專利名稱：一種戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー種戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵方法，適用于戊糖片球菌的高密度發(fā)酵生產(chǎn)。
背景技術(shù)：
戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus, P. p)是ー種常見的乳酸菌,細(xì)胞圓球形，不形成芽抱，不運(yùn)動(dòng)，兼性厭氧，發(fā)酵葡萄糖，不產(chǎn)氣，發(fā)酵阿拉伯糖、核糖、麥芽糖等，接觸酶陽性，屬于革蘭氏陽性細(xì)菌(凌代文，1999，乳酸細(xì)菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法.中國輕エ業(yè)出版社)。戊糖片球菌被認(rèn)為是動(dòng)物體內(nèi)的益生菌，可直接應(yīng)用于動(dòng)物喂食、動(dòng)物飼料 和青貯飼料中。天然乳酸菌飼料添加劑用于秸桿青貯的優(yōu)勢(shì)縮短發(fā)酵周期，快速降低PH值；抑制腐敗細(xì)菌的生長繁殖，解決飼料的腐敗問題；降解纖維素并轉(zhuǎn)化為乳酸，提高飼料的利用率；保持飼料的鮮嫩汁液和營養(yǎng)成分，提高飼料的適ロ性和消化率；明顯減少流出物，降低飼料干物質(zhì)的損失(Anastasiadou, Growth and metabolism of ameat isolated strain of Pediococcus pentosaceus in submerged fermentationPurification, characterization and properties of the produced pediocin SM-1.Enzyme and Microbial Technology, 2008)。在發(fā)酵肉制品中，戍糖片球菌一直是商業(yè)發(fā)酵劑中的必要成員，可用于各種香腸發(fā)酵，井能滿足加工過程中的許多要求，具有較高的競爭性和較好的環(huán)境適應(yīng)性，作為肉制品發(fā)酵劑使用吋，從開始接種到產(chǎn)品消費(fèi)，其均為優(yōu)勢(shì)微生物(Hammes, Starters in tne processing of meat products. Meat SciencjIggzU0戊糖片球菌可以利用碳水化合物產(chǎn)酸，從而使肉制品的pH下降，賦予其特有的風(fēng)味；另外戊糖片球菌產(chǎn)生的蛋白酶、脂酶及過氧化氫酶等，可使肉中的蛋白質(zhì)分解為人體易吸收的物質(zhì)，分解肉中的脂肪酸為短鏈揮發(fā)性脂肪酸和酷類物質(zhì)，同時(shí)產(chǎn)生大量風(fēng)味物質(zhì)，提高產(chǎn)品的營養(yǎng)價(jià)值(楊華，發(fā)酵劑及抗氧化劑對(duì)鯰魚發(fā)酵香腸品質(zhì)的影響，食品與發(fā)酵エ業(yè)，2010)。此外在酸性條件下，病原菌和腐敗菌的生長得以抑制，大大提高了發(fā)酵肉制品的安全性。此外，戊糖片球菌也是醬油發(fā)酵過程中的主要細(xì)菌，對(duì)醬油獨(dú)特風(fēng)味的形成具有重要作用(Onda, Analysis of lactic acid bacterial flora during Miso fermentation.Food Science and Technology Research, 2003)。目前對(duì)戊糖片球菌的研究主要集中在生產(chǎn)應(yīng)用當(dāng)中，如動(dòng)物飼料、青貯飼料、食品等方面，但是對(duì)戊糖片球菌發(fā)酵エ藝方面的研究卻少之又少，尚未有文獻(xiàn)報(bào)道，均用傳統(tǒng)的MRS培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，但傳統(tǒng)的MRS培養(yǎng)基成本較高，最后得到的活菌數(shù)較少，一般活菌數(shù)在10億/mL。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供了一種エ藝配方設(shè)計(jì)合理，且能夠提高菌體生物量的戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基。
