專利名稱：能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物技術(shù)領(lǐng)域的基因，特別涉及一種能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因，該基因在多種植物中存在，所編碼的蛋白能與稻黃單胞菌的Harpin蛋白Hpal互作，在植物中過量表達增強了植物的抗病性。
背景技術(shù)：
植物病原菌能夠侵染寄主植物，在侵染點附近引起癥狀，是克服了寄主植物的免疫系統(tǒng)，成功地從寄主植株獲得了所需的營養(yǎng)物質(zhì) 。在病原菌與寄主植物的識別過程中，雙方的多種基因和信號傳導(dǎo)機制共同參與。植物病原細菌的III型分泌系統(tǒng)是病原菌能夠侵染和建立寄生關(guān)系的關(guān)鍵致病因子，它由近30個基因形成的基因族，經(jīng)過一定的表達和調(diào)控機制組裝成一個hrppilus,將細菌合成的效應(yīng)蛋白分泌到細胞外,注射到寄主植物細胞，引發(fā)寄主植物的抗病或感病反應(yīng)。通過III型系統(tǒng)分泌并注射進入植物細胞的效應(yīng)蛋白分為兩大類一類是起到轉(zhuǎn)錄激活作用，通過特定的識別密碼，特異性地結(jié)合到寄主植物啟動子區(qū)域，激活下游基因的表達。另一類效應(yīng)蛋白所起的功能是干擾前種識別。因此，植物病原細菌在植物上引發(fā)的是感病還是抗病癥狀，取決于侵染過程中分泌蛋白所誘導(dǎo)的植物反應(yīng)是感病反應(yīng)更強還是抗病反應(yīng)更強。Harpin蛋白是植物病原細菌的蛋白激發(fā)子，一般由植物病原細菌的一個III型分泌系統(tǒng)基因編碼，超量的Harpin蛋白能夠在非寄主指示植物上誘導(dǎo)細胞快速死亡，引起過敏反應(yīng)的產(chǎn)生。目前，已經(jīng)從植物病原細菌中發(fā)現(xiàn)了至少5中Harpin蛋白，其中包括來自稻黃單胞菌的Hpal蛋白。這些Harpin蛋白雖然都可以從III型系統(tǒng)分泌到胞外，但它們的氨酸序列不盡相同，揭示非寄主指示植物對它們的識別存在差異。由Harpin蛋白誘導(dǎo)的細胞快速死亡就是植物產(chǎn)生的一種抗病反應(yīng)。從植物中篩選和克隆Harpin蛋白的互作或識別蛋白，一方面有助于解析Harpin蛋白誘導(dǎo)植物抗病反應(yīng)的作用機理，另一方面，更能有助于我們發(fā)掘和利用來源于植物源的抗性基因。通過一定的分子設(shè)計，在植物中改進Harpin互作或識別蛋白的表達水平，可以有效的誘導(dǎo)植物抗病反應(yīng)信號。該途徑最大的優(yōu)點在于避開了病原菌侵染時，細菌效應(yīng)分子在識別階段對抗病反應(yīng)的干擾或抑制，而直接從下游啟動植物的抗病信號，不易被病原生物的遺傳進化所克服，導(dǎo)致抗性喪失。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，就是為了提供一種能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因及其應(yīng)用。為了達到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案一種能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因，包括水稻HIPl基因和煙草HIPl基因，水稻HIPl基因的序列如SEQ IDNO.1所示,煙草HIPl基因的序列如SEQ ID NO. 3所示。上述水稻HIPl基因編碼754個氨基酸，氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示；所述煙草HIPl基因編碼510個氨基酸，氨基酸序列如SEQ ID NO. 4所示。
上述能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因的應(yīng)用是，所述水稻HIPl基因或煙草HIPl基因及其蛋白質(zhì)在植物中過表達后，增強了植物對病毒病和細菌病害的抗病性，可作為抗病育種基因資源，克服病原菌進化導(dǎo)致的作物抗性喪失，獲得持久抗性轉(zhuǎn)基因作物新品種。本發(fā)明涉及的是來自水稻和煙草植物的HIPl基因，能夠識別稻黃單胞菌激發(fā)子Hpal，并增強植物的抗病性。來自水稻的HIPl基因序列為SEQ ID NO. 1，序列長度為2262bp，編碼754個氨基酸，氨基酸序列為SEQ ID NO. 2 ;蛋白質(zhì)等電點為5. 