一種生產(chǎn)乙醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明首先提供了一種生物質(zhì)發(fā)酵制備乙醇的方法，包括：（1）預處理：原料破碎、原料輸送、酸液混合、蒸煮、減壓的步驟，其中以噴淋形式將原料與酸或酸酐接觸；（2）酶解；（3）發(fā)酵：采用種子培養(yǎng)基將C5/C6共發(fā)酵微生物培養(yǎng)12-24h，接種擴大培養(yǎng)，將擴大培養(yǎng)后的微生物移至酶解液中發(fā)酵24-72h；（4）分離發(fā)酵液獲得乙醇。
【專利說明】—種生產(chǎn)乙醇的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從發(fā)酵生物質(zhì)生產(chǎn)乙醇的方法，特別涉及一種發(fā)酵木質(zhì)纖維素生物質(zhì)生產(chǎn)乙醇的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著化石能源的日益枯竭，溫室效應的逐步顯現(xiàn)，清潔能源已成為全球的研究熱點，以木質(zhì)纖維素為原料發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇受到了廣泛關(guān)注。
[0003]木質(zhì)纖維素生物質(zhì)包含有半纖維素和纖維素形式的糖聚合物，為了生產(chǎn)化學品，糖聚合物必須先分解成糖單體，分解聚合物的常用方法是利用酶水解，然而為了提高生物質(zhì)對酶的可用性，木質(zhì)纖維素生物質(zhì)通常需要預處理。同時，木質(zhì)纖維素類生物質(zhì)水解產(chǎn)物中除葡萄糖外，還含有大量以木糖為主的五碳糖，因此發(fā)酵戊糖生產(chǎn)乙醇是提高乙醇總收率、降低生產(chǎn)成本的重要措施之一?？梢?，生物質(zhì)發(fā)酵生產(chǎn)乙醇尚待突破和優(yōu)化的三個個技術(shù)難題是原料預處理工藝、低成本纖維素酶的生產(chǎn)技術(shù)、戊糖發(fā)酵生產(chǎn)乙醇菌種及共發(fā)酵發(fā)酵工藝。
[0004]CN101736646A公開了纖維素原料在蒸汽爆破之前先用稀酸或稀堿水解之后汽爆處理得到纖維素漿柏的方法。
[0005]CN1896254A公開了混合菌群降解發(fā)酵木質(zhì)纖維素類物質(zhì)生產(chǎn)酒精的方法，包括將木質(zhì)纖維素類物質(zhì)粉碎后用H2SO4浸泡，然后采用蒸汽爆破的方式。
[0006]CN101220379A公開了將甜高粱莖桿汁渣分離，經(jīng)過稀H2SO4浸泡后然后對甜高粱渣進行稀酸爆破預處理，酶解發(fā)酵得到乙醇。
[0007]W02011/028554A1公開了由纖維素生物質(zhì)制備乙醇時生產(chǎn)各種副產(chǎn)物的方法，將凈化生物質(zhì)原料進行酸浸潰和改進的蒸汽處理或“蒸汽爆破”處理。
[0008]專利CN1966694A公開了一種利用重組釀酒酵母NAN127發(fā)酵葡萄糖和木糖生產(chǎn)酒精的方法，包括種子培養(yǎng)、擴大培養(yǎng)和種子發(fā)酵的步驟，其中種子培養(yǎng)和擴大培養(yǎng)采用YERD培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)為葡萄糖、木糖、蛋白胨的混合物。
[0009]專利CNlOl 165166A中報道了利用熱帶假絲酵母Candida Tropicalis及其馴化菌株對木質(zhì)纖維素水解產(chǎn)物進行發(fā)酵，能夠代謝葡萄糖產(chǎn)乙醇并轉(zhuǎn)化木糖成木糖醇，培養(yǎng)基選擇酵母浸膏、麥芽提取物、硫酸銨、硫酸鎂、磷酸氫二鉀、胰蛋白胨。
[0010]專利W0200851348A、W0200958927A、W0200958938A 中公開了使用經(jīng)過改造的Zymomonas mobilis生產(chǎn)乙醇的方法,種子培養(yǎng)物在SM培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)，并且最終培養(yǎng)物包含一定PH條件下的葡萄糖和木糖的混合配制物。
[0011]專利W09742307A中報道了用于將木糖發(fā)酵為乙醇的穩(wěn)定的重組酵母，其中采用YEro培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)后的重組酵母投入葡萄糖和木糖的混合物中。
[0012]上述專利所公開的生產(chǎn)方法均無法實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，并且經(jīng)過長時間酸浸泡的原料在蒸汽爆破的高壓高溫下對蒸汽爆破設(shè)備的進料裝置產(chǎn)生巨大的酸腐蝕作用，需要隨時更換，生產(chǎn)成本較高，并且處理后的纖維素原料產(chǎn)生了大量抑制物，對后續(xù)步驟影響較大，整個流程蒸汽用量大，處理壓力高，容易造成安全隱患；而且上述工藝中發(fā)酵微生物發(fā)酵原料均使用實驗配制物，在其披露的擴大培養(yǎng)以及發(fā)酵條件下菌體生長慢，發(fā)酵時間長，轉(zhuǎn)化率低，無法實現(xiàn)大規(guī)模的乙醇發(fā)酵生產(chǎn)，不能滿足利用現(xiàn)有菌株從木質(zhì)纖維素產(chǎn)生乙醇的工業(yè)化生產(chǎn)。
[0013]因此，本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，公開了一種能夠在酸性條件下連續(xù)對生物質(zhì)進行處理，發(fā)酵處理后產(chǎn)物中五碳糖和六碳糖物質(zhì)從而獲得乙醇的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014]本發(fā)明目的是提供了一種生物質(zhì)發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法，解決了處理后的物料纖維結(jié)構(gòu)打開程度不高，半纖維素回收率較低的缺陷，同時克服了 C5/C6共發(fā)酵微生物菌體生長慢，發(fā)酵時間長，乙醇轉(zhuǎn)化率低的缺陷，提高乙醇的產(chǎn)率，有利于生物質(zhì)乙醇的工業(yè)化生產(chǎn)。
