光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法,包括平板培養(yǎng)基培養(yǎng),試管培養(yǎng),三角瓶培養(yǎng),二級種子的制備,成品的制備等步驟。本發(fā)明中培養(yǎng)基pH值不隨著培養(yǎng)時間的延長而升高,始終保持在5.5-7.5之間,不會抑制光合細(xì)菌的生長;采用低濃度的有機(jī)培養(yǎng)基諸如蛋白胨、酵母膏及氮磷鉀鹽保證了培養(yǎng)出的光合細(xì)菌顏色純正,亮麗,不會變淡、變綠、變黑等;采用低濃度的氮源和碳源保證了低成本,更能適于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn);本發(fā)明培養(yǎng)的光合細(xì)菌生長速度快,菌液濃度高;工藝簡單并易于控制,不易染雜菌,菌株濃度高,加工成本低,生產(chǎn)環(huán)境友好。
【專利說明】光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】,具體涉及光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法。
[0003]【背景技術(shù)】
[0004]光合細(xì)菌(Photosyntheti bacteria, PSB)是利用光能和二氧化碳維持自養(yǎng)生活的有色細(xì)菌。是地球上出現(xiàn)最早、自然界中普遍存在、具有原始光能合成體系的原核生物,厭氧條件下進(jìn)行不放氧光合作用,沒有形成芽孢能力,革蘭氏陰性菌,是一類以光作為能源、能在厭氧光照或好氧黑暗條件下利用自然界中的有機(jī)物、硫化物、氨等作為供氫體兼碳源進(jìn)行光合作用的微生物。
[0005]光合細(xì)菌液態(tài)微生態(tài)的制劑方法通常為采用敞開粗放式的培養(yǎng)方式,這種培養(yǎng)方式會受到自然界中天氣溫度光照等的干擾,且易摻加進(jìn)其他的細(xì)菌,在有些特殊條件下會影響到光合細(xì)菌的主導(dǎo)地位,從而影響光合細(xì)菌產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性。
[0006]
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]為了克服現(xiàn)有【技術(shù)領(lǐng)域】存在的上述缺陷,本發(fā)明的目的在于,提供一種光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法,解決現(xiàn)有技術(shù)采用敞開粗放式方法培養(yǎng)光合細(xì)菌液態(tài)微生態(tài)制劑,易受天氣溫度光照的干擾,易摻雜其他細(xì)菌等,影響光合細(xì)菌產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性的問題。
[0008]本發(fā)明提供的光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法,包括以下步驟:
(1)平板培養(yǎng)基培養(yǎng),光合細(xì)菌保存菌種劃線接種至平板培養(yǎng)基,121°c滅菌30分鐘,32°C 培養(yǎng) 24h ;
(2)試管接種,取發(fā)育健壯、菌落典型的菌株接種10ml,12rC滅菌,32°C培養(yǎng)24h;
(3)三角瓶接種100ml,121°C滅菌,32°C培養(yǎng)24h;
(4)三角瓶接種1000ml,121°C滅菌,32°C培養(yǎng)24h;
(5)二級種子的制備,將光合細(xì)菌于30°C,通氣量為0.24m3/h條件下培養(yǎng)24h,得二級菌種9L,檢測菌種的性狀、pH值及活菌量;
(6)成品的制備,先向500L的液體發(fā)酵灌內(nèi)加入100L飲用水,將稱量好的蛋白胨90g,酵母膏90g,乙 酸鈉180g,碳酸氫鈉180g,氯化銨180g,氯化鎂180g,磷酸氫二鉀180g,葡萄糖3.6kg投入到發(fā)酵灌,攪拌10分鐘至全部溶解,然后停止攪拌,加飲用水至180L,定完液位后,開啟攪拌,然后打開蒸汽閥升溫至100°C,排冷空氣,排掉冷空氣后繼續(xù)升溫至121°C保持30分鐘,滅菌結(jié)束,冷卻,備用,當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至30°C,將光合細(xì)菌二級種子9L通過壓差接種的方式,接種到500L發(fā)酵罐中,30°C,通氣量為9.6m3/h條件下發(fā)酵48h,得三級菌種。
[0009]所述步驟(1)或(2)或(3)或(4)所用培養(yǎng)基均是由0.5g蛋白胨,0.5g酵母膏,1.0g乙酸鈉,1.0g碳酸氫鈉,1.0g氯化銨,0.5g氯化鎂,1.0g磷酸氫二鉀,15g瓊脂,1000ml蒸餾水配置而成。
