專利名稱：一種保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于益生菌制品制備技術領域，涉及一種益生菌培養(yǎng)基，特別涉及一種保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術：
近年來，隨著酸奶制作技術的發(fā)展，乳酸菌發(fā)酵劑的制備方法也得到了相應的提高。決定酸奶品質的一個關鍵因素是發(fā)酵劑，國內的酸奶生產(chǎn)企業(yè)大多采用傳統(tǒng)的液體發(fā)酵劑。而傳統(tǒng)的液體發(fā)酵劑存在周期長、接種量大、操作繁瑣、活菌數(shù)低(IO7-IO8CfuAiL)；菌種易污染、退化、變異等眾多弊端，因此直投式的凍干發(fā)酵劑成為酸奶發(fā)酵劑發(fā)展的主要方向。保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌是酸奶生產(chǎn)中常用的菌種。要得到高活菌數(shù)且高活 力的酸奶直投式發(fā)酵劑，首先必須篩選適合乳酸菌大量生長的增菌培養(yǎng)基。目前，大都采用MRS作為基礎培養(yǎng)基，然后配合其他的生長因子來培養(yǎng)保加利亞乳桿菌。但此培養(yǎng)基價格昂貴，成分復雜，制作繁瑣，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。因此，選擇價格低廉且活菌數(shù)高的適合保加利亞乳桿菌生長的增殖培養(yǎng)基是非常必要的。呂加平等研究了保加利亞乳桿菌的增菌培養(yǎng)基。結果表明，Ig魚肉蛋白胨、2g乳糖、Ig酵母浸膏、各0. 5g K2HPO4-KH2PO4,在37°C下培養(yǎng)24h后，菌落總數(shù)可達4. 69 X IO8Cfu/mL。萬紅兵等研究了在番茄汁基礎培養(yǎng)基中添加不同營養(yǎng)物質對保加利亞乳桿菌生長的影響，最后確定了增殖培養(yǎng)基的最佳配比以番茄汁為基礎培養(yǎng)基，添加I. 0%胰蛋白胨、0. 5%酵母膏、0. 3%碳酸鈣。專利CN200610012692. 7公布了一種保加利亞乳桿菌復合增菌培養(yǎng)基，它是以菊芋汁為主要原料并添加其他成分。

發(fā)明內容
本發(fā)明解決的問題在于提供一種保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基及其制備方法，培養(yǎng)基廉價而且能使保加利亞乳桿菌大量生長，以實現(xiàn)高效濃縮型直投式發(fā)酵劑的工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。本發(fā)明是通過以下技術方案來實現(xiàn)—種保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基，以質量份數(shù)計，包括以下組分乳糖0. 3 0. 5份，酪蛋白水解物0. 8 I份，K2HPO4O. 5 0. 8份，羥脯氨酸0. 08 0. 12份，谷氨酸0. 04 0. 05份，水100份，以及水體積0. 3 0. 4%的新生牛血清，pH值6. 5 6. 8。具體的，保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基為在每IOOml的水中包括乳糖0. 4g，新生牛血清0. 4mL,酪蛋白水解物0. 8g，質量濃度1%的羥脯氨酸溶液0. 090mL,質量濃度1%的谷氨酸溶液 0. 050mL 和 K2HPO4O. 59g, pH 值 6. 5。一種保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟I)將羥脯氨酸和谷氨酸配制成質量濃度為1%的溶液，過濾除菌；2)將新生牛血清過濾除菌；
3)將0. 3 0. 5份的乳糖、酪蛋白水解物0. 8 I份、K2HPO4O. 5 0. 8份混合溶解于100份的水中，調pH至6. 5 6. 8，滅菌；加入經(jīng)膜過濾的新生牛血清、質量濃度1%的羥脯氨酸溶液和質量濃度1%的谷氨酸溶液，其中新生牛血清為水的體積的0. 3 0. 4%，羥脯氨酸溶液為水的體積的0. 08 0. 12%，谷氨酸溶液為水的體積的0. 04 0. 05% ;混勻后得到保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基。所述步驟1)、2)的過濾除菌為用滅菌后的0. 2微米的膜過濾除菌。所述的膜是在121 °C下滅菌20min。所述的pH是用ImoL/L HCl溶液調節(jié)。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下有益的技術效果
本發(fā)明提供的保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基，是一種廉價而且能使保加利亞乳桿菌大量生長的培養(yǎng)基，所涉及的培養(yǎng)基成分簡單而且便宜，都是比較常見的碳氮源，而且容易制取，因此是一種工業(yè)生產(chǎn)乳酸菌的好方法。高效的濃縮型直投式發(fā)酵劑生產(chǎn)，首先必須獲得適合乳酸菌大量生長的增菌培養(yǎng)基。但保加利亞乳桿菌對營養(yǎng)的要求較為復雜，除基本的碳氮源外，一般還需要B族維生素、氨基酸類化合物以及其他生長因子。同時，實驗室使用的一般是MRS培養(yǎng)基，但其價格
