具有對碳青霉烯類的酶促抗性的細菌的檢測的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種在生物學樣品中檢測和/或鑒定通過產生碳青霉烯酶而表現出對碳青霉烯類的抗性的細菌的方法，所述方法包括以下步驟：a)使所述樣品與包含至少一種碳青霉烯類抗生素和氯唑西林的反應培養(yǎng)基接觸；b)進行整體溫育以允許細菌生長；c)檢測表現出對碳青霉烯類的酶促抗性的菌株。有利地，步驟a)中采用的培養(yǎng)基還包含苯丙氨酸-精氨酸-β-萘基酰胺(PAbetaN)。
【專利說明】具有對碳青霉烯類的酶促抗性的細菌的檢測
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測和鑒定抗碳青霉烯類的細菌的方法。更具體地，本發(fā)明的方法的目的是檢測表現出對碳青霉烯類的酶促抗性的細菌。
【背景技術】
[0002]對β -內酰胺抗生素如青霉素和頭孢菌素抗性的增加使治療革蘭氏陰性菌菌株引起的感染變得復雜。因此這些抗生素被其他廣譜抗微生物劑代替。在這些廣譜抗微生物劑中，碳青霉烯類已起到重要作用，特別是對于治療住院患者。碳青霉烯類針對大多數革蘭氏陽性和革蘭氏陰性需氧細菌以及某些厭氧細菌作用。
[0003]但是，越來越多抗碳青霉烯類的菌株出現在住院患者中。
[0004]相關的細菌非限制性地包括大腸桿菌(Escherichia coli)、陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)、產氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)、朽1 樣酸桿菌(Citrobacter sp.)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、產酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、雷氏普羅威登斯菌(Providencia rettgeri)、惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)、嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumanii)、叢毛單胞菌(Comamonas sp.)、氣單胞菌(Aeromonas sp.)、摩氏摩根菌(Morganella morganii) >腸球菌(Enterococcus sp.)、奇異變形桿菌(Proteus mirabilis)、森夫頓堡沙門氏菌(Salmonella senftenberg)、粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)等。
[0005]對碳青霉烯類敏感性的減少可以歸因于:
[0006]?抗β -內酰胺基因的表達:
[0007](i)ampCβ -內酰胺酶的高產,和/或
[0008](ii) ESBL (超廣譜β -內酰胺酶)，
[0009]聯合細胞壁通透性(不透性抗性)的改變和/或抗生素的主動外排(Pagesetal.，2009; PloS ONE, 4(3));和 / 或
[0010].分解碳青霉烯類的稱為碳青霉烯酶的酶的存在。
[0011]碳青霉烯酶基因可以存在于染色體和/或質粒中。由于這種質粒形式的存在，這類酶促抗性能夠很大程度地蔓延，結果在流行病學角度上構成重大風險。因為對碳青霉烯類的膜不透性抗性不可以蔓延，所以作為診斷的一部分，推薦監(jiān)測攜帶或衛(wèi)生能夠區(qū)分兩種類型的抗性。
[0012]當面對抗碳青霉烯的細菌菌株時，本領域技術人員難以容易地區(qū)分產生碳青霉烯酶的細菌菌株與不透性抗性的菌株。因為這兩種類型的細菌均能夠在碳青霉烯的存在下顯色，目前區(qū)分它們的唯一方式在于進行額外的測試。在這些額外的測試中，可以提到:改良的 Hodge 測試(CLSI M100-S20:Performance Standards for AntimicrobialSusceptibility Testing;Twentieth Informational Supplement.January2010.Supplemental Table2A_S2)、瓊脂擴散(聯合盤)協(xié)同測試，其采用與碳青霉烯聯合的抑制齊U，例如用于B類碳青霉烯酶的EDTA，或者用于檢測A類碳青霉烯酶的苯基-硼酸。