專利名稱：一種用于合成他汀類化合物的新型培養(yǎng)基的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種用于合成他汀類化合物的新型培養(yǎng)基，具體涉及一種用于生物合成洛伐他汀的培養(yǎng)基。
背景技術：
他汀類藥物是一種膽固醇合成抑制劑，其結(jié)構(gòu)與HMG-CoA結(jié)構(gòu)相似，能有效地抑制膽固醇生物合成過程中的關鍵酶HMG-CoA還原酶的活性，因此在降血脂藥物中占據(jù)重要地位。目前臨床上主要通過天然發(fā)酵或生物合成及微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)他汀類藥物，他汀產(chǎn)生菌及菌種選育天然他汀的生產(chǎn)主要依靠不同種、不 同基因組的絲狀真菌直接產(chǎn)生或通過生物轉(zhuǎn)化作用而得。洛伐他汀(L，astatine)為微生物發(fā)酵生產(chǎn)的第I代他汀類藥物，但是目前的生產(chǎn)工藝中其投料濃度只有2. 5g/L，收率只有52%，生產(chǎn)成本太高，因此現(xiàn)在急需要一種能提高底物的投料濃度和轉(zhuǎn)化率，降低生產(chǎn)成本的工藝。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種以洛伐他汀(Lovastatin)產(chǎn)生菌M. ruber, c-1612為菌種，生物合成他汀類化合物的新型培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基成分包含有機氮源、碳源和無機鹽。所述的有機氮源為海參蒸煮液蛋白酶解干粉、蛋白胨、酵母膏，含量為20g/L 35g/L，優(yōu)選為28 g/L。所述的多糖類碳源為海參蒸煮液多糖酶解干粉，淀粉、糊精，含量為20g/L 40g/L優(yōu)選為30g/L。所述的海參蒸煮液蛋白酶解干粉生產(chǎn)工藝為將海參蒸煮液濃縮后按質(zhì)量比10 I加入蛋白水解酶，酶解溫度60°C，pH值為6. 8，反應時間2小時。所述的海參蒸煮液多糖酶解干粉生產(chǎn)工藝為將海參蒸煮液濃縮后按質(zhì)量比10 I加入多糖水解酶，酶解溫度50°c，pH值為5. 0，反應時間10小時。本發(fā)明以海參蒸煮液酶解干粉作為氮源和碳源主體，不僅有利于海參蒸煮液的回收利用，保護環(huán)境，還使得培養(yǎng)基的組分更為合理廉價，配制更為方便，因此不僅降低了培養(yǎng)基的成本，同時還豐富了底物得營養(yǎng)結(jié)構(gòu)。采用本發(fā)明的培養(yǎng)基合成洛伐他汀時，底物投料濃度可達10g/L，轉(zhuǎn)化率最高可達89. 6%，而采用現(xiàn)有技術的培養(yǎng)基合成洛伐他汀時投料濃度只有2. 5g/L，收率最高只有52%。因此本發(fā)明經(jīng)過優(yōu)化的培養(yǎng)基可以很好的解決現(xiàn)有技術底物投料濃度低和轉(zhuǎn)化率不高的缺點，從而降低洛伐他汀的工業(yè)生產(chǎn)成本。
具體實施例方式實施例1斜面培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基(200g 土豆煮汁1000ml，葡萄糖20g，瓊脂20g)，121°C滅菌20mino種子培養(yǎng)基海參蒸煮液酶解干粉10g/L，糊精10g/L，121°C滅菌20min。發(fā)酵培養(yǎng)基海參蒸煮液酶解干粉6g/L，麥芽糊精3g/L，121°C滅菌20min。轉(zhuǎn)化過程將接種菌種的斜面置于30°C恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)4天，得到成熟的孢子，然后成熟的孢子接種于裝有50ml種子培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，在30°C、300rpm搖床上培養(yǎng)4天，得到成熟的種子，得到的種子以5%的接種量接入裝有IOOml發(fā)酵培養(yǎng)基的IOOOml搖瓶中，置于30°C、300r/min搖床中繼續(xù)培養(yǎng)I天，以每升發(fā)酵液IOg底物的量加入底物，置于30°C、300r/min搖床繼續(xù)轉(zhuǎn)化至2天時放瓶，發(fā)酵液采用超臨界CO2萃取分離，離心取上清用HPLC進行分析，采用外標法對樣品進行定量，計算轉(zhuǎn)化率為85. 7%0HPLC條件為LC-10AD型高效液相色譜儀；色譜柱XDB_C18 (250mmX4. 6mm, 5 μ m);流動相為甲醇水=70 30 ;流速1. Oml/min ;進樣量10μ I ;檢測波長240nm。實施例2