[0015]本發(fā)明首先提供了一種生物質(zhì)發(fā)酵制備乙醇的方法，包括:(1)預處理:原料破碎、原料輸送、酸液混合、蒸煮、減壓的步驟，其中以噴淋形式將原料與酸或酸酐接觸；(2)酶解；(3)發(fā)酵:采用種子培養(yǎng)基將C5/C6共發(fā)酵微生物培養(yǎng)12-24h，接種擴大培養(yǎng)，將擴大培養(yǎng)后的微生物移至酶解液中發(fā)酵24-72h ； (4)分離發(fā)酵液獲得乙醇。
[0016]另一方面，本發(fā)明還提供了一種生物質(zhì)發(fā)酵制備乙醇的方法，包括:(1)預處理:原料破碎、原料輸送、酸液混合、蒸煮、減壓的步驟，其中以噴淋形式將原料與酸或酸酐接觸，所述的酸液混合步驟在原料輸送步驟之后，將與酸以噴淋形式接觸后的原料進一步混合均勻，混合后的原料繼續(xù)蒸煮；(2)酶解，將預處理后的產(chǎn)物酶解；(3)發(fā)酵:采用種子培養(yǎng)基將C5/C6共發(fā)酵微生物培養(yǎng)12-24h，接種擴大培養(yǎng)，將擴大培養(yǎng)后的微生物移至酶解液中發(fā)酵24-72h，分離發(fā)酵液獲得乙醇。
[0017]本發(fā)明中所指的“生物質(zhì)”為農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)過程中除糧食、果實以外的秸桿、樹木等木質(zhì)纖維素、農(nóng)產(chǎn)品加工業(yè)下腳料、農(nóng)林廢棄物及畜牧業(yè)生產(chǎn)過程中的禽畜糞便和廢棄物等物質(zhì)，包括玉米秸桿、玉米芯、硬木、軟木、堅果殼、草、紙、大麥桿、小麥桿、樹葉、棉籽絮、報紙、柳枝、燕麥殼等。從結(jié)構(gòu)上看，主要由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素組成的材料。在優(yōu)選實施方案中，生物質(zhì)材料含木素纖維素材料包含至少30wt.%，優(yōu)選至少50wt.%，更優(yōu)選至少70wt.%，甚至更優(yōu)選至少90wt.%的木質(zhì)纖維素。應理解的是，生物質(zhì)還可以包含其它組分，如蛋白質(zhì)材料、淀粉、糖，如可發(fā)酵的糖和/或不可發(fā)酵的糖。
[0018](1)預處理
[0019]本發(fā)明所述的原料破碎的步驟為將生物質(zhì)原料(纖維素)破碎成適宜的顆粒長度，可以理解的是，不同的生物質(zhì)適宜的破碎程度是不同的，但優(yōu)選的破碎為平均長度為15cm以下的顆粒，更優(yōu)選為IOcm以下的顆粒，特別優(yōu)選為IO-1OOmm的顆粒。上述破碎方式可以通過粉碎機、研磨機、錘磨機或本領(lǐng)域中已知的其它合適的粉碎裝置進行處理。
[0020]另一方面，本發(fā)明所述的原料在破碎后還可以存在除雜的步驟。由于原料絕大部分都是
[0021]經(jīng)過多次倒運，過程中可能會混入砂土、鐵器等雜物，如不對物料進行前期處理，可能造成后面處理設(shè)備的磨損甚至損壞。處理方法包括采用水洗、篩分、風選等方式?？衫e的方式，包括:對物料破碎后，輸送過程經(jīng)過篩板進行除砂土 ；經(jīng)過手動永磁除鐵器進行除鐵處理；在輸送過程中進行水洗的步驟；或者將上述步驟組合使用。
[0022]本發(fā)明所述的原料的輸送可通過主動和/或被動輸送裝置來進行。所述的被動輸送裝置包括利用重力的方式來進行，將破碎后的原料經(jīng)過傾斜成一定角度來提供輸送。更為有利的輸送方式是通過主動輸送裝置來進行，例如通過傳送帶和/或傳送螺桿來實現(xiàn)。傳送螺桿可由變速發(fā)動機提供動力，并且傳送螺桿通過沿其軸線的旋轉(zhuǎn)運動而提供原料向出口的輸送，在此過程中同時完成了對物料脫水和壓縮，并由于產(chǎn)生了密封的環(huán)境，有利于壓力的封閉和增加。在優(yōu)選的實施例中，原料輸送的設(shè)備采用螺旋喂料器或螺桿擠出機完成，在輸送過程中對原料脫水至干物的10-60wt.%，以重量百分比計，優(yōu)選20-50wt.%，更為優(yōu)選為25-45wt.%。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選的實施例中，原料的輸送通過傳送帶床送到螺旋喂料器或螺桿擠出機，在經(jīng)過任選的酸液混合、蒸煮、減壓的步驟。
[0023]進一步，本發(fā)明所公開的生物質(zhì)的處理方法，還包括了以噴淋形式將原料與酸或酸酐接
[0024]觸。所述的酸可以為無機酸或有機酸，無機酸包括硫酸、鹽酸、磷酸、硝酸、有機酸包括醋酸。酸酐可以為乙酸酐、丁酸酐、丁二酸酐、乙二酸酐等，優(yōu)選為硫酸或鹽酸。本發(fā)明中與原料接觸的酸或酸酐的濃度可以為0.1%-15wt.%，優(yōu)選為0.5-10wt.%，更優(yōu)選為
0.5-5wt.%，在本發(fā)明的一個實施方式中使用的是0.1-1Owt.%的稀硫酸溶液。噴淋的方式可以采用噴淋機或噴淋頭，噴淋頭可以使用一個或兩個以上。本發(fā)明噴淋的酸與原料的比例是 1: 10-100，優(yōu)選 1:10-50，最優(yōu)選 1:10-30。
[0025]在本發(fā)明的一個【具體實施方式】中所述的酸噴淋步驟是在原料輸送步驟完成，破碎后的生物原料在輸送的過程中可以噴淋酸或酸酐，所述的噴淋發(fā)生在傳送帶和/或傳送螺桿輸送原料的過程中。在一個實施方式中，所述的酸噴淋的過程在螺旋喂料器或螺桿擠出機的前端，優(yōu)選是在原料進入螺旋喂料器或螺桿擠出機之前進行。在更有選的實施例中，所述的酸噴淋的過程在螺旋喂料器或螺桿擠出機的末端，優(yōu)選是在原料經(jīng)螺旋喂料器或螺桿擠出機處理后進行。通常認為，由于螺旋喂料器或螺桿擠出機需要對原料進行擠壓，當在前端進行噴酸時，由于酸沒有與原料混合均勻，擠壓過程不容易精準控制，最終與原料接觸的酸液無法控制，并且擠壓過程是在高壓高溫下進行，產(chǎn)生巨大的酸腐蝕作用，因而所述的酸噴淋的過程在螺旋喂料器或螺桿擠出機的末端。另一方面，本發(fā)明所述的酸噴淋步驟還可以在蒸煮步驟完成，通過輸送步驟進入蒸煮器的原料可以通過噴淋酸液，同樣的可以避免擠壓過程是在高壓高溫下進行，產(chǎn)生巨大的酸腐蝕作用。