[0010]本發(fā)明提供的光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法,其有益效果在于,本發(fā)明中培養(yǎng)基pH值不隨著培養(yǎng)時間的延長而升高,始終保持在5.5-7.5之間,不會抑制光合細(xì)菌的生長;采用低濃度的有機(jī)培養(yǎng)基諸如蛋白胨、酵母膏及氮磷鉀鹽保證了培養(yǎng)出的光合細(xì)菌顏色純正,亮麗,不會變淡、變綠、變黑等;采用低濃度的氮源和碳源保證了低成本,更能適于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn);本發(fā)明培養(yǎng)的光合細(xì)菌生長速度快,菌液濃度高;工藝簡單并易于控制,不易染雜菌,菌株濃度高,加工成本低,生產(chǎn)環(huán)境友好。
[0011]
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合一個實(shí)施例,對本發(fā)明提供的光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0013]實(shí)施例
[0014]本實(shí)施例的光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法,包括以下方法:
(1)平板培養(yǎng)基培養(yǎng),光合細(xì)菌保存菌種劃線接種至平板培養(yǎng)基,121°c滅菌30分鐘,32°C 培養(yǎng) 24h ;
(2)試管接種,取發(fā)育健 壯、菌落典型的菌株接種10ml,12rC滅菌,32°C培養(yǎng)24h;
(3)三角瓶接種100ml,121°C滅菌,32°C培養(yǎng)24h;
(4)三角瓶接種1000ml,121°C滅菌,32°C培養(yǎng)24h;
(5)二級種子的制備,將光合細(xì)菌于30°C,通氣量為0.24m3/h條件下培養(yǎng)24h,得二級菌種9L,檢測菌種的性狀、pH值及活菌量;
(6)成品的制備,先向500L的液體發(fā)酵灌內(nèi)加入100L飲用水,將稱量好的蛋白胨90g,酵母膏90g,乙酸鈉180g,碳酸氫鈉180g,氯化銨180g,氯化鎂180g,磷酸氫二鉀180g,葡萄糖3.6kg投入到發(fā)酵灌,攪拌10分鐘至全部溶解,然后停止攪拌,加飲用水至180L,定完液位后,開啟攪拌,然后打開蒸汽閥升溫至100°C,排冷空氣,排掉冷空氣后繼續(xù)升溫至121°C保持30分鐘,滅菌結(jié)束,冷卻 ,備用,當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至30°C,將光合細(xì)菌二級種子9L通過壓差接種的方式,接種到500L發(fā)酵罐中,300C,通氣量為9.6m3/h條件下發(fā)酵48h,得三級菌種約200L,總含菌量達(dá)到1.3X 109cfu/mL。
【權(quán)利要求】
1.一種光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法,其特征在于:包括以下步驟: 一、平板培養(yǎng)基培養(yǎng),光合細(xì)菌保存菌種劃線接種至平板培養(yǎng)基,121°c滅菌30分鐘,,32°C 培養(yǎng) 24h ; 二、試管接種,取發(fā)育健壯、菌落典型的菌株接種10ml,12rC滅菌,32°C培養(yǎng)24h; 三、三角瓶接種100ml,121°C滅菌,32°C培養(yǎng)24h; 四、三角瓶接種1000ml,121°C滅菌,32°C培養(yǎng)24h; 五、二級種子的制備,將光合細(xì)菌于30°C,通氣量為0.24m3/h條件下培養(yǎng)24h,得二級菌種9L,檢測菌種的性狀、pH值及活菌量; 六、成品的制備,先向500L的液體發(fā)酵灌內(nèi)加入100L飲用水,將稱量好的蛋白胨90g,酵母膏90g,乙酸鈉180g,碳酸氫鈉180g,氯化銨180g,氯化鎂180g,磷酸氫二鉀180g,葡萄糖3.6kg投入到發(fā)酵灌,攪拌10分鐘至全部溶解,然后停止攪拌,加飲用水至180L,定完液位后,開啟攪拌,然后打開蒸汽閥升溫至100°C,排冷空氣,排掉冷空氣后繼續(xù)升溫至121°C保持30分鐘,滅菌結(jié)束,冷卻,備用,當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至30°C,將光合細(xì)菌二級種子9L通過壓差接種的方式,接種到500L發(fā)酵罐中,30°C,通氣量為9.6m3/h條件下發(fā)酵48h,得三級菌種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法,其特征在于:所述步驟一或二或三或四所用培養(yǎng)基均是由0.5g蛋白胨,0.5g酵母膏,1.0g乙酸鈉,1.0g碳酸氫鈉,,1.0g氯化銨,0.5g氯化 鎂,1.0g磷酸氫二鉀,15g瓊脂,1000ml蒸餾水配置而成。
【文檔編號】C12N1/20GK103881934SQ201210553898
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月19日
【發(fā)明者】張述智, 夏偉, 朱紹輝, 張 浩, 王曉麗, 徐權(quán)汗, 李之詳, 許團(tuán)輝 申請人:青島中仁藥業(yè)有限公司