNA，并于室溫干燥。溶解保存DNA :加入一定體積的TE緩沖液或雙蒸水(ddH20)，4° C保存。提取過程所用試劑較多，操作復雜且耗時較長。當提取大批量樣品中的DNA吋，エ作量會很大。

發(fā)明內容
技術問題
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供ー種“傻瓜式”動物組織樣中的基因組DNA提取方法，操作簡單、所用試劑安全經濟、提取效率高、DNA純度好且能快速、充分溶解，以適應大批量樣品基因組DNA的提取。技術方案
為解決上述技術問題，本發(fā)明的技術解決方案是
一種動物組織樣的基因組DNA提取試劑盒，包括細胞裂解液(溶液A)、6 mol/L的NaCl溶液(溶液B)、三氯甲烷(溶液C)、TE緩沖液(溶液D)和蛋白酶K。碎化組織樣將動物組織樣用剪刀切下20-60 mg，放在ー個I. 5 ml離心管蓋里，加100 μ I細胞裂解液，用眼科剪把組織樣剪碎，約剪5分鐘，然后每管再加入300 μ I的裂解液(溶液A)。消化蛋白質向每個裝組織樣的離心管內加入15 μ I的蛋白酶K，上下顛倒搖勻，放于65 ° C的振動水浴鍋內，水浴2個小吋。分離DNA :將水浴后的樣品每管加入200 μ I的6 mol/L的NaCl溶液(溶液B)，然后放在冰塊上，再加入500 μ I的三氯甲烷(溶液C)，上下?lián)u動裝有樣品的盒子10分鐘左右，將樣品4 °C離心12000轉/分，10分鐘。析出DNA :取離心管的上清液(約600 μ I)到新的I. 5ML離心管中，對號標上記號，加入1000 μ I無水こ醇(或等體積的異丙醇)，小心的搖動離心管直至DNA析出，靜置2分鐘。將析出DNA的離心管4 °C離心，12000轉/分，5分鐘。洗滌DNA :倒出離心管中溶液，加入1000 μ I的70%こ醇，輕彈離心管底部，使DNA浸到液體中，以便充分洗滌；4 ° C離心，12000轉/分，2分鐘。重復此步驟，洗滌第二
次。 快速干燥DNA :倒出離心管中溶液，用衛(wèi)生紙吸走管ロ殘液，離心甩下管壁上的こ醇，用10 Ul移液器吸走剰余こ醇，倒置5分鐘離心管。溶解DNA :加入130-600 ul的TE緩沖液(溶液D)或ddH20，放置4 °C保存過夜，待用。有益效果
試劑盒含有A、B、C、D四種溶液，具有操作簡單、提取速度快、成本低廉的特點。本發(fā)明先用蛋白酶K將細胞核蛋白中的蛋白質除去，再用高鹽溶液對核酸進行提純，使DNA和RNA分開，最后再用移液器快速干燥DNA，操作簡單，不但提取速度快，而且所提取的DNA質量高。本發(fā)明通過將DNA提取過程簡化，提取試劑組合優(yōu)化，在保證DNA質量的前提下達到了快速、高效提取的效果組織樣只需5分鐘剪碎、細胞裂解時間只需2個小吋、DNA干燥只需5分鐘，省時省力，特別適用于提取大批量動物組織樣本DNA的試驗。本發(fā)明提取的基因組DNA含量(150-300 ng/μ I)和純度高(0D260/280 =I. 8-2. 0)，稀釋15倍后瓊脂糖電泳觀察，經瓊脂糖檢測的條帶也很亮，如圖I。本發(fā)明提取的基因組DNA量大質優(yōu)，且無蛋白質污染。


圖I是本發(fā)明實施例所提取基因組DNA的電泳圖譜。
