專利名稱：一種恩拉霉素高產(chǎn)菌株及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于生產(chǎn)抗生素的菌株，具體地說，涉及一種高產(chǎn)恩拉霉素的菌株及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
恩拉霉素是由真殺菌鏈霉菌(Streptomyces fungicidious)發(fā)酵產(chǎn)生的ー種由十幾種氨基酸和不飽和脂肪酸結(jié)合而成的環(huán)狀多肽類抗生素。以往用于生產(chǎn)恩拉霉素的殺真菌鏈霉菌菌株大多是從野生菌株中篩選得到的，其生產(chǎn)水平較低。中國專利ZL201010528367. 2公開了ー種殺真菌鏈霉菌突變菌株FYFJ03 (保藏號CGMCC No. 4113)，其篩選方法是首先采用5-溴尿嘧啶誘使出發(fā)菌株突變，產(chǎn)生突變株，然后采用金黃色葡萄球菌，按照生物效價法對突變株進(jìn)行篩選，得到高產(chǎn)恩拉霉素的菌株。該方法雖然在一定程度上提高了菌株的生產(chǎn)能力，但是由于僅采用了化學(xué)誘變，且篩選方式単一，因此菌株生產(chǎn)能 力的提聞有限。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高產(chǎn)恩拉霉素的菌株，同時提供上述菌株的篩選方法，以及提供該菌株在恩拉霉素生產(chǎn)中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種分類名稱是殺真菌鏈霉菌(Streptomycesfungicidious) DCS067 (以下簡稱DCS067)的恩拉霉素高產(chǎn)菌株，其保藏號是CGMCCNo. 6220，保藏單位是中國微生物菌種保藏管理委員會(CGMCC)，保藏日期是2012年6月14曰。本發(fā)明所提供的DCS067菌株其微生物學(xué)特征如下
單菌落的形態(tài)為菌落直徑2-3mm，孢子灰色或白色，豐滿。顯微鏡觀察孢子圓形或橢圓形。本發(fā)明提供的DCS067的制備方法，包括以下步驟
a、孢子懸液I的制備取殺真菌鏈霉菌的出發(fā)菌株，接種于斜面培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C、相対濕度40%-60%條件下培養(yǎng)5_8天，然后加入無菌水，將孢子刮下，混勻，得到孢子懸液I ;
b、有機(jī)溶劑處理向孢子懸液I中加入無菌有機(jī)溶劑，振蕩后靜置，分層，取水相得到孢子懸液II ;所述振蕩可以采用漩渦振蕩器振蕩15-60 S，靜置時間最好為15-30min。C、紫外誘變將孢子懸液II置于滅菌的培養(yǎng)皿中，于波長為254nm的紫外燈下照射45-60s ;照射吋，最好是在功率為30W的紫外燈下垂直距離30cm處照射。d、抗性篩選將誘變處理后的孢子懸液II涂布在含有抗生素的分離培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C、相対濕度40%-60%條件下培養(yǎng)5_8天，生成具有抗生素耐藥性的若干單菌落；培養(yǎng)時最好第一天正置，第二天起倒置培養(yǎng)；分別挑取上述單菌落，接種于斜面培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C、相対濕度40%-60%條件下培養(yǎng)5_8天后，接種于種子培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C, 200^220 rpm條件下培養(yǎng)26_30h后，接種于發(fā)酵培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C，200^220 rpm條件下培養(yǎng)9-12天，得到發(fā)酵液，采用HPLC法測定發(fā)酵液中恩拉霉素效價，其中，效價最高的發(fā)酵液對應(yīng)的菌株即為本發(fā)明所述殺真菌鏈霉菌(Streptomycesfungicidious) DCS067。本發(fā)明首先將菌株孢子懸液經(jīng)過有機(jī)溶劑處理，去除了孢子表面的多糖被、蛋白類物質(zhì)等附著物，有利于后續(xù)的誘變和篩選。