專利名稱：提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基及其應(yīng)用和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，還涉及該培養(yǎng)基的應(yīng)用和方法。
背景技術(shù)：
聚蘋果酸(Polymalic acid，PMLA)以L-蘋果酸為唯一單體在體內(nèi)聚合而成，是一種新型完全生物降解性高分子材料，具有高度的生物相容性、生物降解性和生物可吸收性等優(yōu)點。由于PMLA在側(cè)鏈上具有懸掛羧基，容易與其他官能團反應(yīng)而制備PMLA衍生物，與聚乳酸等材料相比，PMLA在體內(nèi)易代謝性、易修飾性等方面表現(xiàn)出更好的優(yōu)勢，在藥物制齊U、食品包裝、農(nóng)業(yè)等方面應(yīng)用前景廣闊。聚蘋果酸還可以水解為單體，即L-蘋果酸，又名2-羥基丁二酸，是重要的有機酸和生物煉制平臺化合物。L-蘋果酸具有天然果實的酸味特 征，L-蘋果酸的酸感強度約相當(dāng)于檸檬酸的1.2倍，味覺自然豐厚，產(chǎn)熱量更低，可以替代檸檬酸作為食品添加劑加以應(yīng)用。聚蘋果酸的可以由出芽短梗霉(Aureobasidium pulIulans)以淀粉或葡萄糖為原料發(fā)酵生產(chǎn)聚蘋果酸，該過程是以三羧酸循環(huán)(TCA)代謝產(chǎn)生的蘋果酸經(jīng)聚蘋果酸聚合酶聚合而成聚蘋果酸，聚合過程需要ATP的參與。而細(xì)胞內(nèi)源ATP產(chǎn)生達到飽和條件下，無法繼續(xù)增加，因此在一定程度上影響了聚蘋果酸的得率。因此急需一種提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，能夠大幅度提高聚蘋果酸的產(chǎn)量。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中通過添加外源能源供體，提高細(xì)胞內(nèi)ATP的供應(yīng)量，從而提高聚蘋果酸的產(chǎn)量。為了實現(xiàn)上述為目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為
提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基是含有1-20 g/L的檸檬酸或檸檬酸鹽。優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基還包括葡萄糖50-200g/L、氮源l_5g/L、KH2P04 O. 005-0. 3g/L、ZnSO4 O. 005-0. 3g/L、MgSO4 O. 005-0. 3g/L、玉米漿 0. 05_3g/L 和 CaCO3 10-50 g/L。更優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基由葡萄糖100-150g/L、氮源2_4g/L、KH2PO4 O. 05-0. 2g/L、ZnSO4 O. 05-0. 2g/L、MgS04 O. 05-0. 2g/L、玉米漿 0. 5_2g/L、檸檬酸或檸檬酸鹽 5_15g/L 和CaCO3 20-40 g/L 組成。最優(yōu)選的，所述氮源為硫酸銨、氯化銨、硝酸鉀或硝酸鈉；所述檸檬酸鹽為檸檬酸鈉。本發(fā)明中檸檬酸可以用分析級檸檬酸，為降低生產(chǎn)成本也可以為工業(yè)生產(chǎn)檸檬酸中檸檬酸發(fā)酵液經(jīng)結(jié)晶剩余的液體，即檸檬酸母液。檸檬酸母液為檸檬酸發(fā)酵液經(jīng)鈣鹽法提取工藝，檸檬酸結(jié)晶后剩余的液體，檸檬酸母液中含檸檬酸60wt%，以及殘?zhí)?、蛋白、色素?Ca2+、Fe3+、S042_ 等離子。本發(fā)明目的之二在于提供培養(yǎng)基的應(yīng)用，技術(shù)方案為所述培養(yǎng)基在利用出芽短梗霉{Aureobasidium pulIulans )生產(chǎn)聚蘋果酸中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的之三在于提供利用培養(yǎng)基的方法，技術(shù)方案為
利用所述培養(yǎng)基生產(chǎn)聚蘋果酸的方法，包括以下步驟
將出芽短梗霉的活化種子液接種于所述提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基中，在溫度為23-30°C震蕩培養(yǎng)96小時以上。優(yōu)選的，將所述活化種子液與所述培養(yǎng)基按體積比為1:10-20接種，在溫度為25°C、轉(zhuǎn)速為180-1000 rpm條件下培養(yǎng)96-200小時。更優(yōu)選的，所述活化的種子液的制備方法是將出芽短梗霉接種于種子培養(yǎng)基，在溫度為23-30°C震蕩培養(yǎng)至0D_= O. 4，得活化種子液；所述種子培養(yǎng)基為葡萄糖40_100g/ L^NH4NO31-5 g/L、KH2PO4 O. 005-0. 3g/L、ZnSO4 O. 005-0· 3g/L、MgSO4 0· 005-0· 3g/L、玉米漿0.05-3 g/L和 CaCO3 10-50 g/L。