專利名稱：一種脫脂發(fā)酵提取骨鈣的方法及骨鈣素的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及骨鈣提取工藝，屬于食品加工領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著社會的老齡化，在西方國家，骨質(zhì)疏松癥的患病率居代謝性骨病的第一位。骨質(zhì)疏松病癥帶給患者及家庭的痛苦是不言而喻的。據(jù)統(tǒng)計，我國目前約有超過I億的骨質(zhì)疏松癥患者，預計到2050年將增加到2億I千萬人。造成越來越多的人們鈣缺乏的因素生活和工作節(jié)奏加快，工作壓力大以及生活無規(guī)律，不注意飲食結(jié)構(gòu)的合理搭配，每日鈣攝入少于600毫克者可認為是鈣攝入不足，易造成體內(nèi)鈣的缺乏；一些中年人工作緊張，缺乏自我保健意識，不重視室外活動，使得體內(nèi)合成的維生素D減少，影響鈣的吸收和利用；營養(yǎng)攝入不均衡或缺乏人體所必需的營養(yǎng)元素。 目前市場的鈣劑多為工業(yè)合成的鈣。工業(yè)合成的鈣劑營養(yǎng)成分單一，很難滿足骨骼生長代謝過程中多方面的營養(yǎng)需求，補鈣效果不理想。動物骨富含鈣、磷、鐵、鎂等多種礦物元素，而且與人骨相似，人體骨骼細胞對相同組織細胞有較強的親和力，因而利用率更聞。中國專利CN1087793A和美國專利US6342252B1公開了一種利用酶解方法從牛骨中提取鈣素的工藝。酶解骨鈣具有鈣磷比例適宜、營養(yǎng)豐富、鈣質(zhì)吸收利用率高等特點。從市場銷售情況看，酶解骨鈣深受廣大消費者的喜愛，服用后改善骨質(zhì)疏松的效果明顯，取得了顯著的經(jīng)濟效益。但是，上述工藝制得的骨鈣中，脫脂方法主要是以蒸煮方式實施，難以去除骨質(zhì)中高含量的脂肪，導致最終的產(chǎn)品脂肪含量較高。對于具有心血管疾病的消費者，過高的脂肪攝入量顯然會升高發(fā)病的危險因素。因此，從動物骨骼中提取鈣素的過程中，去除過多的脂肪，減少心血管疾病的發(fā)病風險，成為技術(shù)人員急需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的酶解骨鈣的提取工藝，所述的工藝能夠較現(xiàn)有技術(shù)更好的去除骨質(zhì)中的脂肪。本發(fā)明的另一目的是提供一種更健康的補鈣產(chǎn)品生產(chǎn)工藝，所述的工藝制得的補鈣產(chǎn)品具有較低的脂肪含量。本發(fā)明的另一目的是提供一種具有市場競爭力的補鈣產(chǎn)品，所述的產(chǎn)品不因脫脂工藝的設計而增加生產(chǎn)成本。為達到上述目的，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案實現(xiàn)。本發(fā)明采用三次脫脂方式去除骨油，第一次是60 80°C，45 75min ;第二次80 90°C，30min ;第三次是脂肪酶酶解。三次脫脂除具有除去骨質(zhì)中的脂肪效果外，同時還具有殺菌的功效。為增強脫脂效果，本發(fā)明優(yōu)選的將骨粉碎至5 40_顆粒，顆粒過小則增加生產(chǎn)成本，顆粒過大去脂效果較差。發(fā)明人經(jīng)過多次試驗及經(jīng)驗，最終確定5 40_顆粒范圍達到去骨脂和成本的最佳性價比。在乙醇浸提脫脂后，本發(fā)明還采用熱水浸泡漂洗方式去除骨料中存在的脂肪；漂洗后再次以4000 8000r/min,離心30min,這樣可以去除骨粉中大部分的脂肪。為進一步去除殘存的脂肪，本發(fā)明的工藝選擇在離心后再次加入堿性脂肪酶進行酶解骨料中殘存的脂肪。堿性脂肪酶A、B按1.5 3 I混合的復合脂肪酶，占骨料比
O.I 0.4%，20 301，水解40 601^11。在酶解后，二次離心，進一步將殘存的微量脂肪去除。經(jīng)過上述脫脂步驟后，本發(fā)明采用發(fā)酵的方法對脫脂后的骨料進行預處理，然后再進行酶解提取鈣素。 ’
為增強發(fā)酵效果，本發(fā)明優(yōu)選的將骨粉碎至5 40_顆粒，顆粒過小則增加生產(chǎn)成本，顆粒過大效果較差。發(fā)明人經(jīng)過多次試驗及經(jīng)驗，最終確定5 40_顆粒范圍達到鈣素提取和成本的最佳性價比。本發(fā)明所述的酶解前發(fā)酵采用乳酸菌與骨料按一定的重量配比，35 50°C，發(fā)酵12h。乳酸菌與骨料的重量配比、乳酸菌在發(fā)酵液中的濃度、發(fā)酵溫度和時間對最終制得的產(chǎn)物中游離鈣含量具有重要的影響，而乳酸菌與骨料的重量配比和乳酸菌在發(fā)酵液中的濃度對游離鈣的影響最大。發(fā)明人根據(jù)自己多年的工作經(jīng)驗，反復試驗后確定乳酸菌占骨料重量比為O. 01 O. 04%，骨料與水重量體積比I : 3 5的條件下，能夠達到投入與產(chǎn)出的最佳性價比。發(fā)明人提供大量實驗，意外發(fā)現(xiàn)多種乳酸菌按照一定的配比組合進行發(fā)酵，最終的產(chǎn)物中游離鈣含量較單獨以某種乳酸菌發(fā)酵提高8%以上，而采用乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus)三種乳酸菌進行發(fā)酵效果較好；采用此三種乳酸菌配比后發(fā)酵效果最好，當三種乳酸菌以重量比1:3: 2進行組合時，酶解液中游離鈣含量較單一乳酸菌發(fā)酵后提高10% 30%。本發(fā)明的酶解采用二次酶解方法，經(jīng)過篩選后，最終發(fā)現(xiàn)用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶進行酶解較其他蛋白酶具有更好的效果。當然，選用其他蛋白酶進行酶解也能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明的目的。本發(fā)明的提取工藝中最佳的酶解方案是PH值I 3，加入胃蛋白酶，水解溫度35 40°C，攪拌I 2h，PH值6 7，加入木瓜蛋白酶，40 60°C，攪拌I 2h。水解骨粉所用的兩種蛋白酶各占骨料比為O. 04 O. 08%為佳。堿性脂肪酶A由福建師范大學生物工程學院研制的擴展青霉PF868產(chǎn)生的堿性脂肪酶，由深圳綠微康生物工程有限公司提供；堿性脂肪酶B采用生物技術(shù)由真菌發(fā)酵精制而產(chǎn)生的堿性脂肪酶，由海寧金潮實業(yè)有限公司提供。本發(fā)明的組合物與任何一種或一種以上藥劑學上輔料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、羥丙甲基纖維素、聚乙二醇、硬脂酸鎂、微粉硅膠、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各種劑型，例如，可制成片齊 、緩釋片、滴丸、顆粒齊 、膠囊齊 、微粒劑。優(yōu)選劑型為片劑或顆粒劑。采用本發(fā)明的脫脂工藝制得的骨粉中，脂肪基本被完全去除，使得酶解獲得的鈣劑中脂肪含量低于O. I %。產(chǎn)品對有心血管疾病的消費者來說更加安全和健康，但是又未因此而增加經(jīng)濟負擔。試驗例