91，呈堿性，分子量為81.53KD。來自煙草的HIPl基因序列為SEQ ID NO. 3，序列長度為1530bp，編碼510個氨基酸，氨基酸序列為SEQ ID NO. 4;蛋白質(zhì)等電點為5. 53，呈堿性，分子量為65. 92KD。上述HIPl基因的產(chǎn)物HIPl蛋白能夠在病原菌侵染時增加合成，增強植物的抗病反應(yīng)，加速煙草葉片侵染點附近細胞的快速衰老和死亡。本發(fā)明的HIPl基因由以下方法獲得 利用酵母雙雜交技術(shù)，以稻黃單胞菌的蛋白激發(fā)子Hpal為誘餌，從水稻cDNA文庫中篩選互作蛋白，得到了 4個cDNA片段，經(jīng)測序確認為同一個基因片段，雖然大小不同，但相互有交叉覆蓋。在GenBank數(shù)據(jù)庫中進行BLAST分析，與已經(jīng)登錄的日本晴水稻數(shù)據(jù)庫比對，與α-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶編碼基因的cDNA具有100%的一致性，用特異性引物從水稻中擴增了 HIPl基因的全長序列。根據(jù)序列的保守性，設(shè)計簡并引物從煙草中擴增出同源基因的片段，用3’和5’ RACE方法得到煙草HIPl基因的全長。將HIPl基因克隆到病毒載體2mDNAl上，利用病毒介導(dǎo)的基因沉默技術(shù)(VIGS)在非寄主植物煙草上瞬時表達，植株對Hpal蛋白的敏感性降低，產(chǎn)生過敏反應(yīng)的最低有效濃度增加了 3倍，同時，生長優(yōu)勢明顯，株高和葉片大小增加明顯。通過接種實驗，HIPl過表達植物的抗病能力最強。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果本發(fā)明獲得了煙草和水稻植物中識別稻黃單胞菌Hpal蛋白的HIPl的編碼序列，對植物的生長發(fā)育和抗病性具有重要作用，為運用分子遺傳學(xué)方法改良作物的生長和抗病性狀提供了抗性資源。所獲得的基因來源于植物本身，可以獲得穩(wěn)定的抗性遺傳，克服了病原菌致病效應(yīng)分子進化所導(dǎo)致的抗性喪失，具有廣泛的應(yīng)用前景。本發(fā)明中所涉及的水稻和煙草中的HIPl基因與水稻條斑病菌hpal基因的互作，以及在煙草上的功能分析為首次報道。水稻HIPl基因的序列已在文獻《Lee RH，LinMC and Chen SC. A novel alkaline alpha-galactosidase gene is involved in riceleafsenescence. Plant Mol Biol 55(2) :281-295 (2004)》中公開，但煙草中的序列沒有公開。序列分析表明，該基因在多種植物中都有存在。涉及玉米的序列在《AlexandrovNN，Brover VV, Freidin S, Troukhan ME, Tatarinova TV,Zhang H, Swaller TJ, Lu YP,BouckJ, Flavell RB and Feldmann KA.1nsights into corn genes derived fromlarge-scalecDNA sequencing. Plant Mol Biol 69 :179-194(2009)》中公開。涉及擬南芥的序列在《Seki M, Carninci P, Nishiyama Y, Hayashizaki Y and Shinozaki K. High-efficiencycloning of Arabidopsis full-length cDNA by biotinylated CAP trapper. PlantJ 15 =707-720. (1998)》中公開。其它植物的序列，如番茄(NM001247834.1)，蓖麻(XM002530577.1)，黃瓜(DQ157703. 2)，葡萄(EU543561.1)，大麥(AK373761.1)，番杏(AB434769.1)，豌豆(EF433424.1)，蓮花(AK339754.1)，鹽芥(AK352828.1)和毛果楊(XM002308921.1)均可以在 NCBI 數(shù)據(jù)庫中查詢到(http://www. ncb1. nlm. nih. gov/)。利用病毒載2mDNAl在煙草植物中快速驗證HIPl基因功能，是常規(guī)的實驗技術(shù)手段，該方法已經(jīng)在(《Huang, C. J.，Xie, Y. and Zhou, X. P. (2009) Eff icientvirus-1nducedgene silencing in plants using a modified geminivirus DNA lcomponent. PlantBiotechnology Journal. 7 :254-265)))中公開。


