新型乳酸菌以及含有該乳酸菌的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種乳酸菌類的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合。所述微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或其組合可以與至少一種金黃色葡萄球菌或銅綠假單胞菌共凝集。
【專利說明】新型乳酸菌以及含有該乳酸菌的組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及新型乳酸菌、其類似物或片段以及含有它們的組合物，尤其用作益生菌和/或用于生理衛(wèi)生和治療中。本發(fā)明尤其涉及新型乳酸菌和/或含有它們的組合物用于治療和/或預(yù)防可以由金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)引起的全部疾病的用途。
[0002]此外，這里描述的開發(fā)提供了 GRAS微生物乳酸菌形式的新穎生物產(chǎn)品，所述生物產(chǎn)品可以用作具有預(yù)防和局部治療皮膚感染和加速慢性傷口治療的特殊作用的抗微生物添加物。
[0003]另外，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的微生物或其類似物或其片段在組合物或藥物產(chǎn)品或化妝產(chǎn)品或醫(yī)用產(chǎn)品中以及用于皮膚或表面消毒劑中的用途。
【背景技術(shù)】
[0004]皮膚的主要功能是保護(hù)皮膚下方組織免受外部環(huán)境影響。因此，它防止致病微生物滲入身體中，這僅為其中功能之一。皮膚和粘膜當(dāng)然由多種微生物棲居，所述微生物經(jīng)常作為共生物以相對(duì)穩(wěn)定的組成在體表生活并支持皮膚的保護(hù)性功能。在理想情況下，具有有利健康作用的細(xì)菌將壓倒同時(shí)存在的有害微生物。如果這種體系失去平衡，實(shí)際上注定不利地影響人的健康和福利 。
[0005]致病微生物具有借助結(jié)合蛋白特異性粘附至表皮結(jié)構(gòu)的能力。例如，已知微生物可借以粘附至纖連蛋白結(jié)構(gòu)的粘附素的存在隨致病性菌株金黃色葡萄球菌一起出現(xiàn)(Bingham, R.J.等人，2008 ;0’ Neill, E.等人，2008)。
[0006]致病微生物通常具有與宿主粘附的較高潛力，這因此解釋了增加的毒性。皮膚頂層中極小損害或其他損傷的存在增加了致病微生物侵入的風(fēng)險(xiǎn)。
[0007]另外，傷口表面的細(xì)菌性感染，尤其在傷口愈合時(shí)，可以導(dǎo)致并發(fā)癥。首先存在急性傷口將不愈合并將導(dǎo)致慢性傷口的風(fēng)險(xiǎn)。這些慢性傷口的微生物區(qū)系是高度復(fù)雜的，并且已知多種微生物可以對(duì)傷口愈合過程產(chǎn)生有害影響(Davies等人，2004 ；Kirketerp-Moller 等人，2008)。
[0008]已經(jīng)鑒定有氧細(xì)菌，例如銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌，作為傷口中的主要病原體。傷口愈合的炎性期正常情況下起到消滅潛在致病性微生物和細(xì)胞再生的作用。然而，不良愈合或難治性傷口經(jīng)常在已經(jīng)遭受免疫抑制并具有降低的炎癥反應(yīng)的患者中出現(xiàn)。這削弱的免疫反應(yīng)可能不再針對(duì)主要傷口細(xì)菌提供有效防御，從而細(xì)菌滲入傷口中并形成菌落，這些菌落組織成生物被膜(James等人，2008)。
[0009]生物被膜不僅抵抗宿主的防御系統(tǒng),還抵抗浮游細(xì)胞(planktonic cell)或微菌落(Fux等人，2005, Sheldon, 2005)。歸因于受損的免疫系統(tǒng)，生物被膜使傷口愈合過程保持在炎性期，結(jié)果是例如存在升高的基質(zhì)金屬蛋白酶(如彈性蛋白酶、纖溶酶和凝血酶)的濃度，這轉(zhuǎn)而降解對(duì)于愈合所必需的生長(zhǎng)因子和它們的受體(Mast和Schultz, 1996)。
[0010]另外，升高的游離氧自由基和炎性細(xì)胞因子濃度嚴(yán)重?fù)p傷宿主細(xì)胞(James等人，2003 ；Moseley 等人，2004)。[0011]現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)描述了能夠消除生物被膜并因此消滅慢性和難治性傷口病因的治療藥。
[0012]根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)通過復(fù)雜的抗生素療法治療傷口感染，所述抗生素療法并不總是導(dǎo)致治愈，因?yàn)榍笆鰝谏锊⒉豁憫?yīng)于這種治療，原因在于它們的適應(yīng)性和抗性機(jī)制，包括它們形成生物被膜的能力。皮膚護(hù)理產(chǎn)品如pH優(yōu)化的沐浴露、洗滌洗液、沐浴油和護(hù)膚液可用于預(yù)防性阻止皮膚損傷，尤其在免疫抑制的患者中，例如，患有異位性皮炎、濕疹、脂溢性皮炎的那些患者中。
[0013]主要病原體金黃色葡萄球菌是可以在無養(yǎng)分情況下存活至多到7個(gè)月的疾病病原體。它在送洗衣物和門把手、燈具開關(guān)、地墊上以及在床榻立面上存活(JJuliaBidder2010)。它在健康人群中不引起癥狀，但是如果某人的免疫系統(tǒng)削弱，如傷口感染的情況下，這種微生物將增殖并造成愈合不良的炎癥、皮膚潰瘍、癤、肺部感染、尿路感染和致命性血液中毒、眼部感染、中耳感染。這種感染可以蔓延至實(shí)際上任何器官。某些因素可以促進(jìn)金黃色葡萄球菌感染，例如，削弱的免疫系統(tǒng)、糖尿病、先前存在的皮膚損傷(脫皮或神經(jīng)性皮炎)、皮膚損傷(例如，由于事故、手術(shù)、插管)、患有褥瘡的老年人和臥床患者、其自身皮膚為微生物感染的形成提供潮濕儲(chǔ)存地的肥胖患者。
[0014]抗生素甲氧西林不再有效對(duì)抗金黃色葡萄球菌的耐甲氧西林菌株(MRSA)。在實(shí)踐中這意味這些菌株對(duì)三種或更多種抗生素多重耐藥。僅所謂訂制抗生素(reserveantibiotic)現(xiàn)在有助于對(duì)抗這些菌株。德國(guó)門診部估計(jì)治療MRSA患者的成本每天增加1600 至 4300 歐元(Julia Bidder2010)。
[0015]銅綠假單胞菌是另一個(gè)在院內(nèi)感染中頻繁遭遇并因其代謝和其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)而具有多重抗生素耐藥的主要病原體。銅綠假單胞菌占據(jù)幾乎10%的全部醫(yī)院感染并且是德國(guó)最常見的院內(nèi)微生物之一。由這些細(xì)菌引起的疾病譜是廣泛的。溶血能力是這種細(xì)菌的首要引發(fā)因子之一，同時(shí)產(chǎn)生細(xì)菌的多種致病性因素如外毒素A(ADP核糖基轉(zhuǎn)移酶)和細(xì)胞毒素外切酶S和外切酶U也是如此。最常見表現(xiàn)是肺炎伴發(fā)囊性纖維化，這可能在免疫抑制患者和AIDS患者中尤其嚴(yán)重。也可能誘發(fā)尿路感染、小腸結(jié)腸炎、腦膜炎、外耳炎(者游泳耳病”泳、燒傷感染或隱形眼鏡使用者中的角膜炎。
[0016]通常使用乳酸菌作為益生菌以保護(hù)對(duì)抗疾病病原體引起的胃腸道疾病，因?yàn)槌樗嶂猓鼈兘?jīng)常產(chǎn)生抗菌物質(zhì)。這些乳酸菌(乳桿菌目、乳酸桿菌或乳酸菌)形成一個(gè)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌類別，它們總是厭氧的或大多情況下耐氧并且特征在于它們將糖降解成乳酸(乳酸發(fā)酵)。乳桿菌目(Lactobacillales)包括乳桿菌科(Lactobacillaceae)、氣球菌科(Aerococcaceae)、肉桿菌科(Carnobacteriaceae)、腸球菌科(Enterococcaceae)、明串珠菌科(Leuconostocaceae)和鏈球菌科(Streptococcaceae)。兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)物種以前劃歸為乳酸桿菌(雙歧乳桿菌(Lactobacillusbifidum),但是根據(jù)如今可獲得的信息,它在系統(tǒng)進(jìn)化與該目并不密切相關(guān)。然而，就代謝而言，仍將它作為乳酸菌對(duì)待。乳酸菌也在食品工業(yè)中十分重要，在食品工業(yè)中，它們用來生產(chǎn)乳產(chǎn)品，但是也可能作為病害生物出現(xiàn)(例如，在啤酒釀造廠中)。將乳酸菌劃歸為非致病性。
[0017]現(xiàn)有技術(shù)中也已知益生細(xì)菌用于餐具洗滌劑的用途(例如，W02010/130563)，因此，可以減少餐具洗滌對(duì)皮膚的不利影響。它還具有皮膚護(hù)理作用。
[0018]微生物在化妝性皮膚治療藥中的用途已經(jīng)是已知的。因此，例如，US6，790，434描述了這類微生物在化妝性皮膚治療藥中與胞外基質(zhì)的植物提取物組合來對(duì)抗UV引起的皮膚損傷的用途。然而，該來源沒有公開這些微生物在洗滌劑和清潔劑中的用途。
[0019]此外,某些芽孢桿菌屬(Bacillus species)物種在衛(wèi)生清潔劑中的用途是已知的。因此，W097/25865描述了芽孢桿菌屬物種在衛(wèi)生清潔劑中的用途，因?yàn)樗鼈兎乐共≡w繁殖并能夠降解有機(jī)污垢。然而，該專利沒有描述對(duì)皮膚具有有益作用的微生物的用途。
[0020]同時(shí)，益生細(xì)菌口服劑型在W02005/117921中公開，其中該劑型含有至少一個(gè)屬的益生菌微生物，其中向劑型和/或細(xì)菌提供含有纖維素醚的包衣。
[0021]本發(fā)明的目的是提供用于急性和預(yù)防性治療傷口感染和皮膚疾病和/或皮膚刺激，而沒有現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn)或不足的藥物或組合物。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0022]上述發(fā)明目的是由獨(dú)立權(quán)利要求實(shí)現(xiàn)的。優(yōu)選的實(shí)施方案源自從屬權(quán)利要求。
[0023]本發(fā)明涉及一種屬于乳酸菌類的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中所述微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或其組合可以與至少一種致病微生物共凝集，其中所述致病微生物選自包含金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的組。完全令人驚訝的是，可以提供尤其與感染性細(xì)菌菌株凝集的乳酸菌，特別是通過與它們凝集并因此降低微生物的局部濃度、抑制它們的生長(zhǎng)或甚至殺死它們或防止形成生物被膜。這構(gòu)成與現(xiàn)有技術(shù)的差異，與現(xiàn)有技術(shù)的傳統(tǒng)治療選項(xiàng)相比具有一些重要優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)椴恍枰股刂委?，取而代之可以使用致病性乳酸菌。另外，與生產(chǎn)抗生素和以下治療成本相比，特定乳酸菌的生產(chǎn)構(gòu)成價(jià)廉替代品。用專門針對(duì)這些微生物所衍生并且不造成這些微生物進(jìn)一步任何耐藥的乳酸菌治療是對(duì)抗致病微生物的戰(zhàn)斗中的獨(dú)特方案。
[0024]在本發(fā)明的意義下，共凝集作用描述了遺傳不同的細(xì)菌物種彼此的特殊粘附或結(jié)合，而共粘附尤其指遺傳相同的細(xì)菌物種的粘附或結(jié)合。因此，就此而言，甚至更令人驚訝的是，乳酸菌可以與病原菌結(jié)合，由此尤其是通過特異性結(jié)合導(dǎo)致共凝集。
[0025]本發(fā)明尤其涉及一種微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中共凝集所述至少一種致病微生物的能力甚至在生物、化學(xué)或物理處理后仍然存在。采用優(yōu)選的微生物或其片段、衍生物、突變體或組合，共凝集所述至少一種致病微生物的能力優(yōu)選地甚至在約3和約8之間的pH值下存在。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該微生物或其片段、衍生物、突變體或組合尤其具有抑制所述至少一種致病微生物的生物被膜的形成的能力。
