專利名稱：一種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基，尤其是一種適宜多種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，屬于細(xì)胞培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)作為一項(xiàng)極具產(chǎn)業(yè)化發(fā)展?jié)摿Φ募夹g(shù)，正在日益受到人們的關(guān)注。昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基是培養(yǎng)昆蟲(chóng)細(xì)胞的關(guān)鍵物質(zhì)，昆蟲(chóng)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增值、分化等過(guò)程都需要培養(yǎng)基，適宜的培養(yǎng)基對(duì)昆蟲(chóng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖會(huì)起到極其重要的作用，可以獲得較好的培養(yǎng)效果，使原代培養(yǎng)能維持高密度、貼壁的單層細(xì)胞。昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中需要補(bǔ)充多方 面的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如多種氨基酸、維生素、輔酶、核酸、嘌呤、嘧啶、激素和生長(zhǎng)因子。大部分昆蟲(chóng)細(xì)胞都是利用葡萄糖、果糖或麥芽糖作為主要碳源和能源，不同種類的昆蟲(chóng)細(xì)胞對(duì)氨基酸有不同的要求，至少有14種必需的氨基酸是細(xì)胞本身不能合成而必須由培養(yǎng)基提供的。昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基三個(gè)發(fā)展階段.天然培養(yǎng)基取自動(dòng)物體液，或者是從動(dòng)物組織中提取的成分；合成培養(yǎng)基的各種成分都為公知成分；無(wú)血清培養(yǎng)基是在已知細(xì)胞所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和貼壁因子中加入適宜的細(xì)胞生長(zhǎng)因子而得到的，可保證細(xì)胞生長(zhǎng)良好，且無(wú)須補(bǔ)加血清。到目前為止，至少已報(bào)道了 60多種昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基。不同細(xì)胞系選擇的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)條件有所不同。常用的有Grace、TC- 199、TC-100, IPL - 41、MGM - 443,MGM -448,MGM - 450、MM 和 M 3 等。雖然目前已有多種商品化培養(yǎng)基面世，但不同的昆蟲(chóng)細(xì)胞在不同培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)差異性較大，而能適應(yīng)多種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基至今還比較罕見(jiàn)，特別在新昆蟲(chóng)細(xì)胞系的建立方面，尋找適宜的培養(yǎng)基則是較大的難點(diǎn)。因此，有必要研發(fā)能夠適于不同目昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)用培養(yǎng)基，以適于不同目的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞的生長(zhǎng)，從而為新昆蟲(chóng)細(xì)胞系的建立提供技術(shù)支持。本發(fā)明通過(guò)下列技術(shù)方案完成一種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)用培養(yǎng)基，其特征在于每1000毫升培養(yǎng)基中含有下列組分
Grace培養(yǎng)基40 50g
海藻糖O. 5 3g
酵母抽提物O. 5 3g
胎牛血清100 200ml
水余量。所述Grace培養(yǎng)基為市購(gòu)產(chǎn)品。所述海藻糖為市購(gòu)的海藻糖Glucose產(chǎn)品。