這是因?yàn)榫昙?xì)胞在生長繁殖過程中，孢子周圍會形成主要由多糖被以及蛋白類物質(zhì)組成的附著物，此類附著物不僅能阻擋紫外線的作用，還能防礙抗生素的滲入，同時，多糖被中還含有較高濃度的抗生素降解酶，進(jìn)一歩阻止了抗生素對深層孢子的影響。去除上述附著物，能夠使孢子更好地暴露于外部環(huán)境中。本發(fā)明在后續(xù)步驟中，采用了紫外誘變和抗生素抗性篩選相結(jié)合的方式，克服了以往單ー誘變的不足，進(jìn)ー步提高了突變菌株的恩拉霉素產(chǎn)率。與出發(fā)菌株相比，本發(fā)明所述菌株的恩拉霉素產(chǎn)率提高了 47. 80%。本發(fā)明a步驟所述孢子懸液I中孢子濃度最好為IOll-IO13個/mL或者是吸光度A6tltl為I. 0-2.0 ;該濃度或吸光度下的孢子懸液，易于除去孢子表面的附著物(多糖被、蛋白類物質(zhì))，同時還具有良好的繁殖性能。本發(fā)明b步驟所述有機(jī)溶劑最好 是經(jīng)滅菌處理的苯酚、三氯甲烷、正十六烷、正己烷、正辛烷、正十二烷、正辛醇、ニ甲苯中的任意ー種或幾種的混合物。其中，更優(yōu)選的組合是苯酚和三氯甲烷的混合物；混合物中，苯酚和三氯甲烷的體積比最好為25:4。采用上述混合物對孢子懸液I進(jìn)行處理時，能夠更好地除去孢子表面的多糖被、蛋白類物質(zhì)。按質(zhì)量體積比計(jì)算，本發(fā)明所述斜面培養(yǎng)基的成分最好為0. 5-1.0%麥芽糖粉，
0.05-0. 10%干酵母粉，0. 05-0. 10%金槍魚膏，0. 06-0. 12%胰蛋白胨，0. 1-0. 5%氯化鈉，
1.8-2. 2%瓊脂，其余為水，所述分離培養(yǎng)中抗生素的含量優(yōu)選0. ro. 7ug /mL，其余成分及含量與斜面培養(yǎng)基相同，所述斜面培養(yǎng)基和分離培養(yǎng)基均采用質(zhì)量百分含量為30%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至6.7±0. I。本發(fā)明所述分離培養(yǎng)基中的抗生素優(yōu)選鏈霉素。按質(zhì)量體積比計(jì)算，本發(fā)明d步驟所述種子培養(yǎng)基成分最好為2.5-4.5%玉米粉，0. 2-0. 8%玉米蛋白粉，0. 2-0. 8%棉籽餅粉，I. 5-2. 5%輕質(zhì)碳酸鈣，0. 15-0. 35%硫酸銨，
0.02-0. 05%硫酸亞鐵，0. 05-0. 25%磷酸ニ氫鉀，I. 5-3. 5%玉米漿，其余為水，該培養(yǎng)基采用質(zhì)量百分含量為30%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至6. 7±0. I。按質(zhì)量體積比計(jì)算，本發(fā)明d步驟所述發(fā)酵培養(yǎng)基成分最好為6-15%玉米粉，2-6%玉米蛋白粉，0. 2-0. 8%輕質(zhì)碳酸鈣，0. 2-0. 8%氯化鈉，0. 1-0. 5%硫酸銨，0. 003-0. 012%硫酸亞鐵，0. 007-0. 027%磷酸ニ氫鉀，0. 1-0. 5%尿素，0. 005-0. 015%氯化鋅，0. 05-0. 25%氫氧化鉀，0. 07-0. 15%玉米漿，0. 1-0. 5%L-乳酸，0. 04-0. 12%耐高溫a -淀粉酶，其余為水，該培養(yǎng)基采用質(zhì)量百分含量為30%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至5. 9±0. I。本發(fā)明所述菌株能夠用于恩拉霉素的生產(chǎn)。用于恩拉霉素生產(chǎn)時，最好在28. 0±0. 5°C，20(T220 rpm條件下，將DCS067菌株在發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵9-12天，制得含有恩拉霉素的發(fā)酵液；發(fā)酵采用的培養(yǎng)基成分最好為6-15%玉米粉，2-6%玉米蛋白粉，0. 2-0. 8%輕質(zhì)碳酸鈣，0. 2-0. 8%氯化鈉，0. 1-0. 5%硫酸銨，
0.003-0. 012%硫酸亞鐵，0. 007-0. 027%磷酸ニ氫鉀，0. 1-0. 5%尿素，0. 005-0. 015%氯化鋅，