[0026]當酸液與原料接觸后，為了使酸能夠和原料混合均勻，可以任選的在原料輸送和蒸煮
[0027]之間添加入酸混合步驟，所述的混合步驟可以通過裝有螺旋推進葉片的筒體或絞龍來實現(xiàn)，并且混合的裝置應該與蒸煮器連通保持一致的壓力。所述的混合時間可以為l-30min，優(yōu)選為 2_20min，更優(yōu)選為 2-lOmin。
[0028]本發(fā)明所述的蒸煮步驟可以通過蒸煮器實現(xiàn)，所述的蒸煮器為攪拌釜反應器或非攪拌釜反應器(例如是立式或者臥式反應器)，優(yōu)選采用具有推進葉片的蒸煮器來完成，所述的蒸煮器可以是一個或多個。蒸煮過程的壓力是可以是恒定的或非恒定的，所述的壓力為0.5-2MPaG，優(yōu)選為0.5_lMPa，更優(yōu)選為0.5-0.8MPa，特別是采用本發(fā)明公開的生物質(zhì)的處理方法，保證了處理壓力為0.5-0.8MPa，低于常見的高溫高壓處理方式所采用的1.2-1.6MPa，操作上安全性更高。當增加酸浸潰的原料在用于蒸汽處理的容器中的停留時間時，可以觀察到纖維素和/或半纖維素降解為諸如羥甲基糠醛之類的降解產(chǎn)物。因而，通常選擇在反應器內(nèi)的停留時間以在不導致產(chǎn)物繼續(xù)降解的情況下提高纖維素的生物利用度和/或溶解半纖維素。一般來說，蒸煮的時間可以為l_30min，優(yōu)選為2_20min，更優(yōu)選為2-10min。蒸煮過程內(nèi)對于溫度的要求使促進整個區(qū)域當中的溫度相對均勻和原料溫度的相對均勻。因此，通常通過將蒸汽分布到整個原料當中使原料在接觸區(qū)內(nèi)達到目標溫度，使得相當一部分原料的平均溫度不會與目標溫度有任何顯著程度的差異。例如，在各種優(yōu)選的實施方案中，生物質(zhì)原料區(qū)域的平均溫度與目標溫度相差不大于5°C。
[0029]本發(fā)明所述的減壓的目的是通過瞬間泄壓過程實現(xiàn)纖維素、半纖維素與木質(zhì)素的組分分離和各自結(jié)構(gòu)變化，該過程可以通過噴放閥來實現(xiàn)，通過壓力恢復到常壓連續(xù)或間歇泄壓排放的方式排出。所述減壓間隔時間可以為l-20s，優(yōu)選2-lOs。
[0030]在一個具體實施方面，本發(fā)明所述的步驟(1)預處理中包括:原料破碎、通過螺旋
[0031]喂料器輸送原料，將原料與酸性溶液或酸酐混合，通入蒸汽蒸煮，然后通過減壓排放的方式排除，其中以噴淋的方式噴入0.5%-10wt%的酸性溶液或酸酣。在一個實施例中，其中所述的噴淋酸性溶液或酸酣步驟在進入螺旋喂料器前進行，更優(yōu)選的實施方式是其中所述的噴淋步驟在原料經(jīng)螺旋喂料器或螺桿擠出機處理后進行。原料通過螺旋喂料器，對原料脫水至干物的10-60wt.%，優(yōu)選20-50wt.%，更為優(yōu)選為25-45wt.%，以重量百分比計。所述的蒸汽為低壓蒸汽，優(yōu)選為0.5-lMPaG，更優(yōu)選為0.5-0.8MPaG。
[0032](2)酶解
[0033]本發(fā)明所述的酶解步驟中使用的酶包括:纖維素酶、半纖維素酶，淀粉酶、蛋白酶、葡糖淀粉酶、脂肪酶等，其中纖維素酶包括但不限于纖維二糖水解酶(纖維二糖水解酶I和纖維二糖水解酶II)以及內(nèi)切葡聚糖和β-葡糖苷酶。
[0034](3)發(fā)酵
[0035]本發(fā)明所述的發(fā)酵方法包括采用種子培養(yǎng)基將C5/C6共發(fā)酵微生物培養(yǎng)12_24h，例如培養(yǎng)至菌種數(shù)為(0.1-0.5) X109/ml，接種擴大培養(yǎng)至(0.1-1) X109/ml，將擴大培養(yǎng)后的微生物移至酶解液中發(fā)酵24-72h，分離發(fā)酵液獲得乙醇。
[0036]本發(fā)明所述發(fā)酵步驟酶解液中還加入蛋白質(zhì)、游離氨基酸、維生素、微量元素中的一種或幾種。其中，蛋白質(zhì)在發(fā)酵液中的含量為3-4g/L ;所述游離氨基酸包括丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、亮氨酸和/或纈氨酸中的一種或幾種；所述的微量元素包括銅、鈣、鐵、鋅、鉛、銀、鉻、菸酸、吡哆酸、硫胺和/或泛酸鈣中的一種或幾種；所述的維生素包括B族維生素，例如生物素、葉酸。在本發(fā)明的一個實施方案中，發(fā)酵過程中加入黃豆餅粉、玉米餅粉、玉米漿(其中干物質(zhì)含量為40-60wt.%)、魚粉和/或酵母膏，提供蛋白質(zhì)、游離氨基酸、維生素和/或微量元素，其含量為5-10g/L，優(yōu)選為6-8g/L。優(yōu)選的，發(fā)酵過程中還加入有無機鹽和/或抑制劑。所述的無機鹽選自磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸氫二銨中的一種或幾種，優(yōu)選為磷酸二氫鉀和/或磷酸氫二銨，無機鹽在發(fā)酵液中的含量為0.5-4g/L，優(yōu)選1-2.5g/L，在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中發(fā)酵液中含有0.5g/L磷酸二氫鉀和2g/L磷酸氫二銨。當發(fā)酵培養(yǎng)過程沒有進入雜菌時，在發(fā)酵液中不需要添加抑菌劑，所述的抑制劑是用來抑制培養(yǎng)基中的雜菌，選自青霉素、氨芐青霉素、鏈霉素、氯霉素、土霉素、四環(huán)素中的一種或幾種，優(yōu)選青霉素或/鏈霉素，發(fā)酵液中抑制劑的工作濃度為10-50單位/mL，優(yōu)選為15-25單位/mL，更優(yōu)選為20單位/mL。
