專利名稱：血液白細(xì)胞分離液及其制作方法、真空采血管與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域中血液采集、白細(xì)胞密度自然沉降分離采集真空容器，尤其涉及血液白細(xì)胞分離液、該血液白細(xì)胞分離液的應(yīng)用、該血液白細(xì)胞分離液的制作方法、具有該血液白細(xì)胞分離液的血液白細(xì)胞分離真空采血管、以及該血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)今醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)中血液病毒基因檢驗(yàn)、免疫細(xì)胞功能的檢驗(yàn)，都需要在血液采集后分離出具有吞噬病毒能力的有核白細(xì)胞或免疫淋巴細(xì)胞，傳統(tǒng)的細(xì)胞分離方法一般都利用各種細(xì)胞的密度不同，配制各種目標(biāo)細(xì)胞相同密度的高離子強(qiáng)度的細(xì)胞分離液，定量加入試管中，將抗凝血沿管壁緩慢加入管中(不能沖破分離液液面層)，然后使用離心機(jī)進(jìn)行離心(離心力范圍需求非常窄)，離心力與離心半徑、離心機(jī)實(shí)際轉(zhuǎn)速也只是理論推導(dǎo)值， 無法實(shí)際進(jìn)行測(cè)定和控制，專業(yè)性非常強(qiáng)，人為影響因素大，分離效果的重復(fù)性差?；谏鲜鰝鹘y(tǒng)細(xì)胞分離方法存在的諸多缺陷專業(yè)性強(qiáng)、操作難度大，目前尚無統(tǒng)一的試劑，也沒有統(tǒng)一操作規(guī)程，目標(biāo)細(xì)胞收集率非常低、耗時(shí)、耗力，常要重復(fù)進(jìn)行多次收集。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，有必要提供能把復(fù)雜細(xì)胞分離技術(shù)變成簡(jiǎn)單采血分離過程、過程易統(tǒng)一、試驗(yàn)效果的重復(fù)性好、質(zhì)量可控性強(qiáng)的血液白細(xì)胞分離液、該血液白細(xì)胞分離液的應(yīng)用、該血液白細(xì)胞分離液的制作方法、具有該血液白細(xì)胞分離液的血液白細(xì)胞分離真空采血管、以及該血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，血液白細(xì)胞分離液，其由重量份比例為18.511.5 :
I.5 2. 5 :2 3 69 :3. 8 :0. I :0. 05 O. 15 :2 3的葡聚糖T500、羥乙基淀粉、泛影葡胺、水、檸檬酸鈉、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯卩比咯烷酮組成。本發(fā)明還涉及上述血液白細(xì)胞分離液的制作方法，其包括以下步驟將葡聚糖T500、羥乙基淀粉、泛影葡胺按重量份比例18. 5 21. 5 :1. 5 2.5 :2 3 69加入玻璃容器中，并加入水充分溶解；將檸檬酸鈉、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯吡咯烷酮按重量份比例3.8 :0. I :0. 05、. 15 2^3加入該玻璃容器中，并充分混勻形成該血液白細(xì)胞分離液，其中，該葡聚糖T500 :該羥乙基淀粉該泛影葡胺該水該檸檬酸鈉該NaN3 :該聚二烯丙基二甲基氯化銨該聚乙烯吡咯烷酮為18. 5 21. 5 :1. 5 2. 5 :2 3 69 :3. 8 0. I O. 05、. 15 :2 3。作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，該血液白細(xì)胞分離液的制作方法還包括以下步驟用O. I μ m濾膜抽濾。本發(fā)明還涉及上述血液白細(xì)胞分離液的應(yīng)用，該血液白細(xì)胞分離液用于血液病毒基因檢驗(yàn)或免疫細(xì)胞功能檢驗(yàn)。
本發(fā)明還涉及血液白細(xì)胞分離真空采血管，其包括真空管體以及收容在該真空管體內(nèi)的血液白細(xì)胞分離液，該血液白細(xì)胞分離液由重量份比例為18. 5^21.5 :1.5^2. 5 2 3 69 :3.8 :0. I :0. 05 O. 15 :2 3的葡聚糖T500、羥乙基淀粉、泛影葡胺、水、檸檬酸鈉、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯吡咯烷酮組成。作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，該血液白細(xì)胞分離液與該血液白細(xì)胞分離真空采血管待獲取的采血量的比例為2:1。作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，該血液白細(xì)胞分離真空采血管預(yù)置該待獲取的采血