0.05-0. 25% 氫氧化鉀，0. 07-0. 015% 玉米漿，0. 1-0. 5%L-乳酸，0. 04-0. 12% 耐高溫 a -淀粉酶，其余為水，該培養(yǎng)基采用質(zhì)量百分含量為30%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至5. 9±0. I。本發(fā)明所述殺真菌鏈霉菌DCS067經(jīng)菌株復(fù)試及穩(wěn)定性考察結(jié)果可知，其具有良好的傳代穩(wěn)定性，同時用于生產(chǎn)恩拉霉素時，可有效提高恩拉霉素的產(chǎn)率。本發(fā)明所述方法其篩選方法，操作簡便，結(jié)果可靠。
具體實(shí)施例方式下面用具體實(shí)施例來進(jìn)ー步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但并不以任何方式意味著對本發(fā)明進(jìn)行限制。下述實(shí)施例采用的殺真菌素鏈霉菌的出發(fā)菌株購自中國普通微生物菌種保藏管理中心(編號為4. 1312)。實(shí)施例I恩拉霉素高產(chǎn)菌株的篩選
a、制備斜面培養(yǎng)基稱取8g麥芽糖粉,0. 8g干酵母粉,0. 8g金槍魚膏，Ig胰蛋白胨,3g氯化鈉，20g瓊脂，加水定容至1000ml，然后用質(zhì)量百分含量為30%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至6. 7±0. I,得到混合液A。取上述混合液A,分裝至若干30 mmX200 mm的試管中，依次加棉塞、兩層紗布、兩層牛皮紙包好，在0. ll±0.05MPa、121±l°C條件下滅菌20 min。滅菌完畢后立即搖勻，降溫至手感不燙時，鋪成斜面，凝固后得到斜面培養(yǎng)基。制備孢子懸液I :取殺真菌鏈霉菌的出發(fā)菌株(4. 1312)，接種至上述斜面培養(yǎng)基 上，在28. 0±0. 5°C、相対濕度40-60%條件下培養(yǎng)7天，然后加入3mL無菌水，用無菌接種針將孢子刮下，轉(zhuǎn)入含有數(shù)顆玻璃珠的無菌三角瓶中，振蕩，取水層得到孢子懸液I，采用分光光度法檢測，其吸光度為A_=l. 506，孢子濃度為IO12個/mL。b、有機(jī)溶劑處理將苯酚、三氯甲烷按照體積比25:4混合后，經(jīng)0. 22 Um有機(jī)微孔濾膜過濾除菌，得到無菌有機(jī)溶剤。取5mL步驟a得到的孢子懸液I，加入5mL上述無菌有機(jī)溶劑，在漩渦振蕩器上振蕩30 s后，靜置30 min，分層；取水相得到孢子懸液II，采用分光光度法檢測，其吸光度為A_=0. 456。與孢子懸液I相比，孢子懸液II的吸光度明顯下降，外觀上也更加澄明通透，說明孢子表面的多糖被、蛋白類物質(zhì)與有機(jī)溶劑結(jié)合后從水相轉(zhuǎn)移到了有機(jī)相。C、紫外誘變?nèi)?mL上述孢子懸液II,置于直徑6 cm的無菌培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿中放有滅菌轉(zhuǎn)子，將培養(yǎng)皿置于磁力攪拌器上，在攪拌條件下，于波長254nm、30W的紫外燈下垂直距離30cm處照射45s。d、制備含有鏈霉素的分離培養(yǎng)基取a步驟所述混合液A，按200 mL/瓶的用量分裝至容積為500 mL的三角瓶中，然后依次加棉塞、兩層紗布、兩層牛皮紙包裝，在
0.11±0. 05MPa、121 土 1°C條件下滅菌20 min。滅菌后立即搖勻，降溫至手感不燙時，按照每ImL培養(yǎng)基0. 3 U g鏈霉素的添加量，加入鏈霉素水溶液，再次搖勻后倒平板，凝固后得到分離培養(yǎng)基。制備種子培養(yǎng)基稱取35g玉米粉，5g玉米蛋白粉，5g棉籽餅粉，20g輕質(zhì)碳酸鈣，