本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供了ー種上述培養(yǎng)基的制備方法。本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供了ー種利用上述培養(yǎng)基對(duì)戊糖片球菌進(jìn)行高密度發(fā)酵的方法。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為ー種戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，其原料配方如下蛋白胨I 20g，
酵母粉I 10g，
梓檬酸鈉(C6H5O7Na3· 2H20) O. 5 5g，葡萄糖(C6H12O6)10 50g,こ酸鈉(CH3COONa)I 6g，磷酸氫ニ鉀(K2HPO4· 3H2O) Γ6δ,硫酸鎂(MgSO4· 7H20) O. I 2g，玉米漿2 30g，用蒸懼水定容至1000mL。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為上述ー種戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，其制備方法如下I、將蛋白胨I 20g、酵母粉I 10g、檸檬酸鈉0.5 5g、こ酸鈉I 6g、磷酸氫ニ鉀l 6g、硫酸鎂0. l 2g、玉米楽;2^30g混合,用蒸懼水將固體全部溶解并定容至900mL,用5 8mol/L的NaOH和5 8mol/L鹽酸調(diào)整pH到6. 2 6. 8，在103. 4kPa壓力、115 121°C溫度下滅菌2(T30min得培養(yǎng)基；2、稱取葡萄糖l(T50g，加蒸餾水溶解并定容至IOOmL,在103. 4kPa蒸汽壓力、115 121 °C溫度下滅菌2(T30min，得葡萄糖溶液；3、將步驟2得到的葡萄糖溶液加入到滅過菌的步驟I的培養(yǎng)基中，得到改良的MRS液體培養(yǎng)基，稱為戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為ー種利用上述培養(yǎng)基對(duì)戊糖片球菌進(jìn)行高密度發(fā)酵的方法，其步驟如下I、將斜面保存的戊糖片球菌用接種環(huán)取ー環(huán)，接入裝有3(T50mL MRS培養(yǎng)基(葡萄糖20g/L ;蛋白胨10g/L ;酵母粉5g/L ;檸檬酸氫ニ銨2g/L ;こ酸鈉5g/L ;磷酸氫ニ鉀2g/L ；硫酸鎂0. 58g/L ;硫酸錳0. 25g/L)的250mL三角瓶中，在28 40°C條件下，15(T200rpm下震蕩培養(yǎng)，當(dāng)菌體OD6tltl達(dá)到2. (Γ3. O時(shí)即得發(fā)酵種子液；2、稱取葡萄糖35 40g，加蒸餾水溶解并定容至IOOmL，在103. 4kPa蒸汽壓力、11(T115°C溫度下滅菌2(T30min得補(bǔ)料用葡萄糖溶液；3、將發(fā)酵種子液按0. 5°/Γ5%的接種量接種于本發(fā)明的戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵罐裝液量50% 80%，控制罐溫28 40°C，轉(zhuǎn)速12(T300rpm，通風(fēng)比0. Γ . 0VVM。在此發(fā)酵條件下培養(yǎng)4 10h后，通過滴加5 8mol/LNa0H溶液使發(fā)酵液pH保持在5. O 6. 5范圍內(nèi)，直至發(fā)酵結(jié)束。當(dāng)發(fā)酵至4 10h時(shí)開始補(bǔ)料，之后每隔2h進(jìn)行一次補(bǔ)料，共補(bǔ)料3次，補(bǔ)料完成后繼續(xù)發(fā)酵至2(T25h結(jié)束發(fā)酵。補(bǔ)料成分為步驟2制得的補(bǔ)料用葡萄糖溶液，毎次加入量為6 12g/L，使發(fā)酵體系中葡萄糖濃度為l(T25g/L，發(fā)酵結(jié)束后葡萄糖終濃度為0. 5 3g/L。
