專利名稱：一種貪噬菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)微生物領(lǐng)域，涉及ー種貪噬菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
潮土是河流沉積物受地下水運動和耕作活動影響而形成的土壌，因有夜潮現(xiàn)象而得名。在中國，多分布于黃河中、下游的沖積平原及其以南江蘇、安徽的平原地區(qū)和長江流域中、下游的河、湖平原和三角洲地區(qū)。潮土分布區(qū)地勢平坦，土層深厚，水熱資源較豐富，造種性廣，是我國主要的旱作土壤，盛產(chǎn)糧棉。但潮土分布面積最大的黃淮海平原，旱澇災(zāi)害時有發(fā)生，尚有鹽堿危害，加之土壤養(yǎng)分低或缺乏，大部分屬中、低產(chǎn)土壤，作物產(chǎn)量低而不穩(wěn)。必須加強潮土的合理利用與改良。
在土壤中許多微生物能夠溶解難溶態(tài)磷，促進(jìn)植物對磷的吸收，增加作物產(chǎn)量和改善作物品質(zhì)，將解磷微生物作為生物肥料，不但可以提高土壤中磷的利用效率，節(jié)肥增產(chǎn)，而且可改善土壤結(jié)構(gòu)，提高土壤有機質(zhì)含量。植物促生菌(Plant Growth PromotingBacteria,簡稱PGPB)被界定為在一定條件下有利于植物生長的自由生活在土壤、根際、根表、葉際的細(xì)菌。這些細(xì)菌能夠固氮、溶磷、溶鐵，并產(chǎn)生植物激素，如生長素、赤霉素、細(xì)胞分裂素和こ烯。此外，它們還能提高植物的抗逆性，包括干旱、高鹽、重金屬毒害和農(nóng)藥。因此從潮土中分離得到植物促生菌，和作物形成共生體系，利用生物修復(fù)改善潮土，成為當(dāng)前研究的熱點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的ー個目的是提供ー種貪噬菌。本發(fā)明的另ー個目的是提供該貪噬菌的應(yīng)用。本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)植物促生菌JX14，分類命名為貪噬菌(Variovorax sp.)，于2011年12月20日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號CGMCC No. 5623。所述植株促生菌JX14，菌落較小為黃色、隆起，邊緣整齊，表面光滑濕潤，不透明，不規(guī)則桿狀排列，不產(chǎn)芽孢。所述植物促生菌的生理生化特性是革蘭氏陰性，嚴(yán)格好氧，化能異養(yǎng)，接觸酶陰性，M. R和VP試驗陰性，淀粉水解明性，明膠水解陽性，硝酸鹽還原陽性，檸檬酸鹽利用陽性。所述的植物促生菌JX14在促進(jìn)植物生長中的應(yīng)用。所述的植物優(yōu)選花生。所述的植物促生菌JX14在促進(jìn)花生栽培中的應(yīng)用。所述植物促生菌能利用難溶性磷酸鹽為磷源進(jìn)行生長并且具有固氮能力，經(jīng)こ炔還原法測定其固氮酶活性達(dá)38. 9nmol C2H4/h ml。本發(fā)明所述的植物促生菌以難溶性磷酸鹽為磷源進(jìn)行生長，并將其轉(zhuǎn)化為可溶性磷酸鹽。在實驗室搖瓶條件下，所述植物促生菌對磷酸三鈣的轉(zhuǎn)化量達(dá)96. 19mg じ1。相對于采用滅活菌作為空白対照的結(jié)果，所述植物促生菌對磷酸三鈣的轉(zhuǎn)化量比空白對照高出 83. 24mg じ1。有益效果本發(fā)明提供的植物促生菌JX14 (CGMCC No. 5623)具有固氮能力，可有效將難溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)化為可溶性磷酸鹽，提高肥料的利用率，促進(jìn)植物根系發(fā)育和對肥料的吸收，増加土壤有效磷及礦質(zhì)氮含量JX14 (CGMCC No. 5623)針對花生具有良好的促生長效果，所具有的固氮能力能夠提高土壌礦質(zhì)氮含量，提高氮肥利用率，促進(jìn)花生的生長發(fā)育，土壤有效磷含量的提高也使得花生對磷肥的利用率更高。


圖I是本發(fā)明菌株JX14的菌落圖；
圖2表示菌株JX14對難溶性磷的利用情況圖3表示種植花生30天后接種JX14菌株對花生鮮重的影響；圖4表示種植花生30天后接種JX14菌株對花生株高的影響；圖5表示種植花生30天后接種JX14菌株對花生植株全N含量的影響；圖6表示種植花生30天后接種JX14菌株對花生全P含量的影響；圖7表示種植花生30天后接種JX14菌株對花生根總長的的影響；圖8表示種植花生30天后接種JX14菌株對花生根表面積的影響；圖9表示種植花生30天后接種JX14菌株對花生根平均直徑的影響；圖10表示種植花生30天后接種JX14菌株對花生根尖數(shù)的的影響；圖11表示種植花生30天后接種JX14菌株對土壤礦質(zhì)N含量的影響；圖12表示種植花生30天后接種JX14菌株對土壤有效P含量的影響；生物材料保藏信息植物促生菌JX14，分類命名為貪噬菌(Variovorax sp.)，于2011年12月20日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，保藏號CGMCC No. 5623。