2.5g硫酸銨，0. 36g硫酸亞鐵，I. 25g磷酸ニ氫鉀，加入去離子水?dāng)嚢杈鶆蚝螅谷敕兴羞M(jìn)行糊化，降至室溫時加入28g玉米衆(zhòng),再用去離子水定容至IOOOmL,最后用30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6. 7±0. I。按照50 mL/瓶的用量，邊充分?jǐn)嚢柽叿盅b至若干容積為500 mL的三角瓶中，用棉塞、兩層紗布、ー層牛皮紙封ロ。在0. ll±0.05MPa 121±1°C條件下滅菌30min，冷卻后得到種子培養(yǎng)基。制備發(fā)酵培養(yǎng)基稱取120g玉米粉，40g玉米蛋白粉，5g輕質(zhì)碳酸I丐，5g氯化鈉，3g硫酸銨,0. 07g硫酸亞鐵,0. 17g磷酸ニ氫鉀，3g尿素,0. Ig氯化鋅，I. 5g氫氧化鉀,加入400mL去離子水?dāng)嚢杈鶆蚝?，倒?00mL沸水中進(jìn)行糊化，然后加入0. 7g耐高溫a -淀粉酶進(jìn)行液化處理，再加入Ig玉米衆(zhòng)和3g L-乳酸,加水定容至IOOOmL ;最后用30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5. 9±0. I。按照50 mL/瓶的用量，邊充分?jǐn)嚢柽叿盅b至若干容積為500mL的三角瓶中，用八層紗布、ー層牛皮紙封ロ，在0. ll±0.05MPa 121 ± 1°C條件下滅菌30min,冷卻后得到發(fā)酵培養(yǎng)基?？剐院Y選將c步驟紫外誘變處理后的孢子懸液II稀釋至每ImL含10_4_10_7個孢子，涂布在上述含有鏈霉素的分離培養(yǎng)基上，于28. 0±0. 5°C、相対濕度40-60%條件下培養(yǎng)7天，第一天正置，第二天起倒置培養(yǎng)，生成具有抗生素耐藥性的若干單菌落；分別挑取若干上述單菌落，接種于a步驟制備的斜面培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C、相対濕度40-60%條件下培養(yǎng)7天后，用接種鏟挖取約0. 5X0. 5cm2接種于上述種子培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C， 200^220 rpm條件下培養(yǎng)28h后，接種于上述發(fā)酵培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C，20(T220 rpm條件下培養(yǎng)10天，得到發(fā)酵液，測定發(fā)酵液中恩拉霉素效價，效價最高為10617U/mL，將其所對應(yīng)的菌株命名為殺真菌鏈霉菌DCS067。測定DCS067的形態(tài)學(xué)特征，其單菌落的形態(tài)為菌落直徑2-3mm，孢子灰色或白色，豐滿。顯微鏡觀察孢子圓形或橢圓形。對DCS067進(jìn)行砂土保藏向保存有DCS067菌株的斜面培養(yǎng)基中加入2 mL無菌水，用接種針將孢子刮下，搖勻后取0.2 mL轉(zhuǎn)移至空白砂土管中，注明菌株名稱、制備日期和有效期，在壓強(qiáng)為-750'760 mmHg柱下抽真空4-6 h,密封后置于裝有變色娃膠的干燥器中，于5±3°C保存。其保藏單位是中國微生物菌種保藏管理委員會(CGMCC)，保藏號為CGMCC No. 6220，保藏日期2012年6月14日。實(shí)施例2恩拉霉素高產(chǎn)菌株的復(fù)試及穩(wěn)定性考察
菌株復(fù)試取實(shí)施例I中保藏DCS067的砂土管，接種至實(shí)施例I制備的斜面培養(yǎng)基上，于28. 0±0. 5°C，相対濕度40-60%條件下培養(yǎng)7天后，用接種鏟挖取約0. 5X0. 5 cm2菌層接種至實(shí)施例I制備的種子培養(yǎng)基上，于28. 0±0. 5°C, 220 rpm條件下震蕩培養(yǎng)26-30 h后，轉(zhuǎn)接至實(shí)施例I制備的發(fā)酵培養(yǎng)基上，于28. 0±0. 5°C, 220 rpm震蕩培養(yǎng)10天，測定發(fā)酵液中恩拉霉素的效價，結(jié)果為10079、11034、10604 U/mL、平均10572 U/mL。此結(jié)果表明DCS067菌株活性良好，并具有高產(chǎn)恩拉霉素的特性。穩(wěn)定性考察取實(shí)施例I中保藏DCS067的砂土管，接種至上述斜面培養(yǎng)基上，于28. 0±0. 5°C，相対濕度40-60%條件下培養(yǎng)7天后，再次接種于上述斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如此重復(fù)，連續(xù)轉(zhuǎn)接三次后，轉(zhuǎn)接至上述種子培養(yǎng)基上，于28. 0±0. 5°C，220 rpm條件下震蕩培養(yǎng)26-30 h后，轉(zhuǎn)接至上述發(fā)酵培養(yǎng)基中，于28.0±0. 5°C，220 rpm震蕩培養(yǎng)10天，檢測發(fā)酵液中土霉素的效價，結(jié)果為10217、9805、10079U/mL，平均10034U/mL。此結(jié)果表明DCS067具有傳代穩(wěn)定性。實(shí)施例3對比實(shí)施例