本發(fā)明提供的上述戊糖片球菌高密度發(fā)酵的方法，得到了ー種戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，以及其高密度發(fā)酵エ藝。由于戊糖片球菌自身的特點(diǎn)，在菌體生長過程能利用葡萄糖代謝產(chǎn)生乳酸，使發(fā)酵液PH值迅速降低，從而抑制菌體生長，但戊糖片球菌能夠耐受12%的高鹽，因而可以在發(fā)酵過程中用一定濃度的NaOH調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH值保持在5. (Γ6. 5范圍內(nèi)，以促進(jìn)菌體生長。通過在發(fā)酵過程中定時(shí)取樣測(cè)定PH值、OD600和殘?zhí)呛?，為補(bǔ)料發(fā)酵提供更及時(shí)、更準(zhǔn)確的指導(dǎo)，給出了更有利于積累菌體的エ藝技術(shù)參數(shù)。本發(fā)明最終菌體生物量OD6tltl可達(dá)14. O,菌數(shù)為90億/ml。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和技術(shù)效果I、本發(fā)明提供了ー種戍糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，降低了培養(yǎng)基的生產(chǎn)成本；2、采用控制發(fā)酵液pH值的方法進(jìn)行發(fā)酵，促進(jìn)了菌體的積累；3、NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值過程中產(chǎn)生的高鹽濃度能有效降低雜菌的污染，在菌劑生產(chǎn)過程中能得到高純度的菌體；4、采用葡萄糖補(bǔ)料的方法進(jìn)行發(fā)酵，延長了對(duì)數(shù)期的時(shí)間，促進(jìn)了菌體的積累。


圖I為戊糖片球菌CICM B1241在MRS培養(yǎng)基中的種子液生長曲線；圖2為發(fā)酵過程中發(fā)酵液的pH調(diào)節(jié)或不調(diào)節(jié)時(shí)菌體生長情況比較圖。
圖中·-發(fā)酵過程控制發(fā)酵液pH時(shí)菌體生物量；·-發(fā)酵過程不控制發(fā)酵液pH時(shí)菌體生物量； ▲-發(fā)酵過程控制發(fā)酵液pH時(shí)殘?zhí)呛?；?發(fā)酵過程不控制發(fā)酵液pH時(shí)殘?zhí)呛俊?br> 具體實(shí)施例方式下面申請(qǐng)人將結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做詳細(xì)的闡述，但以下內(nèi)容不在任何意義上解釋為對(duì)本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)范圍的限制。實(shí)施例中使用的戊糖片球菌均為戊糖片球菌CICM B1241。 實(shí)施例I :I、戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制備(I)按下列配方備料將蛋白胨15g、酵母粉Sg、檸檬酸鈉3g、こ酸鈉2g、磷酸氫ニ鉀2g、硫酸鎂O. 4g、玉米漿(エ業(yè)級(jí)玉米漿，購自宜昌華誠生物發(fā)酵原料有限公司，蛋白含量彡45%、酸度< 14%、亞硫酸鹽彡O. 3%、灰分彡10%)20g混合，用蒸餾水將固體全部溶解并定容至900mL，用5^8mol/L氫氧化鈉和5 8mol/L鹽酸調(diào)整pH到6. 2，在103. 4kPa蒸汽壓力、115°C下滅菌30min得培養(yǎng)基；(2)稱取葡萄糖10g，用蒸餾水溶解并定容至IOOmL,在103. 4kPa蒸汽壓力、110°C下滅菌30min得葡萄糖溶液；(3)將步驟(2)的葡萄糖溶液加入到滅過菌的步驟(I)的培養(yǎng)基中，得到戊糖片球
菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基。
