專(zhuān)利名稱(chēng)：一株具有ace抑制活性的耐低溫乳酸菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株乳酸菌。
背景技術(shù)：
高血壓是世界性難題，影響15-20%的成年人健康。在控制人體血壓的多種因素
中，腎素-血管緊張素調(diào)節(jié)系統(tǒng)(Renia-angiotensin system, RAS)和激肽釋放酶-激
肽系統(tǒng)(Kallikrein-kininsystem, KKS)是人體內(nèi)兩種重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)。其中血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)是系統(tǒng)調(diào)節(jié)過(guò)程中起關(guān)鍵作用的酶，是使血壓升高的主要因素。抑制ACE的活性，就能有效的防治和治療高血壓的發(fā)生。
篩選具有ACE抑制活性微生物的研究以及使其生產(chǎn)具有降血壓功能多肽的食品主要集中在對(duì)乳制品的研究上。然而，篩選具有ACE抑制活性，具有耐低溫、耐鹽及耐亞硝酸鹽等特性，適合用于發(fā)酵肉制品發(fā)酵劑的菌種還未見(jiàn)報(bào)道。現(xiàn)有的植物乳桿菌通常為3. O - 8. O _長(zhǎng)，O. 91. 2 _寬；形成菌落約3寬、凸起、圓、光滑、細(xì)密、白色、偶爾淺黃或深黃色；能產(chǎn)生乳酸，使牛奶酸化，并可能使之凝固；在15°C生長(zhǎng)，通常最適溫度為30°C 35°C (R.E.，N. E.伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè))；目前也尚未有植物乳桿菌具有ACE抑制活性的報(bào)導(dǎo)。目前為止還未有植物乳桿菌ACE抑制活性測(cè)定的報(bào)導(dǎo)，也沒(méi)有將其作為肉制品發(fā)酵劑菌株開(kāi)發(fā)的相關(guān)報(bào)導(dǎo)，更沒(méi)有篩選出具有ACE抑制活性并能作為低溫發(fā)酵肉制品的植物乳桿菌菌株的報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一株具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌。本發(fā)明具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，它為植物乳桿菌Hac tobacillusplan tarum) 11,保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC),保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏日期為2012年9月18日，保藏編號(hào)為CGMCCNo.6575。本發(fā)明中具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，它為植物乳桿菌ilMctobacillusplan tarum) 11，它在MRS瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，菌落為針尖樣濕潤(rùn)圓形小菌落、乳白色、邊緣整齊；它為革蘭氏陽(yáng)性桿菌，無(wú)芽孢，大小為長(zhǎng)(1.0 _ 4. 3 _)X寬(O. 4 _ 0. 8 ,)。本發(fā)明中具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，它為植物乳桿菌{Lactobacillus
II，其在含溴甲酚綠的MRS液體培養(yǎng)基中產(chǎn)酸為陽(yáng)性、呈黃色，其葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸為乳酸，還原石蕊牛奶呈陽(yáng)性；植物乳桿菌Hactobacillus plantarum) Il具有顯著的蛋白酶活性，脂肪酶活性，不產(chǎn)粘液，對(duì)金黃色葡萄球菌及大腸桿菌抑菌效果明顯，對(duì)志賀氏菌和沙門(mén)氏菌有抑菌效果。本發(fā)明中具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，它為植物乳桿菌{Lactobacillus應(yīng))II，它的生長(zhǎng)溫度為4 40°C，最適生長(zhǎng)溫度為37°C;它在濃度為O. 5% 6%的食鹽中正常生長(zhǎng)，在濃度為2% 4%的食鹽中有最大生長(zhǎng)量；它能在含亞硝酸鹽100 300mg/kg的亞硝酸鹽培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，當(dāng)亞硝酸鹽為100mg/kg時(shí)生長(zhǎng)最好。本發(fā)明中具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，它為植物乳桿菌HactobaciIIusplan tarum) II,其 ITS 序列與 GenBank 中登錄的植物乳桿菌{Lactobacillus plan tarum)AB617650.1的基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性為99. 9%，確定植物乳桿菌Il為乳桿菌屬中植物乳桿菌{Lactobacillus plan tarum)。本發(fā)明中具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，它為植物乳桿菌ilMctobacillusplan tarum) 11,保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC ),保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏日期為2012年9月18日，保藏編號(hào)為CGMCCNo.6575。
