一種從豬小腸中提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種肝素鈉的提取方法，特別涉及一種利用豬小腸提取肝素鈉并同時聯(lián)產蛋白粉的方法。本發(fā)明的方法包括如下步驟：（1）酶解和鹽解；（2）分離蛋白粉；（3）提取肝素鈉：吸附、洗脫、沉淀、干燥。該方法提高了肝素鈉的產率，同時，聯(lián)產比單產設備利用率高、節(jié)約資源、可降低肝素鈉、蛋白粉生產成本。充分利用豬小腸資源，增加豬小腸的附加值，同時，減少含蛋白廢液廢渣對環(huán)境污染，變廢為寶。
【專利說明】一種從豬小腸中提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種肝素鈉的提取方法，特別涉及一種利用豬小腸提取肝素鈉的方法，進一步的，本發(fā)明提取肝素鈉還可同時聯(lián)產蛋白粉。
【背景技術】
[0002]肝素鈉是從動物內臟中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬粘多糖類物質，可以用作抗凝血藥。臨床研究表明，肝素鈉具有抗凝血作用外，還具有其他多種生物活性和臨床用途，治療急性靜脈血栓和急性冠脈綜合證、心絞痛、心肌梗塞、抗血栓、降血脂，可抑制體內體外血栓和動靜血栓的形成，而又不影響血小板聚集和纖維蛋白原與血小板的結合，還用于減少癌癥相關的靜脈血栓的復發(fā)。
[0003]我國肝素鈉產品不僅需滿足國內市場日益增長的需求，同時世界出口中也占首位。按國家市場的需求量，美國年需求8000億單位，歐洲市場需求25000億單位，南美市場大概需求6000億單位。
[0004]目前國內外一般是以豬小腸和牛肺為基礎原料提取肝素鈉。動物肺臟中雖然肝素鈉含量高，但由于其組織特異性，存在大量雜質蛋白，肺組織肥大細胞中的蛋白與肝素鈉結合非常牢固，導致不易分離提純，而難以利用。我國肝素鈉生產多以豬小腸粘膜作為原料，曾經有人發(fā)表過的發(fā)明專利中公開了一種利用豬小腸生產肝素鈉的制備方法，在酶解步驟中，腸粘膜與水的重量比為1:7~9，用水量之大，不實用于大規(guī)模生產，同時，生產過程中濾渣被排棄，既污染環(huán) 境又浪費資源。該方法加入蛋白酶，加熱升溫后再加入鹽進行鹽解，這一過程使蛋白質被分解。實際上，在濾渣中含有可供我們利用的蛋白粉，該蛋白粉含有豐富的蛋白質、氨基酸、鈣、磷、纖維素以及其他一些常量和微量元素，作為動物飼料易被消化吸收，是一種動物所必需的營養(yǎng)物質。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術中所存在的上述不足，提供一種利用豬小腸提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，既降低生產成本，又減少污染。
[0006]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術方案:
一種從豬小腸中提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，包括以下步驟:
(1)酶解和鹽解
收集好豬小腸新鮮的粘膜，將粘膜粉碎，打進分解罐中，測定腸粘膜重量，加入水攪拌均勻，調試好PH8.0~8.5，再按粘膜重量百分比為8%~15%的食用鹽攪拌均勻后，升溫到28°C~32°C加入粘膜重量百分比為0.05%~0.08%的2079堿性蛋白酶，升溫到45°C~48°C再加入粘膜重量百分比為0.03%~0.06%的2079堿性蛋白酶，攪拌均勻，再調pH至
8.5，調解鹽濃度在波美3.8~4.8升溫至48°C~52°C保溫2.5~3.0小時；
(2)分離蛋白粉
保溫時間到后，快速升溫至90°C~95°C，保溫10~20分鐘，分層過濾，濾渣經過電壓、烘干得到蛋白粉，濾液為肝素鈉溶液；
(3)提取肝素鈉
