專利名稱：一種基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ace抑制肽的羊奶的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于羊奶發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法。
背景技術(shù)：
世界衛(wèi)生組織(WHO)將高血壓定義為在未使用降壓藥物的情況下，非同日3次測(cè)量血壓，收縮壓> HOmmHg和/或舒張壓> 90mmHg。據(jù)2010年衛(wèi)生部組織的全國居民27萬人營養(yǎng)與健康狀況調(diào)查資料顯示，我國60歲及以上人群高血壓的患病率為49% ，即約每2位60歲以上的人中就有I人患高血壓。近年來,兒童高血壓患病率也有所升高,根據(jù)近10年部分省市的調(diào)查結(jié)果，兒童高血壓患病率，學(xué)齡前兒童為2 4%，學(xué)齡兒童為4 9%。高血壓可引起腦卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性腎臟病等多種并發(fā)癥，不僅致殘、致死率高，而且嚴(yán)重消耗醫(yī)療和社會(huì)資源，給家庭和國家造成沉重負(fù)擔(dān)。目前常用降壓藥物包括鈣通道阻滯劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)、血管緊張素受體阻滯劑(ARB)、利尿劑、α受體阻滯劑和β受體阻滯劑六類，以及由上述藥物組成的固定配比復(fù)方制劑。ACE抑制肽是ACEI中的一類具有降血壓功能的多肽類物質(zhì)，它對(duì)于血壓正常的動(dòng)物或人沒有降血壓作用，具有安全性高，無毒副作用的特點(diǎn)。目前，研究者已分離出多種天然來源的ACE抑制肽，其中大多是利用蛋白酶水解各種食物蛋白得到。有研究發(fā)現(xiàn)，一些酸奶也具有降血壓功能，并有學(xué)者從中分離得到了 ACE抑制肽。羊奶以其營養(yǎng)豐富、易于吸收等諸多優(yōu)點(diǎn)被譽(yù)為奶中精品。瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)是一種具有保健功效的新型酸奶生產(chǎn)菌種,其蛋白酶水解活力高，能夠水解乳蛋白產(chǎn)生多種對(duì)人體有益的生物活性肽，其產(chǎn)生的ACE抑制肽抑制率較聞。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題在于提供一種基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，所制備的羊奶既具有酸羊奶的營養(yǎng)價(jià)值和獨(dú)特風(fēng)味，還含有抑制率較高的ACE抑制肽，不僅促進(jìn)了羊奶資源的開發(fā)利用，對(duì)于高血壓的防治以及高血壓患者的營養(yǎng)保健也有積極作用。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)一種基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)將瑞士乳桿菌接種于羊奶或羊奶復(fù)原乳中，在30 40°C下恒溫厭氧發(fā)酵10 15h，得到發(fā)酵羊奶；2)按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，取步驟I)得到的發(fā)酵羊奶80 90份，與5 10份的蔗糖、
O.15 O. 5份的穩(wěn)定劑及5 30的水充分混合后冷卻至10°C以下，得到混合發(fā)酵羊奶；
3)將混合發(fā)酵羊奶在2 5°C條件下密封，后熟8 10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。所述的瑞士乳桿菌在接種之前還進(jìn)行以下活化I)將瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養(yǎng)10 14h，完成第一次活化；2)按體積分?jǐn)?shù)計(jì)，取3 7%第一次活化的菌液，接種于裝有滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養(yǎng)10 14h，完成第二次活化；3)按體積分?jǐn)?shù)計(jì)，取3 7%第二次活化的菌液，接種于裝有滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養(yǎng)10 14h，完成第三次活化；
完成第三次活化后，按體積分?jǐn)?shù)計(jì)，取3 7%第二次活化的菌液接種于羊奶或羊奶復(fù)原乳中。所述的羊奶復(fù)原乳為羊奶粉與水以10 20 :100的質(zhì)量比溶解于水中。所述的羊奶或羊奶復(fù)原乳中還添加了酪蛋白，以提高發(fā)酵羊奶的凝固性以及ACE抑制肽的抑制率；以質(zhì)量比計(jì)，酪蛋白添加量為O. 5^0. 9%。所述穩(wěn)定劑為果膠、羧甲基纖維素鈉、藻酸丙二醇酯中的一種或兩種。所述含ACE抑制肽的羊奶中瑞士乳桿菌的活菌數(shù)大于108cfu/mL。所述含ACE抑制肽的羊奶中ACE抑制肽抑制率為65 90%。所述制備的含ACE抑制肽的羊奶在制備預(yù)防高血壓或高血壓輔助治療的飲品中應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果本發(fā)明提供的基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，采用以瑞士乳桿菌單菌株發(fā)酵的方式制備羊奶飲品，方法簡(jiǎn)便易行，不僅除去了羊奶中的膻味，還保留了羊奶中豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，凝乳細(xì)膩，易于吸收；所制備的發(fā)酵羊奶中保加利亞乳桿菌活菌數(shù)大于108cfu/mL，可提供包括調(diào)節(jié)胃腸道菌群平衡、增強(qiáng)免疫力、降低膽固醇等一系列的益生作用。進(jìn)一步的，還在發(fā)酵過程中添加酪蛋白，提高了發(fā)酵羊奶中ACE抑制肽的抑制率，還增加了發(fā)酵乳中蛋白質(zhì)和氨基酸的含量；而為了保證羊奶發(fā)酵過程中產(chǎn)生的ACE抑制肽具有較高抑制率，在發(fā)酵結(jié)束后還添加了蔗糖與穩(wěn)定劑。本發(fā)明提供的基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，所制得的發(fā)酵羊奶中ACE抑制肽抑制率可達(dá)到75 90%，堅(jiān)持長期飲用，可以有效地預(yù)防高血壓的發(fā)病，同時(shí)也可用于高血壓患者的輔助治療，可應(yīng)用與制備預(yù)防高血壓或高血壓輔助治療的飲品中。