所述酵母抽提物為市購(gòu)的酵母抽提物TC-Yeastolate產(chǎn)品。所述胎牛血清為市購(gòu)的滅活胎牛血清。所述水為純凈水。本發(fā)明提供的昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)用培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)下列方法制備將市售Grace培養(yǎng)基干粉40 50克溶解在純凈水中；依次加入O. 5 3g市售的海藻糖Glucose及O. 5 3g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的NaOH或IN的HCl調(diào)節(jié)pH值至6. 1-6. 3，加入100-200ml市售的胎牛血清，加入純凈水補(bǔ)足1000ml，按常規(guī)過(guò)濾、滅菌，得適于不同目的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。本發(fā)明具有下列優(yōu)點(diǎn)和效果采用上述方案獲得的培養(yǎng)基，不僅配方科學(xué)合理，原 料易得，制備方法簡(jiǎn)單，而且經(jīng)過(guò)對(duì)14種昆蟲(chóng)細(xì)胞的培養(yǎng)，結(jié)果顯示，來(lái)源于鱗翅目、鞘翅目、直翅目、膜翅目、雙翅目、同翅目等的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞均適宜用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)，大部分細(xì)胞能在本發(fā)明培養(yǎng)基中得以生長(zhǎng)，且成功建立了多個(gè)有限細(xì)胞系和無(wú)限細(xì)胞系。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述。實(shí)施例I
按1000暈升培養(yǎng)基的量進(jìn)行下列備料
純凈水800 ml
市購(gòu)Grace培養(yǎng)基40g
市購(gòu)海藻糖3. Og
市購(gòu)酵母抽提物O. 5g
市購(gòu)胎牛血清200ml ；
經(jīng)過(guò)下列方法
將市購(gòu)的Grace培養(yǎng)基干粉45克溶解在適量純凈水中；依次加入3g市售的海藻糖Glucose及O. 5g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的NaOH調(diào)節(jié)pH值至6. 1，加入200ml市售的胎牛血清，加入純凈水補(bǔ)足1000 ml，按常規(guī)過(guò)濾、滅菌，得適于不同目的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。實(shí)施例2
按1000暈升培養(yǎng)基的量進(jìn)行下列備料
純凈水850ml
市購(gòu)Grace培養(yǎng)基50g
市購(gòu)海藻糖O. 5g
市購(gòu)酵母抽提物3. Og
市購(gòu)胎牛血清150ml ；
經(jīng)過(guò)下列方法
將市購(gòu)的Grace培養(yǎng)基干粉50克溶解在適量純凈水中；依次加入O. 5g市售的海藻糖Glucose及3g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的HCl調(diào)節(jié)pH值至6. 3，加入150ml市售的胎牛血清，加入純凈水補(bǔ)足1000ml，按常規(guī)過(guò)濾、滅菌，得適于不同目的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。
實(shí)施例3
按1000暈升培養(yǎng)基的量進(jìn)行下列備料
純凈水900ml
市購(gòu)Grace培養(yǎng)基50g
市購(gòu)海藻糖2. Og 市購(gòu)酵母抽提物2. Og
市購(gòu)胎牛血清IOOml ；
經(jīng)過(guò)下列方法
將市購(gòu)的Grace培養(yǎng)基干粉50克溶解在適量純凈水中；依次加入2g市售的海藻糖Glucose及2g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的NaOH調(diào)節(jié)pH值至6. 2，加入IOOml市售的胎牛血清，加入純凈水補(bǔ)足1000ml，按常規(guī)過(guò)濾、滅菌，得適于不同目的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。實(shí)施例4
按1000暈升培養(yǎng)基的量進(jìn)行下列備料
純凈水820ml
市購(gòu)Grace培養(yǎng)基48g
市購(gòu)海藻糖2. 5g
市購(gòu)酵母抽提物I. 5g
市購(gòu)胎牛血清180ml ；
經(jīng)過(guò)下列方法
將市購(gòu)的Grace培養(yǎng)基干粉48克溶解在適量純凈水中；依次加入2. 5g市售的海藻糖Glucose及L 5g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的NaOH調(diào)節(jié)pH值至6. 2，加入180ml市售的胎牛血清，加入純凈水補(bǔ)足1000ml，按常規(guī)過(guò)濾、滅菌，得適于不同目的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。實(shí)施例5
按1000暈升培養(yǎng)基的量進(jìn)行下列備料
純凈水880ml
市購(gòu)Grace培養(yǎng)基45. 7g