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作更進(jìn)ー步的說明。實施例I首先準(zhǔn)備以下三種培養(yǎng)基。LB培養(yǎng)基蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml，pH7. 0-7. 2，121°C滅菌，20min。LB液體培養(yǎng)基不加瓊脂，其它條件同上。Ashby 無氮培養(yǎng)基甘露醇 10g, KH2PO4O. 29，MgSO4 7H200. 29，NaCIO. 29，CaSO4 2H200. 29，CaC035g, PH7. 2，121°C滅菌，20min。無機磷細(xì)菌培養(yǎng)基(PKO培養(yǎng)基)磷酸三鈣5g，葡萄糖10g，硫酸銨0. 5g，氯化鈉
0.3g，七水合硫酸鎂0. 3g，氯化鉀0. 3g，硫酸錳0. 03g,七水合硫酸亞鐵0. 03g, pH7. 0瓊脂20g，蒸餾水 1000ml, pH7. 0 7. 2。121°C滅菌，20min。
將從南京板橋采取的潮土挑根過篩后稱取IOg置于盛有IOOml滅菌水的250ml的三角瓶中，在搖床中，30°C, 150r mirT1振蕩20min,靜置IOmin,得到土壤懸浮液。該土壤懸浮液中含有若干種促生菌，采用稀釋法稀釋后涂于LB培養(yǎng)基，將平板倒置，于30°C，恒溫箱中培養(yǎng)24h后，挑取不同類型典型單個菌落，經(jīng)平板純化后，4°C保存在LB斜面待用。下面再通過定性測定和定量測定篩選出有固氮能力的植物促生細(xì)菌。定性測定將純化后的菌株接種到Ashby無氮固體培養(yǎng)基中，28°C下培養(yǎng)4d，可看到有明顯菌落，初歩判斷有一定的固氮 能力，將這些具有固氮能力的菌種進(jìn)入下ー輪定量測定。定量測定對初篩獲得的固氮細(xì)菌進(jìn)行定量測定，將已純化的固氮菌分別接入無氮液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24h后用離心法收集細(xì)菌細(xì)胞，再在收集到的細(xì)菌細(xì)胞中加入45mL無菌水和5mL無氮液體培養(yǎng)基,形成50mL固氮菌懸浮液(姆毫升約IO7個細(xì)菌細(xì)胞)作為待接種菌液。固氮酶活性采用こ炔還原法測定，具體操作如下將純化后的菌株，接種在裝有2ml無氮液體培養(yǎng)基的青霉素小瓶中，32° C下培養(yǎng)18 24h ;將棉塞換為反ロ膠塞密封，用密封性好的注射器先從培養(yǎng)有菌的青霉素小瓶抽取0. 5ml空氣，再注入0. 5mlC2H2，用膠布密封針眼；繼續(xù)培養(yǎng)24h后，取100 u I氣樣在氣相色譜儀上測定C2H4峰值，標(biāo)準(zhǔn)氣C2H4濃度為 130mg/L。采用美國HP公司生產(chǎn)的HP6890型氣相色譜儀，其工作條件設(shè)置為氫火焰離子化檢測器，溫度250° C，H2流量30ml/min，壓カ20kPa ;色譜柱為毛細(xì)管，柱長15. Om,內(nèi)徑320 u m,爐溫30° C ;載氣N2，流量30ml/min，壓カ20kPa ;空氣流量250ml/min ;前進(jìn)樣ロ溫度250° C，壓カ20kPa。こ炔還原活性(ARA)，計算方法為
權(quán)利要求
1.植物促生菌JX14，分類命名為貪噬菌(Variovoraxsp.)，于2011年12月20日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號CGMCC No. 5623。
2.權(quán)利要求I所述的植物促生菌JX14在促進(jìn)植物生長中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的植物為花生。
4.權(quán)利要求I所述的植物促生菌JX14在花生栽培中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種貪噬菌及其應(yīng)用，屬于農(nóng)業(yè)微生物領(lǐng)域。植物促生菌JX14，于2011年12月20日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，分類名為貪噬菌(Variovorax sp.)，保藏號CGMCC No.5623。該菌株能固氮并能利用難溶性磷酸鹽為磷源進(jìn)行生長，提高肥料的利用率，促進(jìn)植物根系發(fā)育和對肥料的吸收；本發(fā)明針對花生具有良好的促生長效果，固氮能促進(jìn)花生的生長發(fā)育，其解磷的能力也使得花生對磷肥的利用率更高。
文檔編號C12N1/20GK102747019SQ20121024663
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月16日
發(fā)明者劉滿強, 姜瑛, 張振, 徐文思, 徐莉, 李方卉, 李輝信, 焦加國, 胡鋒, 陳小云 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)