專利名稱：一株降解大豆主要過(guò)敏原的芽孢桿菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株芽孢桿菌及其應(yīng)用，特別是一株能降解大豆主要過(guò)敏原Gly m Bd60K芽孢桿菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，90%以上的過(guò)敏反應(yīng)是蛋、魚、貝殼、奶、花生、大豆、堅(jiān)果和小麥八類食物引起的。根據(jù)估計(jì)全世界人口將近有O. 5%對(duì)大豆過(guò)敏，大豆繼牛奶、雞蛋、花生后，是第四種導(dǎo)致幼兒過(guò)敏的常見(jiàn)致敏食物。上述八大致敏原中，大豆是我國(guó)種植最廣且消費(fèi)最多的植物蛋白，這是由其營(yíng)養(yǎng)性及其在食品加工過(guò)程中的功能性所決定的。我國(guó)是大豆的故鄉(xiāng)，各類大豆制品也是中國(guó)的主要營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。而且隨著中國(guó)加入WT0，人們生活水平的提高，食品エ業(yè)的發(fā)展也必將與國(guó)際接軌，這就需要我們必須重視食品中蛋白質(zhì)的過(guò)敏問(wèn)題，規(guī)范產(chǎn)品標(biāo)簽，同時(shí)研究開(kāi)發(fā)低致敏性食品。·
大豆蛋白中較為突出的3種致敏蛋白分別為Gly m Bd 30K、Gly m Bd 28K、Glym Bd60K。Gly m Bd 60K即是β-伴大豆球蛋白的α-亞基。它能被25%的對(duì)大豆敏感的過(guò)敏性皮炎患者的血清識(shí)別。大豆β -伴大豆球蛋白約占大豆籽粒總蛋白含量的25%，是影響大豆籽粒蛋白營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)及加工品質(zhì)的重要組分。大豆伴大豆球蛋白由α ’ _(76kDa)，a-(72kDa)和β -(52 54kDa)亞基組成的分子量為150kDa的三聚體化合物。α -亞基與α ’ -亞基和β-亞基在氨基酸序列上有高度的同源性，其中α亞基與α ’亞基的相似性更是超過(guò)90%。他們都是潛在的過(guò)敏原。大豆所含的致敏蛋白是限制大豆在食品和飼料加工中廣泛利用的關(guān)鍵因素，因此，能降低、去除大豆致敏蛋白就成為提高大豆蛋白品質(zhì)，是保障大豆制品在人類食品和畜禽飼料中安全與高效利用的關(guān)鍵性問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種降解大豆主要過(guò)敏原Gly m Bd 60K的芽孢桿菌BBE201108，篩選自預(yù)制備豆制品原料(大豆粉糟)，其分類學(xué)命名為芽孢桿菌Bacillussp.BBE201108，于2012年5月14日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCCNO :M2012165，保藏地址中國(guó)武漢、武漢大學(xué)。16SrDNA結(jié)果鑒定其為芽孢桿菌。所述芽孢桿菌能夠降解大豆分離蛋白的菌株。所述芽孢桿菌應(yīng)用于降解大豆蛋白主要過(guò)敏原也是本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。降解過(guò)敏原的方案為將菌株發(fā)酵上清應(yīng)用于含1%大豆分離蛋白O. IM pH 8. OPB緩沖液，經(jīng)SDS-PAGE檢驗(yàn)，能夠有效的降解大豆蛋白主要過(guò)敏原Gly m Bd 60K。本發(fā)明提供的芽孢桿菌BBE201108發(fā)酵24小時(shí)后蛋白酶活最高可達(dá)10. 5U/mL，收集發(fā)酵上清液，能在Omin到2h時(shí)間段內(nèi)降解大豆蛋白主要過(guò)敏原Gly m Bd 60K。


圖I芽孢桿菌BBE201108在大豆分離蛋白培養(yǎng)基上產(chǎn)生透明圈(大豆分離蛋白培養(yǎng)基組成為大豆分離蛋白3. 5%，氯化鈉1%,瓊脂2%)圖2定時(shí)取發(fā)酵液上清進(jìn)行SDS-PAGE圖(I泳道標(biāo)準(zhǔn)分子量蛋白；2泳道SPI-PB液未添加發(fā)酵上清液；3、泳道=SPI-PB液添加發(fā)酵上清液，酶解反應(yīng)時(shí)間依次為 2h、lh、50min、40min、30min、20min、IOmin0 )
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I 一株降解大豆主要過(guò)敏原Gly m Bd 60K芽孢桿菌的定性初篩方法(一)樣品來(lái)源
采樣來(lái)源為預(yù)制備豆制品的原料(大豆粉糟)(ニ)培養(yǎng)方法取采樣所得大豆粉糟IOg,加入90mL的無(wú)菌生理鹽水,搖床(200rpm)震蕩2h。(三)定性初篩采用大豆分離蛋白平板法。組成如下大豆分離蛋白3. 5%，氯化鈉1%，瓊脂2%。將富集培養(yǎng)后的懸液稀釋至不同的梯度10' 10_2、10' 10_4、10_5、10_6、10'涂布大豆分離蛋白平板，37°C培養(yǎng)2天，挑取能產(chǎn)生透明圈的單菌落。效果如圖I實(shí)施例2酶活測(cè)定(一)酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按下表配制各種不同濃度的酪氨酸溶液。表I配制各種不同濃度的酪氨酸溶液
權(quán)利要求
1.一株降解大豆主要過(guò)敏原的芽孢桿菌，于2012年5月14日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M 2012165。
2.權(quán)利要求I所述的芽孢桿菌，其特征在于篩選自預(yù)制備豆制品原料。
3.權(quán)利要求I所述的芽孢桿菌應(yīng)用于篩選能夠降解大豆分離蛋白的菌株。
4.權(quán)利要求I所述的芽孢桿菌應(yīng)用于降解大豆蛋白主要過(guò)敏原Glym Bd 60K。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于該菌株發(fā)酵上清應(yīng)用于含1%大豆分離蛋白0. IM pH 8. OPB緩沖液，經(jīng)SDS-PAGE檢驗(yàn)，能夠有效的降解大豆蛋白主要過(guò)敏原Gly mBd60K。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一株降解大豆主要過(guò)敏原的芽孢桿菌，本發(fā)明的降解菌Bacillus sp.BBE201108是從預(yù)制備豆制品原料(大豆粉糟)中篩選所得。其篩選步驟為微生物的富集，微生物的分離，透明圈法，SDS-PAGE驗(yàn)證，得到一株降解性能較好的菌株。該菌株能有效降解大豆主要過(guò)敏原Gly m Bd 60K。因此，能在一定程度上降低大豆蛋白致敏性，為保障大豆制品在人類食品和畜禽飼料中安全與高效利用提供參考。
文檔編號(hào)A23L1/211GK102827788SQ201210193348
公開(kāi)日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月13日
發(fā)明者陳堅(jiān), 張娟, 朱婷, 堵國(guó)成, 談銘 申請(qǐng)人:江南大學(xué)