[0037]本發(fā)明所述的發(fā)酵步驟中，首先將C5/C6共發(fā)酵微生物發(fā)酵進行種子培養(yǎng)，優(yōu)選采用YEH)培養(yǎng)基培養(yǎng)發(fā)酵微生物，該步驟中優(yōu)選培養(yǎng)時間為12_20h，特別特優(yōu)的培養(yǎng)時間為12-16小時培養(yǎng)至(0.1-0.5) X 109/ml，優(yōu)選培養(yǎng)至(0.2-0.3) X109/ml。本發(fā)明中所指的YEH)培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基成分為酵母粉10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L，經(jīng)分裝滅菌制備得到。
[0038]本發(fā)明中所述發(fā)酵步驟中擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基即擴培液是微生物獲得生存的營養(yǎng)來源，對微生物生長繁殖、酶的活性與產(chǎn)量都有直接的影響。所述的擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基可以為玉米糖化醪、糖蜜、葡萄糖、甜高粱莖桿汁或木質(zhì)纖維素原料酶解液中的一種或幾種，并且培養(yǎng)基中葡萄糖的含量以重量百分比計在2-10%，優(yōu)選含量為4-6%。優(yōu)選的，擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基含有4%葡萄糖(重量百分比)的培養(yǎng)基或以葡萄糖含量為4% (重量百分比)的玉米糖化醪。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方式中，所述的培養(yǎng)基可以為木質(zhì)纖維素原料酶解液，其中按重量百分比含有葡萄糖1-25%、木糖1_10%，優(yōu)選的葡萄糖含量為5-20%，更優(yōu)選為6-12%，木糖含量優(yōu)選為3-8%，更優(yōu)選為3-6%，作為培養(yǎng)基時，其稀釋濃度為10-75% (重量百分比)，優(yōu)選的培養(yǎng)基為20-30%稀釋后的木質(zhì)纖維素原料酶解液。所述培養(yǎng)基中還發(fā)酵液中還含有蛋白胨、黃豆餅粉、玉米餅粉、玉米漿(其中干物質(zhì)含量為40-60wt.%)、魚粉和/或酵母膏中的一種或幾種，其含量為5-10g/L，優(yōu)選為6-8g/L，其作用的一方面用于提供微生物生長所需要的氮源、包括丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、 胱氨酸、 亮氨酸和/或纈氨酸的游離氨基酸、包括銅、鈣、鐵、鋅、鉛、銀、鉻、菸酸、吡哆酸、硫胺和/或泛酸鈣中的微量元素以及包括B族維生素在內(nèi)的維生素。培養(yǎng)基中任選的還可以含有尿素、無機鹽和/或抑制劑，所述的尿素的含量為2-5g/L，優(yōu)選為3-4g/L，所述的無機鹽選自磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸氫二銨中的一種或幾種，優(yōu)選為磷酸二氫鉀和/或磷酸氫二銨，無機鹽在發(fā)酵液中的含量為0.5-4g/L，優(yōu)選l-3g/L，在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中發(fā)酵液中含有1.5g/L磷酸二氫鉀和1.5g/L磷酸氫二銨。
[0039]發(fā)酵步驟擴大培養(yǎng)中種子罐的級數(shù)對發(fā)酵同樣產(chǎn)生影響，級數(shù)少可減少種子罐污染雜菌的機會，減少消毒、值班工作量以及減少因種子罐生長異常而造成發(fā)酵的波動。本發(fā)明所述的擴大培養(yǎng)可以采用二級擴培、三級擴培或四級擴培。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式中，采用三級擴大培養(yǎng)方式，搖瓶種子培養(yǎng)后的發(fā)酵微生物接至50L擴培發(fā)酵罐，12-24h擴培至(0.1-0.5) X109/ml，之后移至500L擴培罐中擴培12_24h，擴培至(0.1-0.5)父1071111，移至5立方擴培罐中，12-2411擴培至(0.1-0.5) X 109/ml ;在本發(fā)明的另一個實施方式中，采用四級擴培的方式，搖瓶種子培養(yǎng)后的發(fā)酵微生物接種至50L擴培罐，12-24h擴培至(0.1-0.5) X109/ml，之后移至500L擴培罐中擴培12_24h，擴培至(0.1-0.5) X109/ml，移至 5 立方擴培罐，12-24h 擴培至(0.1-0.5) X109/ml，移至 30 立方擴培罐，12-24h擴培至(0.1-0.5) X 109/ml。接種到擴大培養(yǎng)的微生物接種量可以為種子培養(yǎng)的5-20%，優(yōu)選為5-10%。
[0040]微生物擴大培養(yǎng)和發(fā)酵條件中控制通氣條件時，應考慮到既能滿足菌種生長與合成酶的不同要求，又要節(jié)省電耗，以提高經(jīng)濟效益。通氣可以供給大量的氧，而攪拌則能使通氣的效果更好，并且攪拌有利于熱交換，使培養(yǎng)液的溫度較一致，有利于營養(yǎng)物質(zhì)和代謝物的分散。此外，選用擋板可使攪拌效果更好。在培養(yǎng)階段的各個時期的通氣量，可以根據(jù)菌種的特性、罐的結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)基的性質(zhì)通過試驗確定。在本發(fā)明的一個實施方式中擴培通氣量應該控制在0.1-0.5vvm,每小時10_20min,優(yōu)選的通氣量控制在0.1vvm,每小時20min,擴培攪拌轉(zhuǎn)速可以控制在50 - 100r/min,特別優(yōu)選的攪拌速度為70r/min，發(fā)酵2_4h攪拌一次，每次5-20min,特別優(yōu)選4h攪拌一次,每次lOmin。