吸附:收集步驟(2)中所有肝素鈉濾液，打進吸附罐，加入離子交換水，調整鹽濃度為波美2.0~2.5，pH7.72~8.0溫度50°C~55°C，加入樹脂進行離子交換，交換時間為10~12小時，交換吸附完的樹脂用45°C~50°C溫水進行清洗，用波美5度鹽水清洗樹脂5~10分鐘；
洗脫:用波美20~22度的鹽水攪拌洗脫第一次，洗脫3~4小時，洗脫溫度為40°C~50°C，鹽水和樹脂的體積比例I~3:1 ;再用波美17~19度鹽水進行攪拌第二次洗脫，洗脫2~3小時，洗脫溫度為40°C~50°C，鹽水和樹脂的體積比例I~3:1 ;
沉淀、干燥:將兩次洗脫液合并后，用食用酒精沉淀10~12小時，固液分離后將固形物干燥得肝素鈉粗品。
[0007]上述方法，酶解和鹽解同時進行，并且優(yōu)選了鹽解、酶解的條件，在上述條件下，能確保肝素鈉的提取率不受影響，并且能同時從豬小腸中分離較大量的蛋白粉。
[0008]優(yōu)選的，上述提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，步驟(1)中腸粘膜與水的重量比為1:1~3。上述比例范圍，在生產量較大的情況下，可明顯節(jié)約用水。
[0009]優(yōu)選的，上述提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，步驟(2)中所述過濾的方法為:將步驟(1)所得產品上層用60-100目尼龍布過濾后，濾渣用體積比為1:1的75°C~85°C水清洗，濾液用的60-100目尼龍布過濾；將步驟(1)所得的產品下層用的60-100目尼龍布過濾；合并所有濾渣，濾渣經過電壓、烘干得蛋白粉，濾液為肝素鈉溶液。上述過濾方法，有利于肝素鈉與蛋白粉更好分離，并且能達到較高的收率。
[0010]優(yōu)選的，上述提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，步驟(3)中所述樹脂為羅馬哈斯98樹脂，羅馬哈斯98樹脂再生吸附力強。所述羅馬哈斯98樹脂的用量每根豬小腸用20g~30g,優(yōu)選的，每根豬小腸用20g樹脂，此用量下既不浪費樹脂，又能保證樹脂能充分吸附肝素鈉。
[0011]優(yōu)選的，沉淀干燥中使用的食用酒精與洗脫液的體積比2~4:1，在此比例范圍能，能更充分地將肝素鈉沉淀出來。
[0012]優(yōu)選的，沉淀干燥中干燥的溫度為80°C~85°C，干燥時間12~15小時；上述干燥條件有利于確保肝素鈉的活性，溫度控制在85°C內干燥不損害基因。
[0013]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果:
現(xiàn)有技術從豬小腸中提取肝素鈉，采用酶解法，提取一億個單位的肝素鈉需要1700~1750根豬小腸；采用鹽解法，提取一億個單位的肝素鈉需要1700~1800根豬小腸。本發(fā)明采用酶解和鹽解相結合同時進行，能確保肝素鈉的提取率不受影響，按照本發(fā)明的方法，提取一億個單位的肝素鈉只需要1500~1600根豬小腸，肝素鈉的產率較高；并且能同時從豬小腸中提取較大量的蛋白粉粗品，提取蛋白粉蛋白含量在40%以上，同時，本發(fā)明還能聯(lián)產蛋白粉，比單產方法設備利用率高、節(jié)約資源、可降低肝素鈉、蛋白粉生產成本。充分利用豬小腸資源，增加豬小腸的附加值，同時，減少含蛋白廢液廢渣對環(huán)境污染，變廢為寶。
【具體實施方式】
[0014]下面結合試驗例及【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步的詳細描述。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本
【發(fā)明內容】
所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。
[0015]實施例1
從豬小腸中提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，采用以下步驟:
(1)酶解和鹽解
取500根豬小腸洗凈，收集其新鮮的粘膜550Kg，加入825Kg重量的水，攪拌均勻后，pH值為8.0，加入85Kg的食用鹽，攪拌均勻后，升溫至28°C，加入0.2kg2079堿性蛋白酶，升溫至45°C，加入0.3kg 2079堿性蛋白酶，攪拌均勻，再調pH至8.5，調整鹽度為波美度4.5，50°C保溫2.5小時后，升溫至95°C，保溫10分鐘。
[0016](2)分離蛋白粉
將步驟(1)所得的產品，用60目尼龍布過濾后，濾渣用1:1的85°C水清洗；再用的80目尼龍布過濾，壓榨后得到180kg蛋白粉粗品，其蛋白粉含量為40%，合并過濾的濾液用于提取肝素鈉。
[0017](3)提取肝素鈉
吸附:將過濾得到的肝素鈉溶液，調整PH值為8，鹽度為波美度2.2、溫度為55°C，放入IOkg羅馬哈斯98樹脂進行離子變換12小時，吸附完的樹脂用50°C溫水進行清洗，用波美5度鹽水清洗10分鐘。
[0018]洗脫:用波美20度的食鹽水攪拌洗脫第一次4小時，溫度保持在40°C，食鹽水和樹脂的比例2:1 ;再用波美19`度食鹽水進行攪拌第二次洗脫2小時，溫度保持在40°C，鹽水和樹脂的比例1:1。
[0019]沉淀干燥:將兩次洗脫液合并后，用食用酒精沉淀10小時，食用酒精與洗脫液的體積比4:1，再脫水、壓干、85°C烘14小時得0.3043個億單位肝素鈉粗品。
[0020]實施例2
從豬小腸中提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，采用以下步驟:
Cl)酶解和鹽解
取1000根豬小腸洗凈，收集其新鮮的粘膜llOOKg，加入2000Kg重量的水，攪拌均勻后，，調節(jié)pH值為8.5，加入180Kg的食用鹽，攪拌均勻后，升溫至32°C，加入0.4kg2079堿性蛋白酶，升溫46°C，加入0.7Kg2079堿性蛋白酶，攪拌均勻，再調pH至8.5，調整鹽度為波美度4.5，50°C保溫1.5小時后調節(jié)pH值為8.5，再保溫I小時，升溫至95°C，保溫10分鐘；
(2)分離蛋白粉
將步驟(1)所得的產品，用60目尼龍布過濾后，濾渣用1:1的85°C水清洗；再用的80目尼龍布過濾后，壓榨后得到480kg蛋白粉粗品，其蛋白粉含量為43%，合并過濾的濾液用于提取肝素鈉；
(3)提取肝素鈉
吸附:將過濾得到的肝素鈉提取液，調整PH值為7.9，鹽度為波美度2.2、溫度為60°C，放入25kg羅馬哈斯98樹脂進行離子變換12小時。吸附完的樹脂用50°C溫水進行清洗，用波美5度鹽水清洗10分鐘；
洗脫:用波美20度的食鹽水攪拌洗脫第一次4小時，溫度保持在45°C，食鹽水和樹脂的比例3:2 ;再用波美19度食鹽水進行攪拌第二次洗脫3小時，溫度保持在40°C，鹽水和樹脂的比例2:1;。
[0021]沉淀干燥:將兩次洗脫液合并后，用食用酒精沉淀12小時，食用酒精與洗脫液的體積比3:1，再脫水、壓干、80°C烘13小時得0.6425個單位肝素鈉粗品。
[0022]實施例3
從豬小腸中提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，采用以下步驟:
Cl)酶解和鹽解
取1500根豬小腸洗凈，收集其新鮮的粘膜1650Kg，加入2500Kg重量的水，攪拌均勻后，調節(jié)PH值為8.0，加入250kg的食用鹽，攪拌均勻后，升溫至30°C，加入0.55kg2079堿性蛋白酶，升溫至48°C，加入Ikg 2079堿性蛋白酶，攪拌均勻，再調pH至8.5，調整鹽度為波美度4.2，52°C保溫1.5小時后調節(jié)pH值為8.5，再保I小時，升溫至90°C，保溫8分鐘；
(2)分離蛋白粉
將步驟(1)所得的產品，用60目尼龍布過濾后，濾渣用1:1的80°C水清洗；濾液最后用100目尼龍布過濾后，濾渣后壓榨后得到529kg蛋白粉粗品，其蛋白粉含量為45%，合并過濾的濾液用于提取肝素鈉；
(3)提取肝素鈉