[0026]尤其優(yōu)選該微生物或其片段、衍生物、突變體或組合選自乳酸乳桿菌(Lactobacillus lactis)、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、詹氏乳桿菌(Lactobacillus jensenii)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、食淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)、約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、戍糖乳桿菌(Lactobacillus pentosus)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、彎曲乳桿菌(Lactobacillus curvatus)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、短乳桿菌(Lactobacillus brevis)、布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri)、食果糖乳桿菌(Lactobacillus fructivorans)、希氏乳桿菌(Lactobacillus hilgardii)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、羅伊乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、綠色乳桿菌(Lactobacillus viridescens)、兩歧雙歧桿菌或其類似物、衍生物、片段或突變體。
[0027]可以使用根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中所述微生物選自以下已經(jīng)保藏于德國(guó)微生物和細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心并配有以下保藏編號(hào):DSM25906、DSM25907、DSM25908、DSMZ25909、DSM25910、DSM25911、DSM25912、DSM25913、DSM25914 和 DSM Z25915 的微生物。
[0028]在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包含至少一種微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合的組合物。在本發(fā)明的意義下，術(shù)語“組合物”可以作為術(shù)語“制劑”的同義詞使用。優(yōu)選的組合物也可以含有選自化妝品可用溶媒或賦形劑、可藥用溶媒或賦形劑或皮膚學(xué)可用溶媒或賦形劑的溶媒或賦形劑。
[0029]所述組合物可以優(yōu)選地為粉劑、棒劑(stick)、氣溶膠噴霧劑、泵式噴霧劑、乳膏劑、分散體劑(dispersion)、乳劑、泡沫劑、軟膏劑、噴霧劑、氣溶膠劑、粉劑、棒劑(stick)、衣物劑(cloths)、洗劑、混懸劑、溶液劑(solution)、凝膠劑形式或在基底上。尤其優(yōu)選所述組合物為護(hù)膚霜、皮膚洗滌洗劑或皮膚軟膏劑的形式。
[0030]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物可以以固體、液體、粘稠的形式或作為氣溶膠存在。另外，優(yōu)選的護(hù)膚霜、皮膚洗滌洗劑或皮膚軟膏尤其可以以固體、液體或粘稠的形式或作為氣溶膠存在。
[0031]優(yōu)選的組合物也可以優(yōu)選地包含益生菌、防腐劑或其他抗菌物質(zhì)，因而在優(yōu)選的組合物中，它是藥用、獸用、化妝品或食品組合物。
`[0032]在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物還優(yōu)選地包含促凈劑物質(zhì)、表面活性表面活性劑、酶、有機(jī)和/或無機(jī)過氧化合物、過氧化物激活劑、水可溶混性有機(jī)溶劑、掩蔽劑、電解質(zhì)、pH調(diào)節(jié)劑、增稠劑、去污劑、熒光增白劑、發(fā)灰抑制劑、染料轉(zhuǎn)移抑制劑、泡沫調(diào)節(jié)劑和/或其他著色劑。
[0033]此外，可以優(yōu)選的是所述組合物包含選自以下組中的至少一種物質(zhì):
[0034]a.對(duì)皮膚狀況具有積極影響的有效成分，尤其是對(duì)老年皮膚具有積極影響的有效成分，特別是與生物醌(尤其是泛醌Q10)、肌酸、肌酐、肉堿、生物素、異黃酮、心磷脂、硫辛酸、抗凍蛋白、牛蒡苷、啤酒花和啤酒花-麥芽提取物組合時(shí)；
[0035]b.用于重建結(jié)締組織的促進(jìn)劑，尤其是異黃酮類化合物；
[0036]c.支持干性皮膚上的皮膚功能的有效成分，尤其是維生素C、生物素、肉堿、肌酸、丙酸、綠茶提取物、桉油、脲和無機(jī)鹽(尤其是NaCl、海洋礦物質(zhì)和滲壓劑)；
[0037]d.用于減輕炎性皮膚狀態(tài)和/或?qū)ζ洚a(chǎn)生積極影響的有效成分，尤其是絹毛欖仁苷(sericoside)、多種甘草提取物、甘草查爾酮(尤其是甘草查爾酮A)、水飛薊素、水飛薊賓-磷脂復(fù)合物(siIyphos)和/或右旋泛醇。
[0038]優(yōu)選的是所述微生物在該組合物中以滅活、活性或無活性形式存在。此外，所述微生物可以在組合物中優(yōu)選以封裝、噴霧干燥和/或凍干的形式存在。還優(yōu)選所述微生物尤其以細(xì)胞溶解物的形式存在于該組合物中。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述微生物在該組合物中尤其以某個(gè)量存在，所述量是按重量計(jì)0.0Ol重量％至10重量％、優(yōu)選地0.005重量％至5重量％、特別優(yōu)選地0.01重量％至3重量％。
[0039]本發(fā)明還涉及一種用于鑒定和/或選擇具有與選自包含金黃色葡萄球菌或銅綠假單胞菌的組中的致病微生物共凝集的特性的乳酸菌的方法，其中所述方法至少包括以下步驟:
[0040]a.孵育所述致病微生物以形成生物被膜；
[0041]b.添加待研究的乳酸菌并孵育以形成在致病微生物和待研究的乳酸菌之間形成共凝集的混合物；
[0042]c.通過移走上清液分離未結(jié)合的乳酸菌；以及
[0043]d.就共凝集的乳酸菌而言測(cè)定生物被膜。
[0044]這種方法可以優(yōu)選地還包括以下額外的步驟:
[0045]-研究致病微生物對(duì)生物被膜的抑制，由此在孵育形成生物被膜的致病微生物期間添加待研究的乳酸菌。
[0046]另外，這種方法可以在優(yōu)選實(shí)施方案中由以下方法步驟補(bǔ)充:
[0047]-通過與不添加待測(cè)試 乳酸菌時(shí)的對(duì)照相比來測(cè)量光密度的方式，將通過移除未結(jié)合細(xì)胞的生物被膜的形成定量。
[0048]在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及所述組合物的用途，優(yōu)選用于生產(chǎn)治療或預(yù)防以下皮膚疾病的藥用藥物、醫(yī)用產(chǎn)品或化妝品，尤其是葡萄球菌的皮膚綜合征、觸染性膿皰病、淺表毛囊炎、膿皰化、皮膚膿腫、癤、癰、膿腫、蜂窩織炎、干性皮膚、癢性皮膚、發(fā)紅皮膚、炎性皮膚、極度油性皮膚、座瘡、糖尿病足、褥瘡、神經(jīng)性皮炎、急性淋巴結(jié)炎、藏毛囊腫、藏毛瘺、藏毛竇、藏毛瘺、藏毛囊腫、皮膚和皮下組織的局部感染、膿皮病、膿性皮炎、膿毒性皮炎、化膿性皮炎、皮炎和濕疹、異位性濕疹、脂溢性濕疹、尿布皮疹、過敏性接觸性皮炎、脂溢性皮炎、剝脫性皮炎、中毒性接觸性皮炎、慢性單純性苔蘚、癢疹、瘙癢癥和其他形式的皮炎、丘疹鱗屑性皮膚疾病、銀屑病、副銀屑病、皮膚附屬物的疾病、脫發(fā)瘢痕化、脫發(fā)性毛囊炎以及皮膚和皮下組織的其他疾病、下肢潰瘍、皮膚損傷、癢病和瘡痂、事故或手術(shù)后傷口。
[0049]在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述組合物可以用來生產(chǎn)用于處理表面的清潔劑或消毒劑。此外，所述組合物可以也有利地用來生產(chǎn)在生理衛(wèi)生、醫(yī)用產(chǎn)品和預(yù)防領(lǐng)域中使用的產(chǎn)品O
[0050]所述組合物優(yōu)選用來生產(chǎn)施加至皮膚表面的洗劑、震蕩合劑(shake mixture)、粉劑、水凝膠劑、乳膏劑、克勒薩(cresa)、軟膏劑、脂性軟膏劑或糊膏劑。
[0051]已經(jīng)有利地發(fā)現(xiàn)所述組合物可以優(yōu)選地用來生產(chǎn)對(duì)局部治療皮膚感染和加速慢性傷口愈合具有特殊作用的抗微生物添加物。所述組合物可以優(yōu)選地預(yù)防性或治療性地使用。另外，所述組合物可以優(yōu)選地局部施加。
[0052]在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及用于衛(wèi)生處理的試劑盒(kit)，所述試劑盒含有微生物或所述組合物以及生理衛(wèi)生裝置或設(shè)備、沖洗液和/或糊膏劑。
[0053]在優(yōu)選的應(yīng)用形式中，本發(fā)明可以用作針對(duì)動(dòng)物，尤其是狗、馬、貓和嚙齒類動(dòng)物(兔、野兔、倉(cāng)鼠、豚鼠)和商品動(dòng)物如雞、豬和牛的噴霧劑或洗滌液的抗微生物添加物，以便顯著地減少皮膚、軟毛和羽毛上負(fù)載的微生物。[0054]本發(fā)明因此也涉及微生物，尤其是乳酸菌、其類似物、突變體、衍生物或片段以及含有前者的組合物的用途，尤其是用于治療或預(yù)防嬰兒、學(xué)步兒童、兒童、健康人、老年人、免疫抑制人群、病理性皮膚變化(尤其是葡萄球菌性燙傷樣皮膚綜合征、觸染性膿皰病、淺表毛囊炎、膿皰化、皮膚膿腫、癤(癤病)、癰(膿腫)、蜂窩織炎、干性皮膚、發(fā)癢皮膚、發(fā)紅皮膚、炎性皮膚、極度油性皮膚、座瘡、糖尿病足、褥瘡、神經(jīng)性皮炎、急性淋巴結(jié)炎、藏毛囊腫(包括潛毛性瘺、藏毛竇、尾骨瘺、尾骨囊腫)、皮膚和皮下組織的其他局部感染(例如，膿皮病、膿性皮炎、膿毒性皮炎、化膿性皮炎)；還有多種形式的皮炎和濕疹(例如，異位性濕疹、脂溢性濕疹、尿布皮疹、過敏性接觸性皮炎、脂溢性皮炎、剝脫性皮炎、中毒性接觸性皮炎、慢性單純性苔蘚、癢疹、瘙癢癥和其他形式的皮炎)的人群的皮膚疾??；它們也可以用來治療丘疹鱗屑性皮膚疾病(銀屑病、副銀屑病)、皮膚附屬物的疾病(例如，脫發(fā)伴發(fā)瘢痕化、包括脫發(fā)性毛囊炎)、以及皮膚和皮下組織的其他疾病(例如，下肢潰瘍)、具有先前存在的皮膚損傷(例如，干性皮膚)的人群、皮膚損傷(例如，瘡痂、傷口、包括事故或手術(shù)后的那些)或用于商業(yè)動(dòng)物和家用寵物中。
[0055]優(yōu)選的微生物即是如下的微生物，其屬于乳酸菌類或其類似物、衍生物、突變體或片段并具有共凝集能力，尤其是優(yōu)選地特異性結(jié)合選自金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌群的至少一種致病微生物。完全令人驚訝的是，優(yōu)選的乳酸并不導(dǎo)致共生性皮膚細(xì)菌或微生物如杰氏棒狀桿菌(Corynebacterium jeikeium)、藤黃微球菌(MicrococcusIuteus)、痤瘡丙酸桿菌屬(Propionibacterium acnes)座瘡或尤其是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)的任何共凝集或結(jié)合。例如，表皮葡萄球菌是皮膚菌群的幾乎不引人注意的共生生物。在皮膚內(nèi)或表面存在的各種微生物的相互作用中，這個(gè)物種存在于許多哺乳動(dòng)物的健康皮膚菌群中并且與這些哺乳動(dòng)物處于微生物平衡中-至少在健康皮膚上如此。因此，在本發(fā)明的范圍內(nèi)將優(yōu)選不影響這種細(xì)菌(例如，因凝集而影響)并且因此不影響生理衛(wèi)生中以靶向方式使用的其他微生物。
[0056]換而言之，優(yōu)選的乳酸菌特異性與病原菌金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌共凝集。沒有該類型的構(gòu)思來源自現(xiàn)有技術(shù)?，F(xiàn)有技術(shù)僅描述了也顯示與共生微生物結(jié)合的乳酸菌，從而它們不能在不造成副作用的情況下使用。與這些相反，優(yōu)選的乳酸菌不顯示與占據(jù)皮膚菌群的共生性皮膚細(xì)菌 或其他致病微生物的任何結(jié)合或共凝集。根據(jù)另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明乳酸菌不具有與皮膚上共生性微生物結(jié)合的能力。