以下通過一些具體的實驗數(shù)據(jù)進一步說明本發(fā)明的有益效果，本發(fā)明所有的實施例均能做出與此相近的實驗效果，以下數(shù)據(jù)只是舉例說明。I、材料與方法I. I牛骨購于河北福成五豐食品股份有限公司I. 2樣品I :依照中國專利CN1087793A使用牛骨獲得的樣品；樣品2 :依照美國專利US6342252B1使用牛骨獲得的樣品；樣品3 :依照《超微粉碎牦牛骨泥經(jīng)發(fā)酵和酶解后游離鈣和氨基酸態(tài)氮的變化》(陳丹，張傳林等，《中國釀造》2008年第I期總第178期)中“I. 5乳酸菌發(fā)酵處理牦牛骨泥……牛骨泥用蒸餾水稀釋為10%的濃度……發(fā)酵36小時”使用牛骨獲得的樣品；樣品4 :依照本發(fā)明實施例4使用牛骨獲得的樣品。I. 3方法采用原子吸收分光光度法測定游離鈣含量。 2、結(jié)果2. I樣品I的游離鈣含量為170. 05mg/100g,樣品2的游離鈣含量為341. llmg/100g,樣品3的游離鈣含量為1934. 83mg/100g,樣品4的游離鈣含量為2302.67mg/100g。2. 2經(jīng)數(shù)據(jù)對比分析，本發(fā)明所制得的產(chǎn)品的游離鈣含量，與樣品I、樣品2相比，具有非常顯者的提聞；與樣品3相比，具有顯者的提聞，提聞幅度達到19. 01 %。
具體實施例方式
配制培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，葡萄糖2%，磷酸氫二鉀0.2%，醋酸鈉0.5%，硫酸鎂0.02%，硫酸錳O. 005%，吐溫-80 O. 1%,檸檬酸三銨O. 2%, PH5. 5 6. 0，115°C，滅菌 30min。實施例I取動物骨骼粉碎至40mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；90°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B按I. 5 I混合的復合脂肪酶，占骨料比0.4%，301，水解601^11，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2 ;骨料與水重量體積比I : 5，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為0.04%，50°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值3，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解溫度40°C，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，60°C，攪拌2h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例2取動物骨骼粉碎至5mm顆粒，加入乙醇，60°C，浸提45min，棄上清液；80°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料4000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3，調(diào)PH值8，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 1%，20°C，水解40min，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2 ;骨料與水重量體積比I : 3，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為0.01%，35°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值1，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 04%，水解溫度35°C，攪拌lh，加堿調(diào)節(jié)PH值至6，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 04%，4(TC，攪拌lh，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例3取動物骨骼粉碎至20mm顆粒，加入乙醇，70°C，浸提60min，棄上清液；85°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值9，加入堿性脂肪酶A、B按2 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 3%，25°C，水解50min，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2 ;骨料與水重量體積比I : 4，加入總重量的5%的蔗糖，，乳酸菌占骨料重量比為0.03%，40°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 06%，水解溫度37 V，攪拌I. 5h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6. 5，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 06 %，50°C，攪拌