[0041]同時，本發(fā)明所述的微生物發(fā)酵步驟中溫度可以選擇微生物生長的適宜溫度，例如在25-38 °C范圍內(nèi)，在此溫度范圍內(nèi)，微生物生長、繁殖最快。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，所述的發(fā)酵過程溫度控制在28-35°C范圍內(nèi)，優(yōu)選在28-32°C。如果所培養(yǎng)的微生物能承受稍高一些的溫度進行生長、繁殖，可減少污染雜菌的機會，減少夏季培養(yǎng)所需降溫的輔助設(shè)備，對工業(yè)生產(chǎn)有很大的好處，例如在低于45°C條件下。處于緩慢期的細菌對于溫度的影響十分敏感，將其置于最適生長溫度附近，可以縮短其生長的緩慢期；將其置于較低的溫度，則會延長其緩慢期；而且孢子萌發(fā)的時間在一定溫度范圍內(nèi)也隨溫度的上升而縮短。處于對數(shù)生長期的細菌，如果在略低于最適溫度的條件下培養(yǎng)，即使在發(fā)酵過程中升溫，其升溫的破壞作用也顯得較弱。
[0042]培養(yǎng)基的氫離子濃度對微生物的生命活動有顯著影響。各種微生物都有自己生長與合成酶的最適PH值。同一菌種合成酶的類型與酶系組成可隨pH值的改變而產(chǎn)生不同程度的變化。本發(fā)明所述的微生物擴大培養(yǎng)和發(fā)酵條件中，PH值應該保持在pH5.0-7.0的范圍內(nèi)，在一個優(yōu)選的實施方式中，pH值應該保持在pH4-6.5的范圍內(nèi)。本發(fā)明所述調(diào)節(jié)pH值的方法有三種，使用酸堿溶液、緩沖液以及各種生理緩沖劑(如生理酸性與生理堿性的鹽類)，優(yōu)選使用堿溶液進行調(diào)節(jié)，包括氨水、氫氧化鈉、碳酸鈉和碳酸氫鈉。
[0043]本發(fā)明中所指C5/C6共發(fā)酵微生物指自然界分離得到的微生物以及經(jīng)過遺傳工程改造后的C5/C6共發(fā)酵微生物，包括細菌、真菌和酵母釀酒。酵母包括釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae、嗜鞋管囊酵母 Pachysolen tannophilus、樹干畢赤酵母 Pichia stipitis、休哈塔假絲酵母 Candida shehatae、酒香酵母 Brettanomycesnaardenensis、纖細假絲酵母Candida tenuis、熱帶假絲酵母Candida tropicalis和賽溝畢赤酵母Pichia segobiensis ;真菌包括多動擬桿菌Bacteroides polypragmatus、菊歐文氏桿菌Erwinia chrysanthem、植物克雷伯桿菌Klebsiella planticola、嗜熱厭氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus、球狀螺旋體 Spirochaeta coccoides sp.、植物發(fā)酵梭菌 Clostridium phytofermentas sp.;真菌包括尖抱鍵刀菌 Fusarium oxysporum、粗糖脈抱菌 Neurospora crassa 和燕麥鍵刀菌 Fusarium avenaceum。
[0044] 經(jīng)過遺傳工程改造的微生物包括重組釀酒酵母S.cerevisiae、重組運動發(fā)酵單胞菌Zymomonas mobilis,以及重組大腸桿菌Escherichia coli。重組釀酒酵母S.cerevisiae是通過真菌的木糖轉(zhuǎn)運酶在釀酒酵母中進行表達，選擇木糖異構(gòu)酶(XI)途徑或木糖還原-木糖醇氧化途徑(XR-XDH)進行木酮糖轉(zhuǎn)化，并將磷酸戊糖下游代謝路徑進行修飾以強化木糖代謝轉(zhuǎn)化乙醇的能力，可利用的釀酒酵母菌記載在專利W09742307A、W09513362A、US20110027847、CN1966694A、CN101205525A 所公開的菌株；對運動發(fā)酵單胞菌 Zymomonasmobilis改造可將E.coli的xyIA(木糖異構(gòu)酶基因)、xylB(木酮糖激酶基因)、talB(轉(zhuǎn)酮醇酶基因)、tktA(轉(zhuǎn)醛醇酶基因)導入到Z.mobilis中，例如專利US5843760、US5514583、W0200851348A、W0200958927A、W0200944868A 或 W0200958938A ;將含有 PET 操縱子(攜帶運動發(fā)酵單胞菌丙酮酸脫氫酶和乙醇脫氫酶基因)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.coli菌株可以使重組E.coli的已糖和戊糖代謝形成的中心代謝物一丙酮酸轉(zhuǎn)向乙醇生產(chǎn)，例如專利CN101875912A中所報道的菌株。在本發(fā)明的優(yōu)選實施例中，優(yōu)選的C5/C6共發(fā)酵微生物選自釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae、運動發(fā)酵單胞菌 Zymomonas mobilis 和 / 或大腸桿菌 E.coli,特別優(yōu)選為釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae、運動發(fā)酵單胞菌Zymomonas mobilis。
[0045](4)分離發(fā)酵液獲得乙醇
[0046]在本申請的一個實施方式中，從發(fā)酵液中分離乙醇可以采用本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法，例如采用蒸餾，可采用本領(lǐng)域中所描述的常規(guī)蒸餾設(shè)備，例如具有雙流塔板和橫流塔板的蒸餾塔。然而，因為發(fā)酵含酒精產(chǎn)物的高懸浮固體含量，一般來說，雙流篩塔板或橫流閥塔板是優(yōu)選的。在各種優(yōu)選的實施方案中，包括橫流閥塔板的塔是優(yōu)選的，因為通過橫流閥塔板往往提供更聞的極限負荷比和更聞的效率。