[0057]本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，健康皮膚被微生物如細(xì)菌和真菌以共生或互助形式稠密占據(jù)。這些微生物是皮膚表面的天然組分并且由術(shù)語“皮膚菌群”概括。隸屬于術(shù)語皮膚菌群的微生物是保護(hù)皮膚本身和身體完好無損免受致病生物作用的重要前提并且是生物屏障的部分。在這方面，特別有利的是，優(yōu)選的乳酸菌不導(dǎo)致皮膚菌群失去平衡，反而僅與病原菌金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌結(jié)合和/或與它們共凝集。
[0058]微生物尤其具有特定粘附特性并且與致病微生物金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌形成共凝集。然而，還優(yōu)選乳酸菌也特異性與葡萄球菌屬(Staphylococcus)或假單胞菌屬(Pseudomonas)微生物的其他致病物種共凝集或至少與它們相互作用。
[0059]并非所有本發(fā)明的微生物都具有防止生物被膜形成的特性。鑒于以下事實(shí):優(yōu)選的乳酸菌與病原菌共凝集和/或相對(duì)于它們具有粘附特性，致病微生物可以被掩蔽，這導(dǎo)致許多致病因素的隱匿并且因此導(dǎo)致細(xì)菌負(fù)荷的降低和/或?qū)е乱种粕锉荒ば纬桑纾ㄟ^掩蔽和/或結(jié)合病原菌的相應(yīng)表面粘附蛋白。
[0060]雖然本發(fā)明具體涉及乳酸菌群，但是仍存在專利申請(qǐng)所教導(dǎo)內(nèi)容的一致性。要求保護(hù)的微生物具有共同特性或作用。結(jié)構(gòu)或功能公共性的總和導(dǎo)致共凝集金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌、皮膚不結(jié)合共生性微生物和防止生物被膜形成和/或破壞金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌建立生物被膜之間的功能關(guān)系這些共同特征因此不構(gòu)成任何特征總和，反而背離所提到的要求保護(hù)的微生物的共同特征，所述共同特征有利地允許和表征用于這種目的的微生物的適用性。
[0061]優(yōu)選的微生物，尤其乳酸菌，選自包含以下微生物的組:乳酸乳桿菌、瑞士乳桿菌、詹氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、食淀粉乳桿菌、德氏乳桿菌、干酪乳桿菌、卷曲乳桿菌、加氏乳桿菌、約氏乳桿菌、副干酪乳桿菌、戊糖乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、彎曲乳桿菌、植物乳桿菌、短乳桿菌、布氏乳桿菌、食果糖乳桿菌、希氏乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、羅伊乳桿菌、綠色乳桿菌、兩歧雙歧桿菌或其類似物、衍生物、片段或突變體；這些微生因彼此的功能關(guān)系相關(guān)以形成本發(fā)明的統(tǒng)一構(gòu)思，從而它們共有多種特性和/或作用，即它們特異性與病原菌金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌共凝集，不結(jié)合皮膚和/或粘膜的任何共生性微生物并且還防止金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌形成生物被膜。這些乳酸菌尤其包括選自以下微生物的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，所述微生物以代碼編號(hào) DSM25906、DSM25907、DSM25908、DMS25909、DSM25910、DSM25911、DSM25912、DSM25913、DSM25914和DSM Z25915保藏于德國(guó)微生物和細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心。完全令人驚訝的可能鑒定到具有相同有利特性的一組乳酸菌。還未描述過綜合全部這些特性，同時(shí)還無致病性并且不對(duì)皮膚天然菌群造成任何損傷或影響的細(xì)菌，尤其乳酸菌。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，施加優(yōu)選的乳酸菌，無論是否作為組合物，均防止金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌結(jié)合和侵入宿主細(xì)胞。這種情況的原因是迄今未知的，但是應(yīng)當(dāng)由額外的實(shí)驗(yàn)確定。
[0062]優(yōu)選的微生物、尤其乳酸菌的另一個(gè)令人驚訝的優(yōu)點(diǎn)是它們也可以預(yù)防性使用。優(yōu)選的微生物、尤其乳酸菌的另一個(gè)令人驚訝的優(yōu)點(diǎn)是它們也可以預(yù)防性使用。換而言之，乳酸菌和/或含有它們的組合物可以預(yù)防性地施加至存在風(fēng)險(xiǎn)的皮膚區(qū)域和/或施加至存在風(fēng)險(xiǎn)的人類或動(dòng)物群體，而不對(duì)皮膚`或皮膚菌群造成任何損傷。例如，已知開放傷口可能在必須長(zhǎng)時(shí)間臥床的人中在壓迫點(diǎn)處形成。初步實(shí)驗(yàn)已經(jīng)顯示，預(yù)防性處理這些區(qū)域可以防止開放傷口的形成并且可以至少保護(hù)免遭由金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌引起的額外感染
[0063]在本發(fā)明的意義上，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將皮膚具體理解為是人類或動(dòng)物身體的外部器官，所述外部器官起到界定內(nèi)部與外部的作用。在本發(fā)明意義下，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，皮膚區(qū)域包括皮膚頂層組分、真皮(或真皮)或皮下組織。根據(jù)本發(fā)明、皮膚的頂層(表皮)也以下層由組成:角質(zhì)層、透明層、顆粒層(粒層)、棘細(xì)胞層(棘層)和/或基底層。對(duì)這個(gè)區(qū)域內(nèi)細(xì)胞的每種調(diào)節(jié)構(gòu)成本發(fā)明意義下的皮膚面積內(nèi)的細(xì)胞調(diào)節(jié)。也可以作為本發(fā)明皮膚區(qū)域的組分的真皮優(yōu)選地由結(jié)締組織纖維組成并且發(fā)揮作用以向皮膚提供營(yíng)養(yǎng)和錨定作用。邊界區(qū)域內(nèi)的毛細(xì)血管化血管系統(tǒng)連同表皮也屬于本發(fā)明意義下的皮膚區(qū)域，皮脂腺和汗腺(sudoriferous gland)或汗腺(sweat gland)也是如此。本發(fā)明意義下的真皮可以再分成乳頭層和網(wǎng)層。此外，本發(fā)明意義下的皮膚區(qū)域可以是任何區(qū)域，即，在皮下組織(皮下層)或在身體或任何器官或器官部分中的組織內(nèi)部或表面上的任何位置。區(qū)分器官與周圍結(jié)構(gòu)的組織屏障可以是本發(fā)明意義下的皮膚。此外，本發(fā)明的皮膚區(qū)域概念也可以理解成包括皮膚附屬物如毛發(fā)、皮脂腺、豎毛肌、指甲、趾甲和汗腺，尤其外分泌汗腺和頂泌汗腺，還有乳腺。偏離正常的任何細(xì)胞調(diào)節(jié)，尤其細(xì)胞生長(zhǎng)，可以用本發(fā)明的藥物處理，優(yōu)選地，而不限于皮膚外部區(qū)域。然而，本發(fā)明意義下的皮膚區(qū)域也可以包括溝部皮膚，如手指或足趾上的那部分皮膚或外皮和與之相關(guān)的皮膚附屬物。
[0064]皮膚的乳酸菌耐受性是成功治療皮膚感染和傷口或其中存在來自葡萄球菌群或假單胞菌群的微生物的其他疾病或癥狀中細(xì)菌性感染的前提。
[0065]優(yōu)選的組合物可以尤其含于皂；洗液、粉劑、合成洗滌劑，泡沫劑、棒劑、乳劑、噴霧劑、乳膏劑、凝膠劑、洗發(fā)液、液體皂或除臭劑中。還優(yōu)選組合物特別作為益生菌使用，其中可以將所述益生菌添加至洗滌劑；沖洗劑；清潔劑或消毒劑(例如，皂、粉劑、糊膏劑、溶液劑、乳劑、洗劑)；清潔和/或消毒毛巾；洗發(fā)劑；用于皮膚、毛發(fā)和/或解剖刀用的沖洗液或敷貼；乳膏劑；軟膏劑；皮膚清潔洗液和/或皮膚護(hù)理洗液；用于眼、耳、口、鼻部或喉中或其上的溶液劑(例如，作為滴劑、噴霧劑、沖洗液)和/或可以摻入繃帶或傷口敷料內(nèi)以抑制致病微生物的形成、結(jié)合它們以將它們作為聚集物除去和/或抑制它們或殺死它們并因而降低它們的數(shù)目。
[0066]完全令人驚訝的是，本發(fā)明組合物的優(yōu)點(diǎn)可以通過將它并入前述藥用形式中再次改進(jìn)。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉將本發(fā)明組合物導(dǎo)入溶媒物質(zhì)的其他制劑構(gòu)思，例如，如用于皮膚應(yīng)用的乳劑或其他產(chǎn)品，例如，可以優(yōu)選無水或含水的液體形式，其中含水形式可以根據(jù)本發(fā)明劃分成單相體系和多相體系。此外，可以為無水或含水的半固態(tài)形式，其中再次可能將它們劃分成單相體系和其中含水半固態(tài)形式也可能存在的多相體系。也可以優(yōu)選地使用親脂或親水的固態(tài)形式。除上文已經(jīng)提到的那些形式之外，這類形式的例子還包括例如基于脂肪的軟膏劑、泡沫劑、粉劑、棒劑、凝膠劑、乳膏劑、水分散體凝膠劑、水性乳劑、洗劑、軟膏劑、噴霧劑和乳劑。本領(lǐng)域 技術(shù)人員在此意識(shí)到，這類溶媒物質(zhì)可以首先基于皮膚上的感覺區(qū)分成豐富/高貴的那些和清新及淡雅的那些，并且其次可以就粘度而言區(qū)分成具有低粘度的那些和具有高粘度的其他，其中水凝膠或保濕霜和/或0/W乳液或W/0乳液具有高粘度。當(dāng)使用液態(tài)施加形式時(shí)，如上文解釋，它們可以再次劃分成含水和無水體系。對(duì)于無水體系，非極性體系、無乳化劑的極性體系和含乳化劑的極性體系是特別優(yōu)選的。對(duì)于含水體系，單相體系如溶液和微乳液是優(yōu)選的；對(duì)于多相體系，多相乳液W/0乳液或0/W乳液是優(yōu)選的。對(duì)于固態(tài)/液態(tài)體系，優(yōu)選的形式包括懸液或液/固/液體系如懸液體系/乳液體系。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉供應(yīng)這類溶媒的各種可能。對(duì)于0/W乳液，優(yōu)選的藥用主導(dǎo)物質(zhì)包括0/W乳化劑、ff/Ο乳化劑、液態(tài)親水成分和液態(tài)親脂成分。對(duì)于W/0乳液，優(yōu)選的藥用主導(dǎo)物質(zhì)包括W/0乳化劑、0/W乳化劑、液態(tài)和半固態(tài)親脂成分、凝膠形成劑、液態(tài)親水成分和/或鹽。
[0067]對(duì)于半固態(tài)的優(yōu)選溶媒物質(zhì)，無水體系以及含水體系對(duì)各種應(yīng)用都是優(yōu)選的。無水體系可以由無乳化劑的非極性體系或極性體系如脂凝膠、油凝膠或聚乙二醇凝膠組成，和/或可以由基于0/W吸收基質(zhì)或W/0吸收基質(zhì)的含乳化劑的非極性體系組成。含水體系可以優(yōu)選地由單相體系如水凝膠或微乳凝膠或多相體系如0/W乳膏、ff/Ο乳膏或兩性體系組成。優(yōu)選的半固態(tài)制備物是用于在室溫和皮膚溫度之間的溫度范圍施加至皮膚或用于施加粘膜的可鋪展制備物，其中它們具有局部用作用，在此它們輸送有效成分或?qū)ζつw具有軟化或保護(hù)作用。優(yōu)選的制備物包括更狹義上的軟膏劑、乳劑、凝膠劑和/或糊膏劑。除軟膏劑、乳劑、凝膠劑和糊膏劑之外，油凝膠也可以作為半固態(tài)透明單相體系使用。本領(lǐng)域技術(shù)人員從美國(guó)專利6，187，323或Aiache等人，2001中知曉用于配制半固態(tài)體系的各種無水混合物，包括，例如，油凝膠和水凝膠的混合物，其可以稱作為本發(fā)明的大凝膠。此外，水分散體凝膠或各種脂類可以用來提供本發(fā)明的溶媒物質(zhì)。當(dāng)使用脂類時(shí)，有機(jī)硅化合物和有機(jī)碳化合物可以用來在分散體系中供應(yīng)脂質(zhì)相，而例如可以借助不可水解脂類或可水解脂類(甘油)或蠟酯供應(yīng)有機(jī)碳化合物。這類體系的優(yōu)點(diǎn)包括改進(jìn)的皮膚柔順性和彈性增加以及取決于脂質(zhì)組成，具有增加物質(zhì)釋放及其滲透效果的能力。例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道他們必須使用哪種脂質(zhì)以在某個(gè)時(shí)間參數(shù)內(nèi)部增加或減少滲透。