因此已知使用盤聯合美羅培南和硼酸化合物作為β -內酰胺酶抑制劑，用于KPC碳青霉烯酶的表型檢測(Pournaras et al., 2010; J.Antimicrob.Chemotherapy, 65 (7): 1319-1321) ? 相似地,Giske等人測試了氯唑西林對區(qū)分產生KPC的菌株以及組合孔蛋白喪失與AmpC高產的菌株的影響(Giske et al., 2010; Clin.Microbiol.1nfect.; 17 (4): 552-6) ? 在這種情況下，區(qū)分基于氯唑西林對AmpC基因編碼的頭孢菌素酶的抑制作用，這恢復β-內酰胺的作用。但是，這些測試的結果經常必須通過分子生物學技術(例如靶向碳青霉烯-抗性基因的PCR擴增)來證實。
[0013]在申請W02010/010083中提出特征在于使用包含美羅培南和/或厄他培南的顯色培養(yǎng)基的方法，并且其在培養(yǎng)基CHROMagar? KPC(Samra et al.，2008; J.Clin.Microbiol.，46(9):3110-3111; CHROMagar?, Paris, France)和 C0L0REX?KPC (BioMed DiagnosticsInc.)中實施。這種培養(yǎng)基不允許檢測所有產生碳青霉烯酶的菌株，特別是金屬-β_內酰胺酶(Nordmann et al., 2011; J Clin Microbiol.，49 (2): 718-721)。
[0014]在目前的流行病學背景下，特別是隨著新抗性如NDM-1的出現，仍需要提高篩選所有與各種類型的碳青霉烯酶的產生相關的抗性機制的靈敏度和/或特異性。
[0015] 申請人:已證實可以改進直接區(qū)分(換句話說，特別是在單一篩選裝置中)酶促抗性與通過其他機制(其中包括不透性)的抗性，這通過抑制表現出不透性抗性或其他非酶促抗性機制的菌株而不影響通過產生碳青霉烯酶來產生抗性的菌株的生長和檢測。 申請人:令人驚訝地觀察到與PAbetaN相關或無關的氯唑西林對不產生碳青霉烯酶且不產生AmpC的抗碳青霉烯菌株的影響。

【發(fā)明內容】

`[0016]在這方面，本發(fā)明涉及一種在生物學樣品中檢測和/或鑒定表現出對碳青霉烯類的抗性的細菌的方法，所述方法包括以下步驟:
[0017]a)使所述樣品與包含至少一種碳青霉烯類抗生素和氯唑西林的反應培養(yǎng)基接觸；
[0018]b)進行整體溫育以允許細菌生長；
[0019]c)檢測表現出對碳青霉烯類的酶促抗性的菌株。
[0020]有利地，步驟a)中采用的培養(yǎng)基還包含苯丙氨酸-精氨酸萘基酰胺(PAbetaN)。
[0021] 申請人:令人驚訝地證實，將氯唑西林或者氯唑西林與PAbetaN的組合加入包含碳青霉烯類的顯色或非顯色培養(yǎng)基使得可以提高通過產生碳青霉烯酶而對碳青霉烯類具有抗性的細菌的檢測的靈敏度和特異性，并且更特異性地鑒定產生碳青霉烯酶的菌株。更具體地，本發(fā)明的方法使得可以在抗碳青霉烯細菌菌株中區(qū)分產生碳青霉烯酶的菌株與表現出不透性抗性或其他非酶促抗性機制的菌株。因此，可以立即實施預防表現出酶促抗性的菌株的傳播所必需的衛(wèi)生措施。
[0022]根據第一實施方案，本發(fā)明對應于一種在生物學樣品中檢測和/或鑒定通過產生碳青霉烯酶而表現出對碳青霉烯類的抗性的細菌的方法，所述方法包括以下步驟:[0023]a)使所述樣品與包含至少一種碳青霉烯類抗生素和氯唑西林的反應培養(yǎng)基接觸；
[0024]b)進行整體溫育以允許細菌生長；
[0025]c)檢測表現出對碳青霉烯類的酶促抗性的菌株。
[0026]有利地，步驟a)中采用的培養(yǎng)基還包含苯丙氨酸-精氨酸萘基酰胺(PAbetaN)。
[0027]根據第二實施方案，本發(fā)明對應于一種在生物學樣品中檢測和/或鑒定通過產生碳青霉烯酶而表現出對碳青霉烯類的抗性的細菌的方法，所述方法包括以下步驟:
[0028]a)使所述樣品與包含至少一種顯色底物、至少一種碳青霉烯類抗生素和氯唑西林的反應培養(yǎng)基接觸；
[0029]b)進行整體溫育以允許細菌生長；
