專(zhuān)利名稱(chēng)：一種增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε-聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε-聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
:民以食為天，食品安全已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外關(guān)注的熱點(diǎn)之一。不可否認(rèn)食品中添加的各種防腐劑對(duì)食品防腐保鮮起了重要作用，促進(jìn)了食品工業(yè)的發(fā)展，可以說(shuō)現(xiàn)代食品工業(yè)離不開(kāi)防腐劑，但傳統(tǒng)使用的化學(xué)合成防腐劑對(duì)人體有一定潛在危害，如硝酸鹽及亞硝酸鹽具有致癌性，常用的苯甲酸及其鹽、山梨酸及其鹽也有一定毒性，為提高食品的安生性，使用天然、安全、綠色防腐劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)化學(xué)合成防腐劑是今后發(fā)展的必然趨勢(shì)，是解決和提高食品安全的必然選擇。ε-聚賴(lài)氨酸是鏈霉菌(Streptomyces)生物合成的胞外次級(jí)代謝產(chǎn)物,通常由25-35個(gè)L-賴(lài)氨酸殘基組成的，通過(guò)α-ε酰胺鍵連接，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、酵母菌、絲狀真菌均具有一定抑制作用，對(duì)病毒也有一定抑制作用。ε -聚賴(lài)氨酸具有對(duì)人體安全無(wú)毒、可生物降解等優(yōu)點(diǎn)，因此，ε -聚賴(lài)氨酸是替代傳統(tǒng)化學(xué)合成防腐劑的理想選擇，引起了人們的高度重視。美國(guó)FDA批準(zhǔn)了 ε-聚賴(lài)氨酸的GRAS (認(rèn)為安全)地位。目前，ε_(tái)聚賴(lài)氨酸已經(jīng)在日本、韓國(guó)、美國(guó)等國(guó)家作為食品防腐劑得到應(yīng)用。ε -聚賴(lài)氨酸作為食品防腐劑有諸多的優(yōu)勢(shì)，因此在食品工業(yè)中有極大的潛在需求。目前，微生物發(fā)酵法是生產(chǎn)ε-聚賴(lài)氨酸的惟一方法，但其發(fā)酵過(guò)程中存在一個(gè)顯著制約因素，即液體深層發(fā)酵時(shí)ΡΗ4.0或以下是ε -聚賴(lài)氨酸生物合成所必須的條件，但低pH不利于細(xì)胞生長(zhǎng)，因此，通常培養(yǎng)條件下難以獲得高細(xì)胞密度，這不利于提高發(fā)酵產(chǎn)率，針對(duì)這些狀況，研究人員提出了兩階段PH控制發(fā)酵工藝，即當(dāng)發(fā)酵過(guò)程pH下降至5.0時(shí)，將pH控制在5.0 一段時(shí)間，以利于細(xì)胞生長(zhǎng)，為階段I ;然后讓其pH自然下降，降至4.0時(shí)，控制pH在4.0以利ε-聚賴(lài)氨酸合成，為階段2。兩階段pH控制ε -聚賴(lài)氨酸發(fā)酵可參見(jiàn)附圖1，該工藝已廣泛應(yīng)用于ε-聚賴(lài)氨酸的工業(yè)發(fā)酵。但該工藝在階段I及先前生長(zhǎng)細(xì)胞由于PH過(guò)高細(xì)胞不能合成ε -聚賴(lài)氨酸，而在人為延長(zhǎng)的階段I細(xì)胞活性可能損失，這會(huì)影響細(xì)胞ε -聚賴(lài)氨酸合成能力，此外，由于合成階段pH較低，細(xì)胞密度仍然難以根本提高，基于這些不足，研發(fā)更有效的發(fā)酵工藝，尤其是提高細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞活性的發(fā)酵工藝十分必要
發(fā)明內(nèi)容
:本發(fā)明的目的是提供一種增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε -聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法。本發(fā)明的增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物 過(guò)程效率的ε -聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法，其特征在于，包括以下步驟:
ε -聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌用其發(fā)酵培養(yǎng)基對(duì)其進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)體系的pH值下降至3.6^4.1之間時(shí)，按照每小時(shí)每升發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加0.025g、.5g酵母粉或其他有機(jī)氮源至培養(yǎng)體系中直至發(fā)酵結(jié)束，同時(shí)自PH降至3.6^4.1之間開(kāi)始，用氨水控制培養(yǎng)體系的PH維持在3.6^4.1之間直至發(fā)酵結(jié)束，并補(bǔ)加滅過(guò)菌的含葡萄糖和硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)體系的葡萄糖為5 30g/L直至發(fā)酵結(jié)束。