市購(gòu)海藻糖I. 9g
市購(gòu)酵母抽提物2. 5g
市購(gòu)胎牛血清120ml ；
經(jīng)過(guò)下列方法
將市購(gòu)的Grace培養(yǎng)基干粉45. 7克溶解在適量純凈水中；依次加入I. 9g市售的海藻糖Glucose及2. 5g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的HCl調(diào)節(jié)pH值至6. 1，加入120ml市售的胎牛血清，加入純凈水補(bǔ)足1000ml，按常規(guī)過(guò)濾、滅菌，得適于不同目的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。實(shí)施例6
按1000暈升培養(yǎng)基的量進(jìn)行下列備料
純凈水840ml市購(gòu)Grace培養(yǎng)基45g
市購(gòu)海藻糖3g
市購(gòu)酵母抽提物3g
市購(gòu)胎牛血清160ml ；
經(jīng)過(guò)下列方法
將市購(gòu)的Grace培養(yǎng)基干粉45克溶解在適量純凈水中；依次加入3g市售的海藻糖Glucose及3g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的HCl調(diào)節(jié)pH值至6. 3，加入160ml 市售的胎牛血清，加入純凈水補(bǔ)足1000ml，按常規(guī)過(guò)濾、滅菌，得適于不同目的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。為表明本發(fā)明的技術(shù)效果，下面通過(guò)具體試驗(yàn)例加以驗(yàn)證。試驗(yàn)用培養(yǎng)基Schneider、TC-100、Grace和本發(fā)明實(shí)施例的培養(yǎng)基。培養(yǎng)過(guò)程按常規(guī)將各昆蟲(chóng)細(xì)胞分別用上述不同的四種培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。結(jié)果如下
I.短翅鳴螽胚胎細(xì)胞
試驗(yàn)采用Schneider、TC-100、Grace、和本發(fā)明實(shí)施例I的培養(yǎng)基共四種，分別對(duì)短翅鳴螽胚胎細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果顯示在本發(fā)明實(shí)施例I的培養(yǎng)基及Schneider培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的短翅鳴螽胚胎細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)較好，培養(yǎng)初期細(xì)胞形態(tài)多樣，貼壁生長(zhǎng)狀態(tài)，細(xì)胞透亮、有光圈，細(xì)胞在培養(yǎng)一段時(shí)間后增殖，并進(jìn)行了傳代。成功建立短翅鳴螽胚胎細(xì)胞系3個(gè)，均為RIRI改良Grace培養(yǎng)基培養(yǎng)。結(jié)果見(jiàn)表I。表I
權(quán)利要求
1. 一種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)用培養(yǎng)基，其特征在于每1000毫升培養(yǎng)基中含有下列組分Grace培養(yǎng)基40 50g海藻糖O. 5 3g酵母抽提物O. 5 3g胎牛血清100 200ml水余量。
全文摘要
本發(fā)明提供一種昆蟲(chóng)細(xì)胞生長(zhǎng)用培養(yǎng)基，其特征在于每1000毫升培養(yǎng)基中含有下列組分Grace培養(yǎng)基40～50g，海藻糖0.5～3g，酵母抽提物0.5～3g，胎牛血清，100～200ml，余量為水。采用上述方案獲得的培養(yǎng)基，不僅配方科學(xué)合理，原料易得，制備方法簡(jiǎn)單，而且經(jīng)過(guò)對(duì)14種昆蟲(chóng)細(xì)胞的培養(yǎng)，結(jié)果顯示，來(lái)源于鱗翅目、鞘翅目、直翅目、膜翅目、雙翅目、同翅目等的多種昆蟲(chóng)細(xì)胞均適宜用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)，大部分細(xì)胞能在本發(fā)明培養(yǎng)基中得以生長(zhǎng)，且成功建立了多個(gè)有限細(xì)胞系和無(wú)限細(xì)胞系。
文檔編號(hào)C12R1/91GK102776148SQ201210309760
公開(kāi)日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2012年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月28日
發(fā)明者丁偉峰, 何釗, 馮穎, 孫龍, 張欣, 李嫻, 馬濤 申請(qǐng)人:中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲(chóng)研究所