圖1顯示HIPl與水稻條斑病菌Hpal的互作；圖2顯示HIPl沉默促進煙草植株生長； 圖3顯示HIPl沉默降低煙草對Hpal的敏感性；圖4顯示HIPl過表達煙草增強了對TMV和野火疫病的抗性。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等分子克隆實驗室手冊(New York ColdSpringHarbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件,或按照制造廠商所建議的條件。UHIPl基因的克隆本實施例克隆水稻和煙草中HIPl基因的全長，通過酵母雙雜交技術(shù)，驗證與Hpal的互作。首先以水稻條斑病菌Hpal為誘餌，從接種條斑菌的水稻cDNA文庫中篩選互作因子，共得到4個克隆，經(jīng)測序確定這4個片段都來源于同一個基因HIP1。在GenBank數(shù)據(jù)庫中，HIPl基因?qū)?yīng)的是0sh69，產(chǎn)物是β-半乳糖苷酶。以水稻cDNA為模板，設(shè)計引物 rHIPl_F(SEQ ID NO. 5) :5，-aaaggtaccatgacggtgggagccggggtg-3，和 rHIPl_R(SEQID NO. 6) :5，-tctagagcctggtgatacttccttgccagaa-3’，進行 PCR 擴增，PCR 擴增條件為950C /5min+ (94°C /45sec+55°C /30sec+72°C /lmin30sec)父38循環(huán)+72。0 /IOmin0 PCR產(chǎn)物經(jīng)KpnI和SmaI酶切后，連接到pGADT_7載體中，獲得pArHIPl，與表達hpal的pGBKT_7載體構(gòu)建進行酵母雙雜交，確定全長HIPl基因與hpal的互作(參見圖1)。水稻HIPl基因同玉米、番茄和擬南芥等其它植物中的同源基因在有些區(qū)域序列保守性很高，有些區(qū)域的序列差異較大。我們在特別保守的區(qū)域設(shè)計了簡并引物 sHIPl-F(SEQ ID NO. 7) :5，-tggtggatgacncagaggat-3’ 和 sHIPl_R(SEQID NO. 8) :5’ -actccrccccagtawccgg-3’，以煙草 cDNA 為模版，進行 PCR 擴增，獲得了一個631bp大小的HIPl基因片段。PCR擴增條件為95 V /5min+(94 V /45sec+53 °C /45sec+72 °C /2min) X38 循環(huán) +72 °C /IOmin0 根據(jù) 63Ibp 序列設(shè)計引物 GSP1-R(SEQID NO. 9) :5，-ccaggcatatttctaactcgtcgt-3，和 GSP2_R(SEQ IDNO. 10) :5’ -tcccttgaagaacagccctaaa-3’，按照 TaKaRa 5’ -RACE 試劑盒的操作手冊，擴增煙草HIPI基因的5，端序列，PCR擴增條件同上。同時設(shè)計引物GSP3-F (SEQID NO. 11) :5，-aggctaactcatatcaaagagaacc-3，和 GSP4-F (SEQ ID NO. 12)5’ -aatatcaaagaccaacacaat-3’進行3-RACE實驗，PCR擴增條件同上。所得到的PCR產(chǎn)物分別連接在PMD18-T載體上，進行測序驗證，得到煙草HIPl基因的兩端序列。根據(jù)測序結(jié)果設(shè)計引物 nHIPl-F(SEQ ID NO. 13) :5，-aagattcatagcttatgcg-3，和 nHIPl_R(SEQ IDNO. 14) :5’-aactcgagctaccagtgcaacaca_3’,以煙草 cDNA 為模板進行 PCR 擴增,PCR 產(chǎn)物連接pMD18-T載體進行測序驗證，得到煙草中HIPl基因的全長總計1530bp，編碼510個氨基酸，與水稻HIPl的序列有75%的一致性。將煙草HIPl全長克隆到載體pGADT-7，通過酵母雙雜交證明全長cDNA與hpal的互作(參見圖1)。2、HIPl基因?qū)χ参锷L發(fā)育的影響本實例通過病毒介導(dǎo)的方法獲得HIPl基因沉默煙草植株。設(shè)計引物YCI_F(SEQID NO. 15) :5’-aaggatccccaatttttgattgtggaa-3’和 YCI_R(SEQ ID NO. 16) :5’_tttctagaaaccagttcaacatgtctg-3’進行PCR反應(yīng)，擴增條件為95°C /5min+ (94°C /45sec+53°C /45sec+72°C /20sec) X 32循環(huán)+72°C /IOmin0回收PCR產(chǎn)物，經(jīng)過XbaI和BamHI限制性酶切連接到2mDNAl載體上。