所述的補(bǔ)料培養(yǎng)基優(yōu)選每升含有800g葡萄糖和IOOg硫酸銨，余量為水。進(jìn)一步優(yōu)選，所述的當(dāng)培養(yǎng)體系的pH值下降的pH值為3.9，所述的自pH值降至是降至3.9開(kāi)始，用氨水控制培養(yǎng)體系的pH維持在3.9直至發(fā)酵結(jié)束，所述的并補(bǔ)加滅過(guò)菌的含葡萄糖和硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)體系的葡萄糖為5 30g/L直至發(fā)酵結(jié)束是自當(dāng)培養(yǎng)體系的葡萄糖低于10g/L時(shí)，自動(dòng)補(bǔ)加滅過(guò)菌的含葡萄糖和硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)體系的葡萄糖為10g/L直至發(fā)酵結(jié)束。所述的ε -聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌指的是能夠產(chǎn)生ε -聚賴(lài)氨酸的鏈霉菌，使用的發(fā)酵培養(yǎng)基是ε -聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)知識(shí)去選擇ε-聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌以及與其相配套的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述的ε-聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌優(yōu)選為不吸水鏈霉菌(Streptomyces ahygroscopicus) str_8。 所述的其他氮源優(yōu)選為豆餅粉或王米漿等。所述的氨水優(yōu)選為10% (w/w)的氨水。本發(fā)明的增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε -聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法通過(guò)補(bǔ)加酵母粉以提高細(xì)胞生長(zhǎng)和活性，使細(xì)胞持續(xù)生長(zhǎng)、顯著提高細(xì)胞密度、增強(qiáng)細(xì)胞活性，由于發(fā)酵過(guò)程細(xì)胞生長(zhǎng)及ε -聚賴(lài)氨酸生物合成利用大量葡萄糖，因此在發(fā)酵過(guò)程中補(bǔ)加葡萄糖和硫酸銨，使ε-聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌能持續(xù)的合成ε-聚賴(lài)氨酸。與現(xiàn)有技術(shù)的兩階段PH控制發(fā)酵相比，本發(fā)明的細(xì)胞較快的進(jìn)入ε-聚賴(lài)氨酸合成階段，避免了細(xì)胞進(jìn)入合成階段前細(xì)胞活性的損失，延長(zhǎng)了細(xì)胞合成ε-聚賴(lài)氨酸的時(shí)間，從而顯著提高細(xì)胞ε-聚賴(lài)氨酸合成能力，克服了兩階段PH控制發(fā)酵的不足，使得ε -聚賴(lài)氨酸產(chǎn)率顯著提高，該發(fā)酵方法具有適用廣泛，易于操作的特征。


:圖1是ε -聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵兩階段pH控制示意圖I表示pH控制階段I，pH為5.0 ; II表示pH控制階段2，pH為3.9。圖2是本發(fā)明的增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε -聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法的一階段PH控制結(jié)合酵母粉補(bǔ)加的示意圖；YE表示酵母粉；I表示pH控制階段，pH為3.9。
具體實(shí)施方式
:實(shí)施例1:1、孢子制備將新鮮的ε -聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌不吸水 鏈霉菌(Streptomyces ahygroscopicus)str-8(該菌于2011年6月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址:中國(guó)武漢武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為:CCTCC NO:M2011191,該菌種的保藏信息公開(kāi)于專(zhuān)利號(hào)為:ZL201110152802.0，發(fā)明名稱(chēng)為:不吸水鏈霉菌Str_8及利用制備ε -聚賴(lài)氨酸及其鹽的方法的專(zhuān)利中)斜面菌種多次劃線(xiàn)接種于燕麥瓊脂培養(yǎng)基(ISP3)中，30° C、倒置培養(yǎng)7天，以無(wú)菌水洗滌收集成熟的孢子，制備孢子懸浮液，作為接種物，通常情況下可獲得孢子懸浮液濃度約5X108CFU/mL。