[0047]本發(fā)明所述的從生物質(zhì)發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法解決了預處理后的物料纖維結(jié)構(gòu)打開程度不高，半纖維素回收率較低的缺陷，同時減少了高溫處理后的物料產(chǎn)生的較多抑制物，能夠使木糖的利用率和總糖的轉(zhuǎn)化率達到70%以上，發(fā)酵后發(fā)酵液中含有乙醇的濃度在50g/l左右，有利于實現(xiàn)大規(guī)模的纖維素乙醇發(fā)酵生產(chǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0048]圖1描述了在原料輸送步驟噴淋酸的生物質(zhì)的預處理方法；
[0049]圖2描述了含有酸混合步驟生物質(zhì)的預處理方法；
[0050]圖3描述了利用生物質(zhì)制備獲得生物乙醇的方法。
【具體實施方式】
[0051]實施例1生物質(zhì)的預處理方法I
[0052]步驟(1)將纖維素原料破碎為粒度為IO-1OOmm的顆粒，將原料投入螺旋喂料器，對其進行擠壓脫水至干物20%-50%，形成致密的料塞，在保證纖維素原料不斷進入處理容器的同時還能抵御容器內(nèi)的蒸汽外泄；
[0053]步驟(2)在步驟I中形成的料塞從螺旋喂料器處理后，向纖維素原料中混入其質(zhì)量0.5%的稀釋硫酸溶液，進入酸混合容器混合后得到酸性纖維素原料；
[0054]步驟(3)步驟2中的酸性纖維素原料在蒸煮處理容器中，與0.6MPaG的低壓蒸汽接觸進行處理，處理時間在5±0.2min，然后通過連續(xù)泄壓排放的方式排出容器，此過程可以打開纖維素原料的結(jié)構(gòu)，使半纖維素部分降解，部分纖維素裸露在表面。
[0055]實施例2生物質(zhì)的預處理方法2
[0056]步驟(1)將纖維素原料破碎為粒度為IO-1OOmm的顆粒，進行水或酸的混合濕潤后，將原料進入螺旋喂料器，對其進行擠壓脫水至干物20%-50%，形成致密的料塞，在保證纖維素原料不斷進入處理容器的同時還能抵御容器內(nèi)的蒸汽外泄；
[0057]步驟(2)在步驟1中形成的料塞從螺旋喂料器處理后，向纖維素原料中噴淋混入其質(zhì)量5%的稀釋硫酸溶液，進入酸混合容器混合后得到酸性纖維素原料；
[0058]步驟(3)步驟2中的酸性纖維素原料在蒸煮處理容器中，與IMPa的低壓蒸汽接觸進行處理，處理時間在2±0.2min，然后通過連續(xù)泄壓排放的方式排出容器，此過程可以打開纖維素原料的結(jié)構(gòu)，使半纖維素部分降解，部分纖維素裸露在表面，這樣得到的就是纖維素原料預處理物料，其通過此方法處理后能便于后序的降解處理。
[0059]實施例3生物質(zhì)的預處理方法3
[0060]步驟(1)將纖維素原料破碎為粒度為IO-1OOmm的顆粒，向纖維素原料中噴淋混入其質(zhì)量2%的稀釋硫酸溶液，將原料進入螺旋喂料器，對其進行擠壓脫水至干物20%-50%，形成致密的料塞；
[0061]步驟(2)進入酸混合容器混合后得到酸性纖維素原料；
[0062]步驟(3)步驟2中的酸性纖維素原料在蒸煮處理容器中，與0.5-0.SMPaG的低壓蒸汽接觸進行處理，處理時間在10±0.2min，然后通過間隔時間2_20s的間歇泄壓排放的方式排出容器。
[0063]實施例4生物質(zhì)的預處理方法(對照)
[0064]步驟(1)將纖維素原料破碎為粒度為IO-1OOmm的顆粒，將纖維素原料中浸泡在濃度2%的稀H2S04溶液中，攪拌40min，進行間歇式蒸汽爆破，所述間歇式蒸汽爆破的條件為在195°C下以1.6兆帕的壓力維持5min，然后泄壓，生成產(chǎn)物。
[0065]實施例5生物質(zhì)預處理后的實驗結(jié)果
[0066]
【權(quán)利要求】
1.一種發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，包括:(1)預處理:原料破碎、原料輸送、酸液混合、蒸煮、減壓的步驟，其中以噴淋形式將原料與酸或酸酐接觸；(2)酶解:將預處理后的產(chǎn)物酶解；(3)發(fā)酵:采用種子培養(yǎng)基將C5/C6共發(fā)酵微生物培養(yǎng)12-24h/ml，接種擴大培養(yǎng)，將擴大培養(yǎng)后的微生物移至酶解液中發(fā)酵24-72h ； (4)分離發(fā)酵液獲得乙醇。
2.權(quán)利要求1所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于原料輸送和蒸煮步驟之間存在酸混合步驟。
3.權(quán)利要求1-2任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的原料破碎步驟中將生物質(zhì)破碎為長度為15cm以下的顆粒。
4.權(quán)利要求1-3任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的原料破碎步驟中將生物質(zhì)破碎為IO-1OOmm的顆粒。
5.權(quán)利要求1-4任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于原料輸送步驟采用螺旋喂料器或螺桿擠出機。
6.權(quán)利要求1-5任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的原料輸送過程中對原料脫水至干物的10-60wt%，以重量百分比計。
7.權(quán)利要求1-6任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的原料輸送過程中對原料脫水至干物的20-50wt%，以重量百分比計。
8.權(quán)利要求1-7任 意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的原料輸送過程中對原料脫水至干物的25-45wt%，以重量百分比計。
9.權(quán)利要求1-8任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的酸或酸酐為硫酸、鹽酸或乙酸酐的一種或兩種以上。
10.權(quán)利要求1-9任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的酸或酸酐的濃度為0.1%-15wt%。