2、3L發(fā)酵罐高密度發(fā)酵A、發(fā)酵種子液的培養(yǎng)將斜面保存的戊糖片球菌用接種環(huán)取ー環(huán)，接入裝有30mLMRS培養(yǎng)基(葡萄糖20g/L ;蛋白胨10g/L ;酵母粉5g/L ;檸檬酸氫ニ銨2g/L ;こ酸鈉5g/L ;磷酸氫ニ鉀2g/L ;硫酸鎂O. 58g/L ;硫酸錳O. 25g/L)的250mL三角瓶中，在35°C條件下，180rpm下震蕩培養(yǎng)，當(dāng)菌體OD6tltl達(dá)到2. (Γ3. O 時(shí)即得發(fā)酵種子液(戊糖片球菌在MRS培養(yǎng)基中的種子液生長曲線見圖I)。B、補(bǔ)料用葡萄糖溶液的配制稱取葡萄糖40g,加蒸懼水溶解并定容至IOOmL,在103. 4kPa蒸汽壓力、110°C下蒸汽滅菌30min得補(bǔ)料用葡萄糖溶液；C、接種將發(fā)酵種子液按1%的接種量接入裝有I. 5L步驟I制備的戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的3L發(fā)酵罐中，控制罐溫28°C，轉(zhuǎn)速120rpm，通風(fēng)比O. 1VVM，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。D、發(fā)酵液pH值調(diào)節(jié)及補(bǔ)料發(fā)酵戊糖片球菌發(fā)酵培養(yǎng)至4h后，開始通過級(jí)聯(lián)控制滴加5 8mol/L的NaOH溶液使pH值保持在5. O 5. 5范圍內(nèi)，直至發(fā)酵結(jié)束。在發(fā)酵培養(yǎng)至4h時(shí)開始補(bǔ)料，向發(fā)酵罐中一次補(bǔ)入15mL補(bǔ)料用葡萄糖溶液，之后每隔2h進(jìn)行一次補(bǔ)料，共補(bǔ)料3次，發(fā)酵至20h結(jié)束發(fā)酵，此時(shí)戊糖片球菌的有效活菌數(shù)為50億/mL，菌體OD6tltl是9. (T9. 5。實(shí)施例2 I、戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制備(I)按下列配方備料將蛋白胨10g、酵母粉5g、檸檬酸鈉lg、こ酸鈉lg、磷酸氫ニ鉀2g、硫酸鎂O. 58g、玉米漿(エ業(yè)級(jí)玉米漿，購自宜昌華誠生物發(fā)酵原料有限公司，蛋白含量> 45%、酸度彡14%、亞硫酸鹽彡O. 3%、灰分彡10%)20g混合，用蒸餾水將固體全部溶解并定容至900mL，用5 8mol/L氫氧化鈉和5 8mol/L鹽酸調(diào)整pH到6. 4，在103. 4kPa蒸汽壓力、118°C下滅菌25min得培養(yǎng)基；(2)稱取葡萄糖25g,用蒸懼水溶解并定容至IOOmL, 103. 4kPa蒸汽壓力、113°C下滅菌25min得葡萄糖溶液；(3)將步驟(2)的葡萄糖溶液加入到滅過菌的步驟(I)的培養(yǎng)基中，得到戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基。2、發(fā)酵罐高密度發(fā)酵A、發(fā)酵種子液的培養(yǎng)將斜面保存的戊糖片球菌用接種環(huán)取ー環(huán)，接入裝有40mL MRS培養(yǎng)基(葡萄糖20g/L ;蛋白胨10g/L ;酵母粉5g/L ;檸檬酸氫ニ銨2g/L ;こ酸鈉5g/L ;磷酸氫ニ鉀2g/L ;硫酸鎂O. 58g/L ;硫酸錳O. 25g/L)的250mL三角瓶中，在40°C條件下，200rpm下震蕩培養(yǎng)，當(dāng)菌體OD6tltl達(dá)到2. (Γ3. O時(shí)即得發(fā)酵種子液。B、補(bǔ)料用葡萄糖溶液的配制稱取葡萄糖40g，加蒸餾水溶解并定容至IOOmL,在103. 4kPa蒸汽壓力、113°C下滅菌25min得補(bǔ)料用葡萄糖溶液；