[0068]額外的優(yōu)選溶媒物質(zhì)包括例如水分散體凝膠和/或微膠囊、微球?；驁F(tuán)粒(大珠)。提到的溶媒起到增加穩(wěn)定性并確保皮膚上最短施加時(shí)間的作用。優(yōu)選的半固態(tài)單相體系可以借助以下藥用主導(dǎo)物質(zhì)制備:液態(tài)親水成分尤其水和(多元)醇、親水性成凝膠物質(zhì)、成鹽物質(zhì)和W/0乳化劑、0/W乳化劑、液態(tài)、半固態(tài)和固態(tài)親脂成分以及親脂性成凝膠物質(zhì)和助洗液。本領(lǐng)域技術(shù)人員將將知道他們必須怎樣組合這些物質(zhì)以實(shí)現(xiàn)某種效果。
[0069]本領(lǐng)域技術(shù)人員將也指導(dǎo)用于皮膚產(chǎn)品的其他藥物制品。根據(jù)本專利申請(qǐng)，例如，由Daniels和Knie在JDDG; 2007，5:367-383在引文中公開的全部藥用化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道不同藥物制品在皮膚中具有不同作用并且他們將以不同的量施加植物制劑組合物至皮膚。將JDDG;2007，5:367-383的內(nèi)容引入根據(jù)本專利申請(qǐng)所教導(dǎo)的公開內(nèi)容。本發(fā)明的優(yōu)選產(chǎn)品包括例如親脂性或親水性溶液、親脂性或親水性乳液、親脂性或親水性懸液、專用液體制劑、疏水性或親水性軟膏、水乳化軟膏、親脂性、親水性或兩性乳膏劑、水凝膠、疏水性或親水糊膏劑和/或散劑。
[0070]實(shí)驗(yàn)已經(jīng)顯示，優(yōu)選的乳酸菌尤其乳桿菌屬細(xì)胞與金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌細(xì)胞接觸時(shí)形成共凝集物。由于形成共凝集物，所以尤其阻止金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌滲入皮膚傷口中，或沉降在皮膚上并形成菌落，且建立、粘附和形成生物被膜。金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌細(xì)胞，尤其它們的細(xì)胞表面，被乳酸菌尤其乳桿菌屬細(xì)胞掩蓋，從而金黃色葡萄球菌 和/或銅綠假單胞菌細(xì)胞優(yōu)選地不再能夠與皮膚上皮細(xì)胞結(jié)合。由于阻止金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌與皮膚上皮細(xì)胞結(jié)合，因此炎癥反應(yīng)不能出現(xiàn)和/或減少或防止皮膚刺激。金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌細(xì)胞，尤其它們的細(xì)胞表面，被乳酸菌尤其乳桿菌屬細(xì)胞結(jié)合。隨后與單獨(dú)存在或處于小凝集物中的金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌細(xì)胞相比，形成了通?？梢愿菀缀透咝矣行У貜钠つw、傷口和表面(軟毛、羽毛、鋼、塑料和金屬表面)移除(洗掉)的由乳桿菌屬細(xì)胞和/或金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌細(xì)胞組成的細(xì)胞共凝集物。
[0071]在本發(fā)明的意義下，益生微生物包含對(duì)人類和/或動(dòng)物身體具有有利影響的細(xì)胞。優(yōu)選的組合物作為益生組合物使用并含有對(duì)人類和/或動(dòng)物身體具有有利影響的乳酸菌。有利影響可以尤其在于改善皮膚菌群。具體而言，皮膚菌群中不想要的微生物如金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌可以因益生菌微生物與不想要的微生物直接相互作用而被抑制，和尤其因間接相互作用而被抑制，所述間接相互作用基于因益生微生物的表達(dá)產(chǎn)物而抑制不想要的微生物的代謝。實(shí)驗(yàn)已經(jīng)顯示，在通過優(yōu)選的乳酸菌共凝集后，致病微生物金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌不顯示任何生長(zhǎng)，即沒有進(jìn)一步的細(xì)胞物質(zhì)增殖，并且相反，細(xì)胞被掩蔽、在共凝集物中被結(jié)合和/或殺死。
[0072]本文所述的乳酸菌的類似物、突變體、衍生物或片段尤其通過生物、化學(xué)或物理處理所述乳酸菌來產(chǎn)生并且令人驚訝地顯示有利特性，甚至在處理后也是如此。乳酸菌有利地選自乳酸乳桿菌、瑞士乳桿菌、詹氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、食淀粉乳桿菌、德氏乳桿菌、干酪乳桿菌、卷曲乳桿菌、加氏乳桿菌、約氏乳桿菌、副干酪乳桿菌、戊糖乳桿圃、鼠李糖乳桿圃、彎曲乳桿圃、植物乳桿圃、短乳桿圃、布氏乳桿圃、食果糖乳桿圃、希氏乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、羅伊乳桿菌、綠色乳桿菌、兩歧雙歧桿菌或優(yōu)選地選自以下保藏于德國(guó)微生物和細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心的微生物，其中將這些微生物是編為DSM25906、DSM25907、DSM25908、DSMZ25909、DSM25910、DSM25911、DSM25912、DSM25913、DSM25914 和 DSMZ25915。
[0073]另外，令人驚訝的是，甚至在物理、化學(xué)或生物殺死后，乳酸菌、其片段、衍生物、突變體、類似物或組合將仍具有有利特性。例如，優(yōu)選的菌株，即DSM25906、DSM25907、DSM2598、DSMZ25909、DSM25910、DSM25911、DSM25912、DSM25913、DSM25914 和 DSMZ25915 導(dǎo)致病原體的共凝集、防止生物被膜形成并且還不顯示與共生性微生物的任何結(jié)合，甚至在70致病熱處理20分鐘或用超聲處理后也是如此。因此,在組合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，乳酸菌、片段、衍生物、突變體、類似物或其組合可以有利地還以殺死方式存在。該組合物的穩(wěn)定性和使用性可以按這種方式大幅度延長(zhǎng)。另外，該組合物也可以在不允許使用活微生物的應(yīng)用領(lǐng)域中使用。完全令人驚訝的是，在組合物中的乳酸菌可以是滅活、有活性或無活性并且然而仍能夠特異性結(jié)合和/或共凝集于致病微生物?？梢杂欣厥褂媒M合物作為食品、食品添加劑或藥劑、醫(yī)用產(chǎn)品、化妝品、清潔劑添加物和作為動(dòng)物飼料或飲料。
[0074]優(yōu)選的組合物是的一種組合物，其含有具有共凝集至少一種致病微生物的能力的本發(fā)明乳酸菌或類似物、片段、突變體或其衍生物，所述致病微生物選自金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌群，其中所述組合物用于生理衛(wèi)生、物理療法和/或預(yù)防。
[0075]優(yōu)選的微生物是乳酸菌屬或目的代表，即通發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生乳酸的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。本發(fā)明的微生物在一方面以如下事實(shí)為特征:它們具有特異性共凝集選自金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌群的至少一種致病微生物的能力。這種結(jié)合導(dǎo)致形成本發(fā)明微生物和特異性結(jié)合的致病微生物的凝集物`。歸因于共凝集物的形成，后者即致病微生物可以容易地以機(jī)械方式并以靶向方式去除(例如，通過沖洗移除)，這采用過去已知的措施時(shí)是不可能的。與單獨(dú)存在或處于小凝集物中的金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌細(xì)胞相t匕，通?？梢愿菀缀透咝矣行У貜钠つw、傷口和表面(軟毛、羽毛、鋼、塑料和金屬表面)移除(洗掉)的由乳桿菌屬細(xì)胞和/或金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌細(xì)胞組成的細(xì)胞共凝集物。
[0076]在本發(fā)明意義下以及一般在微生物學(xué)和衛(wèi)生、尤其人類微生物學(xué)和生理衛(wèi)生領(lǐng)域，術(shù)語“特異性結(jié)合”或“共凝集”理解為指遺傳上屬于不同細(xì)胞類型的細(xì)胞的相互識(shí)別和粘附。在細(xì)胞表面上，細(xì)菌在此表達(dá)粘附于其他細(xì)胞類型的受體和結(jié)構(gòu)，所述受體和結(jié)構(gòu)用于細(xì)胞之間的粘附。這種粘附作用在致病微生物以及共生性微生物定居中發(fā)揮優(yōu)異作用，從而介入這種粘附作用可能導(dǎo)致深遠(yuǎn)的結(jié)果。歸因于本發(fā)明的微生物具有特異性結(jié)合，尤其共凝集于選自金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌群的至少一種致病微生物的能力的事實(shí)，形成本發(fā)明微生物和致病微生物的凝集物。所產(chǎn)生的共凝集物可以輕易移除，例如，通沖洗表面、皮膚、組織和/或一些其他部位或定居儲(chǔ)存地，從而致病微生物的數(shù)目明確地降低。此外，通過掩蔽致病微生物的表面結(jié)構(gòu)物，防止和/或減少對(duì)表面、皮膚、組織和/或其他部位或定居儲(chǔ)存地的初始/或接續(xù)粘附。如果細(xì)胞彼此結(jié)合并形成凝集物，則這個(gè)過程尤其稱作為凝集。如果僅一個(gè)細(xì)胞種類參與這種凝集物形成，這個(gè)過程稱作為自動(dòng)凝集或自凝集。如果至少兩種不同細(xì)胞種類參與凝集物的形成，這種過程特別稱作為共凝集。
[0077]在本發(fā)明的意義下，“特異性結(jié)合少一種致病微生物”尤其理解為尤其指根據(jù)本發(fā)明微生物結(jié)合來自金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌群的至少一種細(xì)菌。
[0078]根據(jù)本發(fā)明微生物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，它們進(jìn)一步特征在于，與至少一種致病微生物特異性結(jié)合的能力甚至在生物、化學(xué)或物理處理后(例如，在最低70°C下熱處理)仍存在。換而言之，優(yōu)選的乳酸菌可以優(yōu)選地存在于優(yōu)選的組合物中，因?yàn)榕c病原菌，尤其金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌特異性相互作用或結(jié)合的能力不受影響并且因此可以建立結(jié)合或相互作用。
[0079]失活或無活性乳酸菌細(xì)胞可能是特別有利的，因?yàn)闆]有代謝活性可以從這些乳酸菌細(xì)胞發(fā)出。
[0080]根據(jù)乳酸菌的另一個(gè)優(yōu)選特性，除了上文描述的特性，即特異性結(jié)合選自化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)群的至少一種致病微生物的能力之外,本發(fā)明的微生物也可以由熱穩(wěn)定性表征，并且它們可以在高溫、優(yōu)選地至少大約60°C、更優(yōu)選地至少65°C、和甚至更優(yōu)選地至少70°C持續(xù)至少20分鐘、優(yōu)選地25分鐘和更優(yōu)選地至少大約30分鐘的處理下存活，并且就共凝集所述致病微生物的能力而言保持不變。
[0081]在組合物的一 個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，乳酸菌是滅活、有活性或殺死的或是部分和其片段，例如，酶促或機(jī)械裂解產(chǎn)物(例如，弗氏壓碎器等)或代謝產(chǎn)物，因?yàn)樗鼈內(nèi)跃哂泄材?或防止生物被膜形成的能力。還優(yōu)選的乳酸菌以封裝、噴霧干燥和/或凍干形式，即以封裝、噴霧干燥和/或凍干形式在優(yōu)選的組合物中使用。另外，如果乳酸菌以消化細(xì)胞的形式使用，則這可以是有利的。