11.權(quán)利要求1-10任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的酸或酸酐的濃度為0.5-10%wt%。
12.權(quán)利要求1-11任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的酸或酸酐的濃度為0.5-5wt%。
13.權(quán)利要求1-12任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的蒸煮步驟中通入0.5-2MpaG的水蒸汽。
14.權(quán)利要求1-13任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的蒸煮步驟中通入0.5-lMpaG的水蒸汽。
15.權(quán)利要求1-14任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的蒸煮步驟中通入0.6-0.8MpaG的水蒸汽。
16.權(quán)利要求1-15任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的蒸煮步驟中蒸煮的時間為l_30min。
17.權(quán)利要求1-16任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的蒸煮步驟中蒸煮的時間為2-20min。
18.權(quán)利要求1-17任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的蒸煮步驟中蒸煮的時間為2-10min。
19.權(quán)利要求1-18任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的減壓步驟采用連續(xù)或間歇泄壓排放的方式排出。
20.權(quán)利要求19所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述間歇泄壓排放間隔時間為l-20s。
21.權(quán)利要求1-20任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于噴淋的酸或酸酐與生物質(zhì)原料的比例是1:10-100。
22.權(quán)利要求1-21任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于酸或酸酐噴淋步驟是在原料輸送步驟完成。
23.權(quán)利要求1-22任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于發(fā)酵步驟酶解液中還加入黃豆餅粉、玉米餅粉、玉米漿、魚粉或酵母膏一種或幾種，含量為5-10g/L。
24.權(quán)利要求23任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于發(fā)酵步驟酶解液中還加入玉米漿。
25.權(quán)利要求1-24任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于發(fā)酵步驟酶解液中還加入無機鹽，所述的無機鹽選自磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸氫二銨中的一種或幾種，無機鹽在發(fā)酵液中的含量為0.5-4g/L。
26.權(quán)利要求25所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的無機鹽為磷酸二氫鉀和磷酸氫二銨。
27.權(quán)利要求1-26任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于步驟(4)發(fā)酵中擴大培養(yǎng)采用二級擴大 培養(yǎng)、三級擴大培養(yǎng)或四級擴大培養(yǎng)。
28.權(quán)利要求27所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于采用三級擴大培養(yǎng):種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后，接種5-20%的微生物至50L擴培罐，12-24h擴培至(0.1-0.5)X 109/ml，之后移至500L擴培罐中擴培12-24h，擴培至(0.1-0.5) X109/ml，移至5立方擴培罐中，12-24h 擴培至(0.1-0.5) XlOVmlo
29.權(quán)利要求28所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于采用四級擴培，種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后，接種5-20%的微生物至50L擴培罐，12-24h擴培至(0.1-0.5) X 109/ml，之后移至500L擴培罐中擴培12-24h，擴培至(0.1-0.5) X 109/ml，移至5立方擴培罐，12_24h擴培至(0.1-0.5) X 109/ml，移至 30 立方擴培罐，12-24h 擴培至(0.1-0.5) X109/ml。
30.權(quán)利要求1-29任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于步驟(4)發(fā)酵中擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基含有玉米糖化醪、糖蜜、葡萄糖、甜高粱莖桿汁或木質(zhì)纖維素原料酶解液中的一種或幾種，并且培養(yǎng)基中葡萄糖的含量以重量百分比計含量2-10%。
31.權(quán)利要求30所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基中葡萄糖的含量以重量百分比計含量為4-6%。
32.權(quán)利要求30所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基為按重量百分比含有葡萄糖1-25%和木糖1-10%的木質(zhì)纖維素原料酶解液。
