專利名稱：長鏈非編碼rna作為疾病診斷血液分子標志物的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于分子生物學領域，具體地，本發(fā)明涉及長鏈非編碼RNA作為疾病診斷血液分子標志物的應用。
背景技術：
癌癥是目前威脅人類生存、影響健康的最主要疾病。前列腺癌(Prostatecancer, PCa)是發(fā)達國家發(fā)病率最高的男性惡性實體腫瘤之一，占全球癌死亡率第6位。我國前列腺癌的發(fā)病率近年來一直處于顯著的上升趨勢。在北京、上海、廣州等醫(yī)學、經(jīng)濟發(fā)達城市，前列腺癌發(fā)病率已位于當?shù)厥蟪Ｒ娔[瘤之列。來自上海市疾病控制中心的資料顯示，前列腺癌的發(fā)病率自2002年起已躍居男性泌尿生殖系惡性腫瘤的首位。流行病學數(shù)據(jù)還顯示，中國前列腺癌發(fā)病率已從1993年的1.71/10萬男性人口增加到2005年的
7.9/10萬男性人口，年增幅13%。依次推算，預計至2020年，我國前列腺癌發(fā)病率將超過40/10萬人口男性，接近歐美國家水平，成為危害男性健康的主要腫瘤“殺手”。早期前列腺癌局限于包膜內(nèi)，但當腫瘤擴散到包膜外或遠處轉(zhuǎn)移時，腫瘤的治療就顯得相當困難，且預后效果很差。因此，前列腺癌的早期診斷就顯得尤為重要。前列腺特異性抗原(Prostate specific antigen, PSA)作為目前診斷前列腺癌最為公認、應用最為廣泛的分子診斷標記物，在目前前列腺癌的診斷方面起著極為重要的作用，但它在明顯提高腫瘤診斷率的同時也有著越來越大的局限性。例如，PSA處于正常范圍(<4.0ng/ml)，前列腺穿刺陽性率為15.2% ；^PSA的診斷灰區(qū)(4-10ng/ml)，前列腺穿刺及反復穿刺陰性率為78%和90%。美國一項臨床隨機對照試驗表明，PSA作為PCa的診斷標記物不能降低癌死亡率。因此亟需找到PCa特異性更高的分子診斷標記物和相關的檢測技術。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供長鏈非編碼RNA作為疾病診斷血液分子標志的應用。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種分離的IncRNA，所述的IncRNA選自:(I)序列如SEQ ID Ν0:η所示的IncRNA，其中η為選自1-9的正整數(shù)；或(2)與SEQ ID Ν0:η所示序列互補的IncRNA，其中η為選自1_9的正整數(shù)。在另一優(yōu)選例中，所述的IncRNA為序列如SEQ ID NO:2, SEQ ID Ν0:6、或SEQ IDNO:7 所示的 IncRNA。在另一優(yōu)選例中，所述的IncRNA為序列SEQ ID N0:7所示的IncRNA。在另一優(yōu)選例中，所述的IncRNA分離自人或非人哺乳動物的血液。在另一優(yōu)選例中，所述的血液為血漿和/或血清。在另一優(yōu)選例中，所述的血液不包括血細胞。在另一優(yōu)選例中，所述的非人哺乳動物為小鼠、大鼠、兔、豬、牛、羊等。在另一優(yōu)選例 中，所述的IncRNA分離自人。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種IncRNA集，所述的IncRNA集由序列如SEQIDNO: 1-9中所示的至少2種IncRNA所構成。在另一優(yōu)選例中，所述的IncRNA集至少包括如SEQ ID N0:6所示的IncRNA。在另一優(yōu)選例中，所述的IncRNA集由序列如SEQ ID NO: 1-9中所示的9種IncRNA所構成。在本發(fā)明的第三方面，提供了一種分離的前體IncRNA，所述的前體IncRNA能在人細胞內(nèi)剪切并表達成第一方面所述的IncRNA。在另一優(yōu)選例中，所述的前體IncRNA分離自人或非人哺乳動物的血液。在本發(fā)明的第四方面，提供了一種分離的多核苷酸，所述的多核苷酸能被人細胞轉(zhuǎn)錄成第一方面所述的IncRNA。