燕麥瓊脂培養(yǎng)基(ISP3)的制備:稱(chēng)取40g燕麥，經(jīng)去離子水洗滌后置于IL裝有800mL去離子水的燒杯中，加熱煮沸l(wèi)Omin，紗布過(guò)濾，棄渣，將15_20g瓊脂置入過(guò)濾液中，加熱充分溶解后定容至1L，121° C滅菌30min。2、種子培養(yǎng)將IOmL孢子懸浮液(約為5 X IO8孢子/mL)接種于裝有500mL M3G培養(yǎng)基(IOOOmL搖瓶)中，溫度30° C，轉(zhuǎn)速150r/min，培養(yǎng)20h作為種子液。M3G 培養(yǎng)基成分(g/L):葡萄糖 30 ;酵母粉 5 ; (NH4) 2S047 ；FeS04.7Η200.03 ；MgSO4.7Η200.5 ；ZnSO4.7Η200.04 ；Κ2ΗΡ040.8 ；KH2PO41.36 ；ρΗ7.2。IX IO5Pa 滅菌 30min。3、發(fā)酵罐的補(bǔ)料分批發(fā)酵工藝 取150mL種子液接種于滅菌的2.85L M3G培養(yǎng)基中(5L發(fā)酵罐)，溫度為30° C，轉(zhuǎn)速為300r/min，通氣為lvvm，當(dāng)發(fā)酵過(guò)程出現(xiàn)泡沫時(shí)，在線(xiàn)添加消泡劑自動(dòng)消泡。發(fā)酵罐接種種子液后，當(dāng)培養(yǎng)體系中的發(fā)酵培養(yǎng)基pH下降至約為3.9時(shí)，此時(shí)施以質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%氨水在線(xiàn)控制培養(yǎng)體系的pH維持在3.9的水平至發(fā)酵終點(diǎn)，即一階段pH控制；并在PH降至3.9時(shí)始持續(xù)流加滅菌的酵母粉溶液(200g/L)(按每小時(shí)每升發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加0.042g酵母粉的量添加)至發(fā)酵結(jié)束，以提高細(xì)胞生長(zhǎng)和活性。發(fā)酵過(guò)程pH控制及酵母粉補(bǔ)加參見(jiàn)附圖2。發(fā)酵過(guò)程細(xì)胞生長(zhǎng)及聚賴(lài)氨酸生物合成利用大量葡萄糖，當(dāng)培養(yǎng)體系的葡萄糖濃度下降至約為10g/L時(shí)，自動(dòng)流加滅過(guò)菌的葡萄糖與硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基(每升含800g葡萄糖和IOOg硫酸銨，余量為水)使培養(yǎng)體系的葡萄糖維持約為10g/L直至發(fā)酵結(jié)束。發(fā)酵IOd結(jié)束時(shí)ε -聚賴(lài)氨酸發(fā)酵終濃度達(dá)5.23g/L，而對(duì)照(常規(guī)2階段法)僅為3.74g/L，因此，本發(fā)明的方法顯著提高了 ε -聚賴(lài)氨酸的產(chǎn)率。實(shí)施例2:1、孢子制備和種子液培養(yǎng)同實(shí)施例1，由此得到種子液。2、發(fā)酵罐的補(bǔ)料分批發(fā)酵工藝取150mL種子液接種于滅菌的2.85L M3G培養(yǎng)基中(5L發(fā)酵罐)，溫度為30° C，轉(zhuǎn)速為300r/min，通氣為lvvm，當(dāng)發(fā)酵過(guò)程出現(xiàn)泡沫時(shí)，在線(xiàn)添加消泡劑自動(dòng)消泡。發(fā)酵罐接種種子液后，當(dāng)培養(yǎng)體系中的發(fā)酵培養(yǎng)基pH下降至約為3.6時(shí)，此時(shí)施以質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%氨水在線(xiàn)控制培養(yǎng)體系的pH維持在3.6^4.1之間的水平至發(fā)酵終點(diǎn)，即一階段PH控制；并在pH降至3.6時(shí)始持續(xù)流加滅菌的酵母粉溶液(200g/L)(按每小時(shí)每升發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加0.025g酵母粉的量添加)至發(fā)酵結(jié)束，以提高細(xì)胞生長(zhǎng)和活性。發(fā)酵過(guò)程細(xì)胞生長(zhǎng)及聚賴(lài)氨酸生物合成利用大量葡萄糖，當(dāng)培養(yǎng)體系的葡萄糖濃度下降至約為5g/L時(shí)，自動(dòng)流加滅過(guò)菌的葡萄糖與硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基(每升含800g葡萄糖和IOOg硫酸銨，余量為水)使培養(yǎng)體系的葡萄糖維持約為5g/L直至發(fā)酵結(jié)束。發(fā)酵IOd結(jié)束時(shí)ε -聚賴(lài)氨酸發(fā)酵終濃度達(dá)5.17g/L，而對(duì)照(常規(guī)2階段法)僅為3.74g/L，因此，本發(fā)明的方法顯著提高了 ε -聚賴(lài)氨酸的產(chǎn)率。實(shí)施例3:1、孢子制備和種子液培養(yǎng)同實(shí)施例1，由此得到種子液。2、發(fā)酵罐的補(bǔ)料分批發(fā)酵工藝取150mL種子液接種于滅菌的2.85L M3G培養(yǎng)基中(5L發(fā)酵罐)，溫度為30° C，轉(zhuǎn)速為300r/min，通氣為lvvm，當(dāng)發(fā)酵過(guò)程出現(xiàn)泡沫時(shí)，在線(xiàn)添加消泡劑自動(dòng)消泡。