量±10%真空度。 本發(fā)明還涉及上述任意一種血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用，該血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用包括以下步驟按常規(guī)真空采血管采血，采血后將該血液白細(xì)胞分離真空采血管上下顛倒若干次；用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。本發(fā)明還涉及上述任意一種血液白細(xì)胞分離真空采血管的另一種應(yīng)用，該血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用包括以下步驟按常規(guī)真空采血管采血，采血后將該血液白細(xì)胞分離真空采血管上下顛倒若干次；將該血液白細(xì)胞分離真空采血管插在試管架上，其中，該血液白細(xì)胞分離真空采血管傾斜于該試管架；自然沉淀45分鐘后，對(duì)該血液白細(xì)胞分離真空采血管中的液體分離出含白細(xì)胞的上清液層；將該上清液層中的上清液用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。作為上述方案的進(jìn)一步改進(jìn)，當(dāng)該血液白細(xì)胞分離真空采血管插在試管架上時(shí)，該血液白細(xì)胞分離真空采血管傾斜于該試管架。本發(fā)明提供的血液白細(xì)胞分離液、該血液白細(xì)胞分離液的應(yīng)用、該血液白細(xì)胞分離液的制作方法、具有該血液白細(xì)胞分離液的血液白細(xì)胞分離真空采血管、以及該血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用利用以下原理血液中紅細(xì)胞與白細(xì)胞比例為5000 :1，其中紅細(xì)胞具有干擾大的特性，在不影響細(xì)胞免疫活性和細(xì)胞完整的情況下將紅細(xì)胞和白細(xì)胞分離收集，追求分離操作過程的簡(jiǎn)單化、標(biāo)準(zhǔn)化以及重復(fù)性好、細(xì)胞收集率高，解決了醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)急待解決的問題。本發(fā)明提供的血液白細(xì)胞分離液、該血液白細(xì)胞分離液的應(yīng)用、該血液白細(xì)胞分離液的制作方法、具有該血液白細(xì)胞分離液的血液白細(xì)胞分離真空采血管、以及該血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用存在以下有益效果將臨床采血、抗凝白細(xì)胞分離一次性完成，真空采血管定量采血后，上下顛倒混勻，分離液中的檸檬酸鈉和血液中的鈣離子蟄合而抗凝，不存在破壞分離液液面層的技術(shù)問題，自然沉淀后吸取上清液，不需要離心、自然不需要考慮離心技術(shù)，把復(fù)雜細(xì)胞分離技術(shù)變成簡(jiǎn)單采血分離過程，過程易統(tǒng)一，試驗(yàn)效果的重復(fù)性好，質(zhì)量可控性強(qiáng)。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。本發(fā)明的目的在于解決臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)在血液中分離出所需一定濃度的白細(xì)胞樣本這一問題，將這一復(fù)雜的、專業(yè)性非常高的分離過程簡(jiǎn)單化、標(biāo)準(zhǔn)化。
本發(fā)明較佳實(shí)施方式提供的血液白細(xì)胞分離真空采血管包括真空管體以及收容在該真空管體內(nèi)的血液白細(xì)胞分尚液。在本實(shí)施方式中，真空管體的管身大而長(zhǎng)，根據(jù)所需目標(biāo)細(xì)胞的量，選擇采血管的大小，采血量(血液白細(xì)胞分離真空采血管待獲取的采血量)5ml — 25ml，加上血液白細(xì)胞分離液(血液白細(xì)胞分離液采血量為2:1)，真空管體直徑16mm,長(zhǎng)度宜在12cm—20cm之間,選用材質(zhì)是透明材料制成，內(nèi)壁娃化處理。血液白細(xì)胞分離液用于血液病毒基因檢驗(yàn)或免疫細(xì)胞功能檢驗(yàn)，其由重量份比例為18. 5 21. 5 1. 5 2. 