專利名稱：一株海洋真菌薩氏曲霉及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株具有抗腫瘤活性的海洋真菌-薩氏曲霉(Aspergillus
sydowii) MNP12010103，及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
癌癥一直都是人類難以攻克的一個(gè)難題，尋找生理活性強(qiáng)的物質(zhì)成為人類攻克疾病的主要工作之一。海洋微生物代謝產(chǎn)物研究是近年來(lái)國(guó)際上新興的研究課題。在海洋生態(tài)系統(tǒng)漫長(zhǎng)的演化過(guò)程中，海洋微生物形成了適應(yīng)嚴(yán)酷生存環(huán)境的獨(dú)特機(jī)制，進(jìn)化出基因型、代謝途徑和生理生態(tài)功能的多樣性，蘊(yùn)藏著大量新穎的次級(jí)代謝產(chǎn)物。一些海洋來(lái)源的先導(dǎo)化合物已成功地開發(fā)成藥物,包括來(lái)源于海洋真菌的抗感染藥物頭孢霉素(cephalo sporins),來(lái)源于海綿的抗腫瘤藥物阿糖胞苷(cytarabine, AraC),抗病毒藥物阿糖腺苷(vidarabine, AraA),來(lái)源于芋螺的鎮(zhèn)痛藥芋螺毒素(ziconotide,Prialt)等。目前,全球還有40余種海洋新藥批準(zhǔn)進(jìn)入臨床研究。在過(guò)去的幾十年，全世界范圍內(nèi)已從海洋微生物中分離得到新型化合物20000多種。大量研究表明，海洋真菌的代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)類型主要有:環(huán)肽類、留醇類、蒽醌類、吡喃酮類、縮酮類、含羰基羥基類(醛酮化合物、酯和游離羧基化合、含羥基化合物)、含氮類(含硫生物堿類化合物、哌嗪類與喹唑類化合物、吡咯類、其他氮雜稠環(huán)類與吡啶類化合物、酰胺、胺與其他含氮化合物)。海洋真菌產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)主要有:抗菌活性物質(zhì)、抗腫瘤活性物質(zhì)。目前研究較多的抗腫瘤、抑制乙酰膽堿酯酶、抗細(xì)菌和抗氧化等海洋真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物已成為具有生物醫(yī)學(xué)意義的天然化合物豐富來(lái)源，均具有廣闊的藥用前景。故從海洋真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)高活性的物質(zhì)對(duì)于發(fā)現(xiàn)先導(dǎo)化合物非常的重要，對(duì)疾病的攻克也具有著重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一株具有抗腫瘤活性的海洋真菌——薩氏曲霉(Aspergillussydowii) MNP12010103，及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:—株具有抗腫瘤活性的海洋真菌-薩氏曲霉(Aspergillus sydowii)
MNP12010103,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號(hào):CCTCC No:M 2012391，保藏日期2012年10月8日。所述薩氏曲霉MNP12010103的菌落特征如下:涂布或劃線接種于海水PDA上生長(zhǎng)迅速，在海水PDA上28°C培養(yǎng) 5d，菌落直徑31mm，平坦，中部突起，質(zhì)地絨狀至絮狀，分生孢子結(jié)構(gòu)大量，表面灰藍(lán)色至暗藍(lán)色，邊緣白色，老后色深，無(wú)滲出液，菌落反面淡黃褐色，可溶性色素缺乏；所述薩氏曲霉的菌體生長(zhǎng)特征如下:在液體培養(yǎng)基中，28°C培養(yǎng)48 h后呈顆粒狀懸浮生長(zhǎng)；所述的薩氏曲霉MNP12010103分生孢子頭球形至輻射形，小分生孢子頭似青霉?fàn)?，散亂或疏松柱形。本種的最主要特征是致密的柱形分生孢子頭和光滑的小分生孢子，且菌絲體呈白色。本發(fā)明菌株是由浙江省三門灣海域采集的海水中分離和篩選得到的。菌株的篩選純化方法為:將采集的海水運(yùn)用稀釋涂布法涂于土豆平板培養(yǎng)基上，28 V培養(yǎng)至菌落數(shù)量不再增加，挑取單菌落至斜面培養(yǎng)基上。28°C培養(yǎng)2d，以菌株形態(tài)特征區(qū)別進(jìn)行挑選，即得該菌株，并對(duì)該菌株進(jìn)行菌種鑒定。所述的平板培養(yǎng)基和斜面培養(yǎng)基的組成相同，組成為:土豆15(T350g/L，葡萄糖10 30g/L，瓊脂15 35g/L，溶劑為水，ρΗ7.2 8.0。將所述的薩氏曲霉Aspergillus sydowii MNP12010103 的 rDNA-1TS 序列在美國(guó)國(guó)立生物信息中心(National Center for Biotechnology Information USA, NCBI)的GenBank中進(jìn)行同源比對(duì),鑒定為薩氏曲霉(Aspergillus sydowii)。其rDNA-1TS的測(cè)序序列如下:
權(quán)利要求
1.一株具有抗腫瘤活性的海洋真菌-薩氏曲霉(Aspergillus sydowii)MNP12010103，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號(hào):CCTCC No:M 2012391，保藏日期2012年10月8日。
2.如權(quán)利要求1所述的薩氏曲霉MNP12010103，其特征在于其rDNA-1TS的測(cè)序序列如下:CTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGAGTGCGGGCTGCCTCCGGGCGCCCAACCTCCCACCCGTGAATACCTAACACTGTTGCTTCGGCGGGGAACCCCCTCGGGGGCGAGCCGCCGGGGACTACTGAACTTCATGCCTGAGAGTGATGCAGTCTGAGTCTGAATATAAAATCAGTCAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAACTGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGTGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCGACTAGGGCCGGCCGGGCGCCAGCCGACGTCTCCAACCATTTTTCTTCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAA。
3.權(quán)利要求1所述的薩氏曲霉MNP12010103在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所 述的應(yīng)用，其特征在于所述抗腫瘤藥物為治療肝癌、神經(jīng)癌或淋巴癌的藥物。
5.如權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于薩氏曲霉MNP12010103提取物用于制備抗腫瘤藥物。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述提取物為乙酸乙酯提取物，由如下方法制得:將薩氏曲霉MNP12010103接種至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，于25 35°C、15(T250 r/min振蕩條件下培養(yǎng)14 30(1，得到發(fā)酵液，發(fā)酵液去除菌體細(xì)胞后用乙酸乙酯萃取，濃縮揮干得浸膏，即為所述薩氏曲霉MNP12010103的乙酸乙酯提取物；所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:葡萄糖8^20 g/L，蛋白胨1.5^3 g/L，酵母膏0.8 2g/L，溶劑為水:人工海水體積比1:廣4的混合物，pH 7 8。
全文摘要
本發(fā)明提供了一株具有抗腫瘤活性的海洋真菌——薩氏曲霉(Aspergillus sydowii)MNP12010103及其應(yīng)用。該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號(hào)CCTCC NOM 2012391，保藏日期2012年10月8日。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在(1)本發(fā)明的海洋真菌薩氏曲霉MNP12010103營(yíng)養(yǎng)要求簡(jiǎn)單、容易培養(yǎng)；(2)該菌株的代謝產(chǎn)物具有抗腫瘤活性；(3)該菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物的抗腫瘤活性高，其培養(yǎng)所得的發(fā)酵液總浸膏對(duì)HepG2細(xì)胞、PC12細(xì)胞和U937細(xì)胞有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。
文檔編號(hào)C12R1/66GK103074234SQ20121057433
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月25日
發(fā)明者王鴻, 葉建軍, 趙美蓉, 梅建鳳, 易喻, 應(yīng)國(guó)清 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)