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而不是限定。實(shí)施例I基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養(yǎng)12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法進(jìn)行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將IOmL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到90mL鮮羊奶中并混合均勻，過濾凈化后在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入5mL活化好的瑞士乳桿菌，在37°C恒溫厭氧發(fā)酵12h，得到發(fā)酵羊奶。3)以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，將5. 7份的蔗糖、O. 3份的果膠用10份的水溶解，在65°C巴氏殺菌20min后冷卻至40±3°C，再加入到84份的發(fā)酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至I (TC以下，再在4 C冰箱后熟8 IOh,即制成廣品。所得產(chǎn)品中瑞士乳桿菌活菌數(shù)為5. 87X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為88. 36%ο
ACE抑制肽抑制率的檢測(cè)方法為紫外分光光度法用含有O. 3mol/L NaCl 的 O. lmol/L 硼酸鹽緩沖液(ρΗ8· 3)將 HHL (Hip-His-Leu)配成5mmol/L的溶液。在IOmL試管中分別加入200 μ L的5mmol/L Hip-His-Leu溶液和80 μ L的發(fā)酵乳上清液，于37°C下保溫5min后，再加入20 μ L ACE溶液(溶解于蒸餾水中，活力為O. lU/mL)，混勻后在37°C下保溫30min進(jìn)行反應(yīng)，之后加入250 μ L lmol/L HCl終止反應(yīng)，再加入I. 5mL醋酸乙酯，經(jīng)15s振蕩混勻后，靜置5min，用移液管吸取I. OmL的醋酸乙酯層，于120°C烘干30min,再加入I. OmL蒸懼水,混勻后在228nm處測(cè)定吸光度。在上述條件下，抑制50%的ACE活性(IC50)為樣品的一個(gè)活性單位。ACE 抑制率=[(B-A) / (B-C) ] X 100%式中A——含有發(fā)酵乳乳清(或溶于蒸餾水的多肽溶液)和ACE溶液的吸光度；B—不含發(fā)酵乳乳清(或溶于蒸餾水的多肽溶液)樣品，但含有ACE溶液的吸光度；C—為含脫脂乳乳清(或蒸餾水)，但不含ACE溶液的吸光度。實(shí)施例2基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養(yǎng)12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌種，按上述操作方法進(jìn)行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將14g羊奶粉和20mL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到80mL水中并混合均勻，在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳桿菌，在40°C恒溫厭氧發(fā)酵10h，得到發(fā)酵羊奶。3)以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，將7份的蔗糖、O. 2份的羧甲基纖維素鈉用7. 8份的水溶解，在650C巴氏殺菌20min后冷卻至40 ± 3°C，再加入到85份的發(fā)酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成產(chǎn)品。所得產(chǎn)品中瑞士乳桿菌活菌數(shù)為4. 75X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為85. 73%。實(shí)施例3基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟
I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養(yǎng)12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌種，按上述操作方法進(jìn)行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將14g羊奶粉和50mL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到50mL水中并混合均勻，在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳桿菌，在35°C恒溫厭氧發(fā)酵14h，得到發(fā)酵羊奶。3)以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，將5份的蔗糖、O. 3份的藻酸丙二醇酯用6. 7份的水溶解，在650C巴氏殺菌20min后冷卻至40 ± 3°C，再加入到88份的發(fā)酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成產(chǎn)品。所得產(chǎn)品中瑞士乳桿菌活菌數(shù)為4. 68X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為83. 17%。