5 :2 3 69 3. 8 0. I 0. 05 O. 15 :2 3的葡聚糖T500、羥乙基淀粉、泛影葡胺、水、檸檬酸鈉、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯吡咯烷酮組成。也就是說，血液白細(xì)胞分離液的組成成分中，葡聚糖T500重量份優(yōu)化比例為20%，聚二烯丙基二甲基氯化銨重量份優(yōu)化比例為O. 1%，羥乙基淀粉重量份優(yōu)化比例為2%，泛影葡胺重量份優(yōu)化比例為2. 5%，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)重量份優(yōu)化比例為2. 5%。在本實(shí)施方式中，血液白細(xì)胞分離液與采血量的比例為2:1，將血液白細(xì)胞分離液加入采血管(即真空管體)中，預(yù)置采血管的采血量±10%真空度。即為血液白細(xì)胞分離真空采血管。 血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用I包括以下步驟按常規(guī)真空采血管采血，采血后將該血液白細(xì)胞分離真空采血管上下顛倒若干次；用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果O血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用2包括以下步驟按常規(guī)真空采血管采血，采血后將該血液白細(xì)胞分離真空采血管上下顛倒若干次(一般采血后緩慢上下顛倒3次為適宜)；將該血液白細(xì)胞分離真空采血管插在試管架上，優(yōu)選地，該血液白細(xì)胞分離真空采血管傾斜于該試管架；自然沉淀45分鐘，對(duì)該血液白細(xì)胞分離真空采血管中的液體分離出含白細(xì)胞的上清液層(若臨檢需要可另行再做單類型細(xì)胞分離，如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞等)；將該上清液層中的上清液用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。血液白細(xì)胞分離真空采血管中的添加劑是本發(fā)明重要組份之一，即血液白細(xì)胞分離液。研究人員重點(diǎn)研究了血液白細(xì)胞分離液在采血時(shí)按比例與血液混合時(shí)的密度；各類細(xì)胞在混合液中的分布狀態(tài)；溶液離子的電荷對(duì)各類細(xì)胞的影響。用聚二丙基二甲基氯化銨(PDDA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)聚電解質(zhì)(帶正電荷)中和紅細(xì)胞表面電荷層(負(fù)電荷)，因?yàn)榧t細(xì)胞是圓盤狀結(jié)構(gòu)，可以形成盤面疊加的“串珠”狀聚集下沉，下沉的速度與紅細(xì)胞聚集形成的“串珠”大小成正比，與血液白細(xì)胞分離液密度成反比。本發(fā)明是目前醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)界首次進(jìn)入把血液采集與自然沉淀快速分離白細(xì)胞于一體的研究領(lǐng)域。實(shí)驗(yàn)取Φ16Χ160πιπι玻璃管，加5毫升本發(fā)明的血液白細(xì)胞分離液，預(yù)置
2.5± 10%毫升真空度，數(shù)量50支。應(yīng)用I :臨床采血后，上下顛倒混勻，立即用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。應(yīng)用2 :自然沉淀45分鐘后，吸取上清液再在同一臺(tái)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。
權(quán)利要求
1.血液白細(xì)胞分離液，其特征在于，其由重量份比例為18.5^21. 5 :1. 5^2. 5 2^3 69 3.8 :0. I :0. 05 0. 15 :2 3的葡聚糖T500、羥乙基淀粉、泛影葡胺、水、檸檬酸鈉、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯吡咯烷酮組成。
2.如權(quán)利要求I所述的血液白細(xì)胞分離液的制作方法，其特征在于，其包括以下步驟 將葡聚糖T500、羥乙基淀粉、泛影葡胺按重量份比例18. 5^21. 5 :1. 5^2. 5 2^3 69加入玻璃容器中，并加入水充分溶解； 將檸檬酸鈉、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯吡咯烷酮按重量份比例3. 8 0. I 0.05、. 15 2^3加入該玻璃容器中，并充分混勻形成該血液白細(xì)胞分離液，其中，該葡聚糖T500 :該羥乙基淀粉該泛影葡胺該水該檸檬酸鈉該NaN3 :該聚二烯丙基二甲基氯化銨該聚乙烯吡咯烷酮為18. 5 21. 5 :1. 5 2. 5 :2 3 69 :3. 8 :0. I :0. 05 0. 15 :2 3。