[0030]c)檢測表現出對碳青霉烯類的酶促抗性的菌株。
[0031]有利地，步驟a)中采用的培養(yǎng)基還包含苯丙氨酸-精氨酸萘基酰胺(PAbetaN)。
【具體實施方式】
[0032]生物學樣品應理解為用于分析的實體的一小部分或分離的少量。其可以是臨床樣品，人或動物的，來自生物液體的樣本；或者是食物樣品，來自任何類型的食物；或者是來自食物生產或加工環(huán)境的樣品。因此該樣品可以是液體或固體。可以以非限制性的方式舉例:全血、血清、血漿、尿、糞便的臨床樣品，鼻、喉、皮膚、傷口、腦脊液的樣本；水、飲料(如奶、果汁)、酸奶、肉、蛋、蔬菜、蛋黃醬、奶酪、魚等的食物樣品；來自動物飼料的食物樣品，特別是例如動物食品樣品，或者表面或水體對照的樣品。這種樣本可以直接使用，或者在分析之前按照本領域技術人員已知的方法通過富集、稀釋、提取、濃縮或純化來進行制備。
[0033]反應培養(yǎng)基應理解為包含代謝的表達和/或微生物的生長所必需的所有元素的培養(yǎng)基。反應培養(yǎng)基可以是固體、半固體或液體。例如，固體培養(yǎng)基應理解為膠凝培養(yǎng)基。瓊脂是微生物學中用于微生物培養(yǎng)的常規(guī)膠凝劑，但是可以使用明膠、瓊脂糖或者其他天然或人工的凝膠形成物質。許多制品可商購，例如Columbia瓊脂、Trypcase-大豆瓊脂、MacConkey瓊脂、Mueller Hinton瓊脂,或者更一般地,微生物學培養(yǎng)基手冊(CRC Press)所述的那些制品。
[0034]反應培養(yǎng)基可以包含組合的一種或多種元素，例如氨基酸、蛋白胨、碳水化合物、核苷酸、礦物質、維生素等。該培養(yǎng)基還可以包含染料。作為指示，可能的染料可以是伊文思藍、中性紅、羊血、馬血、遮光劑如氧化鈦、硝基苯胺、孔雀綠、亮綠、一種或多種代謝指示劑、一種或多種代謝調節(jié)劑等。
[0035]反應培養(yǎng)基可以是顯示培養(yǎng)基或者培養(yǎng)和顯示培養(yǎng)基。在第一種情況下，微生物的培養(yǎng)在接種之前進行，而在第二種情況下，檢測和/或鑒定培養(yǎng)基還構成用于培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
[0036]本領域技術人員還可以使用雙板，這使得可以容易地比較包含不同底物或不同選擇性混合物的兩種培養(yǎng)基，在這兩種培養(yǎng)基上沉積相同的生物學樣品。
[0037]反應培養(yǎng)基可以包含一種或多種選擇劑。選擇劑應理解為能夠防止或減緩除靶微生物以外的微生物的生長的任何化合物。不受限制地，0.01mg/l-5g/l的濃度特別適合本發(fā)明。
[0038]作為選擇劑，可以提到抗生素、抗真菌劑、膽鹽、結晶紫、堿性品紅、亮綠等?？股貞斫鉃槟軌蚍乐够驕p緩細菌生長的任何化合物。具體地，它們屬于β_內酰胺、糖肽、氨基糖苷(aminoside)、多肽、磺酰胺和喹諾酮類組。作為提示，具體可以提到抗生素頭孢噻月虧、頭孢磺啶、頭孢他啶、頭孢西丁、頭孢曲松、頭孢泊廂、氨曲南、萬古霉素、慶大霉素、甲氧芐啶、妥布霉素、拉氧頭孢、磷霉素、D-環(huán)絲氨酸、多鏈絲霉素、多粘菌素E以及喹諾酮類如萘啶酸。
[0039]抗真菌劑應理解為能夠防止或減緩酵母或霉菌的生長的任何化合物。作為提示，具體可以提到兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑和環(huán)己米特。
[0040]步驟a)中采用的培養(yǎng)基中所用的碳青霉烯類優(yōu)選在反應培養(yǎng)基中是穩(wěn)定的。它們優(yōu)選自:美羅培南、厄他培南、多利培南、法羅培南、噻烯霉素、比阿培南、來那培南、帕尼培南、阿祖培南(razupenem)、托莫培南(tomopenem)、替比培南、硫培南以及Choi等人在申請US2010/0160284A1中所述的β-甲基碳青霉烯類。更優(yōu)選地，它們選自:美羅培南、厄他培南、多利培南和法羅培南。
[0041]優(yōu)選地，碳青霉烯濃度為0.05_32mg/L。
[0042]更優(yōu)選地，碳青霉烯濃度對于法羅培南為2_32mg/L，對于多利培南為0.05_2mg/L，對于美羅培南為0.05-2mg/L,并且對于厄他培南為0.05_12mg/L。