借助農(nóng)桿菌GV3101的作用，在煙草Nicotiana Benthamiana上瞬時表達HIP I。轉(zhuǎn)化煙草經(jīng)過20-30days的溫室培養(yǎng)(25°C，光照/黑暗，16h/12h)后，與空載體對照相比，葉片寬大加厚且顏色加深，莖桿粗壯，節(jié)間距增加，根系發(fā)達(參見圖2)。轉(zhuǎn)基 因植株延遲進入開花期，生長周期增長，說明該基因?qū)χ参锏纳L發(fā)育有重要作用，對增加作物的生物產(chǎn)量也有一定的應(yīng)用前景。在水稻中的HIPl基因在影響植物生長發(fā)育上的功能已經(jīng)在(《Lee，R.H.，Hsu, J. H. , Huang, H. J. , Lo, S. F. , Chen, S. H. (2009)Alkaline alpha-galactosidasedegradesthylakoid membranes in the chloroplast during leaf senescence in rice.New Phytol 184(3) :596-606)))中公開。3、HIPl沉默煙草對Hpal蛋白的敏感性降低本實例通過抑制HIPl在煙草中的表達水平后，檢測煙草對Hpal的敏感性。設(shè)計弓丨物Hpal. F(SEQ ID NO. 17) :5' -tcgggatccatgaattctttgaacacaca-3'和HpaLR(SEQ IDNO. 18) 5/ -acgaagcttctgcatcgatccgctgtcgttc-3'，以水稻條斑病菌的基因組DNA 為模板，擴增hpal基因，構(gòu)建到原核表達載體pET30a(+)中，在大腸桿菌BL21中大量表達Hpal蛋白。經(jīng)N1-NTA柱分離純化Hpal蛋白，用PBS稀釋后，形成1. 0，O. 5，O. 4，O. 3，O. 2，O. 15，O.1和O. 05mg/mL8個濃度梯度。在HIPl沉默煙草和空載體對照煙草上注射，觀察過敏反應(yīng)的產(chǎn)生。注射后24小時，O. lmg/ml濃度的Hpal就可以在對照煙草上激發(fā)過敏反應(yīng)的產(chǎn)生，而在HIPl沉默煙草上激發(fā)過敏反應(yīng)的最低濃度要達到O. 3mg/ml，所需Hpal蛋白的量增加了 3倍(參見圖3)。HIPl沉默煙草對Harpin蛋白的反應(yīng)敏感性大幅度降低，說明煙草對Hpal蛋白的識別能力下降，從而消弱了由其激發(fā)的過敏反應(yīng)產(chǎn)生的速度。4、HIPl基因過表達煙草增強了對煙草花葉病毒(TMV)和野火疫病菌的抗性本實例通過對煙草花葉病毒和野火疫病抗性測定，說明HIPl在植物抗病性方面的功能。先在雙元載體PCAMBIA1310中的多克隆位點引入35S啟動子，再將HIPl構(gòu)建到該啟動子下游，所用的引物為nHIPOE. F(SEQ IDN0. 19) 5/ -tgcgaattcatgagcttgcatgcctgcaggtcga-31 和 nHIPOE. R(SEQ ID NO. 20) :5' -tgcgaattctacacagtgcaacacagatta-31。將HIPl克隆到雙元載體pCAMBIA1301的EcoRI多克隆位點中，轉(zhuǎn)化進入農(nóng)桿菌EHA105，以空載體PCAMBIA1301為對照，進行煙草轉(zhuǎn)基因，得到Tl代轉(zhuǎn)基因煙草。將O. 62mg/mL的TMV通過摩擦接種的方法接種煙草，每次實驗接種3株煙草，每株煙草接3張重復(fù)3葉片，一周后觀察病斑數(shù)并進行拍照(參見圖4A)。煙草野火疫病菌的接種方式也是采用摩擦接種方法(參見圖4B)。約一周后，觀察煙草花葉病毒和野火疫病的病斑情況。結(jié)果顯示，HIPl過表達后能增強對煙草花葉病毒(TMV)和野火疫病的抗病性，過表達煙草的上形成花葉病毒癥狀斑點明顯少于空載體對照。而野火疫病菌在過表達煙草上幾乎不發(fā)病，說明HIPl在煙草中的過表達增強了植物對TMV和野火疫病的抗性，在植物抗病性中起到非常重要的作用。關(guān)于RS105參見陳功友、潘小玫、王金生,水稻白葉枯病菌(Xanthomonasoryzaepv. oryzae)化學(xué)誘變hrp基因突變體及相關(guān)性狀的研究，植物病理學(xué)報，2001，31 (3)199 207 ；關(guān)于病毒介導(dǎo)的基因沉默(VIGS)的操作方法參見Huang CJ7Xie Y and ZhouXP.Efficient virus-1nduced gene silencing in plants using a modified geminivirusDNAlcomponent. Plant Biotechnol J，2009，7 :254-265 ；·