3.如權(quán)利要求2所述的血液白細(xì)胞分離液的制作方法，其特征在于，該血液白細(xì)胞分離液的制作方法還包括以下步驟用0. I ii m濾膜抽濾。
4.如權(quán)利要求I所述的血液白細(xì)胞分離液的應(yīng)用，該血液白細(xì)胞分離液用于血液病毒基因檢驗(yàn)或免疫細(xì)胞功能檢驗(yàn)。
5.血液白細(xì)胞分離真空采血管，其包括真空管體以及收容在該真空管體內(nèi)的如權(quán)利要求I所述的血液白細(xì)胞分離液。
6.如權(quán)利要求5所述的血液白細(xì)胞分離真空采血管，其特征在于，該血液白細(xì)胞分離液與該血液白細(xì)胞分尚真空米血管待獲取的米血量的比例為2: I。
7.如權(quán)利要求5或6所述的血液白細(xì)胞分離真空采血管，其特征在于，該血液白細(xì)胞分離真空采血管預(yù)置該待獲取的采血量±10%真空度。
8.血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用，該血液白細(xì)胞分離真空采血管為權(quán)利要求5至7中任意一項(xiàng)所述的血液白細(xì)胞分離真空采血管，該血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用包括以下步驟 按常規(guī)真空采血管采血，采血后將該血液白細(xì)胞分離真空采血管上下顛倒若干次； 用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。
9.血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用，該血液白細(xì)胞分離真空采血管為權(quán)利要求5至7中任意一項(xiàng)所述的血液白細(xì)胞分離真空采血管，該血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用包括以下步驟 按常規(guī)真空采血管采血，采血后將該血液白細(xì)胞分離真空采血管上下顛倒若干次； 將該血液白細(xì)胞分離真空采血管插在試管架上； 自然沉淀45分鐘后，對(duì)該血液白細(xì)胞分離真空采血管中的液體分離出含白細(xì)胞的上清液層； 將該上清液層中的上清液用血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。
10.如權(quán)利要求9所述的血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)該血液白細(xì)胞分離真空采血管插在試管架上時(shí)，該血液白細(xì)胞分離真空采血管傾斜于該試管架。
全文摘要
本發(fā)明公開了血液白細(xì)胞分離液、該血液白細(xì)胞分離液的應(yīng)用、該血液白細(xì)胞分離液的制作方法、具有該血液白細(xì)胞分離液的血液白細(xì)胞分離真空采血管、以及該血液白細(xì)胞分離真空采血管的應(yīng)用，血液白細(xì)胞分離液由重量份比例為18.5~21.51.5~2.52~3693.80.10.05~0.152~3的葡聚糖T500、羥乙基淀粉、泛影葡胺、水、檸檬酸鈉、NaN3、聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯吡咯烷酮組成。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于能將臨床采血、抗凝白細(xì)胞分離一次性完成，血液白細(xì)胞分離液中的檸檬酸鈉和血液中的鈣離子蟄合而抗凝，不存在破壞分離液液面層的技術(shù)問題，自然沉淀后吸取上清液不需要離心，把復(fù)雜細(xì)胞分離技術(shù)變成簡(jiǎn)單采血分離過程，過程易統(tǒng)一，試驗(yàn)效果的重復(fù)性好，質(zhì)量可控性強(qiáng)。
文檔編號(hào)C12Q1/06GK102703597SQ20121020383
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月20日
發(fā)明者王之侃 申請(qǐng)人:安徽信靈檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)科技有限公司