最優(yōu)選的，所述出芽短梗霉為出芽短梗霉FMT1801 CCTCC NO: M2012223。本發(fā)明有益效果在于本發(fā)明公開的提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，由于含有適量的檸檬酸或檸檬酸鹽能夠為出芽短梗霉提供外源能源供體，能夠提高出芽短梗霉胞內(nèi)的ATP，因此能夠有效提高聚蘋果酸的產(chǎn)量，打破了聚蘋果酸合成中的瓶頸；同時利用出芽短梗霉發(fā)酵的終產(chǎn)物為聚蘋果酸，解決了傳統(tǒng)路線發(fā)酵直接產(chǎn)生蘋果酸會抑制菌種產(chǎn)酸能力的問題，因而能夠獲得高濃度的聚蘋果酸發(fā)酵液，發(fā)酵液中聚蘋果酸最高達48. 48g/L。本發(fā)明使用的出芽短梗霉FMT1801生產(chǎn)的聚蘋果酸還能直接分泌到胞外，用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液即可沉淀，容易提取，工藝步驟簡單，適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)，獲得的聚蘋果酸可通過酸水解獲得蘋果酸產(chǎn)品。本發(fā)明中朽1檬酸可以由朽1檬酸母液提供，我國是朽1檬酸發(fā)酵生產(chǎn)的世界第一大國。采用鈣鹽法或色譜法從發(fā)酵液中提取檸檬酸，提取后檸檬酸母液中含有大量都會產(chǎn)生大量的檸檬酸，直接丟棄造成資源浪費，如果將其回收繼續(xù)提取，容易導(dǎo)致產(chǎn)品收率下降，并影響產(chǎn)品質(zhì)量等問題。因此本發(fā)明將檸檬酸母液添加，提高聚蘋果酸產(chǎn)量，同時解決檸檬酸母液資源浪費等問題。菌種保藏
本發(fā)明中出芽短梗霉(Jtfreo AaWia pul Iulans^) FMT1801是從出芽短梗抱NRRLY2311經(jīng)過自然分離獲得能高效利用蔗糖為碳源產(chǎn)生聚蘋果酸的菌株，送中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC NO: M2012223，地址位于中國武漢武漢大學(xué)，保藏日期為2012年6月12日，分類命名為出芽短梗霉Uareo如Wiws pullulans ) FMT1801。
具體實施例方式以下將結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細(xì)的描述。優(yōu)選實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件。本發(fā)明使用的發(fā)酵菌株為出芽短梗霉(Auroobasidium pullulans ) FMT1801CCTCC NO: M2012223，將出芽短梗霉 FMT1801 CCTCC NO: M2012223 制備成 OD6tltl= O. 4 左右的菌液，為出芽短梗霉FMT1801種子液，備用。實施例I
生產(chǎn)聚蘋果酸的方法，具體步驟為a.種子活化
將出芽短梗霉FMT1801 CCTCC NO: M2012223接種于種子培養(yǎng)基中，接種量按照出芽短梗霉FMT1801種子液與種子培養(yǎng)基的體積比為1:200，種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖40 g/L、硝酸銨 O. 005 g/L、KH2PO4 O. 005g/L、ZnSO4 O. 005g/L、MgSO4 O. 005g/L、玉米漿 O. 5g/L 和CaCO3 10g/L，在溫度為23°C、轉(zhuǎn)速為250 rpm條件下震蕩培養(yǎng)72小時，得活化種子液。b.發(fā)酵
將步驟a所得活化種子液接種于含3L發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中，接種量按照活化種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:15，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖50 g/L、氯化銨I g/L、KH2PO4 O. 005g/L、ZnSO4 O. 005g/L、MgSO4 O. 005g/L、玉米漿 O. 005g/L、檸檬酸 20g/ L 和CaCO3 10 g/L，在溫度為28°C、轉(zhuǎn)速為500 rpm，通氣量為I: O. 8條件下培養(yǎng)200小時，培養(yǎng)液用板框過濾機過濾，收集濾液，得發(fā)酵液。c.聚蘋果酸提取
將步驟b所得發(fā)酵液中加入相當(dāng)于發(fā)酵液體積5倍的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液，40C冷凍24小時，轉(zhuǎn)速為4500rpm離心20分鐘，收集沉淀，得到聚蘋果酸。本實施例中，聚蘋果酸產(chǎn)量為38.76 g/L，獲得的聚蘋果酸用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗滌3次后，將沉淀溶解在濃度為2 M硫酸中，在80°C條件下水解12小時，得到蘋果酸，蘋果酸產(chǎn)量為43. 97g/L。實施例2
生產(chǎn)聚蘋果酸的方法，具體步驟為 a.種子活化