具體實施例方式一種動物組織樣的基因組DNA提取試劑盒，包括細胞裂解液(溶液A)、6 mol/L的NaCl溶液(溶液B)、三氯甲烷(溶液C)、TE緩沖液(溶液D)和蛋白酶K。取豬耳組織60 mg，放在ー個I. 5 ml離心管蓋里，加100 μ I細胞裂解液(溶液Α)，用眼科剪把組織樣剪碎，約剪5分鐘，然后再加入300 μ I的溶液A和15 μ I的蛋白酶K，上下顛倒搖勻，放于65 ° C的振動水浴鍋內，水浴2個小吋。將水浴后的樣品每管加入200 μ I的溶液B，然后放在冰塊上，再加入500 μ I的溶液C，上下?lián)u動裝有樣品的盒子10分鐘左右，將樣品4 0C離心12000轉/分，10分鐘。取離心管的上清液(約600 μ I)到新的I. 5ML離心管中，對號標上記號，加入1000μ I無水こ醇，小心的搖動離心管直至DNA析出，靜置2分鐘。將析出DNA的離心管4 °(離心，12000轉/分，5分鐘。倒出離心管中溶液后，離心管中再加入1000 μ I的70%こ醇，輕彈離心管底部，使DNA浸到液體中，以便充分洗滌；4 ° C離心，12000轉/分，2分鐘。重復此步驟，洗滌第二次。倒出離心管中溶液，用衛(wèi)生紙吸走管ロ殘液，離心甩下管壁上的こ醇，用10 Ul移液器吸走剰余こ醇，倒置5分鐘離心管。加入600 ul的溶液D，放置4 °C保存過夜，待用。以上述方法得到的基因組DNA含量(150-300 ng/μ I)和純度高(0D260/280 =
I.8-2.0)，稀釋15倍后瓊脂糖電泳觀察，經瓊脂糖檢測的條帶也很亮，如圖I。本發(fā)明提取的基因組DNA量大質優(yōu)，且無蛋白質污染?！?br> 權利要求
1.一種動物組織樣的基因組DNA提取試劑盒，包括 溶液A :細胞裂解液；溶液B 6 mol/L的NaCl溶液；溶液C :三氯甲烷；溶液D :TE緩沖液和蛋白酶K。
2.權利要求I所述一種動物組織樣的基因組DNA提取試劑盒的用法，其特征在于 .1)碎化組織樣將動物組織樣用剪刀切下20-60mg，放在一個I. 5 ml離心管蓋里，力口.100 u I溶液A，再把組織樣剪碎，然后再加入300 u I的溶液A ； .2)消化蛋白質向離心管內加入15的蛋白酶K，上下顛倒搖勻，放于65 ° C的振動水浴鍋內，水浴2個小時； .3)分離DNA:將水浴后的樣品加入200 u I溶液B，然后放在冰塊上，再加入500 yl溶液C，上下?lián)u動10分鐘，將樣品4 °C離心12000轉/分，10分鐘； .4)析出DNA:取離心管內的上清液600 到新的I. 5ML離心管中，加入1000 yl無水乙醇或等體積的異丙醇，搖動離心管直至DNA析出，靜置2分鐘；將析出DNA的離心管4.0C離心，12000轉/分，5分鐘; .5)洗滌DNA:倒出離心管中溶液后，離心管中再加入1000 u I的70% (體積比)乙醇，充分洗滌；4 °C離心，12000轉/分，2分鐘；重復此步驟，洗滌第二次； .6)快速干燥DNA:倒出離心管中溶液，用衛(wèi)生紙吸走管口殘液，離心甩下管壁上的乙醇，用10 ul移液器吸走剩余乙醇，倒置5分鐘離心管； .7)溶解DNA:加入130-600 ul的溶液D或ddH20，放置4 °C保存過夜，待用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種動物組織樣的基因組DNA快速提取試劑盒，屬于生物技術領域。試劑盒含有A、B、C、D四種溶液，具有操作簡單、提取速度快、成本低廉的特點。本發(fā)明通過將DNA提取過程簡化，提取試劑組合優(yōu)化，在保證DNA質量的前提下達到了快速、高效提取的效果組織樣只需5分鐘剪碎、細胞裂解時間只需2個小時、DNA干燥只需5分鐘，省時省力，特別適用于提取大批量動物組織樣本DNA的試驗。本發(fā)明提取的基因組DNA量大質優(yōu)，可以用600μl溶液溶解DNA，此溶液稀釋15倍后，經瓊脂糖檢測的條帶也很亮，且無蛋白質污染。
文檔編號C12N15/10GK102676505SQ201210169838
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月29日 優(yōu)先權日2012年5月29日
發(fā)明者付言峰, 任守文, 方曉敏, 李蘭, 李碧俠, 王學敏 申請人:江蘇省農業(yè)科學院