本發(fā)明具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，它為植物乳桿菌(lac tobacillusP lantarum) II,對(duì)ACE的抑制率為66%。它能耐受6%的NaCl及100mg/kg的亞硝酸鹽并能迅速產(chǎn)酸。它的生長(zhǎng)溫度為4 40°C，最適生長(zhǎng)溫度為37°C，適用于低溫發(fā)酵。同時(shí)，它具有顯著的蛋白酶活性，脂肪酶活性，不產(chǎn)粘液，對(duì)金黃色葡萄球菌及大腸桿菌抑菌效果明顯，對(duì)志賀氏菌和沙門(mén)氏菌有抑菌效果，因此，本發(fā)明中具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，即植物乳桿菌ilactobacillus plantarum) Il可以作為低溫條件下肉制品發(fā)酵劑菌株使用。


圖1為具體實(shí)施方式
一中純菌株Il連接到PMD19-T載體中的PCR鑒定結(jié)果圖，其中1-7泳道分別為Il的7個(gè)轉(zhuǎn)化菌落PCR產(chǎn)物，M泳道為DNA Marker ；
圖2為具體實(shí)施方式
一中純菌株Il與植物乳桿菌{Lac tobaci Ilus plan tarum)AB617650.1的16S基因序列分析結(jié)果圖3為具體實(shí)施方式
一中純菌株Il的耐氯化鈉結(jié)果的柱狀圖4為具體實(shí)施方式
一中純菌株Il的耐亞硝酸鹽結(jié)果的柱狀圖5為具體實(shí)施方式
一中純菌株Il的生長(zhǎng)與溫度關(guān)系的曲線圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，它為植物乳桿菌{LactobacillusII,保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏日期為2012年9月18日，保藏編號(hào)為CGMCC No. 6575。本實(shí)施方式中具體的保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼為100101。本實(shí)施方式中具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，該菌株自大慶新百大超市購(gòu)買(mǎi)的泡菜中分離純化得到，其樣本現(xiàn)存于黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室；它按以下步驟進(jìn)行分離純化培養(yǎng)泡菜用稀釋涂布法接種于MRS瓊脂培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)24h，然后將生長(zhǎng)出的菌落用MRS瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)一步分離純化得到純菌株，命名為純菌株Il [即植物乳桿菌(Lactobacillus plantarmi) 1\~\。MRS瓊脂培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨10g、牛肉粉8g、酵母粉4g、葡萄糖20g、磷酸氫二鉀2g、檸檬酸氫二銨2g、乙酸納5g、硫酸鎂O. 2g、硫酸錳O. 04g、吐溫80 Ig、瓊脂15g、蒸餾水 IOOOmL、pH 5· 7±0· 2，118°C 滅菌 15 分鐘。MRS肉湯培養(yǎng)基(g/L):按上述配方去掉瓊脂。培養(yǎng)條件如上。的測(cè)定
純菌株Il接種到MRS肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)24h，取培養(yǎng)液離心(4000rpm，5min)后取上清液用NaOH調(diào)整pH值到8. 3，根據(jù)表1，將各試劑加入到試管中，在37°C水浴中反應(yīng) 30min，反應(yīng)結(jié)束后馬上加入ImoL/L HCl以終止反應(yīng)，然后各試管中加入乙酸乙酯1. 5mL,旋渦混合后進(jìn)行離心(4000rpm，IOmin);吸取1. OmL乙酸乙酯于另一試管中，放入真空烘箱中，100°C揮發(fā)溶劑30min，冷卻后加入去離子水3mL，旋渦混合后用紫外分光光度計(jì)在228nm測(cè)定其吸光值，按以下公式計(jì)算ACE抑制率。
權(quán)利要求
1.一株具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，其特征在于它為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) II,保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏日期為2012年9月18日，保藏編號(hào)為 CGMCC No. 6575。
全文摘要
一株具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌，它涉及一株乳酸菌。具有ACE抑制活性的耐低溫乳酸菌為植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)I1，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏日期為2012年9月18日，保藏編號(hào)為CGMCCNo.6575。本發(fā)明中菌株I1，其ACE抑制率為66%，能耐受6%的NaCl及100mg/kg的亞硝酸鹽并能迅速產(chǎn)酸；它的生長(zhǎng)溫度為4～40℃，適用于低溫發(fā)酵；它具有顯著的蛋白酶活性，脂肪酶活性，不產(chǎn)粘液，對(duì)金黃色葡萄球菌及大腸桿菌抑菌效果明顯，可以作為低溫條件下肉制品發(fā)酵劑菌株使用。
文檔編號(hào)C12R1/25GK102994420SQ201210445629
公開(kāi)日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月9日
發(fā)明者俞龍浩, 王欣 申請(qǐng)人:黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)