將出芽短梗霉FMT1801 CCTCC NO: M 2012223接種于種子培養(yǎng)基中，接種量按照出芽短梗霉FMT1801種子液與種子培養(yǎng)基的體積比為1:800，種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖100 g/L、硝酸銨 5 g/L,KH2PO4 O. 3g/L,ZnSO4 O. 3g/L, MgSO4 O. 3g/L、玉米漿 3 g/L、檸檬酸 15 g/L和CaCO3 50g/L在溫度為28°C、轉(zhuǎn)速為300 rpm條件下震蕩培養(yǎng)36小時，得活化種子液。b.發(fā)酵
將步驟a所得活化種子液接種于含50mL發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，接種量按照活化種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:10，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖200 g/L、硝酸銨5 g/L、KH2P04
O.3g/L,ZnSO4 0.3g/L、MgS04 O. 3g/L、玉米漿 3g/L、檸檬酸鈉 12 g/L 和 CaCO3 50 g/L，在溫度為30°C、轉(zhuǎn)速為300rpm條件下震蕩培養(yǎng)150小時，培養(yǎng)液用板框過濾機過濾，收集濾液，得發(fā)酵液。c.聚蘋果酸提取
將步驟b所得發(fā)酵液中加入相當(dāng)于發(fā)酵液體積4倍的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液，40C冷凍36小時，轉(zhuǎn)速為5000rpm離心5分鐘，收集沉淀，得到聚蘋果酸。本實施例中，聚蘋果酸產(chǎn)量為40. 67g/L，獲得的聚蘋果酸用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗滌3次后，將沉淀溶解在濃度為2 M硫酸中，在80°C條件下水解12小時，得到蘋果酸，蘋果酸產(chǎn)量為46. 14 g/L。實施例3
生產(chǎn)聚蘋果酸的方法，具體步驟為 a.種子活化將出芽短梗霉FMT1801 CCTCC NO: M2012223接種于種子培養(yǎng)基中，接種量按照出芽短梗霉FMT1801種子液與種子培養(yǎng)基的體積比為1:500，種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖80g/L、硝酸銨 4 g/L,KH2PO4 O. 2g/L,ZnSO4 O. 2g/L, MgSO4 O. 2g/L、玉米漿 2g/L 和 CaCO3 40 g/L 在溫度為25°C、轉(zhuǎn)速為180rpm條件下震蕩培養(yǎng)96小時，得活化種子液。b.發(fā)酵
將步驟a所得活化種子液接種于含50mL發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，接種量按照活化種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:10，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖150g/L、硝酸鈉4 g/L、KH2PO4O. 2g/L, ZnSO4 O. 2g/L, MgSO4 O. 2g/L、玉米漿 2g/L、檸檬酸母液 20 g/L 和 CaCO3 40 g/L,在溫度為23°C、轉(zhuǎn)速為180 rpm條件下震蕩培養(yǎng)96小時，培養(yǎng)液用板框過濾機過濾，收集濾液，得發(fā)酵液。c.聚蘋果酸提取
將步驟b所得發(fā)酵液中加入相當(dāng)于發(fā)酵液體積3倍的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液，40C·冷凍12小時，轉(zhuǎn)速為3500rpm離心45分鐘，收集沉淀，得到聚蘋果酸。·本實施例中，聚蘋果酸產(chǎn)量為46. 54g/L，獲得的聚蘋果酸用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗滌3次后，將沉淀溶解在濃度為2 M硫酸中，在80°C條件下水解12小時，得到蘋果酸，蘋果酸產(chǎn)量為52. 79g/L。本實施例中，檸檬酸母液為檸檬酸發(fā)酵液經(jīng)鈣鹽法提取工藝，檸檬酸結(jié)晶后剩余的液體，檸檬酸母液中含檸檬酸60wt%，以及殘?zhí)恰⒌鞍?、色素及Ca2+、Fe3+、S042-等離子。實施例4
生產(chǎn)聚蘋果酸的方法，具體步驟為 a.種子活化
將出芽短梗霉FMT1801 CCTCC NO: M2012223接種于種子培養(yǎng)基中，接種量按照出芽短梗霉FMT1801種子液與種子培養(yǎng)基的體積比為1:100，種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖60g/L、硝酸銨 2 g/L、KH2PO4 O. 05g/L、ZnSO4 O. 05g/L, MgSO4 O. 05g/L、玉米漿 O. 05g/L 和 CaCO3 20g/L在溫度為25°C、轉(zhuǎn)速為250 rpm條件下震蕩培養(yǎng)48小時，得活化種子液。b.發(fā)酵
