專利名稱：一種植物離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物病蟲害抗性鑒定方法，具體涉及ー種植物離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法。
背景技術(shù)：
菌核病可危害400多種植物，比如油菜，每年因菌核病的危害我國油菜減產(chǎn)10-80%。培育抗病品種是防治菌核病危害最經(jīng)濟(jì)的途徑。簡(jiǎn)單易行，準(zhǔn)確的菌核病抗性鑒定方法是篩選抗病材料的關(guān)鍵。目前菌核病抗性鑒定有葉片抗性鑒定和莖桿抗性鑒定，葉片抗性鑒定包括離體葉
片接種、葉腋接種、葉柄接種、子葉接種等。這些方法雖然操作簡(jiǎn)單，但葉片的抗性并不能完全反映莖桿的抗性。菌核病浸染莖桿后，將導(dǎo)致產(chǎn)量嚴(yán)重降低。對(duì)莖桿抗性鑒定有田間莖桿牙簽接種法和莖桿菌絲塊捆綁法，兩種方法簡(jiǎn)單易行，適合大規(guī)模接種鑒定，但容易受大田環(huán)境條件的影響，接種鑒定不穩(wěn)定。比如遇到干燥等不利于菌核病發(fā)病的氣候條件，將導(dǎo)致大田接種鑒定的失敗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)單、穩(wěn)定的莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法。本方法在室內(nèi)可控條件下，創(chuàng)造適宜菌核病浸染的溫度和濕度環(huán)境，對(duì)離體的莖桿進(jìn)行接種鑒定，根據(jù)菌斑的長度來衡量材料抗菌核病的強(qiáng)弱。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法，首先，用打孔器沿鋪滿核盤菌菌絲的PDA培養(yǎng)基的邊緣打孔，獲得大小一致的PDA菌絲塊，作為接種體用于離體莖桿接種；然后截取莖桿并將離體莖桿轉(zhuǎn)移至室內(nèi)，在莖桿上制造與接種體相同形狀的創(chuàng)傷后，覆蓋接種體，在溫度和濕度恒定的室內(nèi)環(huán)境，進(jìn)行核盤菌接種；記錄菌斑擴(kuò)展長度，衡量抗菌核病的強(qiáng)弱。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)該接種方法是在實(shí)驗(yàn)室可控環(huán)境條件下，發(fā)病條件一致，接種鑒定穩(wěn)定，方法簡(jiǎn)單，接種效率高，周期短，接種部位靈活，可對(duì)單株進(jìn)行重復(fù)鑒定，適合對(duì)材料進(jìn)行大規(guī)模接種鑒定。


圖I為接種油菜莖桿后第3天菌斑的長度。
具體實(shí)施例方式以下以鑒定蕓苔屬莖桿菌核病抗病性為本發(fā)明方法的ー種具體實(shí)施方式
，但并不是對(duì)本發(fā)明方法的限定，任何不超離本發(fā)明實(shí)質(zhì)內(nèi)容的變換，仍應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例I
I.接種體的準(zhǔn)備I)病原菌采集于重慶市油菜工程技術(shù)中心試驗(yàn)田，其純化過程為將采集的菌核接種于馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)中，于22°C黑暗培養(yǎng)2天，從邊緣挑取菌絲接入新的PDA培養(yǎng)基，2天后再次將邊緣的菌絲轉(zhuǎn)接，如此反復(fù)，直至培養(yǎng)基中長出的菌絲不含其它雜菌為止。其中PDA培養(yǎng)基的制備為200g 土豆、20g蔗糖和15g瓊脂粉，定容到1し2)離體實(shí)驗(yàn)接種體(PDA菌絲塊)制備取活化后的菌種ー小塊，接種于裝有PDA培養(yǎng)基的無菌培養(yǎng)皿中央，于22°C、85%濕度條件下培養(yǎng)2天，待菌絲均勻鋪滿培養(yǎng)基表面后，用直徑6_的打孔器沿培養(yǎng)皿邊緣打孔，獲得的PDA菌絲塊即可用于離體莖桿接種。2.離體莖桿接種在終花期，在距地面20cm處截取約30cm長的主莖并截取約30cm長最底端的2根側(cè)枝，將莖桿兩端用保鮮膜纏繞(以防止水分散失)。以17份蕓薹屬植物為例進(jìn)行菌核病接種鑒定。