實(shí)施例4基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養(yǎng)12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法進(jìn)行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將20mL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到80mL鮮羊奶中并混合均勻，過濾凈化后在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳桿菌，在37°C恒溫厭氧發(fā)酵llh，得到發(fā)酵羊奶。3)以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，將7份的蔗糖、O. 2份的羧甲基纖維素鈉用10. 8份的水溶解，在650C巴氏殺菌20min后冷卻至40 ± 3°C，再加入到82份的發(fā)酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成產(chǎn)品。所得產(chǎn)品中瑞士乳桿菌活菌數(shù)為5. 66X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為85. 44%ο實(shí)施例5基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，包括以下步驟I)取O. 4g瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有IOmL滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C培養(yǎng)12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法進(jìn)行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌種。2)將20mL濃度為1%的酪蛋白溶液添加到80mL鮮羊奶中并混合均勻，過濾凈化后在90°C滅菌15min，冷卻至40±3°C后，接入7mL活化好的瑞士乳桿菌，在35°C恒溫厭氧發(fā)酵14h，得到發(fā)酵羊奶。3)以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，將5份的蔗糖、O. I份的羧甲基纖維素鈉、O. I份的果膠用7.8份的水溶解，在65°C巴氏殺菌20min后冷卻至40 ±3°C，再加入到87份的發(fā)酵羊奶中，混合均勻后迅速冷卻至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成產(chǎn)品。所得產(chǎn)品中瑞士乳桿菌活菌數(shù)為4. 42X 108cfu/mL，其中的ACE抑制肽抑制率為79. 80%ο所制備的發(fā)酵羊奶堅(jiān)持長期飲用，可以有效地預(yù)防高血壓的發(fā)病，同時(shí)也可用于高血壓患者的輔助治療，可應(yīng)用于制備預(yù)防高血壓或高血壓輔助治療的飲品中。
權(quán)利要求
1.一種基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 1)將瑞士乳桿菌接種于羊奶或羊奶復(fù)原乳中，在30 40°C下恒溫厭氧發(fā)酵10 15h，得到發(fā)酵羊奶； 2)按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，取步驟I)得到的發(fā)酵羊奶80 90份，與5 10份的蔗糖、O.15 O.5份的穩(wěn)定劑及5 30的水充分混合后冷卻至10°C以下，得到混合發(fā)酵羊奶； 3)將混合發(fā)酵羊奶在2 5°C條件下密封，后熟8 10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。
2.如權(quán)利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述的瑞士乳桿菌在接種之前還進(jìn)行以下活化 1)將瑞士乳桿菌的凍干菌粉接種于裝有滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養(yǎng)10 14h，完成第一次活化； 2)按體積分?jǐn)?shù)計(jì)，取3 7%第一次活化的菌液，接種于裝有滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養(yǎng)10 14h，完成第二次活化； 3)按體積分?jǐn)?shù)計(jì)，取3 7%第二次活化的菌液，接種于裝有滅菌羊奶復(fù)原乳的厭氧管中，充分混勻后在37°C厭氧培養(yǎng)10 14h，完成第三次活化； 完成第三次活化后，按體積分?jǐn)?shù)計(jì)，取3 7%第二次活化的菌液接種于羊奶或羊奶復(fù)原乳中。
3.如權(quán)利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述的羊奶復(fù)原乳為羊奶粉與水以10 20 :100的質(zhì)量比溶解于水中。
4.如權(quán)利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述的羊奶或羊奶復(fù)原乳中還添加了酪蛋白，以提高ACE抑制肽的抑制率；以質(zhì)量比計(jì)，酪蛋白添加量為O. I O. 5%。
5.如權(quán)利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述穩(wěn)定劑為果膠、羧甲基纖維素鈉、藻酸丙二醇酯中的一種或兩種。
6.如權(quán)利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述含ACE抑制肽的羊奶中瑞士乳桿菌的活菌數(shù)大于108cfu/mL。
7.如權(quán)利要求I所述的基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，其特征在于，所述含ACE抑制肽的羊奶中ACE抑制肽的抑制率為65 90%。
8.權(quán)利要求I所述制備的含ACE抑制肽的羊奶在制備預(yù)防高血壓或高血壓輔助治療的飲品中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種基于瑞士乳桿菌發(fā)酵的含ACE抑制肽的羊奶的制備方法，將瑞士乳桿菌接種于羊奶或羊奶復(fù)原乳中，在30～40℃下恒溫厭氧發(fā)酵10～15h，得到發(fā)酵羊奶；將發(fā)酵羊奶80～90份，與5～10份的蔗糖、0.15～0.5份的穩(wěn)定劑及5～30的水充分混合后冷卻至10℃以下，得到混合發(fā)酵羊奶；將混合發(fā)酵羊奶在2～5℃條件下密封，后熟8～10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。所制備的羊奶既具有酸羊奶的營養(yǎng)價(jià)值和獨(dú)特風(fēng)味，還含有抑制率較高的ACE抑制肽，不僅促進(jìn)了羊奶資源的開發(fā)利用，對(duì)于高血壓的防治以及高血壓患者的營養(yǎng)保健也有積極作用。
文檔編號(hào)A23C9/123GK102960444SQ20121047079
公開日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月19日
發(fā)明者陳合, 吉喆, 舒國偉 申請(qǐng)人:陜西科技大學(xué)