[0043]氯唑西林對應于青霉素類抗生素。其體外使用以抑制某些β -內酰胺酶(上文的Giske et al.，2010)。有利地認為雙氯西林和氟氯西林等同于氯唑西林。優(yōu)選地，以25-300mg/L的濃度使用氯唑西林。`
[0044]PABN或PAbetaN對應于苯丙氨酸-精氨酸_ β _萘基酰胺。這種化合物已知為外排泵抑制劑，例如，使得可以減少氯霉素對產氣腸桿菌菌株的最小抑制濃度(MIC) (Malleaet al., 2002;Biochemical and Biophysical Research Communications293:1370-3)。優(yōu)選地，以l_50mg/L的濃度使用PAbetaN。
[0045]顯色底物應理解為使得可以通過直接或間接的可檢測信號檢測靶微生物的酶促或代謝活性的底物。對于直接檢測，這種底物可以連接至作為熒光或有色標記發(fā)揮作用的部分(Orenga et al.，2009; J.Microbiol.Methods; 79 (2): 139-55)。對于間接檢測，本發(fā)明的反應培養(yǎng)基還可以包含PH指示劑，其對底物消耗所誘導的pH變化敏感并且顯示靶微生物的代謝。所述PH指示劑可以是發(fā)色團或熒光團。作為發(fā)色團的實例，可以提到溴甲酚紫、溴麝香草酚藍、中性紅、苯胺藍和溴甲酚藍。熒光團包括例如4-甲基傘形酮、羥基香豆素衍生物或試鹵靈衍生物。
[0046]根據本發(fā)明，顯色底物優(yōu)選自基于吲哚氧基的底物(3-吲哚氧基、5-溴-3-吲哚氧基、5-碘-3-吲哚氧基、4-氯-3-吲哚氧基、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基、5-溴-6-氯-3-吲哚氧基、6-溴-3-吲哚氧基、6-氯-3-吲哚氧基、6-氟-3-吲哚氧基、5-溴-4-氯-N-甲基-3-吲哚氧基、N-甲基-3-吲哚氧基、Al do I?等);基于傘形酮的底物(4-甲基傘形酮、環(huán)己酮七葉苷(Cyclohexenoesculetin)等)；基于菌素的底物；基于對萘酹苯甲醇的底物；基于硝基苯酚的底物(鄰硝基苯酚、對硝基苯酚等)；基于羥基喹啉的底物；基于兒茶酚(Cathecol)的底物(兒茶酚、二羥黃酮、羥基黃酮等)；基于試鹵靈的底物；基于氯酚紅的底物；基于熒光素的底物；基于氨基苯酚的底物(對氨基苯酚、二氯-氨基苯酚等)；基于萘酚的底物(α-萘酚、2-萘酚、萘酚-ASBI等)；基于氨基香豆素的底物(7-氨基-4-甲基-香豆素等)；基于萘基酰胺的底物；基于吖啶的底物(氨基-苯基-吖啶等)；基于氨基-吩噁嗪-的底物(氨基-苯并吩噁嗪酮、氨基-戊基-試鹵靈等)。
[0047]作為指示，顯色底物靶向的酶促活性可以屬于水解酶組，并且優(yōu)選氧化酶(osidase)、酯酶或肽酶組。優(yōu)選地，顯色底物靶向的酶促活性選自:葡糖醛酸酶、葡糖苷酶、半乳糖苷酶、酯酶、硫酸酯酶和脫氨酶。
[0048]作為指示，用于檢測葡糖醛酸酶活性的底物具體可以是4-甲基傘形酮基-β -葡糖苷酸、5-溴-4-氯-3-吲哚基-β -葡糖苷酸、5-溴-6-氯-3-吲哚基-β -葡糖苷酸、6-氯-3-吲哚基-β -葡糖苷酸、茜素-β -葡糖苷酸、環(huán)己酮七葉苷-β -葡糖苷酸或它們的鹽。
[0049]用于檢測β_半乳糖苷酶活性的底物具體可以是4-甲基傘形酮基-β_半乳糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-半乳糖苷、5-溴-6-氯-3-吲哚基-β-半乳糖苷、6-氯-3-吲哚基-β -半乳糖苷、茜素-β -半乳糖苷、環(huán)己酮七葉苷-β -半乳糖苷或它們的鹽。
[0050]用于檢測葡糖苷酶活性的底物具體可以是4-甲基傘形酮基-β_葡糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-β -葡糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-甲基-β -葡糖苷、5_溴_6_氯_3_ Π引哚基-β -匍糖苷、6-氯_3_ Π引哚基-β -匍糖苷、菌素_ β _匍糖苷、環(huán)己酮七葉苷-β -葡糖苷、硝基苯基-β -葡糖苷、二氯氨基苯基葡糖苷或它們的鹽。