發(fā)酵罐接種種子液后，當(dāng)培養(yǎng)體系中的發(fā)酵培養(yǎng)基pH下降至約為4.1時(shí)，此時(shí)施以質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%氨水在線(xiàn)控制培養(yǎng)體系的pH維持在4.1的水平至發(fā)酵終點(diǎn)，即一階段pH控制；并在PH降至4.1時(shí)始持續(xù)流加滅菌的酵母粉溶液(200g/L)(按每小時(shí)每升發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加0.5g酵母粉的量添加)至發(fā)酵結(jié)束，以提高細(xì)胞生長(zhǎng)和活性。發(fā)酵過(guò)程細(xì)胞生長(zhǎng)及ε -聚賴(lài)氨酸生物合成利用大量葡萄糖，當(dāng)培養(yǎng)體系的葡萄糖濃度下降至約為30g/L時(shí)，自動(dòng)流加滅過(guò)菌的葡萄糖與硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基(每升含800g葡萄糖和IOOg硫酸銨，余量為水)使培養(yǎng)體系的葡萄糖維持約為30g/L直至發(fā)酵結(jié)束。發(fā)酵IOd結(jié)束時(shí)ε -聚賴(lài)氨酸發(fā)酵終濃度達(dá)7.51g/L，而對(duì)照(常規(guī)2階段法)僅為3.74g/L，因此，本發(fā)明的方法顯著提高了 ε -聚賴(lài)氨酸的產(chǎn)率。實(shí)施例4:本實(shí)施例與實(shí)施例1基本相同，只是在培養(yǎng)體系的pH降至3.9時(shí)始持續(xù)流加滅菌的豆餅粉溶液(200g/L)(按每小時(shí)每升發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加0.042g豆餅粉的量添加)至發(fā)酵結(jié)束，其他步驟相同。 發(fā)酵IOd結(jié)束時(shí)ε -聚賴(lài)氨酸發(fā)酵終濃度達(dá)5.07g/L,而對(duì)照(常規(guī)2階段法)僅為3.74g/L，因此，本發(fā)明的方法顯著提高了 ε -聚賴(lài)氨酸的產(chǎn)率。實(shí)施例5:1、孢子制備和種子液培養(yǎng)同實(shí)施例1，由此得到種子液。2、取IL (5%，ν/ν)種子液接種于滅菌的19L M3G培養(yǎng)基(30L發(fā)酵罐)，溫度為30° C，轉(zhuǎn)速為300r/min，通氣為lvvm，當(dāng)發(fā)酵過(guò)程出現(xiàn)泡沫時(shí)，在線(xiàn)添加消泡劑自動(dòng)消泡。向發(fā)酵罐接種種子液后，當(dāng)培養(yǎng)體系中的發(fā)酵培養(yǎng)基pH下降至約為3.9時(shí)，此時(shí)施以10% (w/w)氨水在線(xiàn)控制培養(yǎng)體系的pH維持在3.9的水平至發(fā)酵終點(diǎn)，并在PH3.9時(shí)始持續(xù)流加滅菌的酵母粉溶液(200g/L)(按每小時(shí)每升發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加0.025g酵母粉的量添加)至發(fā)酵結(jié)束。發(fā)酵過(guò)程細(xì)胞生長(zhǎng)及聚賴(lài)氨酸生物合成利用大量葡萄糖，當(dāng)培養(yǎng)體系中的葡萄糖下降至約為10g/L時(shí)，自動(dòng)流加滅過(guò)菌的含葡萄糖與硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基(每升含800g葡萄糖和IOOg硫酸銨，余量為水)使培養(yǎng)體系的葡萄糖維持約為10g/L至發(fā)酵結(jié)束。發(fā)酵13day結(jié)束時(shí)，發(fā)酵液中ε -聚賴(lài)氨酸發(fā)酵終濃度達(dá)28.2g/L，而對(duì)照(常規(guī)2階段法)僅為16.3g/L，因此，本發(fā)明的方法顯著提高了 ε-聚賴(lài)氨酸的產(chǎn)率。實(shí)施例6:本實(shí)施例與實(shí)施例5基本相同，只是在培養(yǎng)體系中的發(fā)酵培養(yǎng)基pH下降至約為
3.9時(shí)，持續(xù)流加滅菌酵母粉溶液(200g/L)(按每小時(shí)每升發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加0.21g酵母粉的量添加)至發(fā)酵結(jié)束，其他步驟相同。
發(fā)酵15d結(jié)束時(shí)ε -聚賴(lài)氨酸發(fā)酵終濃度達(dá)35.4g/L，而對(duì)照(常規(guī)2階段法)僅為16.3g/L，因此，本發(fā)明的方法 顯著提高了 ε-聚賴(lài)氨酸的產(chǎn)率。
權(quán)利要求