將步驟a所得活化種子液接種于含50mL發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，接種量按照活化種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:20，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖100 g/L、硝酸鉀2 g/L、KH2P04
O.05g/L, ZnSO4 O. 05g/L,MgSO4 O. 05g/L、玉米漿 O. 5g/L、檸檬酸 I g/L 和 CaC0320 g/L，在溫度為25°C、轉(zhuǎn)速為220 rpm條件下震蕩培養(yǎng)144小時，培養(yǎng)液用板框過濾機過濾，收集濾液，得發(fā)酵液。c.聚蘋果酸提取
將步驟b所得發(fā)酵液中加入相當(dāng)于發(fā)酵液體積2倍的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液，40C冷凍24小時，轉(zhuǎn)速為4000rpm離心30分鐘，收集沉淀，得到聚蘋果酸。本實施例中，聚蘋果酸產(chǎn)量為41. 7g/L，獲得的聚蘋果酸用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗滌3次后，將沉淀溶解在濃度為2 M硫酸中，在80°C條件下水解12小時，得到蘋果酸，蘋果酸產(chǎn)量為47. 3g/L。實施例5
生產(chǎn)聚蘋果酸的方法，具體步驟為a.種子活化
將出芽短梗霉FMT1801 CCTCC NO: M2012223接種于種子培養(yǎng)基中，接種量按照出芽短梗霉FMT1801種子液與種子培養(yǎng)基的體積比為1:1000，種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖70 g/L、硝酸銨 3 g/L、KH2PO4 O. I g/L, ZnSO4 O. 15g/L，MgSO4 O. lg/L、玉米漿 lg/L 和 CaCO3 30 g/L在溫度為25°C、轉(zhuǎn)速為220 rpm條件下震蕩培養(yǎng)48小時，得活化種子液。b.發(fā)酵
將步驟a所得活化種子液接種于含5L發(fā)酵培養(yǎng)基的IOL發(fā)酵罐中，接種量按照活化種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:10，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖120 g/L、硝酸鉀3 g/L、KH2PO4 O. I g/L, ZnSO4 O. 15g/L、MgS04 O. lg/L、玉米漿 lg/L、檸檬酸鈉 lg/ L 和 CaCO3 30 g/L，在溫度為25°C、轉(zhuǎn)速為1000 rpm，通氣量為I: I. 6條件下培養(yǎng)96小時，培養(yǎng)液用板框過濾機過濾，收集濾液，得發(fā)酵液。c.聚蘋果酸提取
將步驟b所得發(fā)酵液中加入相當(dāng)于發(fā)酵液體積2倍的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液，40C冷凍24小時，在3000rpm條件下離心20分鐘，收集沉淀，得到聚蘋果酸。本實施例中，聚蘋果酸產(chǎn)量為48. 48g/L，獲得的聚蘋果酸用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗滌3次后，將沉淀溶解在濃度為2 M硫酸中，在80°C條件下水解12小時，得到蘋果酸，蘋果酸產(chǎn)量為55g/L。實施例6
生產(chǎn)聚蘋果酸的方法，具體步驟為
a.種子活化
將出芽短梗霉FMT1801 CCTCC NO: M2012223接種于種子培養(yǎng)基中，接種量按照出芽短梗霉FMT1801種子液與種子培養(yǎng)基的體積比為1:100，種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖60g/L、硝酸銨 2 g/L、KH2PO4 O. 05g/L、ZnSO4 O. 05g/L, MgSO4 O. 05g/L、玉米漿 O. 05g/L 和 CaCO3 20g/L在溫度為25°C、轉(zhuǎn)速為250 rpm條件下震蕩培養(yǎng)48小時，得活化種子液。b.發(fā)酵
將步驟a所得活化種子液接種于含50mL發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，接種量按照活化種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:15，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖100 g/L、硝酸鉀2 g/L、KH2P04
O.05g/L,ZnSO4 O. 05g/L,MgSO4 O. 05g/L、玉米漿 O. 5g/L 和 CaC0320 g/L，在溫度為 25°C、轉(zhuǎn)速為220 rpm條件下震蕩培養(yǎng)144小時，培養(yǎng)液用板框過濾機過濾，收集濾液,得發(fā)酵液。c.聚蘋果酸提取