I.5h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得?！?br> 實施例4取動物骨骼粉碎至IOmm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；89°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料6000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3. 5，調(diào)PH值8. 5，加入堿性脂肪酶A、B按2 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 2%，30°C，水解60min，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2 ;骨料與水重量體積比I : 5，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為0.04%，50°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值1，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解溫度37°C，攪拌I. 2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6. 7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 06%，45°C，攪拌Ih，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例5取動物骨骼粉碎至25mm顆粒，加入乙醇，75°C，浸提65min，棄上清液；88°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值9. 5，加入堿性脂肪酶A、B按2. 8 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 3%，30°C，水解50min，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2 ;骨料與水重量體積比I : 5，加入總重量的5%的蔗糖，，乳酸菌占骨料重量比為O. 04%，40°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值3，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解溫度40°C，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，60°C，攪拌lh，力口熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例6取動物骨骼粉碎至35mm顆粒，加入乙醇，78°C，浸提70min，棄上清液；87°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料7000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值8，加入堿性脂肪酶A、B按I. 8 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 25%，201，水解501^11，離心，去上清液；取乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2 ;骨料與水重量體積比I : 5，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為0.04%，45°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值1，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解溫度36°C，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，55°C，攪拌2h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例7取動物骨骼粉碎至IOmm顆粒，加入乙醇，60°C，浸提75min，棄上清液；86°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料5000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 35%，241，水解451^11，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2 ;骨料與水重量體積比I : 5，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為0.03%，50°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值I. 3，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解溫度35°C，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08 %，450C，攪拌2h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例8取動物骨骼粉碎至15mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；84°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值8. 5，加入堿性脂肪酶A、B按2. 6 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 14%，301，水解601^11，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2 ;骨料與水重量體積比I : 5，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為0.03%，37°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 07%，水解溫度38°C，攪 拌I. 5h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08 %，40 °C，攪拌2h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例9取動物骨骼粉碎至30mm顆粒，加入乙醇，75°C，浸提55min，棄上清液；83°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值8，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 35%，28°C，水解60min，離心，去上清液；取乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2;乳酸菌占骨料重量比為O. 