以出發(fā)菌株為發(fā)酵菌株，采用等同于實(shí)施例2復(fù)試的培養(yǎng)條件進(jìn)行發(fā)酵，檢測發(fā)酵液中恩拉霉素的效價，結(jié)果為7114、7030、7315U/mL，平均7153U/mL。比較實(shí)施例I、實(shí)施例3所得發(fā)酵液中恩拉霉素效價可知，與出發(fā)株相比，本發(fā)明所述DCS067菌株的恩拉霉素的產(chǎn)率提高了 47. 80% 。
權(quán)利要求
1.ー種恩拉霉素高產(chǎn)菌株，其特征在所述菌株保藏名稱是殺真菌鏈霉菌(Streptomyces fungicidious) DCS067,保藏單位 CGMCC,保藏號是 CGMCC No. 6220,保藏日期2012年6月14日。
2.權(quán)利要求I所述恩拉霉素高產(chǎn)菌株的制備方法，其特征在于包括以下步驟 a、制備孢子懸液I:取殺真菌鏈霉菌的出發(fā)菌株，接種于斜面培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C、相対濕度40-60%條件下培養(yǎng)5_8天，然后加入無菌水，將孢子刮下，混勻，得到孢子懸液I ; b、有機(jī)溶劑處理向孢子懸液I中無菌有機(jī)溶劑，振蕩后靜置，分層，取水相得到孢子懸液II ； C、紫外誘變將孢子懸液II置于滅菌的培養(yǎng)皿中，于波長254nm的紫外燈下照射45_60s ； d、抗性篩選將誘變處理后的孢子懸液II涂布在含有抗生素的分離培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C、相対濕度40-60%條件下培養(yǎng)5_8天，生成具有抗生素耐藥性的若干單菌落；分別挑取上述單菌落，接種于斜面培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C、相対濕度40-60%條件下培養(yǎng)5-8天后，接種于種子培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C，200^220 rpm條件下培養(yǎng)26_30h后，接種于發(fā)酵培養(yǎng)基上，在28. 0±0. 5°C，200^220 rpm條件下培養(yǎng)9_12天，得到發(fā)酵液，測定發(fā)酵液中恩拉霉素效價，選取效價最高的發(fā)酵液對應(yīng)的菌株即為殺真菌鏈霉菌(Streptomycesfungicidious) DCS067。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述恩拉霉素高產(chǎn)菌株的制備方法，其特征在于，所述孢子懸液I中孢子濃度為1011-1013個/mL或吸光度A600為I. 0-2. 0，所述有機(jī)溶劑為苯酚、三氯甲烷、正十六烷、正己烷、正辛烷、正十二烷、正辛醇、ニ甲苯中的任意ー種或幾種的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述恩拉霉素高產(chǎn)菌株的制備方法，其特征在干，所述有機(jī)溶劑是體積比為25:4的苯酚、三氯甲烷的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述恩拉霉素高產(chǎn)菌株的制備方法，其特征在干，按質(zhì)量體積比計(jì)算，所述斜面培養(yǎng)基的成分為0. 5-1. 0%麥芽糖粉，0. 05-0. 10%干酵母粉，0. 05-0. 10%金槍魚膏，0. 06-0. 12%胰蛋白胨，0. 1-0. 5%氯化鈉，I. 8-2. 2%瓊脂，其余為水；所述分離培養(yǎng)中抗生素的含量為0. r0.7ug /mL，其余成分及含量與斜面培養(yǎng)基相同，上述斜面培養(yǎng)基和分離培養(yǎng)基均采用質(zhì)量百分含量為30%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至6. 