曰蟲印貝o本發(fā)明提供的保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基，保加利亞乳桿菌經(jīng)活化后，以3%接入該增菌培養(yǎng)基中，35°C培養(yǎng)20h，活菌數(shù)高達(5. 97-7. 25) X 108cfu/mL以上，與實驗室常用的MRS培養(yǎng)基的活菌數(shù)(4. 8-5. 3) X 108cfu/mL相比得到了提高。本發(fā)明提供的保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基，其增菌的效果顯著。而且該增菌培養(yǎng)基容易分離菌體細胞，因此很適合大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式本發(fā)明提供一種保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基及其制備方法，培養(yǎng)基廉價而且能使保加利亞乳桿菌大量生長，以實現(xiàn)高效濃縮型直投式發(fā)酵劑的工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。下面結合具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。實施例I保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基組成乳糖0. 4g,新生牛血清0. 4mL,酪蛋白水解物0. 8g ;質量濃度1%的羥脯氨酸0. 09mL ;質量濃度1%的谷氨酸0. 05mL ；K2HP040 . 59g，水IOOmL, pH 值6. 5。其中，酪蛋白水解物于羅森博科技有限公司商購可得，為黃色粉末，易溶于水。其制備方法為I)羥脯氨酸和谷氨酸濃溶液的制備將羥脯氨酸和谷氨酸配制成1%的濃溶液，然后經(jīng)121°C，20min高溫滅菌的0. 2微米的膜過濾。2)新生牛血清的制備將新生牛血清經(jīng)121°C，20min高溫滅菌的0. 2微米的膜進行過濾。3)保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基的制備將乳糖0. 4g、酪蛋白水解物0. 8g、K2HPO4O. 59g，混合溶于IOOmL水中，用ImoL/LHCl溶液調pH至6. 5。然后經(jīng)118°C，15min滅菌，最后再加入經(jīng)膜過濾的新生牛血清0. 4mL、質量濃度1%的羥脯氨酸0. 09mL和質量濃度1%的谷氨酸0. 05mL。將保加利亞乳桿菌經(jīng)過液體MRS培養(yǎng)基活化后，以3%的接種量接入本實施例所得的增菌培養(yǎng)基中，35°C培養(yǎng)20h，活菌數(shù)可達6. 2X 108cfu/mL，較之對照MRS培養(yǎng)基的活菌數(shù)4. 92 X 108cfu/mL相比得到了提高。 實施例2保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基組成乳糖0. 4g,新生牛血清0. 4mL,酪蛋白水解物Ig ;質量濃度1%的羥脯氨酸0. IOmL ;質量濃度1%的谷氨酸0. 04mL ；K2HP040. 59g，水lOOmL，pH 值 6. 6。其制備方法為I)羥脯氨酸和谷氨酸濃溶液的制備將羥脯氨酸和谷氨酸配制成1%的濃溶液，然后經(jīng)121°C，20min高溫滅菌的0. 2微米的膜過濾。2)新生牛血清的制備將新生牛血清經(jīng)121°C，20min高溫滅菌的0. 2微米的膜進行過濾。3)保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基的制備將乳糖0. 4g、酪蛋白水解物lg、K2HPO4O. 59g，混合溶于水中，用ImoL/LHCl溶液調pH至6. 6，然后經(jīng)118°C，15min滅菌，最后再加入經(jīng)膜過濾的新生牛血清0. 4mL、質量濃度1%的羥脯氨酸0. IOmL和質量濃度1%的谷氨酸0. 04mL。將保加利亞乳桿菌經(jīng)過液體MRS培養(yǎng)基活化后，以3%的接種量接入本實施例所得的增菌培養(yǎng)基中，35°C培養(yǎng)20h，活菌數(shù)可達6. 38X 108cfu/mL，較之對照MRS培養(yǎng)基的活菌數(shù)4. 98 X 108cfu/mL相比得到了提高。實施例3保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基組成乳糖0. 4g,新生牛血清0. 3mL,酪蛋白水解物0. 8g ;質量濃度1%的羥脯氨酸0. 12mL ;質量濃度1%的谷氨酸0. 05mL ；K2HP040 . 59g，水IOOmL, pH 值6. 8。其制備方法為I)羥脯氨酸和谷氨酸濃溶液的制備將羥脯氨酸和谷氨酸配制成1%的濃溶液，然后經(jīng)121°C，20min高溫滅菌的0. 2微米的膜過濾。2)新生牛血清的制備將新生牛血清經(jīng)121°C，20min高溫滅菌的0. 2微米的膜進行過濾。3)保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基的制備將乳糖0. 4g、酪蛋白水解物0. 8g、K2HPO4O. 59g，混合溶于水中，用ImoL/LHCl溶液調pH至6. 8，然后經(jīng)118°C，15min滅菌，最后再加入經(jīng)膜過濾的新生牛血清0. 3mL、質量濃度1%的羥脯氨酸0. 12mL和質量濃度1%的谷氨酸0. 05mL。將保加利亞乳桿菌經(jīng)過液體MRS培養(yǎng)基活化后，以3%的接種量接入本實施例所得的增菌培養(yǎng)基中，35°C培養(yǎng)20h，活菌數(shù)可達6. 92X 108cfu/mL，較之對照MRS培養(yǎng)基的活菌數(shù)5. 13X 108cfu/mL相比得到了提高。
