專利名稱：硅橡膠塑化標本dna提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種DNA提取方法，尤其是一種既可長期保存DNA又可降低保存成本的硅橡膠塑化標本DNA提取方法。
背景技術(shù)：
科學(xué)實驗中獲得的DNA主要包括基因組DNA和cDNA，為保留遺傳信息，同常需要將DNA長期保存。由于DNA在常溫下容易降解、破壞，因此，DNA的長期保存方法是低溫(低于_20°C)冷凍，溫度越低保存時間越久。長期低溫冷凍不僅對實驗室設(shè)備提出更高要求，而且制冷還會浪費大量電能，導(dǎo)致DNA保存的成本加大。目前，硅橡膠塑化已是標本保存的常用方法之一。硅橡膠塑化保存標本技術(shù)的基 本原理指利用硅橡膠塑化劑對標本進行滲透，從而取代組織中的水分和脂類，從而使生物標本保持原有形態(tài)，達到保存標本的目的，基本步驟包括標本固定、脫水、塑化浸潰和固化處理等。雖然經(jīng)過硅橡膠技術(shù)保存的標本具有干燥、無毒、無味、保存長久且成本低等特點，但是，迄今為止還沒有將硅橡膠塑化標本中的DNA提取出來的方法，以至于DNA保存仍沿用上述的低溫冷凍方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述技術(shù)問題，提供一種既可長期保存DNA又可降低保存成本的硅橡膠塑化標本DNA提取方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種硅橡膠塑化標本DNA提取方法，其特征在于依次按如下步驟進行
a.將硅橡膠塑化標本切割成體積小于O.5mm3的組織塊；
b.加入甲醇鈉溶液浸泡72小時；
C.用生理鹽水或平衡鹽溶液洗滌組織塊10分鐘，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘；
d.向組織塊中加入細胞裂解緩沖液勻漿，細胞裂解緩與組織塊的用量比為Iml40mg ；
e.將所得勻漿轉(zhuǎn)入離心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)混勻，在65°C恒溫水浴鍋中水浴30min，所述蛋白酶與組織塊的用量比為20 μ I 40mg ；
f.12000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，取上清液入另一離心管中，加入等體積的酚、
氯仿、異戊醇(25 24 1)混合液，混搖20分鐘；
g.加入2倍體積無水乙醇，取沉淀，用70%乙醇洗沉淀2次，空氣干燥沉淀后加TE溶解沉淀，4度保存?zhèn)溆?。本發(fā)明可在需要時將硅橡膠塑化標本中的DNA提取出來，因此可利用硅橡膠技術(shù)在保存標本的同時將其中的DNA進行長期保存，即可避免DNA在常溫下降解、破壞，又解決了低溫冷凍保存DNA所存在的成本大的問題。
具體實施例方式a.取硅橡膠塑化人體標本40mg，采用機械方法切割，使組織塊體積小于O. 5mm3 ；
b.向組織塊中加入甲醇鈉溶液浸泡72小時；
c.用5ml生理鹽水或平衡鹽溶液洗滌組織塊10分鐘，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘；
d.向組織塊中加入細胞裂解緩沖液勻漿，以所產(chǎn)生的勻漿中無組織塊為準，細胞裂解緩與a步驟所得組織塊的用量比為Iml 40mg ；
e.將所得勻漿轉(zhuǎn)入離心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)混勻，在65°C恒溫水浴鍋中水浴30min,所述蛋白酶與a步驟所得組織塊的用量比為20 μ I 40mg ；
f.12000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，以去除未消化的細胞碎片，取上清液入另一離心管中，力口入等體積的酚、氯仿、異戊醇(25 24 :1)混合液，混搖20分鐘；
可以重復(fù)f步驟一次，以純化DNA ；
g.加入2倍體積無水乙醇，取沉淀，用70%乙醇洗沉淀2次，空氣干燥沉淀后加TE溶解沉淀，4度保存?zhèn)溆?。用瓊脂糖凝膠電泳和測序檢測所得沉淀，證實是人體DNA。
權(quán)利要求
1.一種硅橡膠塑化標本DNA提取方法，其特征在于依次按如下步驟進行 a.將硅橡膠塑化標本切割成體積小于O.5mm3的組織塊； b.加入甲醇鈉溶液浸泡72小時； C.用生理鹽水或平衡鹽溶液洗滌組織塊10分鐘，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘； d.向組織塊中加入細胞裂解緩沖液勻漿，細胞裂解緩與組織塊的用量比為Iml40mg ； e.將所得勻漿轉(zhuǎn)入離心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)混勻，在65°C恒溫水浴鍋中水浴30min，所述蛋白酶與組織塊的用量比為20 μ I 40mg ； f.12000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min,取上清液入另一離心管中,加入等體積的酹、氯仿、異戍11(25:24:1)混合液，混搖20分鐘； g.加入2倍體積無水乙醇，取沉淀，用70%乙醇洗沉淀2次，空氣干燥沉淀后加TE溶解沉淀，4度保存?zhèn)溆谩?br> 全文摘要
本發(fā)明公開一種硅橡膠塑化標本DNA提取方法，依次按如下步驟進行將硅橡膠塑化標本切割成組織塊；加入甲醇鈉溶液浸泡；用生理鹽水或平衡鹽溶液洗滌組織塊；向組織塊中加入細胞裂解緩沖液勻漿，細胞裂解緩與組織塊的用量比為1ml40mg；將所得勻漿轉(zhuǎn)入離心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)混勻，在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，所述蛋白酶與組織塊的用量比為20μl40mg；12000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，取上清液入另一離心管中，加入等體積的酚、氯仿、異戊醇(25241)混合液，混搖20分鐘；加入2倍體積無水乙醇，取沉淀，用70%乙醇洗沉淀2次，空氣干燥后加TE溶解沉淀，4度保存?zhèn)溆谩?br> 文檔編號C12N15/10GK102911931SQ20121036758
公開日2013年2月6日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者付元山, 隋鴻錦, 于勝波, 張開立, 宮瑾, 蔡琳, 馬景馨, 遲彥艷, 張健飛, 鄭楠, 唐煒 申請人:大連醫(yī)科大學(xué)