關(guān)于基因重組分子操作參見SambrookJ，Russell DW, Molelcular cloning,ALaboratory Manual(3rd ed), 2001, Spting Harbor Laboratory Press·關(guān)于RNA 的提取及 eDNA 的合成方法參見Li YR，Zou HS，Che YZiCui YPiGuo W，Zou LF, Chatterjee S，Biddle EM, Yang CH and Chen GY. A novel regulatoryrole ofHrpD6 in regulating hrp-hrc-hpa genes in Xanthomonas oryzae pv.oryzicola. MolPlant Microbe Interact，2011，24(9) :1086-1101.關(guān)于RACE的方法參見=TaKaRa 5’ -RACE和3’ -RACE試劑盒的操作手冊；關(guān)于克隆載體pMD18-T和表達載體pET30a(+)參見TAKARA載體說明書和Nerk基因表達載體說明；關(guān)于蛋白原核表達和純化參見Nerk基因大腸桿菌表達系統(tǒng)說明書。序列表〈110〉上海交通大學(xué)〈120〉能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因及其應(yīng)用<160>20<170>PatentIn version<210>1<211>2262<212>DNA<213>0ryza sativa<221>CDS〈222〉(I). . (2262)〈400〉Iatgacggtgg gagccggggt ggcggtgcag gacggcggcc tggtggcgct gggcgccacg 60gtgctgacgg aggtgcgcga caatgtgctc ctgacgccgg ccgccggcgc cggcatgacg 120agcggcacgt tcgtcggagt ccgctccgcc accgccggca gccgcagcgt cttccccgtc 180gggaagctca ggggattgcg gttcatctgc acgttccggt ttaagatgtg gtggatgacg 240cagaggatgg ggacgtcagg ccgcgacatc cccttcgaga cgcagttcct cctcgtcgag 300gccgccgacg ccgacggatc acacctcgcc ggcgacggcg ccgccgcggt gtacaccgtg 360ttcctcccga tcttggaggg accgttccga gctgtgcttc aggggaactc tgatgatgag 420ctcgagattt gcctcgagag tggtgaccca gctgtggaat cattcgaagg cacgcatctg 480
gttttcgtcg gtgccggatcggatccattc gaagtcatca caaattctgt caaggctgtt 540gagaggcact tgcagacgtttactcacagg gaaaagaaga agatgccaga catgctaaac600tggtttggtt ggtgcacatg ggatgcgttt tatactgatg ttacttcaga aggagtaatg660gaaggattac agagtctagg aaaaggtgga actggcccaa aatttgtgat aattgatgat 720ggatggcaat cagttagtatggatcctgca ggaattgcat cattagctga taactcagcc 780aactttgcaa acaggttgactcac ataaag gagaaccaca aatttcagct aaacgggagg840aaaggtcaca gggaagagaa tccggcaaat ggccttgcac acattgtcaa tgaaattaag900ggcaaacatc agctgaagta tgtttatgtg tggcacgcga tcaccggata ctggggtgga960gtaaggcctg gtgctgatgg aatggagcac tacgaatcga agatgcagta cccggtctca 