1.一種增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε-聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法，其特征在于，包括以下步驟:ε -聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌用其發(fā)酵培養(yǎng)基對(duì)其進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)體系的PH值下降至3.6^4.1之間時(shí)，按照每小時(shí)每升發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加0.025g^0.5g酵母粉或其他有機(jī)氮源至培養(yǎng)體系中直至發(fā)酵結(jié)束，同時(shí)自PH降至3.6^4.1之間開(kāi)始，用氨水控制培養(yǎng)體系的PH維持在3.6^4.1之間直至發(fā)酵結(jié)束，并補(bǔ)加滅過(guò)菌的含葡萄糖和硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)體系的葡萄糖為5 30g/L直至發(fā)酵結(jié)束。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε-聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法，其特征在于，所述的補(bǔ)料培養(yǎng)基每升含有800g葡萄糖和IOOg硫酸銨，余量為水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε-聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法，其特征在于，所述的當(dāng)培養(yǎng)體系的PH值下降的pH值為3.9，所述的自pH值降至是降至3.9開(kāi)始，用氨水控制培養(yǎng)體系的pH維持在3.9直至發(fā)酵結(jié)束，所述的并補(bǔ)加滅過(guò)菌的含葡萄糖和硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)體系的葡萄糖為5 30g/L直至發(fā)酵結(jié)束是自當(dāng)培養(yǎng)體系的葡萄糖低于10g/L時(shí)，自動(dòng)補(bǔ)加滅過(guò)菌的含葡萄糖和硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)體系的葡萄糖為10g/L直至發(fā)酵結(jié)束。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε-聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法，其特征在于，所述的ε -聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌為不吸水鏈霉菌(Streptomycesahygroscopicus)str-8。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε-聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法，其特征在于，所述的其他氮源為豆餅粉或王米漿。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε-聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法，其特征在于，所 述的氨水為質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的氨水。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)及生物過(guò)程效率的ε-聚賴(lài)氨酸補(bǔ)料分批發(fā)酵方法。它是用ε-聚賴(lài)氨酸產(chǎn)生菌用其發(fā)酵培養(yǎng)基對(duì)其進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)體系的pH值下降至3.6~4.1之間時(shí)，按照每小時(shí)每升發(fā)酵培養(yǎng)基中補(bǔ)加0.025g~0.5g酵母粉或其他有機(jī)氮源至培養(yǎng)體系中直至發(fā)酵結(jié)束，同時(shí)自pH降至3.6~4.1之間開(kāi)始，用氨水控制培養(yǎng)體系的pH維持在3.6~4.1之間直至發(fā)酵結(jié)束，并補(bǔ)加滅過(guò)菌的含葡萄糖和硫酸銨的補(bǔ)料培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)體系的葡萄糖為5~30g/L直至發(fā)酵結(jié)束。本發(fā)明的細(xì)胞較快的進(jìn)入ε-聚賴(lài)氨酸合成階段，避免了細(xì)胞進(jìn)入合成階段前細(xì)胞活性的損失，延長(zhǎng)了細(xì)胞合成ε-聚賴(lài)氨酸的時(shí)間，從而顯著提高細(xì)胞ε-聚賴(lài)氨酸合成能力。
文檔編號(hào)C12P13/02GK103074393SQ20121051827
公開(kāi)日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月5日
發(fā)明者吳清平, 劉盛榮, 莫樹(shù)平, 柏建玲, 王惠惠, 丘明泉, 張菊梅 申請(qǐng)人:廣東省微生物研究所