[0051]作為指示，用于檢測酯酶活性的底物具體可以是具有6-14個碳、優(yōu)選7-9個碳的飽和或不飽和直鏈脂肪酸的酯，以及4-甲基傘形酮、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基、5-溴-6-氯-3-吲哚氧基、6-氯-3-吲哚氧基、5-溴-3-吲哚基或茜素的酯或它們的鹽。優(yōu)選地，它們選自4-甲基傘形酮基-辛酸酯、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-辛酸酯、5-溴-6-氯-3-吲哚氧基-辛酸酯、6-氯`-3-吲哚氧基-辛酸酯、5-溴-3-吲哚基-辛酸酯或茜素-辛酸酯。
[0052]用于檢測脫氨酶活性的底物具體可以是L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸和L-組氨酸。
[0053]用于檢測硫酸酯酶活性的底物具體可以是4-甲基傘形酮基-硫酸酯、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-硫酸酯、5-溴-6-氯-3-吲哚氧基-硫酸酯、3-吲哚氧基-硫酸酯、酚酞-二硫酸酯或它們的鹽。
[0054]優(yōu)選地，顯色底物選自:5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β -D-吡喃葡萄糖苷(X-葡糖苷)、5_溴-6-氯-3-吲哚氧基-β -D-吡喃半乳糖苷(品紅β -Gal)、6_氯-3-吲哚氧基-β -D-葡糖苷酸(玫瑰β Gur)、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-β -D-吡喃葡萄糖苷(綠A β Glu)、甲基-β -D-吡喃葡萄糖苷(甲基β D葡糖苷)和L-色氨酸。
[0055]溫育應理解為表示在1-48小時之間，優(yōu)選4-24小時之間，更優(yōu)選16_24小時之間升至并維持在適當的溫度，一般為20-50°C，優(yōu)選30-40°C。
[0056]檢測應理解為表示用裸眼或使用光學裝置識別靶細菌生長的存在。有利地，當采用的培養(yǎng)基包含顯色底物時，檢測還可以使得能夠鑒定靶細菌。對于熒光底物，使用光學裝置進行檢測，或者對于有色底物，用裸眼或使用光學裝置進行檢測。[0057]特異性應理解為如果靶細菌菌株不存在，方法或反應培養(yǎng)基給出陰性結果的能力。換句話說，根據本發(fā)明，更特異性的鑒定對應于與不表達碳青霉烯酶的菌株相關的假陽性數量的減少，不聲稱抑制所有這些菌株。
[0058]靈敏度應理解為如果樣品中存在靶細菌菌株，給出陽性結果的能力。
[0059]如上文所示，對碳青霉烯類的酶促抗性應理解為表示由于靶細菌表達碳青霉烯酶而導致的對碳青霉烯抗生素的抗性。
[0060]如上文所示，最常見的抗碳青霉烯類的細菌有:大腸桿菌、陰溝腸桿菌、產氣腸桿菌、檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌、產酸克雷伯氏菌、銅綠假單胞菌、雷氏普羅威登斯菌、惡臭假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、鮑曼不動桿菌、叢毛單胞菌、氣單胞菌、摩氏摩根菌、腸球菌、奇異變形桿菌、森夫頓堡沙門氏菌、粘質沙雷氏菌、鼠傷寒沙門氏菌等。
[0061]本發(fā)明還涉及一種用于檢測和/或鑒定表現出對碳青霉烯類的酶促抗性的細菌的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基對應于基本培養(yǎng)基，其還包含至少一種顯色底物、至少一種碳青霉烯、氯唑西林或者氯唑西林和PAbetaN的組合。
[0062]最后，本發(fā)明涉及氯唑西林或者氯唑西林和PAbetaN的組合在特異性地檢測和/或鑒定表現出對碳青霉烯類的酶促抗性的細菌中的用途。
[0063]下文展開的實施例的目的是促進對本發(fā)明的理解。它們以解釋的方式給出而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0064]實施例
[0065]實施例1