1020tcaccgggag ttcagaagaa cgagccatgt gatgctctga acagcataac caccaacggc 1080cttggccttg tgaaccctga cagagtgttc agcttctaca acgagctaca cgcctacctt 1140gcatctgctg ggatcgatgg agtgaaagta gatgtgcaga acattcttga gacactgggt 1200gctggccatg gtggaagagtgcttctggca aggaagtatc accaggctct agaagcttcc 1260atcgcccgga acttccgcga caacggcatc atatgctgca tgagccacaa cacggataac 1320ttgtacagtt ctaagaggag tgctgttgtg agagcttctg atgatttctg gcctagagac 1380cctgcttccc atactataca tattgcatct gttgcatata atactgtatt tcttggagaa 1440ttcatgcaac cagattggga catgttccat agtgttcacc caatggctga ataccatgct 1500gcagcaagag cagtcggtgg ctgtgccata tatgtcagtg acaagcctgg gaaccatgac 1560ttcaatttgc tgaagaagctggttcttcct gacggatcga tcctgagagc caaactcccc 1620ggcaggccaa ccagagactg tctgttttca gaccctgcaa gggatggcaa gagtatcctg 1680aagatatgga atctgaacga gcactccggt gtgattggcg ccttcaattg ccagggtgct1740ggatggtgca gagtagggaa gaagaacctc gtccacgacg agcagccggc gacggtcacc1800ggtgtcatcc gtgcacagga cgtgcatcac ctcgcaaccg ttgctgccga tggctggaac1860ggcgacgtga tcgtctactcgcacatcgga ggggaggtga cctgcctgcc caagaacgcg1920tcgttgccgg tgacactgaa gacgcgagag tacgaggtct tcaccgtcgt accactgaag1980aagctcgaca atggcgtctccttcgccgcg gtcgggctga tcgggatgtt caactccggc2040ggggcggtga cggcggtgag gtacgtggag gacgccggcg ttgaggtcag ggtgcgtggc2100tccggcacgg tcggggcgta ctcctcggcg aagccggcga gggtggtggt ggattcggag2160gcggcggaat tctcctacga tgatggatgc ggcttggtca cgttcgagct cgccgtgccg2220gagcaagaac tctactcctg gaccatctcg atcgagtact ag2262<210>2<211>754<212>PRT<213>0ryza sativa<400>2Met Thr Val Gly Ala Gly Val Ala Val Gln Asp Gly Gly Leu Val Ala151015Leu Gly Ala Thr Val Leu Thr Glu Val Arg Asp Asn Val Leu Leu Thr202530
Pro Ala Ala Gly Ala Gly Met Thr Ser Gly Thr Phe Val Gly Val Arg354045Ser Ala Thr Ala Gly Ser Arg Ser Val Phe Pro Val Gly Lys Leu Arg505560Gly Leu Arg Phe lie Cys Thr Phe Arg Phe Lys Met Trp Trp Met Thr65707580 Gln Arg Met Gly Thr Ser Gly Arg Asp lie Pro Phe Glu Thr Gln Phe859095Leu Leu Val Glu Ala Ala Asp Ala Asp Gly Ser His Leu Ala Gly Asp100105110Gly Ala Ala Ala Val Tyr Thr Val Phe Leu Pro lie Leu Glu Gly Pro115120125Phe