04%，骨料與水重量體積比I : 3，加入總重量的5%的蔗糖，50°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值3，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解溫度39°C，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08 %，500C，攪拌2h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例10取動物骨骼粉碎至20mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提60min，棄上清液；82°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料6000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 3%，30°C，水解60min，離心，去上清液；取乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 : 2;乳酸菌占骨料重量比為O. 04%，骨料與水重量體積比I : 3，加入總重量的5%的蔗糖，40°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 05%，水解溫度38°C，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 07 %，550C，攪拌lh，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例11將骨骼粉碎至40mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；81°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B按3 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. I %，30°C，水解60min，離心，去上清液；取乳酸菌加入骨料中，骨料與水重量體積比I : 5，加入總重量的5%的蔗糖，，42°C，發(fā)酵1211，120°〇滅菌301^11 ;加鹽酸調(diào)pH值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08 %，水解溫度38 0C，水解2h，調(diào)PH值7，再加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 06%, 550C，攪拌2h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。
實施例12將骨骼粉碎至5mm顆粒，加入乙醇，60°C，浸提45min，棄上清液；90°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料4000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3，調(diào)PH值8，加入復合脂肪酶，占骨料比O. 1%，20°C，水解60min，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿茵(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 2;骨料與水重量體積比I : 4，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為O. 04%，45°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值，加入蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解a，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例13將骨骼粉碎至30mm顆粒，加入乙醇，75°C，浸提60min，棄上清液；90°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值9，加入復合脂肪酶，占骨料比0.4%，30°C，水解60min，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿茵(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 2;骨料與水重量體積比I : 3. 5，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為O. 04 %，50 °C，發(fā)酵12h，120 V滅菌30min ；加鹽酸調(diào)pH值2，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 06%，水解溫度40°C，攪拌2h，調(diào)PH值7，再次加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，60°C，攪拌2h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例14將骨骼粉碎至IOmm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提75min，棄上清液；88°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 5，調(diào)PH值10，加入堿性脂肪酶A、B混合的復合脂肪酶，占骨料比O. 4%，30°C，水解60min,離心,去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿茵(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus)，三種乳酸菌重量比I : 3 2 ;骨料與水重量體積比I : 5，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為O. 04%，50°C，發(fā)酵1211，1201滅菌301^11 ；加鹽酸調(diào)PH值I. 5，加入胃蛋白酶，水解溫度37°C，攪拌2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6. 7，加入中性蛋白酶，占骨料比為O. 08%，50°C，攪拌2h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。實施例15