[0082]另外，如果本發(fā)明乳酸菌與致病微生物特異性結(jié)合的能力甚至在大約3和8之間的PH值下持續(xù)存在，則這是優(yōu)選的。這意味乳酸菌可以處在具有3至8的pH值的培養(yǎng)基中并且仍具有結(jié)合金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌的能力。本領(lǐng)域技術(shù)人員是知曉皮膚具有略酸性PH值的事實(shí)。在這方面，特別有利的是，優(yōu)選的乳酸菌也顯示它們?cè)趯抪H值范圍內(nèi)共凝集金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌的能力。皮膚的PH值可以變動(dòng)，例如，歸因于化妝產(chǎn)品或處于不同身體區(qū)域。優(yōu)選的乳酸菌可以有利地處在寬PH值范圍內(nèi)和/或在優(yōu)選的范圍內(nèi)具有優(yōu)選的特性。優(yōu)選的乳酸菌可以因此有利地在不同身體區(qū)域內(nèi)廣泛使用。
[0083]另外，本文所述的發(fā)明是在蛋白酶處理(例如，胰蛋白酶、胰蛋白酶TPCK處理、溶菌酶、蛋白酶K、鏈霉蛋白酶、凝血酶、PNG酶(PNGase)、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶)后還具有共凝集特性的組合物，尤其是新穎益生菌。
[0084]本發(fā)明的乳酸菌令人驚訝地顯示在約25°C _42°C的寬溫度范圍內(nèi)與金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌共凝集的特性。
[0085]本領(lǐng)域技術(shù)人員因此將明白，在本文以及在本發(fā)明中給出的由此類術(shù)語“約”或“大約”表征的范圍描述中，精確的數(shù)值范圍不需要用“約”或“大約/大約”指明表述，但反而甚至就所示數(shù)值而言向上或向下的微小偏移仍處于本發(fā)明的范圍內(nèi)。[0086]本發(fā)明乳酸菌與所列致病微生物的結(jié)合優(yōu)選地導(dǎo)致抑制這些致病微生物的生長(zhǎng)。
[0087]令人驚訝的是，歸因于致病微生物和本發(fā)明乳酸菌的結(jié)合，作為沉積物存在的凝集物尤其在5至100分鐘后在室溫?zé)o攪拌情況下形成。
[0088]傷口中的有氧細(xì)菌、(主要)病原菌尤其是金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌。傷口愈合的炎性期正常情況下起到消滅潛在致病性微生物和細(xì)胞再生的作用。然而，難治性傷口經(jīng)常在已經(jīng)遭受免疫抑制并具有降低的炎癥反應(yīng)的患者中出現(xiàn)。這縮減的免疫反應(yīng)可能不再擊敗主要傷口細(xì)菌并且因此細(xì)菌滲入傷口中并形成菌落，這些菌落組織成生物被膜。生物被膜不僅抵抗宿主的防御系統(tǒng)，它們還包含浮游細(xì)胞或微菌落。
[0089]在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，優(yōu)選的乳酸菌、其類似物、片段、突變體、衍生物或組合優(yōu)選地具有至少一個(gè)以下特征:a)熱穩(wěn)定性或在生物、化學(xué)和/或物理處理后的穩(wěn)定性或b)抑制金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌形成生物被膜的能力。完全令人驚訝的是，本發(fā)明的乳酸菌甚至在生物、化學(xué)和/或物理處理后將保留它們特異性結(jié)合金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌的能力。
[0090]本發(fā)明乳酸菌的另一個(gè)特性是抑制金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌形成生物被膜的能力。這些細(xì)菌形成極端堅(jiān)韌的生物被膜，所述生物被膜抵抗超聲、去垢劑、蛋白酶或熱并且還抗微生物物質(zhì)。本發(fā)明的微生物尤其具有抑制金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌形成生物被膜的特性。因?yàn)橐种粕锉荒さ男纬?，這些病原菌可以不再定居在生物表面或無機(jī)表面并且因此可以不再造成疾病。
[0091]在本發(fā)明的意義下，短語“抑制金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌形成生物被膜”因此理解為尤其是指下述特性:本發(fā)明的乳酸菌以這種方式與金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌相互作用，即與它們結(jié)合或否則以它們不再可以形成生物被膜的方式影響它們。
[0092]根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，本`發(fā)明的微生物可以因此具有至少一個(gè)所述特性，即抗生物、化學(xué)和/或物理處理的抵抗性；耐熱性；與金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌特異性結(jié)合、共凝集的能力。優(yōu)選的特性組合包括，例如，抗生物、化學(xué)和/或物理處理的抵抗性、耐熱性和與金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌結(jié)合的能力，或者抗生物、化學(xué)和/或物理處理的抵抗性、耐熱性和抑制金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌形成生物被膜。
[0093]在本明的情況下，如已經(jīng)陳述的，表述“屬于乳酸菌屬或類的微生物”也理解成包括仍具有本發(fā)明所述的本發(fā)明微生物的特征和/或特征或特性的衍生物、突變體、類似物或其片段。本發(fā)明的乳酸菌優(yōu)選地是細(xì)菌物種加氏乳桿菌、卷曲乳桿菌和ingluviei乳桿菌(Lactobacillus ingluviei)。
[0094]因此，要求保護(hù)前述微生物的“突變體或衍生物”，前述微生物屬于乳酸菌屬、尤其是乳酸桿菌物種的突變體或衍生物，并且具有與本發(fā)明情況下對(duì)本發(fā)明乳酸菌并尤其對(duì)相同菌株所要求保護(hù)的特征相同的特征。這將至少指特異性共凝集選自金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌群的至少一種致病微生物的能力。此外，它優(yōu)選具有至少一個(gè)以下特征:(i)特異性結(jié)合能力對(duì)生物、化學(xué)和/或物理處理、尤其在高于70°C下處理持續(xù)至少30分鐘的熱處理的抵抗力；(ii)不與表皮葡萄球菌或其他共生性皮膚微生物結(jié)合；(iii)與至少一種致病、形成生物被膜的微生物特異性結(jié)合的能力；(iv)抑制金黃色葡萄球菌或銅綠假單胞菌形成生物被膜的能力；(v)在PH值為3-8下存在特異性結(jié)合。這類優(yōu)選的衍生物可以例如通過基因工程產(chǎn)生。本發(fā)明意義下的術(shù)語“通過基因工程產(chǎn)生”尤其包括本基因工程領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的用于體外和體內(nèi)修飾核酸的全部方法，從而可以通過重組DNA技術(shù)引入基因修飾并且可以修飾基因。
[0095]因此，本發(fā)明也包括尤其本發(fā)明乳酸菌的片段，所述片段仍具有本發(fā)明乳酸菌的特性。本發(fā)明意義下的“片段”尤其是本發(fā)明微生物的細(xì)胞組分和優(yōu)選地是細(xì)胞膜的部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員將充分熟悉從現(xiàn)有技術(shù)獲得細(xì)胞膜級(jí)分的方法。
[0096]本發(fā)明的微生物優(yōu)選地處于分離或純化的形式，其中術(shù)語“分離”尤其意指乳酸細(xì)源自它們的培養(yǎng)基-包括例如，它們的天然培養(yǎng)基。術(shù)語“純化”不限于絕對(duì)純度。
[0097]優(yōu)選，除了活性形式的本發(fā)明微生物之外，根據(jù)本發(fā)明的范圍內(nèi)部也包括本發(fā)明微生物的非活性形式。術(shù)語“非活性形式”在此指不再能夠在培養(yǎng)平板上形成菌落的滅活細(xì)胞或死細(xì)胞。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉用于滅活的適合方法(例如，生物、化學(xué)或物理滅活方法)。然而，在本發(fā)明的情況下，微生物也可以按凍干的形式使用。凍干的細(xì)胞可以在液體或固體培養(yǎng)基中適宜培養(yǎng)后經(jīng)誘導(dǎo)以再次生長(zhǎng)。
[0098]在本發(fā)明的情況下，術(shù)語“滅活形式”或“非活性形式”和“衍生物”或“類似物”或“突變體”也包括本發(fā)明微生物的細(xì)胞和/或發(fā)酵上清液、溶解物(lysate)、級(jí)分(fraction)或提取物，其中這些溶解物、級(jí)分或提取物優(yōu)選地具有乳酸菌的特性，其中“溶解物”以及術(shù)語“提取物”尤其是指在水介質(zhì)中本發(fā)明微生物的細(xì)胞的溶液或懸液，并且包含例如大分子如DNA、RNA、蛋白質(zhì)、肽、脂類、糖等以及細(xì)胞殘片。溶解物優(yōu)選地也包括細(xì)胞壁或細(xì)胞壁組分。產(chǎn)生溶解物的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員充分熟知的并且包括例如使用“弗氏壓碎器”或酶促裂解、帶有玻璃珠或鐵珠的球磨機(jī)。細(xì)胞可以由酶促、物理或化學(xué)方法破開。酶促細(xì)胞裂解的例子可以包括單種酶以及酶混合物，例如，蛋白酶、蛋白酶K、脂肪酶、糖苷酶；化學(xué)裂解可以由離子載體、去垢劑如SDS、酸或堿引起；物理方法也可以通過利用高壓如弗氏壓碎器、滲透性、溫度或交替加熱和冷卻來實(shí)施。另外，化學(xué)、物理酶促方法當(dāng)然可以組合。
[0099]本發(fā)明微生物的“滅活形式”或“非活性形式”和“衍生物”或“類似物”或“突變體”優(yōu)選地具有與前述菌株相同的特性?！皽缁钚问健被颉胺腔钚孕问健焙汀把苌铩被颉邦愃莆铩眱?yōu)選地不再具有任何代謝活性。
[0100]本發(fā)明微生物的類似物是溶解物或片段的形式。本發(fā)明微生物的片段是細(xì)胞的部分，如細(xì)胞膜；大分子如DNA、RNA、蛋白質(zhì)、肽、脂類、糖等以及細(xì)胞殘片。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以為這類術(shù)語如“類似物”、“片段”、“衍生物”或“突變體”提供內(nèi)容并且他們可以在不需要任何巨大技術(shù)付出情況下解讀本發(fā)明意義下的這些術(shù)語。為了提供優(yōu)選微生物的突變體、衍生物、片段或類似物，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以依賴于他們可獲得的標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)，所述標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)公開了可以用來產(chǎn)生突變體、衍生物、片段或類似物的技術(shù)。
[0101]遺傳地改變突變體和/或遺傳改變的變體或衍生物,例如,通過重組DNA技術(shù)(重組核酸的克隆、測(cè)序、轉(zhuǎn)化)以及物理誘變，例如，通過紫外輻射，還因化學(xué)劑如采用甲磺酸乙酯(EMS)進(jìn)行?？梢赃x擇正向特性的變化-以靶向方式或通過評(píng)價(jià)形成的多個(gè)突變體。遺傳改變的突變體含有本發(fā)明微生物的細(xì)胞并且使重組核酸在它們的細(xì)菌染色體和/或質(zhì)粒中產(chǎn)生。因點(diǎn)突變所致的修飾以及在沒有任何直接遺傳操作下的自發(fā)突變也可以對(duì)表達(dá)/轉(zhuǎn)錄/翻譯產(chǎn)生影響。[0102]類似物或片段可以是本發(fā)明微生物的熱滅活(死)或凍干形式，所述形式(例如通過增加表面積)保留或改善它們的發(fā)明特性。甚至在凍干(冷凍干燥)后，細(xì)胞仍可以在一些情況下有活性。這些細(xì)胞可以經(jīng)過在不同溫度的特定存儲(chǔ)過程滅活。滅活細(xì)胞可以例如具有完整的或破裂的細(xì)胞膜，但是它們不能具有任何代謝活性。獲得滅活細(xì)胞的方法可以例如包括用玻璃珠處理它們，其中細(xì)胞和玻璃珠之間的剪切力作用造成細(xì)胞破裂。額外的物理方法如弗氏壓碎器、高壓均化、球磨機(jī)或凍融過程和高壓滅菌，以及UV照射、自溶過程或在不同溫度的特定存儲(chǔ)過程，也導(dǎo)致失活并導(dǎo)致本發(fā)明微生物的片段。