將步驟b所得發(fā)酵液中加入相當(dāng)于發(fā)酵液體積2倍的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液，40C冷凍24小時，轉(zhuǎn)速為4000rpm離心30分鐘，收集沉淀，得到聚蘋果酸。本實施例為對比實施例，聚蘋果酸產(chǎn)量為30. 86 g/L，獲得的聚蘋果酸用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗滌3次后，將沉淀溶解在濃度為2 M硫酸中，在80°C條件下水解12小時，得到蘋果酸，蘋果酸產(chǎn)量為35.01 g/L。由實施例f 5與實施例6相比聚蘋果酸的產(chǎn)量均有提高，其中實施例5提高最為明顯，提高了 57. 1%，其次為實施例3提高了 50. 8%，實施例I、實施例2和實施例4分別提高了 25. 6%、31. 8%和48. 5%，其機理為添加的檸檬酸或檸檬酸鹽能夠提高出芽短梗霉胞內(nèi)的ATP，打破聚蘋果酸合成的瓶頸，提高聚蘋果酸的產(chǎn)量。
最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過參照本發(fā)明的優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了描述， 但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神和范圍。
權(quán)利要求
1.提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基是含有1-20g/L的檸檬酸或檸檬酸鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基還包括葡萄糖 50-200g/L、氮源 l_5g/L、KH2PO4 O. 005-0. 3g/L、ZnSO4 O. 005-0. 3g/L、MgSO4O. 005-0. 3g/L、玉米漿 0. 05-3g/L 和 CaCO3 10-50 g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基由葡萄糖 100-150g/L、氮源 2-4g/L、KH2PO4 O. 05-0. 2g/L、ZnSO4 O. 05-0. 2g/L、MgSO4 O. 05-0. 2g/L、玉米漿0. 5-2g/L、檸檬酸或檸檬酸鹽5-15g/L和CaCO3 20-40 g/L組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，其特征在于所述氮源為硫酸銨、氯化銨、硝酸鉀或硝酸鈉；所述檸檬酸鹽為檸檬酸鈉。
5.權(quán)利要求1-4任一項所述培養(yǎng)基在利用出芽短梗霉pulIulans、生產(chǎn)聚蘋果酸中的應(yīng)用。
6.利用權(quán)利要求1-4任一項所述培養(yǎng)基生產(chǎn)聚蘋果酸的方法，其特征在于，包括以下步驟 將出芽短梗霉的活化種子液接種于所述提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基中，在溫度為23-30°C震蕩培養(yǎng)96小時以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于將所述活化種子液與所述培養(yǎng)基按體積比為1:10-20接種，在溫度為25°C、轉(zhuǎn)速為180-1000 rpm條件下培養(yǎng)96-200小時。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于所述活化的種子液的制備方法是將出芽短梗霉接種于種子培養(yǎng)基，在溫度為23-30°C震蕩培養(yǎng)至0D_= O. 4，得活化種子液；所述種子培養(yǎng)基為葡萄糖 40-100g/L、NH4NO31-5 g/L、KH2PO4 O. 005-0. 3g/L、ZnSO4O. 005-0. 3g/L、MgSO4 0. 005-0. 3g/L、玉米漿 0. 05-3 g/L 和 CaCO3 10-50 g/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述出芽短梗霉為出芽短梗霉FMT1801CCTCC NO: M 2012223。
全文摘要
本發(fā)明公開了提高聚蘋果酸產(chǎn)量的培養(yǎng)基，含有1-20g/L的檸檬酸或檸檬酸鹽，能夠為芽短梗霉在發(fā)酵過程中提供外源能源供體，提高細(xì)胞內(nèi)ATP的供應(yīng)量，從而提高聚蘋果酸的產(chǎn)量，最高能提高57.1%；本發(fā)明公開的培養(yǎng)基能夠用于出芽短梗霉發(fā)酵產(chǎn)生聚蘋果酸，具有很好的經(jīng)濟效益。
文檔編號C12P7/62GK102899365SQ201210200489
公開日2013年1月30日 申請日期2012年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月18日
發(fā)明者鄒祥, 戢運超, 吳小燕, 昝占全, 馬海霞 申請人:西南大學(xué)