將骨骼粉碎至25mm顆粒，加入乙醇，80°C，浸提65min，棄上清液；90°C熱水浸泡漂洗30min，將骨料6000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 4，調(diào)PH值8. 5，加入復合脂肪酶，占骨料比O. 3%，30°C，水解60min，離心，去上清液；取乳酸菌加入骨料中，乳酸菌占骨料重量比為O. 02%，骨料與水重量體積比I : 4，加入總重量的5%的蔗糖，50°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值3，加入胃蛋白酶，占骨料比為O. 08%，水解溫度40°C，攪拌lh，加堿調(diào)節(jié)PH值至7，加入木瓜蛋白酶，占骨料比為O. 08%，45°C，攪拌2h，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。 ·
權(quán)利要求
1.一種脫脂發(fā)酵提取骨鈣的方法，包括如下步驟 (1)將骨粉碎，浸提去骨油，棄上清液； (2)將浸提后的骨料浸泡漂洗、離心，棄上清液； (3)將離心后的骨料加水，調(diào)PH值，加堿性脂肪酶水解，離心，去上清液； (4)將步驟(3)中離心后的骨料加乳酸菌發(fā)酵； (5)步驟(4)中的發(fā)酵液再加入蛋白酶二次水解，加堿中和，干燥即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的步驟(I)骨料顆粒5 40mm 加入乙醇，60 80°C，45 75min。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的步驟(2)中將骨料顆粒熱水漂洗，然后4000 8000r/min,離心30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的步驟(3)中骨料與水重量體積比I : 3 5，調(diào)PH值8 10，加入堿性脂肪酶A、B混合的復合脂肪酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的復合脂肪酶中堿性脂肪酶A、B重量比為I. 5 3 I。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的骨鈣提取方法，其特征在于，所述的復合脂肪酶占骨料比.O.I O. 4%。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，步驟(4)中所述的發(fā)酵是乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 2;骨料與水重量體積比I : 3 5，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為O. 01 O. 04%, 35 50°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的骨鈣提取方法，其特征在于，步驟(5)中所述的水解是加鹽酸調(diào)pH值I 3，加入胃蛋白酶，水解溫度35 40°C，攪拌I 2h，加堿調(diào)節(jié)PH值至6 7，加入木瓜蛋白酶，40 60°C，攪拌I 2h，加熱滅酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的骨鈣提取方法，其特征在于，水解骨粉所用的兩種蛋白酶各占骨料比為O. 04 O. 08%為佳。
10.一種由動物骨骼提取制備的骨鈣素，其特征在于，采用以下方法制備將骨骼粉碎至5 40mm顆粒，加入乙醇，60 80°C，浸提45 75min，棄上清液；骨料熱水浸泡漂洗，水溫80-90°C，浸泡30分鐘，將骨料4000 8000r/min，離心30min，棄上清液；將離心后的骨料加水，骨料與水重量體積比I : 3 5，調(diào)PH值8 10，加入堿性脂肪酶A、B按I. 5 3 I混合的復合脂肪酶，占骨料比O. I O. 4%，20 30°C，水解40 60min，離心，去上清液；乳雙歧桿菌(B. Iactis)、保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)和瑞士乳桿菌(L. helviticus),三種乳酸菌重量比I : 3 2;骨料與水重量體積比I : 3 5，加入總重量的5%的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比為O. 01 O. 04%,35 50°C，發(fā)酵12h，120°C滅菌30min ;加鹽酸調(diào)pH值I 3，加入胃蛋白酶，占骨料重量比為O. 04 O. 08%，水解溫度35 40°C，攪拌I 2h,加堿調(diào)節(jié)PH值至6 7，加入木瓜蛋白酶，占骨料重量比為O. 04 O. 08%，40 60°C，攪拌I a，加熱滅酶；加堿中和，干燥，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種脫脂發(fā)酵提取骨鈣的方法及由該方法制得的骨鈣素。包括如下步驟三次脫脂、兩次離心、發(fā)酵和蛋白酶水解。采用本發(fā)明的脫脂工藝制得的骨粉中，脂肪基本被完全去除，使得酶解獲得的鈣劑中脂肪含量低于0.1％，游離鈣含量增加。產(chǎn)品對有心血管疾病的消費者來說更加安全和健康，但是又未因此而增加經(jīng)濟負擔。
文檔編號A23L1/29GK102871122SQ20121038235
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月10日
發(fā)明者郁正剛, 吳益群, 趙健, 崔卜東, 黃永亮 申請人:天獅集團有限公司