種子培養(yǎng)基海參蒸煮液酶解干粉10g/L，糊精15g/L，121°C滅菌20min。發(fā)酵培養(yǎng)基海參蒸煮液酶解干粉7g/L，麥芽糊精2g/L，121°C滅菌20min。
轉(zhuǎn)化過程將接種菌種的斜面置于30°C恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)4天，得到成熟的孢子，然后成熟的孢子接種于裝有50ml種子培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，在30°C、300rpm搖床上培養(yǎng)4天，得到成熟的種子，得到的種子以10%的接種量接入裝有IOOml發(fā)酵培養(yǎng)基的IOOOml搖瓶中，置于30°C、300r/min搖床中繼續(xù)培養(yǎng)I天，以每升發(fā)酵液IOg底物的量加入底物，置于30°C、300r/min搖床繼續(xù)轉(zhuǎn)化至2天時放瓶，發(fā)酵液采用超臨界CO2萃取分離，離心取上清用HPLC進行分析，采用外標法對樣品進行定量，計算轉(zhuǎn)化率為89.6%。其余同實施例1。實施例3
發(fā)酵培養(yǎng)基海參蒸煮液酶解干粉8g/L，麥芽糊精lg/L，121°C滅菌20min。轉(zhuǎn)化過程將接種菌種的斜面置于30°C恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)4天，得到成熟的孢子，然后成熟的孢子接種于裝有50ml種子培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，在30°C、300rpm搖床上培養(yǎng)4天，得到成熟的種子，得到的種子以15%的接種量接入裝有IOOml發(fā)酵培養(yǎng)基的IOOOml搖瓶中，置于30°C、300r/min搖床中繼續(xù)培養(yǎng)I天，以每升發(fā)酵液IOg底物的量加入底物，置于30°C、300r/min搖床繼續(xù)轉(zhuǎn)化至2天時放瓶，發(fā)酵液采用超臨界CO2萃取分離，離心取上清用HPLC進行分析，采用外標法對樣品進行定量，計算轉(zhuǎn)化率為87.8%。其余同實施例1。上述實施例不作為對本發(fā)明的限定，凡在本發(fā)明的范圍內(nèi)所作的任何修改、等同替換、改進等，均屬于本發(fā)明的保護范圍。
權利要求
1.一種用于合成他汀類化合物的新型培養(yǎng)基，其特征是以洛伐他汀產(chǎn)生菌M. ruber, c-1612為菌種，生物合成他汀類化合物，尤其是洛伐他汀的培養(yǎng)基，包含有機氮源、多糖類碳源和無機鹽。
2.權利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征是所述的有機氮源為海參蒸煮液蛋白酶解干粉、蛋白胨、酵母膏，含量為20g/L 35g/L。
3.權利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征是所述的多糖類碳源為海參蒸煮液多糖酶解干粉，淀粉、糊精，含量為20g/L 40g/L。
4.權利要求2所述的培養(yǎng)基，其特征是所述的海參蒸煮液蛋白酶解干粉生產(chǎn)工藝為將海參蒸煮液濃縮后按質(zhì)量比10 1加入蛋白水解酶，酶解溫度60°C，pH值為6. 8，反應時間2小時。
5.權利要求3所述的培養(yǎng)基，其特征是所述的海參蒸煮液多糖酶解干粉生產(chǎn)工藝為將海參蒸煮液濃縮后按質(zhì)量比10 1加入多糖水解酶，酶解溫度50°C，pH值為5. 0，反應時間10小時。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種以洛伐他汀產(chǎn)生菌M.ruber,c-1612為菌種，生物合成他汀類化合物的新型培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基成分包含有機氮源、碳源和無機鹽，其中有機氮源為海參蒸煮液酶解干粉、蛋白胨、酵母膏。本發(fā)明的新型培養(yǎng)基合成洛伐他汀時的底物投料濃度可達10g/L，轉(zhuǎn)化率最高可達89.6%，因此大大提高了洛伐他汀的工業(yè)生產(chǎn)成本。
文檔編號C12P17/06GK103014089SQ20121051362
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月5日 優(yōu)先權日2012年12月5日
發(fā)明者荊曉麗 申請人:青島艾華隆生物科技有限公司