Arg Ala Val Leu Gln Gly Asn Ser Asp Asp Glu Leu Glu lie Cys130135140Leu Glu Ser Gly Asp Pro Ala Val Glu Ser Phe Glu Gly Thr His Leu145150155160Val Phe Val Gly Ala Gly Ser Asp Pro Phe Glu Val lie Thr Asn Ser165170175Val Lys Ala Val Glu Arg His Leu Gln Thr Phe Thr His Arg Glu Lys180185190Lys Lys Met Pro Asp Met Leu Asn Trp Phe Gly Trp Cys Thr Trp Asp195200205Ala Phe Tyr Thr Asp Val Thr Ser Glu Gly Val Met Glu Gly Leu Gln210215220Ser Leu Gly Lys Gly Gly Thr Gly Pro Lys Phe Val lie lie Asp Asp225230235240Gly Trp Gln Ser Val Ser Met Asp Pro Ala Gly lie Ala Ser Leu Ala245250255Asp Asn Ser Ala Asn Phe Ala Asn Arg Leu Thr His lie Lys Glu Asn260265270His Lys Phe Gln Leu Asn Gly Arg Lys Gly His Arg Glu Glu Asn Pro275280285Ala Asn Gly Leu Ala His He Val Asn Glu He Lys Gly Lys His Gln290295300Leu Lys Tyr Val Tyr Val Trp His Ala lie Thr Gly Tyr Trp Gly Gly305310315320Val Arg Pro Gly Ala Asp Gly Met Glu His Tyr Glu Ser Lys Met Gln325330335Tyr Pro Val Ser Ser Pro Gly Val Gln Lys Asn Glu Pro Cys Asp Ala
權(quán)利要求
1.一種能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因，包括水稻HIPl基因和煙草HIPl基因，水稻HIPl基因的序列如SEQ ID NO.1所示，煙草HIPl基因的序列如SEQIDNO. 3所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因，其特征是，所述水稻HIPl基因編碼754個氨基酸，氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示；所述煙草HIPl基因編碼510個氨基酸，氨基酸序列如SEQ ID NO. 4所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因的應(yīng)用，其特征是，所述水稻HIPl基因或煙草HIPl基因及其蛋白質(zhì)在植物中過表達后，增強了植物對病毒病和細菌病害的抗病性，可作為抗病育種基因資源，克服病原菌進化導(dǎo)致的作物抗性喪失，獲得持久抗性轉(zhuǎn)基因作物新品種。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種能識別稻黃單胞菌蛋白激發(fā)子的植物基因，包括水稻HIP1基因和煙草HIP1基因，水稻HIP1基因的序列如SEQ ID NO.1所示，煙草HIP1基因的序列如SEQ ID NO.3所示，其中的水稻HIP1基因編碼754個氨基酸，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；煙草HIP1基因編碼510個氨基酸，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。上述水稻HIP1基因或煙草HIP1基因及其蛋白質(zhì)在植物中過表達后，增強了植物對病毒病和細菌病害的抗病性，可作為抗病育種基因資源，克服病原菌進化導(dǎo)致的作物抗性喪失，獲得持久抗性轉(zhuǎn)基因作物新品種。
文檔編號C12N15/84GK103014039SQ20121052923
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月10日
發(fā)明者鄒華松, 鄒麗芳, 陳功友, 崔一平 申請人:上海交通大學(xué)