這些材料包括3份白菜(B. rapa)，2份甘藍(lán)(B. oleracea)，6份甘藍(lán)型油菜(B. napus)，4份芥菜型油菜(B. juncea)和2份埃塞俄比亞芥菜(B. carinata)，其具體材料見表I。 接種是在ー個(gè)面積約20平方米、可控溫的接種室內(nèi)進(jìn)行。首先將lX2m2的三合板放置于大小相稱、高40cm的鋁合金框架上，在三合板鋪上濕毛巾，上面墊ー層濾紙。將取回的莖桿置于備好的濾紙上，用直徑為4_的打孔器在莖桿表面打2個(gè)孔，從而造成表面創(chuàng)傷，2個(gè)孔間的間隔為10cm。將直徑為6mm的PDA菌絲塊帶菌面緊貼于創(chuàng)傷處(圖I)。接種完畢后，在三合板上方再放置ー個(gè)相同大小的鋁合金框架，最后用塑料膜將三合板和上方的鋁合金框架一同密閉，并保持密閉間的濕度維持在90-95%內(nèi)ー恒定濕度。室內(nèi)溫度控制在22-24攝氏度內(nèi)ー恒定溫度。離體接種3天后，測(cè)量菌斑的長度，發(fā)現(xiàn)材料間的菌斑大小有差異明顯，其具體表現(xiàn)見表I。主莖和側(cè)枝菌斑的大小存在顯著的正相關(guān)(r=0.657，P=O. 911)。主莖和側(cè)枝的菌斑長度和莖桿的直徑不存在顯著相關(guān)性(主莖r=0. 056，P=O. 824 ;側(cè)枝r=-0. 021，P=O. 935)。本實(shí)施例結(jié)果如表I。
權(quán)利要求
1.ー種植物離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法，首先，用打孔器沿鋪滿核盤菌菌絲的PDA培養(yǎng)基的邊緣打孔，獲得大小一致的PDA菌絲塊，作為接種體；然后截取植物莖桿并將離體莖桿轉(zhuǎn)移至室內(nèi)，在莖桿上制造與接種體相同形狀的創(chuàng)傷后，覆蓋上接種體，在溫度和濕度恒定、適宜菌核病浸染的密閉環(huán)境，進(jìn)行核盤菌接種；記錄菌斑擴(kuò)展長度，衡量抗菌核病的強(qiáng)弱。
2.根據(jù)權(quán)利要求I中所述的離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法，其特征在于所述植物為油菜等莖桿容易感染菌核病的植物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I中所述的植物離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法，其特征在于離體接種的莖桿可以為主莖、側(cè)枝、莖段。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2中所述的植物離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法，其特征在于適宜菌核病浸染的環(huán)境為，在22-24°C范圍內(nèi)設(shè)定ー個(gè)恒定溫度，在90 -95%濕度范圍
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法，其特征在于在接種后第3到4天測(cè)量菌斑生長的長度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種植物離體莖桿接種鑒定菌核病抗性的方法，即將植物主莖或者分枝砍下，放置在溫度和濕度恒定的密閉環(huán)境，進(jìn)行核盤菌接種。通過記錄菌斑擴(kuò)展長度，衡量材料的抗病性強(qiáng)弱。與傳統(tǒng)的菌核病莖桿抗性鑒定方法相比較，本發(fā)明在可控環(huán)境條件下進(jìn)行，發(fā)病條件一致，接種鑒定穩(wěn)定；方法簡(jiǎn)單，周期短，接種效率高；接種部位靈活，可對(duì)單株進(jìn)行重復(fù)鑒定，適合對(duì)材料進(jìn)行大規(guī)模接種鑒定。
文檔編號(hào)C12Q1/18GK102808015SQ20121022995
公開日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2012年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月4日
發(fā)明者錢偉, 梅家琴, 丁一娟, 魏大勇 申請(qǐng)人:西南大學(xué)