7±0. I。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述恩拉霉素高產(chǎn)菌株的制備方法，其特征在干，c步驟所述抗生素是鏈霉素。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述恩拉霉素高產(chǎn)菌株的制備方法，其特征在干，按質(zhì)量體積比計(jì)算，d步驟所述種子培養(yǎng)基的成分為2. 5-4. 5%玉米粉，0. 2-0. 8%玉米蛋白粉，0. 2-0. 8%棉籽餅粉，I. 5-2. 5%輕質(zhì)碳酸鈣，0. 15-0. 35%硫酸銨，0. 02-0. 05%硫酸亞鐵，0. 05-0. 25%磷酸ニ氫鉀，I. 5-3. 5%玉米漿，其余為水，該培養(yǎng)基采用質(zhì)量百分含量為30%的NaOH水溶液調(diào)節(jié) pH 至 6. 7±0. I。
8.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述恩拉霉素高產(chǎn)菌株的制備方法，其特征在干，按質(zhì)量體積比計(jì)算，d步驟所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為6-15%玉米粉，2-6%玉米蛋白粉，0. 2-0. 8%輕質(zhì)碳酸鈣，0. 2-0. 8%氯化鈉，0. 1-0. 5%硫酸銨，0. 003-0. 012%硫酸亞鐵，0. 007-0. 027%磷酸ニ氫鉀,0. 1-0. 5% 尿素，0. 005-0. 015% 氯化鋅，0. 05-0. 25% 氫氧化鉀，0. 07-0. 15% 玉米漿，.0.l-o. 5%L-乳酸，0. 04-0. 12%耐高溫a -淀粉酶，其余為水，該培養(yǎng)基采用質(zhì)量百分含量為30%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至5. 9±0. I。
9.權(quán)利要求I所述菌株在恩拉霉素生產(chǎn)中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述菌株在恩拉霉素生產(chǎn)中的應(yīng)用，其特征在于，在28.0±0. 5°C，200^220 rpm條件下，將DCS067菌株在發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵9_12天，制得含有恩拉霉素的發(fā)酵液；所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為6-15%玉米粉，2-6%玉米蛋白粉，0. 2-0. 8%輕質(zhì)碳酸鈣，0. 2-0. 8% 氯化鈉，0. 1-0. 5% 硫酸銨，0. 003-0. 012% 硫酸亞鐵，0. 007-0. 027% 磷酸ニ氫鉀，0. 1-0. 5% 尿素，0. 005-0. 015% 氯化鋅，0. 05-0. 25% 氫氧化鉀，0. 07-0. 015% 玉米漿，0.l-o. 5%L-乳酸，0. 04-0. 12%耐高溫a -淀粉酶，其余為水，該培養(yǎng)基采用質(zhì)量百分含量為30%的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至5. 9±0. I。
全文摘要
本發(fā)明公開了提供一種高產(chǎn)恩拉霉素的菌株，同時提供上述菌株的篩選方法，以及提供該菌株在恩拉霉素生產(chǎn)中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的恩拉霉素高產(chǎn)菌株DCS067保藏號是CGMCCNo.6220，保藏單位是中國微生物菌種保藏管理委員會(CGMCC)，保藏日期是2012年6月14日。本發(fā)明所述DCS067菌株將恩拉霉素產(chǎn)率提高了47.80%。
文檔編號C12N1/20GK102864114SQ20121039913
公開日2013年1月9日 申請日期2012年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月19日
發(fā)明者王雪峰, 閆彩潔, 劉衛(wèi)哲 申請人:河北圣雪大成制藥有限責(zé)任公司