C、接種將發(fā)酵種子液按4%的接種量接入裝液量為I. 8L步驟I制備的戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的3L發(fā)酵罐中，控制罐溫32°C，轉(zhuǎn)速200rpm，通風(fēng)比O. 4VVM，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。D、發(fā)酵液pH值調(diào)節(jié)及補(bǔ)料戊糖片球菌發(fā)酵培養(yǎng)至8h后，開始通過級(jí)聯(lián)控制滴加5 8mol/L的NaOH溶液使pH保持在5. 5 6. O范圍內(nèi)，直至發(fā)酵結(jié)束。在發(fā)酵培養(yǎng)至6h時(shí)開始補(bǔ)料，向發(fā)酵罐中一次補(bǔ)入12mL補(bǔ)料用葡萄糖溶液，之后每隔2h進(jìn)行一次補(bǔ)料，共補(bǔ)料3次，發(fā)酵至22h結(jié)束發(fā)酵，此時(shí)戊糖片球菌有效活菌數(shù)為80億/mL，此時(shí)菌體OD6tltl是12. (Γ12. 5。實(shí)施例3 I、戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制備(I)按下列配方備料將蛋白胨10g、酵母粉10g、檸檬酸鈉3g、こ酸鈉lg、磷酸氫ニ鉀2g、硫酸鎂O. 58g、玉米漿(エ業(yè)級(jí)玉米漿，購自宜昌華誠生物發(fā)酵原料有限公司，蛋白含量> 45%、酸度彡14%、亞硫酸鹽彡O. 3%、灰分彡10%)20g混合，用蒸餾水將固體全部溶解并定容至900mL，用5 8mol/L氫氧化鈉和5 8mol/L鹽酸調(diào)整pH到6. 6，在103. 4kPa蒸汽壓力、121°C下滅菌20min得培養(yǎng)基；(2)稱取葡萄糖40g，用蒸餾水溶解并定容至100mL，103.4kPa蒸汽壓力、115°C下滅菌20min得葡萄糖溶液；(3)將步驟(2)的葡萄糖溶液加入到滅過菌的步驟(I)的培養(yǎng)基中，得到戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基。2、發(fā)酵罐高密度發(fā)酵A、發(fā)酵種子液的培養(yǎng)將斜面保存的戊糖片球菌用接種環(huán)取ー環(huán)，接入裝有50mLMRS培養(yǎng)基(葡萄糖20g/L ;蛋白胨10g/L ;酵母粉5g/L ;檸檬酸氫ニ銨2g/L ;こ酸鈉5g/L ;磷酸氫ニ鉀2g/L ;硫酸鎂O. 58g/L ;硫酸錳O. 25g/L)的250mL三角瓶中，在30°C條件下，150rpm下震蕩培養(yǎng)，當(dāng)菌體OD6tltl達(dá)到2. (Γ3. O時(shí)即得發(fā)酵種子液。B、補(bǔ)料用葡萄糖溶液的配制稱取葡萄糖35g,加蒸懼水溶解并定容至IOOmL,在103. 4kPa蒸汽壓力、115°C下滅菌20min得補(bǔ)料用葡萄糖溶液；C、接種將發(fā)酵種子液按5%的接種量接入裝液量為2. 4L步驟I制備的戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的3L發(fā)酵罐中，控制罐溫37°C，轉(zhuǎn)速300rpm，通風(fēng)比O. 8VVM，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。D、發(fā)酵液pH值調(diào)節(jié)及補(bǔ)料戊糖片球菌發(fā)酵培養(yǎng)至IOh后，開始通過級(jí)聯(lián)控制滴加5 8mol/L的NaOH使pH保持在6. O 6. 5范圍內(nèi)，直至發(fā)酵結(jié)束。在發(fā)酵培養(yǎng)至8h時(shí)開始補(bǔ)料，向發(fā)酵罐中一次補(bǔ)入IOmL補(bǔ)料用葡萄糖溶液，之后每隔2h進(jìn)行一次補(bǔ)料，共補(bǔ)料3次，發(fā)酵至25h結(jié)束發(fā)酵，此時(shí)戊糖片球菌有效活菌數(shù)為90億/mL，此時(shí)菌體OD6tltl是13. 5^14. O。本實(shí)施例中控制發(fā)酵液pH值與不控制發(fā)酵液pH值條件下發(fā)酵過程的生長曲線及殘?zhí)呛?，如圖2所示。
權(quán)利要求
1.一種戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基，其原料配方如下 蛋白胨I 20 g， 酵母粉廣10 g， 朽1檬酸鈉0. 5^5 g, 葡萄糖10 50 g， 乙酸鈉I 6 g， 磷酸氫二鉀廣6 g， 硫酸鎂0. r2 g， 玉米漿2 30 g， 用蒸餾水定容至1000mL。