[0103]本發(fā)明意義下的術(shù)語“乳桿菌屬細(xì)胞”也可以用來指乳酸菌或乳酸桿菌并且也包括需要糖、尤其葡萄糖和乳糖用于乳酸發(fā)酵并通常利用埃姆登-邁耶霍夫生物合成途徑的微生物。乳桿菌屬細(xì)胞在分類學(xué)上劃入乳桿菌科(Lactobacteriaceae)。它們是革蘭氏陽(yáng)性，不形成孢子并通常是不動(dòng)的。乳桿菌屬細(xì)胞厭氧生活但是是耐氧，雖然它們的確不含有任何氯高鐵血紅素(細(xì)胞色素、過氧化氫酶)(Schleifer等人，System.Appl.Microb.18，461-467 (1995)或 Ludwiq 等人，System.Appl.Microb.15，487-501 (1992)。乳桿菌屬細(xì)胞和/或物種可以基于糖類利用樣式，尤其通過API試驗(yàn)(Biomerieux C0.)和借助16sRNA測(cè)序來確定。根據(jù)本發(fā)明，這尤其包括適合同型發(fā)酵乳酸發(fā)酵或異型發(fā)酵乳酸發(fā)酵的物種。還優(yōu)選的是選自以下的那些乳桿菌屬細(xì)胞:乳酸乳桿菌、瑞士乳桿菌、詹氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、食淀粉乳桿菌、德氏乳桿菌、干酪乳桿菌、卷曲乳桿菌、加氏乳桿菌、約氏乳桿菌、副干酪乳桿菌、戊糖乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、彎曲乳桿菌和植物乳桿菌(均為同型發(fā)酵)，還有短乳桿菌、布氏乳桿菌、食果糖乳桿菌、希氏乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、羅伊乳桿菌、綠色乳桿菌以及兩歧雙歧桿菌(均為異型發(fā)酵)。
[0104]在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明微生物選自加氏乳桿菌、加氏乳桿菌、加氏乳桿菌、卷曲乳桿菌、卷曲乳桿菌、卷曲乳桿菌、卷曲乳桿菌、卷曲乳桿菌、卷曲乳桿菌和 ingluviei 乳桿菌(Lactobacillus ingluviei ),每種細(xì)菌以保藏編號(hào) DSM25906、DSM25907、DSM25908、DSMZ25909、DSM25910、DSM25911、DSM2591、DSM25913、DSM25914 和DSMZ25915保藏于布倫瑞克的德國(guó)微生物和細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心(DSMZ)。前述DSMZ保藏物根據(jù)國(guó)際承認(rèn)用于專利程序的微生物保存布達(dá)佩斯條約作出。
`[0105]如上文解釋進(jìn)一步，本發(fā)明也涉及優(yōu)選地含有活微生物或其類似物、突變體、衍生物或片段以及優(yōu)選地至少一種溶媒或賦形劑的組合物，所述溶媒或賦形劑選自以下溶媒或賦形劑中的至少一種:化妝品可用溶媒或賦形劑、可藥用的溶媒或賦形劑或皮膚學(xué)可用溶媒或賦形劑。
[0106]本發(fā)明意義下的術(shù)語“組合物”理解成尤其包括具有至少一種本發(fā)明微生物或其片段、衍生物、類似物或突變體以及任選地其他成分如溶媒或賦形劑或任選地其他有效成分和鹽的任何組合物?；瘖y品可用、可藥用或皮膚學(xué)可用的賦形劑、溶媒或添加物被理解為包括下述的任何物質(zhì)，所述物質(zhì)在化妝品、藥物或牙科領(lǐng)域常規(guī)使用，旨在以化妝品用方式或藥用方式施用、使用或活化有效成分或組合物，即在本發(fā)明的情況下，至少一種微生物或類似物或衍生物或突變體或其片段。
[0107]優(yōu)選的是所述組合物不僅含有本發(fā)明微生物或其類似物、突變體、衍生物或片段之一，還含有本發(fā)明微生物的混合物或類似物、衍生物、突變體或片段的混合物或本發(fā)明微生物及其片段、衍生物、突變體或類似物的混合物。[0108]所述組合物可以優(yōu)選地處于固態(tài)或液態(tài)或粘稠形式或是氣溶膠，并且可以例如以粉劑、片劑、溶液劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、膠囊劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑等形式，即以適于施用的任何形式使用。如果組合物包含額外的益生菌、防腐劑或其他抗菌物質(zhì)，優(yōu)選地但是任選地包含糖和防腐劑、矯味劑、甜味劑、維生素、礦物質(zhì)等，這也是優(yōu)選的。文獻(xiàn)EP2, 133，414A1列出可以用于優(yōu)選的組合物的許多成分；在本公開中明確參考該公開文獻(xiàn)。另外，填料、流控劑、流變學(xué)調(diào)節(jié)物、軟化劑、穩(wěn)定劑、引發(fā)劑或反應(yīng)交聯(lián)的單體(例如，甲基丙烯酸酯)可以在優(yōu)選的組合物中。
[0109]本發(fā)明到組合物尤其用于生理衛(wèi)生、物理療法和預(yù)防領(lǐng)域中并且含有至少一種本發(fā)明微生物或其衍生物、突變體、片段或類似物。
[0110]所述組合物和/或微生物也可以用作消毒劑例如，用作表面消毒劑如尤其用作隱形眼鏡的清潔液。
[0111]使用本發(fā)明組合物的劑量和施用取決于相應(yīng)的用途和相應(yīng)的患者-尤其年齡、重量、總體健康等-并且處于將使用這種組合物的本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力和評(píng)價(jià)能力范圍內(nèi)。
[0112]本發(fā)明組合物可以是化妝產(chǎn)品、醫(yī)藥產(chǎn)品或藥物產(chǎn)品。該組合物優(yōu)選地以按重量計(jì)0.001重量％至10重量％、優(yōu)選地0.005重量％至5重量％、特別優(yōu)選地0.01重量％至3重量％含有乳酸菌。完全令人驚訝的是使用0.001重量％至10重量％的量尤其將導(dǎo)致分解作用較長(zhǎng)時(shí)間可用，即保持穩(wěn)定。如果以0.005重量％至5重量％的量使用乳酸菌，這令人驚訝地導(dǎo)致對(duì)組合物的流變學(xué)特性產(chǎn)生積極效果并且導(dǎo)致組合物具有較低粘度，因此更好地分布在皮膚上或更容易引入口腔中。以按重量計(jì)0.01重量％至3重量％的量使用乳酸菌已經(jīng)令人驚訝地導(dǎo)致該組合物的組分彼此更好結(jié)合和以縮短的工作時(shí)間供應(yīng)均勻組合物的可能性，這轉(zhuǎn)而導(dǎo)致生產(chǎn)成本降低。然而，不證自明的是，也可以使用用于特定應(yīng)用領(lǐng)域的不同于本文所述量的其他量。
[0113]如上文所解釋，根據(jù)優(yōu) 選的實(shí)施方案，所述組合物和/或微生物可以在生理衛(wèi)生領(lǐng)域用來凝集即結(jié)合前述致病微生物。這些共凝集物可以隨后例如通過將它們淋洗去而輕易地移除，尤其在懸液的情況下，從而有利地實(shí)現(xiàn)致病微生物的數(shù)目減少。乳酸菌和/或含有它們的組合物可以因此以多種方式用于這個(gè)目的。例如，它們可以用于沐浴露、沐浴液、護(hù)膚液、液體皂、皂、沐浴油或消毒溶液、呼吸器中的濾器系統(tǒng)、鼻噴霧劑、隱形眼鏡清潔液、毛巾或清潔毛巾中。本發(fā)明因此也涉及用于生理衛(wèi)生和醫(yī)用產(chǎn)品及預(yù)防領(lǐng)域并含有本發(fā)明乳酸菌的全部產(chǎn)品。上文描述的實(shí)施方案也因此適用于哺乳動(dòng)物中的治療、療法和預(yù)防領(lǐng)域。所述微生物和/或含有它們的組合物可以因此以多種方式使用。
[0114]尤其是如果發(fā)明的組合物和/或本發(fā)明的微生物用來生產(chǎn)藥用藥物、用于治療或預(yù)防糖尿病、皮膚疾病、皮膚損傷、中毒性休克綜合征、葡萄球菌性燙傷樣皮膚綜合征以及由腸毒素引起的中毒性感染、由金黃色葡萄球菌引起的癤、癰、竇炎、骨髓炎如敗血癥和隨后腦膜炎和/或心肌炎和心包炎以及因銅綠假單胞菌所致的肺炎伴發(fā)囊性纖維化、尿路感染、小腸結(jié)腸炎，腦膜炎、外耳炎、燒傷面上感染，則這是優(yōu)選的。
[0115]通過本發(fā)明微生物和含有它們組合物可獲得可以有利治療和/或預(yù)防這些疾病的藥劑。所述微生物和/或含有它們的組合物可以用于人類和獸用藥物中，尤其如上文所示，用于犬、猴、貓、馬和嚙齒類(野兔、兔、倉(cāng)鼠、豚鼠)及商品動(dòng)物如雞、豬和牛、羊、山羊以及其他家養(yǎng)和商品動(dòng)物中。
[0116]本發(fā)明的組合物和/或微生物-或其片段、衍生物或突變體-可以尤其用作食品添加劑、用作衛(wèi)生產(chǎn)品、用作含有所述微生物的衛(wèi)生產(chǎn)品或用作藥物制品。這類衛(wèi)生產(chǎn)品也可以例如處于試劑盒的形式，除了生理衛(wèi)生裝置或設(shè)備、沖洗液、糊膏等之外，所述試劑盒還可以含有本發(fā)明的微生物或含有它們的組合物。
[0117]本發(fā)明也涉及一種用于鑒定和/或選擇具有本發(fā)明特性的乳桿菌屬微生物的方法，其中所述方法至少包括以下步驟:a)孵育一批選自金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌的致病微生物以便形成生物被膜，b)添加待研究的乳桿菌屬微生物并且孵育該批次以形成在致病微生物和待研究的乳桿菌屬微生物之間的特異性結(jié)合，c)通過移走上清液分離未結(jié)合的乳桿菌屬微生物；以及d)就結(jié)合和凝集的乳桿菌屬微生物來測(cè)定生物被膜。
[0118]在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法還包括步驟:研究對(duì)致病微生物形成生物被膜的抑制。本文中在孵育形成生物被膜的致病微生物期間添加待研究的乳酸菌。在移走未結(jié)合的細(xì)胞后，通過與不添加待測(cè)試微生物的對(duì)照相比來測(cè)量光密度，尤其在結(jié)晶紫染色后，優(yōu)選地將生物被膜的形成定量。
[0119]不證自明的是上文提到的特征和下文待描述的那些不僅可以在給出的特定組合中使用，還可以單獨(dú)使用而不超出本發(fā)明的范圍。
[0120]根據(jù)本專利申請(qǐng)的教導(dǎo)內(nèi)容由以下特征來表征:
[0121]-不同于現(xiàn)有技術(shù)中的慣例，
[0122]-對(duì)象的新描述，
[0123]-迫切需要對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間尚未解決但是由本發(fā)明解決的問題的解決方案，
[0124]-先前在部分【技術(shù)領(lǐng)域】的不成功工作，
[0125]-本解決方案的簡(jiǎn)單性顯示發(fā)明的創(chuàng)造性，尤其它替代了更復(fù)雜的教導(dǎo)內(nèi)容，
[0126]-在不同方向上進(jìn)行的科學(xué)技術(shù)發(fā)展，
[0127]-導(dǎo)致進(jìn)一步發(fā)展的成果，
[0128]-在【技術(shù)領(lǐng)域】中涉及相應(yīng)問題解決方案的有缺陷概念(對(duì)技術(shù)進(jìn)步的偏見，例如:改進(jìn)、增加性能、降低成本、節(jié)約時(shí)間、材料、工作步驟、獲得原料的成本或困難、增加的可靠性、消除缺陷、提高品質(zhì)、無需維護(hù)、功效更大，更高產(chǎn)率、技術(shù)可能性增加、提供另一種手段、開辟第二途徑、開辟新領(lǐng)域、某問題的第一解決方案、保留手段、替代物、經(jīng)濟(jì)化的可能性、自動(dòng)化或微型化或藥物資源富集，
[0129]-幸運(yùn)偶然，因?yàn)橐呀?jīng)從多種可能性選出一種具體可能性，不可能已經(jīng)預(yù)測(cè)到結(jié)果，因此這是可以申請(qǐng)專利的幸運(yùn)發(fā)現(xiàn)，
[0130]-技術(shù)文獻(xiàn)中的錯(cuò)誤和/或本發(fā)明主題的非常矛盾的陳述，
[0131]-新【技術(shù)領(lǐng)域】
[0132]-組合發(fā)明，即，組合多個(gè)已知的要素以產(chǎn)生具有令人驚訝效果的組合，
[0133]-許可證的發(fā)放，
[0134]-【技術(shù)領(lǐng)域】的贊揚(yáng)，和
[0135]-經(jīng)濟(jì)成功。
[0136]具體而言，本發(fā)明的有利實(shí)施方案具有至少一個(gè)或多個(gè)前述優(yōu)點(diǎn)?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0137]本發(fā)明將基于附圖和實(shí)施例在下文作為實(shí)施例來解釋，但是，不限于這些實(shí)施例。