在另一優(yōu)選例中，所述的多核苷酸具有式I所示的結構:Seq正向-X-Seq反向式I,式I 中，SeqttS能在人細胞中表達成所述的IncRNA的核苷酸序列；Seqfi^1為與本上互補或完全互補的核苷酸序列；X為位于Seqtt和Seq&^^間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seqtt和Seq反向不互補；并且式I所示的結構在轉(zhuǎn)入人細胞后，形成式II所示的二級結構:
權利要求
1.一種分離的IncRNA,其特征在于,所述的IncRNA選自: (1)序列如SEQID Ν0:η所示的IncRNA，其中η為選自1_9的正整數(shù)；或 (2)與SEQID Ν0:η所示序列互補的IncRNA，其中η為選自1_9的正整數(shù)。
2.如權利要求1所述的IncRNA，其特征在于，所述的IncRNA分離自人或非人哺乳動物的血液。
3.一種IncRNA集，其特征在于，所述的IncRNA集由序列如SEQ ID N0:l_9中所示的至少2種IncRNA所構成。
4.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸能被人細胞轉(zhuǎn)錄成權利要求1所述的IncRNA。
5.—種載體，其特征在于，它含有權利要求1所述的IncRNA,或權利要求4所述的多核苷酸。
6.權利要求1所述的IncRNA、或權利要求3所述的IncRNA集的用途，其特征在于，用于制備癌癥診斷的芯片或試劑盒。
7.一種IncRNA芯片，其特征在于，所述的IncRNA芯片包括: 固相載體；以及有序固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述的寡核苷酸探針特異性地對應于SEQ ID NO: 1-9所示的部分或全部序列。
8.權利要求7所述的IncRNA芯片的用途，其特征在于，用于制備癌癥診斷的試劑盒。
9.一種試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中含有權利要求7所述的IncRNA芯片。
10.一種分離并檢測血液中IncRNA或其片段的方法，所述的IncRNA或其片段是以表達豐度不同的片段存在，其特征在于，包括步驟: (1)獲得樣本血液的總RNA，并且逆轉(zhuǎn)錄所述的RNA，獲得DNA； (2)對所述的DNA進行檢測和分離，獲得相對應的血液中IncRNA或其片段的信息。
全文摘要
本發(fā)明涉及長鏈非編碼RNA作為疾病診斷血液分子標志物的應用。具體地，本發(fā)明人成功分離并檢測了人或非人哺乳動物血液中長鏈非編碼的RNA(lncRNA)；人或非人哺乳動物的血液中的長鏈非編碼的RNA是以表達豐度不同的片段穩(wěn)定存在的；血液中來源于lncRNA MALAT-1的短鏈RNA(命名為MD-miniRNA)來源于前列腺癌(Prostate cancer,PCa)細胞，并分泌釋放入血；體外培養(yǎng)的PCa細胞能分泌MD-miniRNA，并釋放到培養(yǎng)液中；在移植瘤小鼠血漿中能檢測到MD-miniRNA的高表達。此外，MD-miniRNA的表達與PCa的發(fā)病呈現(xiàn)正相關，MD-miniRNA對區(qū)分前列腺穿刺陽性和陰性病人的敏感性和特異性都分別高達40%以上和80%以上。因此，MD-miniRNA是一種新型的癌癥(尤其是前列腺癌)血液分子診斷標記物，能顯著提高診斷的準確性。
文檔編號C12N15/63GK103146688SQ20121033760
公開日2013年6月12日 申請日期2012年9月12日 優(yōu)先權日2012年9月12日
發(fā)明者孫穎浩, 任善成, 王富博, 沈劍 申請人:上海長海醫(yī)院