實施例4保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基組成乳糖0. 5g,新生牛血清0. 3mL,酪蛋白水解物Ig ;質量濃度1%的羥脯氨酸0. IlmL ;質量濃度1%的谷氨酸0. 04mL ；K2HP040. 59g，水lOOmL，pH 值 6. 7。其制備方法為I)羥脯氨酸和谷氨酸濃溶液的制備將羥脯氨酸和谷氨酸配制成1%的濃溶液，然后經(jīng)121°C，20min高溫滅菌的0. 2微 米的膜過濾。2)新生牛血清的制備將新生牛血清經(jīng)121°C，20min高溫滅菌的0. 2微米的膜進行過濾。3)保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基的制備將乳糖0. 5g、酪蛋白水解物lg、K2HPO4O. 59g，混合溶于水中，用ImoL/LHCl溶液調pH至6. 7，然后經(jīng)118°C，15min滅菌，最后再加入經(jīng)膜過濾的新生牛血清0. 3mL、質量濃度1%的羥脯氨酸0. IlmL和質量濃度1%的谷氨酸0. 04mL。將保加利亞乳桿菌經(jīng)過液體MRS培養(yǎng)基活化后，以3%的接種量接入本實施例所得的增菌培養(yǎng)基中，35°C培養(yǎng)20h，活菌數(shù)可達7. I X 108cfu/mL,較之對照MRS培養(yǎng)基的活菌數(shù)5. 24 X 108cfu/mL相比得到了提高。
權利要求
1.一種保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基，其特征在于，以質量份數(shù)計，包括以下組分乳糖0.3 0. 5份，酪蛋白水解物0. 8 I份，K2HPO4O. 5 0. 8份，羥脯氨酸0. 08 0. 12份，谷氨酸0. 04 0. 05份，水100份，以及水體積0. 3 0. 4%的新生牛血清，pH值6. 5 6. 8。
2.如權利要求I所述的保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基，其特征在于，在每IOOml的水中包括乳糖0. 4g，新生牛血清0. 4mL,酪蛋白水解物0. 8g，質量濃度1%的羥脯氨酸溶液0.090mL,質量濃度1%的谷氨酸溶液0. 050mL和K2HPO4O. 59g，pH值6. 5。
3.一種保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 1)將羥脯氨酸和谷氨酸配制成質量濃度為1%的溶液，過濾除菌； 2)將新生牛血清過濾除菌； 3)將0.3 0. 5份的乳糖、酪蛋白水解物0. 8 I份、K2HPO4O. 5 0. 8份混合溶解于100份的水中，調pH至6. 5 6. 8，滅菌；加入經(jīng)膜過濾的新生牛血清、質量濃度1%的羥脯氨酸溶液和質量濃度1%的谷氨酸溶液，其中新生牛血清為水的體積的0. 3 0. 4%，羥脯氨酸溶液為水的體積的0. 08 0. 12%，谷氨酸溶液為水的體積的0. 04 0. 05% ;混勻后得到保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基。
4.如權利要求3所述的保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述步驟1)、2)的過濾除菌為用滅菌后的0. 2微米的膜過濾除菌。
5.如權利要求4所述的保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述的膜是在121 °C下滅菌20min。
6.如權利要求3所述的保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述的pH是用ImoL/L HCl溶液調節(jié)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種保加利亞乳桿菌增菌培養(yǎng)基及其制備方法，在每100ml的水中包括乳糖0.4g，新生牛血清0.4mL，酪蛋白水解物0.8g；質量濃度1%的羥脯氨酸0.090mL；質量濃度1%的谷氨酸0.050mL和K2HPO40.59g。pH值6.5。其中，酪蛋白水解物于羅森博科技有限公司購買。本發(fā)明的培養(yǎng)基是一種廉價而且能使保加利亞乳桿菌大量生長的培養(yǎng)基，所涉及的培養(yǎng)基成分簡單而且便宜，都是比較常見的碳氮源，而且容易制取，因此是一種工業(yè)生產(chǎn)乳酸菌的好方法。
文檔編號C12R1/225GK102952772SQ20121047065
公開日2013年3月6日 申請日期2012年11月19日 優(yōu)先權日2012年11月19日
發(fā)明者陳合, 李串娜, 舒國偉, 王勇 申請人:陜西科技大學