[0138]圖1:在洗去未結(jié)合的細(xì)胞3次后，本發(fā)明微生物(DSM25906、DSM25907、DSM25908)的一個(gè)示例性實(shí)施方案與金黃色葡萄球菌形成的生物被膜的特異性結(jié)合和/或凝集(結(jié)合分析)，與之相比，不屬于本發(fā)明并能夠與結(jié)合金黃色葡萄球菌的額外乳桿菌屬菌株(乳桿菌屬物種I和乳桿菌屬物種2和乳桿菌屬物種3);基于熒光量值(485/535nm)，對(duì)96孔微量滴定平板中CFDA-標(biāo)記的本發(fā)明乳桿菌屬菌株與生物被膜的結(jié)合和/或凝集的具體定量。
[0139]圖2:在洗去未結(jié)合的細(xì)胞3次后，本發(fā)明微生物(DSM25909、DSM25910、DSM25911)的示例性實(shí)施方案與銅綠假單胞菌形成的生物被膜的特異性結(jié)合和/或凝集(結(jié)合分析)，與之相比，不屬于本發(fā)明并不能夠與結(jié)合銅綠假單胞菌的額外乳桿菌屬菌株(乳桿菌屬物種I和乳桿菌屬物種2和乳桿菌屬物種3);基于熒光量值(485/535nm)，對(duì)96孔微量滴定平板中CFDA-標(biāo)記的本發(fā)明乳桿菌屬菌株與生物被膜的結(jié)合和/或凝集的具體定量。
[0140]圖3:照相記錄系統(tǒng)中，本發(fā)明微生物的示例性實(shí)施方案(DSM25909、DSM25910、DSM25911)與銅綠假單胞菌細(xì)胞在共凝集后特異性結(jié)合的宏觀對(duì)照和單獨(dú)的本發(fā)明乳桿菌屬菌株及靶菌株。
[0141]圖4:本發(fā)明微生物的示例性實(shí)施方案(DSM25909、DSM25910、DSM25911)與銅綠假單胞菌細(xì)胞在共凝集后特異性結(jié)合的微觀對(duì)照和單獨(dú)的本發(fā)明乳桿菌屬菌株及靶菌株。顯微照片(對(duì)比度，放大率1000X)。
[0142]圖5:照相記錄系統(tǒng)中，本發(fā)明微生物的示例性實(shí)施方案(DSM25906、DSM25907、DSM25908)與金黃色葡萄球菌細(xì)胞在共凝集后特異性結(jié)合的宏觀對(duì)照和單獨(dú)的本發(fā)明乳桿菌屬菌株及靶菌株。
[0143]圖6:本發(fā)明微生物的示例`性實(shí)施方案(DSM25906、DSM25907、DSM25908)與金黃色葡萄球菌細(xì)胞在共凝集后特異性結(jié)合的微觀對(duì)照和單獨(dú)的本發(fā)明乳桿菌屬菌株及靶菌株。顯微照片(對(duì)比度，放大率1000X)。
[0144]圖7:共凝集測(cè)定法中本發(fā)明微生物的示例性實(shí)施方案(DSM25909、DSM25910、DSM25911)與銅綠假單胞菌(DSM22644)、表皮葡萄球菌(DSM20044)、杰氏棒狀桿菌(DSM7171)和藤黃微球菌(DSM20030)的特異性凝集；通過在600nm測(cè)量單獨(dú)的靶微生物的光密度以及單獨(dú)的乳桿菌屬菌株的光密度和共凝集定量混合物的光密度，對(duì)凝集作用的具
體定量。
[0145]圖8:共凝集測(cè)定法中本發(fā)明微生物的示例性實(shí)施方案(DSM25906、DSM25907、DSM25908)與金黃色葡萄球菌(DSM18587)、表皮葡萄球菌(DSM20044)、杰氏棒狀桿菌(DSM7171)和藤黃微球菌(DSM20030)的特異性凝集；通過在600nm測(cè)量單獨(dú)的靶微生物的光密度以及單獨(dú)的乳桿菌屬菌株的光密度和共凝集定量混合物的光密度，對(duì)凝集作用的具
體定量。
[0146]圖9:共凝集測(cè)定法中本發(fā)明微生物的示例性實(shí)施方案(DSM25906、DSM25907、DSM25908)在進(jìn)行或不進(jìn)行胰蛋白酶處理的情況下與金黃色葡萄球菌(DSM18587)的特異性凝集；通過在600nm測(cè)量單獨(dú)的靶微生物的光密度以及單獨(dú)的乳桿菌屬菌株的光密度和共凝集定量混合物的光密度，對(duì)凝集作用的具體定量。
[0147]圖10:共凝集測(cè)定法中本發(fā)明微生物的示例性實(shí)施方案(DSM25906和DSM25907)在進(jìn)行或不進(jìn)行胰蛋白酶處理的情況下與金黃色葡萄球菌(DSM18587)和金黃色葡萄球菌(DSM20232)的特異性凝集；通過在600nm測(cè)量單獨(dú)的靶微生物的光密度以及單獨(dú)的乳桿菌屬菌株的光密度和共凝集定量混合物的光密度，對(duì)凝集作用的具體定量。
[0148]圖11:用PBS中洗漆的乳桿菌懸液、熱滅活的乳桿菌懸液和熱滅活的乳桿菌懸液的上清液孵育6小時(shí)后本發(fā)明微生物的示例性實(shí)施方案(DSM25914和DSM25915)抑制由金黃色葡萄球菌形成的生物被膜；通過96孔微量滴定平板中的結(jié)晶紫染色在590nm測(cè)量光密度，對(duì)生物被膜定量。
[0149]圖12:用PBS中洗滌的乳桿菌懸液、熱滅活的乳桿菌懸液和熱滅活的乳桿菌懸液的上清液孵育6小時(shí)后本發(fā)明微生物的示例性實(shí)施方案(DSM25912和DSM25913)抑制由銅綠假單胞菌形成的生物被膜；通過96孔微量滴定平板中的結(jié)晶紫染色在590nm測(cè)量光密度，對(duì)生物被膜定量。
實(shí)施例
[0150]實(shí)施例1
[0151]為了鑒定和選擇本發(fā)明的微生物，來自乳桿菌屬菌株庫(kù)的各種菌株由一個(gè)4步驟篩選方法測(cè)試，其中首先就與致病性皮膚微生物(下文也稱作“靶微生物”微結(jié)合的能力測(cè)試它們(結(jié)合分析)，并且隨后，在共凝集測(cè)定法中以微量滴定平板規(guī)模測(cè)試第一步驟中鑒定的菌株，其中使用雙目立體顯微鏡定性測(cè)量與相應(yīng)靶生物的共凝集。另外，研究了共凝集的強(qiáng)度和與靶微生物結(jié)合的穩(wěn)定性以及預(yù)防生物被膜的能力，這最終導(dǎo)致根據(jù)本發(fā)明鑒定的示例性微生物(乳桿菌)。
[0152]結(jié)合分析
[0153]為了能夠?qū)λx擇的乳桿菌屬菌株的結(jié)合活性定量，建立一種結(jié)合分析，其允許定量檢測(cè)96孔板中乳桿菌屬菌株與致病微生物的結(jié)合。乳桿菌屬細(xì)胞與靶生物的結(jié)合活性與共凝集活性和/或共凝集能力相關(guān)。實(shí)驗(yàn)地檢驗(yàn)這一點(diǎn)。在這方面，圖2顯示乳桿菌屬菌株DSM25909、DSM25910、DSM25911和銅綠假單胞菌DSM22644的共凝集的例子，并且圖1顯示乳桿菌屬菌株DSM25906、DSM25907、DSM25908和金黃色葡萄球菌DSM22644的共凝集。
[0154]測(cè)量方法基于本發(fā)明菌株與生物被膜中所結(jié)合的靶菌株的特異性結(jié)合。將限定量的本發(fā)明菌株用熒光染料(CFDA溶液，InvitiOgen)標(biāo)記并且與限定量的與生物被膜結(jié)合的靶生物混合用于分析。在洗滌幾次后使用熒光光度計(jì)測(cè)量結(jié)合的本發(fā)明菌株在靶菌株上的持續(xù)存在。
[0155]為了進(jìn)行這些實(shí)驗(yàn)，使用用于銅綠假單胞菌的TSB(胰蛋白酶解酪蛋白大豆培養(yǎng)液)和用于金黃色葡萄球菌的TSY (胰蛋白酶解酪蛋白大豆酵母提取物培養(yǎng)基)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法培養(yǎng)靶微生物-銅綠假單胞菌(DSMZ22644)和金黃色葡萄球菌(DSMZ18587)。
[0156]在MRS培養(yǎng)基中于37基中厭氧培養(yǎng)乳桿菌屬菌株(de Man等人，1960)。
[0157]為了制作靶微生物，在達(dá)到初始穩(wěn)態(tài)生長(zhǎng)階段后，收獲細(xì)胞，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，pH7.4)洗滌3次并且置于PBS中。隨后將100 μ L懸液置于96孔微量滴定平板的每個(gè)孔中。
[0158]在6-小時(shí)有氧孵育期間，生物被膜由靶菌株形成。在孵育后，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS, ρΗ7.4)洗滌3次移除未結(jié)合的細(xì)胞。[0159]為了制作乳桿菌屬菌株，在培養(yǎng)24小時(shí)后，將它們收獲并用PBS洗滌3次，置于PBS中并通過添加CFDA溶液(Invitrogen)進(jìn)行熒光標(biāo)記。
[0160]為進(jìn)行結(jié)合分析，將ΙΟΟμ L結(jié)合乳桿菌懸液添加至每個(gè)孔中生物被膜內(nèi)所結(jié)合的靶菌株。平行攜帶不添加乳桿菌懸液的對(duì)照定量混合物。在30°C下于培養(yǎng)箱中孵育I小時(shí)后，將未結(jié)合的細(xì)胞分離并且用PBS洗滌3次。在每個(gè)洗滌步驟后，熒光平板光度計(jì)(Em485nm/Ex535nm)中測(cè)量突光。
[0161]與不含乳桿菌屬細(xì)胞的對(duì)照相比，含有乳桿菌屬菌株的定量混合物中熒光(Em485nm/Ex535nm)的增加與生物被膜乳桿菌屬細(xì)胞的量相關(guān)。結(jié)合乳桿菌屬細(xì)胞后所測(cè)量的熒光對(duì)應(yīng)于結(jié)合強(qiáng)度。這個(gè)值越高，標(biāo)記的乳桿菌屬細(xì)胞與生物被膜中所結(jié)合的靶菌株結(jié)合得越好并且測(cè)試的乳桿菌屬細(xì)胞的結(jié)合活性越大。
[0162]實(shí)驗(yàn)已經(jīng)顯示在移除未結(jié)合的細(xì)胞后，對(duì)于結(jié)合分析中的靶生物菌株/靶菌株銅綠假單胞菌和/或金黃色葡萄球菌而言，測(cè)試的乳桿菌屬菌株導(dǎo)致三次洗滌后因生物被膜中結(jié)合的標(biāo)記乳桿菌屬細(xì)胞的結(jié)合所致的熒光增加3至17倍。圖2顯示乳桿菌屬DSM25909、DSM25910和DSM25911與銅綠假單胞菌的結(jié)合分析的結(jié)果，并且圖1是作為本發(fā)明微生物示例的DSM25906、DSM25907和DSM25908與金黃色葡萄球菌的結(jié)合分析的結(jié)果。此外，出于比較目的，圖1和圖2也顯示了不屬于本發(fā)明的不能夠特異性結(jié)合靶生物的乳桿菌屬菌株(乳桿菌屬物種I和2)的數(shù)據(jù)。
[0163]實(shí)施例2_4] 共凝集測(cè)定法
[0165]以下在體積0.8mL和/或在24孔平板中的驗(yàn)證用來顯示所選擇的乳桿菌屬菌株的共凝集活性。
[0166]在這種方法中，單獨(dú)考慮 乳酸桿菌的共凝集行為和靶菌株的共凝集行為，并且最終考慮混在一起的乳桿菌和靶菌株的共凝集作用。通過使用24孔平板的照片宏觀地進(jìn)行以及微觀地進(jìn)行這種分析。
[0167]為了進(jìn)行這些試驗(yàn)，使用用于銅綠假單胞菌的TSB(胰蛋白酶解酪蛋白大豆培養(yǎng)液)和TSY (胰蛋白酶解酪蛋白大豆酵母提取物培養(yǎng)基)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案培養(yǎng)靶微生物-銅綠假單胞菌(DSMZ22644)和金黃色葡萄球菌(DSMZ18587)。
[0168]在MRS培養(yǎng)基中于37基中厭氧培養(yǎng)乳桿菌屬菌株(deMan等人，1960)。
[0169]為了制作靶微生物，在16小時(shí)后，收獲細(xì)胞，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，pH7.4)洗滌3次并且調(diào)整至0D6(iq=4。
[0170]為了制作乳桿菌屬菌株，在16小時(shí)后，收獲它們，用PBS洗滌2次并隨后置于I體積PBS中并且因此調(diào)整至0D_=8。
[0171]為進(jìn)行共凝集測(cè)定法，將400 μ L標(biāo)記的靶微生物的懸液連同400 μ L靶微乳桿菌懸液一起置于24孔平板中的每個(gè)孔內(nèi)。平行制備含有400 μ L相應(yīng)靶生物外加400 μ LPBS (對(duì)照I)或400 μ L相應(yīng)乳桿菌懸液外加400 μ L PBS (對(duì)照2)的對(duì)照定量混合物。在臺(tái)式攪拌器上于25照定后30分鐘孵育，通過照相記錄系統(tǒng)，宏觀地觀察定量混合物，以及通過轉(zhuǎn)移來自每個(gè)孔中心的3 μ L混合物至顯微鏡載玻片，微觀地觀察定量混合物。
[0172]為了對(duì)共凝集作用定量，通過離心分離所產(chǎn)生的共凝集物(10秒，300g)。隨后將100 μ L上清液轉(zhuǎn)移至96孔平底平板并且在平板光度計(jì)中在600nm測(cè)量光密度。[0173]以下式用于計(jì)算共凝集活性的百分比:
[0174]
【權(quán)利要求】
