專利名稱：一種微生物菌株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
:本發(fā)明涉及一種微生物菌株及其應(yīng)用，屬微生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
:植物寄生線蟲是作物上普遍發(fā)生的病害之一，危害幾乎所有作物。僅根結(jié)線蟲(Meloidogyne spp.)每年在全球造成的損失就高達(dá)數(shù)百億美元。由于生產(chǎn)上缺乏抗性品種，農(nóng)作物復(fù)種指數(shù)高，化學(xué)殺線劑的使用受到限制，以及現(xiàn)代農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的需要，生物防治植物線蟲日益受到重視。放線菌作為一種獨(dú)特的微生物資源，其豐富的代謝產(chǎn)物具有多種多樣的活性。本專利利用云南特有的生物資源，篩選出產(chǎn)生高效毒殺線蟲活性代謝產(chǎn)物來毒殺根結(jié)線蟲的放線菌菌株，在線蟲的生物防治中具有潛在和實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值
發(fā)明內(nèi)容
:本發(fā)明的目的在于提供一種微生物菌株及其應(yīng)用。本發(fā)明具體是這樣實(shí)現(xiàn)的:發(fā)明人在前期研究中，篩選獲得了具有良好殺線蟲功能的放線菌糞生鏈霉菌(Streptomyces fimicarius) D153。D153菌株已于2012年7月12日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；保藏單位地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；保藏號(hào)為CGMCC N0.6353。糞生鏈霉菌(Streptomyces fimicarius)孢子絲直或柔曲，孢子為長(zhǎng)圓形、柱形或桿狀，表面光滑，在合成培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)，菌落微褐色帶微紅色調(diào)或淺黃色調(diào)，可溶色素為褐色或黃褐色，氣生菌絲為暗煙色或微灰色(Taguchi，1993)。本發(fā)明的糞生鏈霉菌D153菌株作為制備用于防治根結(jié)線蟲制劑的應(yīng)用。本發(fā)明將糞生鏈霉菌D153通過常規(guī)的液體體培養(yǎng)，獲得包括菌體和胞外分泌物的菌液，穴施使用。本放線菌劑能與其他的殺線蟲農(nóng)藥、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑混合使用，但必須保證所混合藥劑對(duì)本發(fā)明采用的菌劑無副作用。本發(fā)明的放線菌劑一般在作物播種或移栽時(shí)施用。方法是播種時(shí)與種子共同施入土壤中，移栽時(shí)將本制劑施入作物根際周圍。對(duì)線蟲發(fā)生嚴(yán)重地區(qū)可在作物生長(zhǎng)過程中追施一次，方法是將本制劑施入作物根際周圍。本發(fā)明與現(xiàn)有的殺植物寄生線蟲藥相比，具有高效、低毒以及無殘留的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
:本發(fā)明化合物的發(fā) 酵生產(chǎn)方法(常規(guī)方法):1、液體種子培養(yǎng):高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基分裝到500ml三角瓶中，常規(guī)滅菌,再于超凈工作臺(tái)上用接種針從試管斜面上挑取一些菌絲接種于其中，然后22-28°C，150-180rpm/min于搖床上培養(yǎng)5-8天備用。2、將搖好的種子按10-20%的接種量接種到發(fā)酵罐中，控制溫度在22_28°C，培養(yǎng)
2-3天，然后將發(fā)酵液用水調(diào)節(jié)，使CFU在105-108，備用。本發(fā)明制劑對(duì)根結(jié)線蟲的防效試驗(yàn):1、南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita)的培養(yǎng)將溫室培養(yǎng)的帶有南方根結(jié)線蟲的番茄根用無菌水洗凈，解剖針挑取根結(jié)線蟲的卵囊置于0.4M的KCl溶液中，在5ml離心管中依次用4ml無菌水(三次)、Iml無菌青-鏈霉素雙抗溶液、3ml 0.1%的NaClO溶液洗滌和消毒，每一步驟均通過短暫離心(8000轉(zhuǎn)30秒)除去上清液。洗滌好的蟲卵置于0.4M的ZnCl2溶液中孵化48小時(shí)，二齡幼蟲用移液器收集于1.5ml離心管，通過短暫離心(5000轉(zhuǎn)30秒)富集備用。2、防效試驗(yàn)方法( I)試驗(yàn)所用藥劑及處理A、液體菌劑,在作物移栽時(shí)一次性施于作物根際；B、陽性對(duì)照，0.5%阿維菌素按37.5 kg/hm2處理；C、空白對(duì)照，不加菌劑或藥劑處理。(2)試驗(yàn)方法在直徑為15 cm的盆缽加入500g 土樣(病土:沙土:腐殖土 =1:1:1)，做以上幾個(gè)處理。每個(gè)處理5盆且3次重復(fù)，置于25 — 28°C的溫室中培養(yǎng)。移栽后每隔3天澆水，使其正常生長(zhǎng)。菌劑處理后30、60天分別調(diào)查各處理組作物根部的根結(jié)數(shù)、根際的蟲卵數(shù)和作物的株高、地上部分重以及根的濕重，計(jì)算菌劑對(duì)根結(jié)線蟲病的防治效果。實(shí)施例1:用菌劑防治番茄根結(jié)線蟲病試驗(yàn)移栽I月齡番爺(4-6葉),番爺品種為:中雜9號(hào)，山東農(nóng)業(yè)科技開發(fā)公司生產(chǎn)。每盆施用IOOml菌劑，按上述試驗(yàn)方法進(jìn)行防效試驗(yàn)。列表所示為防效數(shù)據(jù)。表1菌劑對(duì)番茄根結(jié)線蟲病的防治效果(60d)
權(quán)利要求
1.種微生物菌株，其特征在于該微生物菌株為糞生鏈霉菌(Streptomycesfimicarius) D153，保藏號(hào)為:CGMCC N0.6353。
2.利要求1所述的糞生鏈霉菌(Streptomycesfimicarius)D153菌株在制備用于防治根結(jié)線蟲制劑中 的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種微生物菌株及其應(yīng)用，屬微生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的微生物菌株為糞生鏈霉菌 (Streptomyces fimicarius) D153。D153菌株已于2012年7月18日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC No.6353。本發(fā)明的微生物菌株作為制備用于防治根結(jié)線蟲制劑的應(yīng)用。用本發(fā)明的微生物菌株制備的菌劑對(duì)番茄根結(jié)線蟲病溫室防效達(dá)到60%以上，對(duì)煙草根結(jié)線蟲病溫室防效達(dá)到40%以上。并能明顯促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。用本發(fā)明的微生物菌株制備的防治根結(jié)線蟲制劑，具有高效、低毒及無殘留的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N1/20GK103087946SQ20121058032
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月28日
發(fā)明者劉亞君, 楊敏敏, 張克勤 申請(qǐng)人:云南大學(xué)