[0066]在厄他培南的存在下，氯唑西林和/或PAbetaN對不透性-抗性(IR)或表現出其他非酶促抗性機制或產生碳青 霉烯酶的菌株的最小抑制濃度(MIC)的影響。
[0067]首先，在有厄他培南的的情況下，使用Mueller Hinton培養(yǎng)基中的E-test?帶評價氯唑西林和PAbetaN對菌株的MIC的影響。第一個測試評價厄他培南對表現出對碳青霉烯類的非酶促抗性(此后稱為不透性-抗性(IR))的19個菌株的MIC的影響。第二個測試在于評價在有厄他培南的情況下這2種化合物對29個產生碳青霉烯酶的菌株的MIC的影響(+1ESBL)。
[0068]1.培養(yǎng)基和微生物
[0069]測試B100904:19個不透性-抗性(IR)菌株屬于以下物種:10株產氣腸桿菌、2株陰溝腸桿菌、I株弗氏朽1檬酸桿菌(Citrobacter freundii)、I株銅綠假單胞菌、3株奇異變形桿菌和2株摩氏摩根菌。
[0070]測試B101001:29個產生碳青霉烯酶的菌株劃分如下:27個產生A類KPC碳青霉烯酶(KPC)的肺炎克雷伯氏菌菌株，以及產生B類碳青霉烯酶(NDM-1)的分別為肺炎克雷伯氏菌和弗氏檸檬酸桿菌的2個菌株。這個測試還包含ESBL大腸桿菌菌株。
[0071]在根據表I補充或未補充氯唑西林和/或PAbetaN的Mueller-Hinton培養(yǎng)基中進行E-測試。
[0072]表1:目的在于評價氯唑西林和/或PabetaN對IR或產生碳青霉烯酶的菌株的MIC的影響而進行測試的培養(yǎng)基(90_培養(yǎng)皿)
【權利要求】
1.一種檢測生物學樣品中產生碳青霉烯酶的細菌的方法，所述方法包括以下步驟: ο使所述樣品與包含至少一種碳青霉烯和氯唑西林的反應培養(yǎng)基接觸， ο進行整體溫育以允許產生碳青霉烯酶的細菌生長，以及 O檢測對應于產生碳青霉烯酶的細菌的菌株。
2.一種檢測和/或鑒定生物學樣品中產生碳青霉烯酶的細菌的方法，所述方法包括以下步驟: ο使所述樣品與包含至少一種碳青霉烯、氯唑西林和至少一種顯色底物的反應培養(yǎng)基接觸， O進行整體溫育以允許產生碳青霉烯酶的細菌生長，以及 O檢測對應于產生碳青霉烯酶的細菌的菌株。
3.權利要求1或2的方法，其中所述反應培養(yǎng)基還包含苯丙氨酸-精氨酸β-萘基酰胺(PAbetaN)。
4.權利要求1-3之一的方法，其中所述碳青霉烯選自:厄他培南、美羅培南、多利培南和法羅培南。
5.權利要求1-4之一的方法，其中所述氯唑西林濃度為25-300mg/L。
6.權利要求3-5之一的方法，其中所述PAbetaN濃度為l_50mg/L。
7.權利要求2-6之一的方法，其中所述顯色底物檢測選自以下的活性:葡糖醛酸酶、葡糖苷酶、半乳糖苷酶、酯酶、硫酸酯酶和脫氨酶。
8.權利要求2-7之一的方法，其中所述顯色底物選自:5_溴-4-氯-3-吲哚氧基-β -D-吡喃葡萄糖苷(X-葡糖苷)、5_溴-6-氯-3-吲哚氧基-β -D-吡喃半乳糖苷(品紅β -Gal)、6_氯-3-吲哚氧基-β -D-葡糖苷酸(玫瑰β Gur)、5_溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-β -D-吡喃葡萄糖苷(綠A β Glu)和L-色氨酸。
9.權利要求1-8之一的方法，其中所述反應培養(yǎng)基為液體或固體培養(yǎng)基。
10.一種用于檢測和/或鑒定表現出對碳青霉烯的酶促抗性的細菌的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包含基本培養(yǎng)基、至少一種顯色底物、至少一種碳青霉烯和氯唑西林。
11.權利要求10的培養(yǎng)基，其還包含苯丙氨酸-精氨酸β-萘基酰胺(PAbetaN)。
12.氯唑西林或者氯唑西林和PAbetaN的組合在特異性地檢測和/或鑒定表現出對碳青霉烯類的酶促抗性的細菌中的用途。
【文檔編號】C12Q1/04GK103443288SQ201280014561
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2012年3月16日 優(yōu)先權日:2011年3月25日
【發(fā)明者】S·吉拉爾迪, J·佩里, G·贊巴爾迪 申請人:生物梅里埃公司