吸附:將過濾得到的肝素鈉提取液，調整PH值為7.8，鹽度為波美度2.0，溫度為50°C，放入45kg羅馬哈斯98樹脂進行離子變換11小時。吸附完的樹脂用50°C溫水進行清洗，用波美5度鹽水清洗8分鐘。
[0023]洗脫:用波美20度的食鹽水攪拌洗脫第一次3小時，溫度保持在40°C，食鹽水和樹脂的比例1:1 ;再用波美18度食鹽水進行攪拌第二次洗脫2小時，溫度保持在45°C，鹽水和樹脂的比例3:1。
[0024]沉淀干燥:將兩次洗脫液合并后，用食用酒精沉淀11小時，食用酒精與洗脫液的體積比2:1，再脫水、壓干、80°C烘8小時得0.9923個單位肝素鈉粗品。
【權利要求】
1.一種從豬小腸中提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)酶解和鹽解 收集好豬小腸新鮮的粘膜，將粘膜粉碎，打進分解罐中，測定腸粘膜重量，加入水攪拌均勻，調試好PH8.0~8.5，再按粘膜重量百分比為8%~15%的食用鹽攪拌均勻后，升溫到28°C~32°C加入粘膜重量百分比為0.05%~0.08%的2079堿性蛋白酶，升溫到45°C~48°C再加入粘膜重量百分比為0.03%~0.06%的2079堿性蛋白酶，攪拌均勻，再調pH至8.5，調解鹽濃度在波美3.8~4.8升溫至48°C~52°C保溫2.5~3.0小時； (2)分離蛋白粉 保溫時間到后，快速升溫至90°C~95°C，保溫10~20分鐘，分層過濾，濾渣經過電壓、烘干得到蛋白粉，濾液為肝素鈉溶液； (3)提取肝素鈉 吸附:收集步驟(2)中所有肝素鈉濾液，打進吸附罐，加入離子交換水，調整鹽濃度為波美2.0~2.5，pH7.72~8.0溫度50°C~55°C，加入樹脂進行離子交換，交換時間為10~12小時，交換吸附完的樹脂用45°C~50°C溫水進行清洗，用波美5度鹽水清洗樹脂5~10分鐘； 洗脫:用波美20~22度的鹽水攪拌洗脫第一次，洗脫3~4小時，洗脫溫度為40°C~50°C，鹽水和樹脂的體積比例I~3:1 ;再用波美17~19度鹽水進行攪拌第二次洗脫，洗脫2~3小時，洗脫溫度為40°C~50°C，鹽水和樹脂的體積比例I~3:1 ; 沉淀、干燥:將兩次洗脫液合并后，用食用酒精沉淀10~12小時，固液分離后將固形物干燥得肝素鈉粗品。
2.如權利要求1所述的提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(1)中腸粘膜與水的重量比為1:1~3。
3.如權利要求1所述的提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(2)中所述的分層過濾的方法為:將步驟(1)所得產品上層用60-100目尼龍布過濾后，濾渣用體積比為1:1的75°C~85°C水清洗，濾液用的60-100目尼龍布過濾；步驟(1)所得的產品下層用的60-100目尼龍布過濾；合并濾渣，濾渣經過電壓、烘干的蛋白粉，濾液為肝素鈉溶液。
4.如權利要求1所述的提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(3)中所述樹脂為羅馬哈斯98樹脂，所述羅馬哈斯98樹脂的用量為每根豬小腸用20~30g。
5.如權利要求1所述的提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(3)中沉淀、干燥步驟中使用的食用酒精與洗脫液的體積比2~4:1。
6.如權利要求1所述的提取肝素鈉并聯(lián)產蛋白粉的方法，其特征在于:步驟(3)中沉淀、干燥步驟中干燥的溫度為80°C~85°C，干燥時間10~15小時。
【文檔編號】C12P21/06GK103665192SQ201210343629
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年9月17日 優(yōu)先權日:2012年9月17日
【發(fā)明者】楊三蓉, 劉亞蘭 申請人:什邡市樂勵馥陽生物有限責任公司