2.—種權(quán)利要求I所述的戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，其步驟如下 (1)、將蛋白胨廣20g、酵母粉flO g、檸檬酸鈉0.5 5 g、乙酸鈉I飛g、磷酸氫二鉀I 6 g、硫酸鎂0. 1 2 g、玉米楽；2 30 g混合,用蒸懼水將固體全部溶解并定容至900mL,用5 8mol/L的NaOH和5 8mol/L鹽酸調(diào)整pH到6. 2 6. 8，在103. 4kPa壓力、115 121°C溫度下滅菌2(T30 min得培養(yǎng)基； (2)、稱取葡萄糖10飛0g，加蒸餾水溶解并定容至IOOmL,在103.4kPa蒸汽壓力、115 1211溫度下滅菌20 30 min，得葡萄糖溶液； (3)、將步驟(2)得到的葡萄糖溶液加入到滅過菌的步驟(I)的培養(yǎng)基中，得到戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基。
3.一種利用權(quán)利要求I所述的戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基對(duì)戊糖片球菌進(jìn)行高密度發(fā)酵的方法，其步驟如下 (1)、將斜面保存的戊糖片球菌用接種環(huán)取一環(huán)，接入裝有3(T50mLMRS培養(yǎng)基的三角瓶中，在28 40°C條件下，150^200 rpm下震蕩培養(yǎng)，當(dāng)菌體OD6tltl達(dá)到2. 0^3. 0時(shí)即得發(fā)酵種子液； (2)、稱取葡萄糖35 40g，加蒸餾水溶解并定容至100 mL，在103.4kPa蒸汽壓力、110 115°C溫度下滅菌20 30 min得補(bǔ)料用葡萄糖溶液； (3)、將發(fā)酵種子液按0.59T5%的接種量接種于權(quán)利要求I所述的戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵罐裝液量50% 80%，控制罐溫28 40°C，轉(zhuǎn)速120 300 rpm，通風(fēng)比0. I I.0 VVM,在此發(fā)酵條件下培養(yǎng)4 10 h后，通過滴加5 8mol/L NaOH溶液使發(fā)酵液pH保持在5.0 6. 5范圍內(nèi)，直至發(fā)酵結(jié)束；當(dāng)發(fā)酵至4 10 h時(shí)開始補(bǔ)料，之后每隔2 h進(jìn)行一次補(bǔ)料，共補(bǔ)料3次，補(bǔ)料完成后繼續(xù)發(fā)酵至2(T25 h結(jié)束發(fā)酵； 所述補(bǔ)料的成分為步驟(2)制得的補(bǔ)料用葡萄糖溶液，每次加入量為6 12g/L，使發(fā)酵體系中葡萄糖濃度為1(T25 g/L，發(fā)酵結(jié)束后葡萄糖終濃度為0.5 3 g/L。
全文摘要
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵方法，適用于戊糖片球菌的高密度發(fā)酵生產(chǎn)。發(fā)酵工藝包括種子液制備和發(fā)酵罐培養(yǎng)。發(fā)酵罐培養(yǎng)階段包括發(fā)酵過程中pH的調(diào)節(jié)和葡萄糖補(bǔ)料發(fā)酵。在發(fā)酵過程中通過注入一定濃度的NaOH溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH在5.0～6.5范圍內(nèi)，發(fā)酵4~6h后間歇補(bǔ)加葡萄糖，培養(yǎng)20~25h結(jié)束發(fā)酵，此時(shí)有效活菌數(shù)可以達(dá)到90億/mL。采用本發(fā)明的戊糖片球菌高密度發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝，使戊糖片球菌的菌體量有大幅度提高。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102732467SQ20121023389
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月6日
發(fā)明者冀志霞, 石娜娜, 祁高富, 陳守文, 馬昕 申請(qǐng)人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)