33.權(quán)利要求30-32任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的步驟(4)發(fā)酵中擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基中還含有黃豆餅粉、玉米餅粉、玉米漿、魚粉、蛋白胨和/或酵母膏中的一種或幾種，其含量為5-10g/L。
34.權(quán)利要求30-33任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的步驟(4)發(fā)酵中擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基中還含有尿素和/或無機鹽，所述的尿素的含量為2-5g/L，所述的無機鹽在發(fā)酵液中的含量為0.5-4g/L。
35.權(quán)利要求34所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的無機鹽選自磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸氫二銨中的一種或幾種。
36.權(quán)利要求35所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在所述的無機鹽為1.5g/L磷酸二氫鉀和1.5g/L磷酸氫二銨。
37.權(quán)利要求1-36任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的步驟(4)發(fā)酵中擴大培養(yǎng)pH值為pH4-6.5。
38.權(quán)利要求1-37任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在所述的于所述的C5/C6共發(fā)酵微生物為細菌、真菌和酵母釀酒中的一種或幾種。
39.權(quán)利要求38所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在所述的于所述的C5/C6共發(fā)酵微生物選自釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae、嗜鞋管囊酵母Pachysolentannophilus、樹干畢赤酵母 Pichia stipitis、休哈塔假絲酵母 Candida shehatae、酒香酵母Brettanomyces naardenensis、纖細假絲酵母Candida tenuis、熱帶假絲酵母Candida tropical is 和賽溝畢赤酵母 Pichia segobiensis、多動擬桿菌 Bacteroidespolypragmatus、菊歐文氏桿菌 Erwinia chrysanthem、植物克雷伯桿菌 KlebsiellaPlanticola、嗜熱厭氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanoIicus、球狀螺旋體 Spirochaetacoccoides sp.、植物發(fā)酵梭菌 Clostridium phytofermentas sp.、尖抱鍵刀菌 Fusariumoxysporum、粗糖脈抱菌Neurospora crassa和燕麥鍵刀菌Fusarium avenaceum、運動發(fā)酵單胞菌Zymomonas mobilis和大腸桿菌Escherichia coli中的一種或幾種。
40.權(quán)利要求39所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在所述的于所述的C5/C6共發(fā)酵微生物選自釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae和運動發(fā)酵單胞菌Zymomonasmobilis。
41.權(quán)利要求1-40任意項所述的發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，其特征在于所述的生物質(zhì)為玉米秸桿、玉米芯、硬木、軟木、堅果殼、草、紙、大麥桿、小麥桿、樹葉、棉籽絮、報紙、柳枝、燕麥殼中的一種或兩種以上組合。
42.一種發(fā)酵生物質(zhì)制備乙醇的方法，包括:(1)預處理:原料破碎、通過螺旋喂料器輸送原料，噴淋入濃度為0.5%-10wt%的酸性溶液或酸酣，將原料與酸性溶液或酸酐混合，通入蒸汽蒸煮，然后通過減壓排放的方式排除；(2)酶解:將預處理后的產(chǎn)物酶解；(3)發(fā)酵:采用種子培養(yǎng)基將C5/C6共發(fā)酵微生物培養(yǎng)12-24h，接種擴大培養(yǎng)，將擴大培養(yǎng)后的微生物移至酶解液中發(fā)酵24-72h ； (4)分離發(fā)酵液獲得乙醇。
43.權(quán)利要求42所述的生物質(zhì)發(fā)酵制備乙醇的方法，其特征在于其中所述的噴淋酸性溶液或酸酣步驟在進入螺旋喂料器前進行。
44.權(quán)利要求42-43任意項所述的生物質(zhì)發(fā)酵制備乙醇的方法，其特征在于其中所述的噴淋酸性溶液或酸酣步驟在原料經(jīng)螺旋喂料器或螺桿擠出機處理后進行。
45.權(quán)利要求42-44任意項所述的生物質(zhì)發(fā)酵制備乙醇的方法，其特征在于原料通過螺旋喂料器，對原料脫 水至干物的10-60wt%，以重量百分比計。
【文檔編號】C12R1/22GK103898167SQ201210572857
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2012年12月25日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月25日
【發(fā)明者】林海龍, 武國慶, 李凡, 林鑫, 沈乃東, 許克家, 鄧立康, 張丹, 劉文信, 劉勁松, 李春玲, 袁敬偉, 岳國君 申請人:中糧營養(yǎng)健康研究院有限公司, 中糧生化能源（肇東）有限公司, 中糧集團有限公司