1.一種屬于乳酸菌類的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中，所述微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或其組合可以與至少一種致病微生物共凝集，其中所述致病微生物選自包含金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和/或銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的組。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中，所述微生物屬于乳桿菌屬。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中，共凝集所述至少一種致病微生物的能力甚至在生物、化學(xué)或物理處理后也存在。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中，共凝集所述至少一種致病微生物的能力在約3和約8之間的pH值下存在。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中，所述微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合具有抑制所述至少一種致病微生物的生物被膜的形成的能力。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中，所述微生物選自包含如下微生物的組:乳酸乳桿菌(Lactobacilluslactis);瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus);詹氏乳桿菌(Lactobacillusjensenii);嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus);保加利亞乳桿菌(Lactobacillusbulgaricus);食淀粉乳桿菌(Lactobacillus amylovorus);德氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckii);干酪乳桿菌(Lactobacillus casei);卷曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus);加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri);約氏乳桿菌(Lactobacillusjohnsonii);副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei);戍糖乳桿菌(Lactobacilluspentosus);鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus);彎曲乳桿菌(Lactobacilluscurvatus)；植物乳桿菌(Lactobacillus pi ant arum)；短乳桿菌(Lactobacillusbrevis);布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri);食果糖乳桿菌(Lactobacillusfructivorans);希氏乳桿菌(Lactobacillus hilgardii);發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum);羅伊乳桿菌(Lactobacillus reuteri);綠色乳桿菌(Lactobacillusviridescens);兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum);或其類似物、衍生物、片段或突變體。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合，其中，所述微生物選自包含以下微生物的組:已經(jīng)保藏于德國(guó)微生物和細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心并配有保藏編號(hào) DSM25906、DSM25907、DSM25908、DSM25909、DSM25910、DSM25911、DSM25912、DSM25913、DSM25914 和 DSM Z25915 的微生物。
8.一種組合物，包含根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的至少一種微生物或其類似物、片段、衍生物、突變體或組合。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述組合物包含選自含以下溶媒或賦形劑的組中的溶媒或賦形劑:化妝品可用溶媒或賦形劑、可藥用溶媒或賦形劑或皮膚學(xué)可用溶媒或賦形劑。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，其中，所述組合物為粉劑、棒劑、氣溶膠噴霧劑、泵噴霧劑、乳膏劑、分散體劑、乳劑、泡沫劑、軟膏劑、噴霧劑、氣溶膠劑、粉齊?、棒劑、毛巾劑、洗劑、混懸劑、溶液劑、凝膠劑的形式或在基底上。
11.根據(jù)權(quán)利要求?ο所述的組合物，其中，所述組合物為護(hù)膚霜、皮膚洗液或皮膚軟膏形式。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，其中，所述組合物為固體、液體、粘稠形式或作為氣溶膠。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，其中，所述護(hù)膚霜、皮膚洗液或皮膚軟膏為固體、液體、粘稠的形式或作為氣溶膠。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，其中，所述組合物包含益生菌、防腐劑或其他抗菌有效成分。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，其中，所述組合物是藥用、獸用、化妝或食品用組合物。
16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，額外地含有促凈劑物質(zhì)、表面活性表面活性劑、酶、有機(jī)和/或無機(jī)過氧化合物、過氧化物激活劑、水可溶混性有機(jī)溶劑、掩蔽劑、電解質(zhì)、PH調(diào)節(jié)劑、增稠劑、去污有效成分、熒光增白劑、發(fā)灰抑制劑、染料轉(zhuǎn)移抑制劑、泡沫調(diào)節(jié)劑和/或著色劑。
17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，額外地包含選自以下組中的至少一種物質(zhì): a.對(duì)皮膚狀況具有積極影響的有效成分，尤其對(duì)老年皮膚具有積極影響的有效成分，尤其與生物醌(特別是泛醌Q10)、肌酸、肌酐、肉堿、生物素、異黃酮、心磷脂、硫辛酸、抗凍蛋白、牛蒡苷、啤酒花和啤酒花-麥芽提取物組合時(shí)，` b.用于重建結(jié)締組織的促進(jìn)劑，尤其是異黃酮類， c.支持干性皮膚上皮膚功能的有效成分，尤其是維生素C、生物素、肉堿、肌酸、丙酸、綠茶提取物、桉油、脲和無機(jī)鹽(尤其是NaCl、海洋礦物質(zhì)和滲壓劑)， d.用于減輕和/或積極影響炎性皮膚狀態(tài)的有效成分，特別是絹毛欖仁苷、多種甘草提取物、甘草查爾酮(尤其是甘草查爾酮A)、水飛薊素、水飛薊賓-磷脂復(fù)合物和/或右旋泛醇。
18.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，其中，所述微生物在組合物中以滅活、活性或無活性的形式存在。
19.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，其中，所述微生物以封裝、噴霧干燥和/或凍干的形式存在。
20.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，其中，所述微生物以細(xì)胞溶解物的形式存在。
21.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物，其中，所述微生物以0.001重量％至10重量％、優(yōu)選地0.005重量％至5重量％、特別優(yōu)選地0.01重量％至3重量％的量存在。
22.一種用于鑒定和/或選擇具有與選自包含金黃色葡萄球菌和/或銅綠假單胞菌的組中的致病微生物共凝集的能力的乳酸菌的方法，其中，所述方法至少具有以下步驟: a.孵育所述致病微生物以形成生物被膜； b.添加待研究的乳酸菌并孵育以形成在致病微生物和待研究的乳酸菌之間誘導(dǎo)共凝集的混合物； C.通過移走上清液分離未結(jié)合的乳酸菌；以及 d.就共凝集的乳酸菌而言測(cè)定生物被膜。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，額外地包括以下步驟: -研究致病微生物對(duì)生物被膜的抑制，其中添加待研究的乳酸菌在孵育形成生物被膜的致病微生物期間進(jìn)行。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的方法，額外地包括以下步驟: -通過與不添加待測(cè)試的乳酸菌時(shí)的對(duì)照相比測(cè)量光密度，將移除未結(jié)合的細(xì)胞后生物被膜的形成定量。
25.根據(jù)8至21中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物用于生產(chǎn)治療或預(yù)防皮膚疾病的藥用藥物、醫(yī)用產(chǎn)品或化妝品的用途，其中，所述皮膚疾病尤其為葡萄球菌性燙傷樣皮膚綜合征、觸染性膿皰病、淺表毛囊炎、膿皰化、皮膚膿腫、癤、癰、膿腫、蜂窩織炎、干性皮膚、癢性皮膚、發(fā)紅皮膚、炎性皮膚、極度油性皮膚、座瘡、糖尿病足、褥瘡、神經(jīng)性皮炎、急性淋巴結(jié)炎、藏毛囊腫、藏毛瘺、藏毛竇、球蟲性瘺、球蟲性囊腫、皮膚和皮下組織的局部感染、膿皮病、膿性皮炎、膿毒性皮炎、化膿性皮炎、皮炎和濕疹、異位性濕疹、脂溢性濕疹、尿布皮疹、過敏性接觸性皮炎、脂溢性皮炎、剝脫性皮炎、中毒性接觸性皮炎、慢性單純性苔蘚、癢疹、瘙癢癥和其他類型的皮炎、丘疹鱗屑性皮膚疾病、銀屑病、副銀屑病、皮膚附屬物的疾病、瘢痕性脫發(fā)、脫發(fā)性毛囊炎以及皮膚和皮下組織的其他疾病、下肢潰瘍、皮膚損傷、刮傷、事故或手術(shù)后的傷口。
26.根據(jù)權(quán)利要求8-2 1中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物用于生產(chǎn)處理表面的清潔劑或消毒劑的用途。
27.根據(jù)權(quán)利要求8-21中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物用于生產(chǎn)在生理衛(wèi)生、醫(yī)用產(chǎn)品和預(yù)防領(lǐng)域中所使用的產(chǎn)品的用途。
28.根據(jù)權(quán)利要求8-21中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物用于生產(chǎn)施加至皮膚表面的洗劑、震蕩合劑、粉劑、水凝膠劑、乳膏劑、克勒薩(cresa)、軟膏劑、脂性軟膏劑或糊膏劑的用途。
29.根據(jù)權(quán)利要求8-21中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的組合物用于生產(chǎn)對(duì)局部治療傷口感染和加速慢性傷口愈合具有特效的抗微生物添加物的用途。
30.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的用途，其中，所述組合物的用途是預(yù)防性或治療性的。
31.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)或多項(xiàng)所述的用途，其中，所述組合物是局部地施加的。
32.用于衛(wèi)生處理的試劑盒，包含根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的微生物或根據(jù)權(quán)利要求8-21所述的組合物以及生理衛(wèi)生裝置或設(shè)備、沖洗液和/或糊膏劑。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK103502434SQ201280022133
【公開日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2012年5月7日 優(yōu)先權(quán)日:2011年5月6日
【發(fā)明者】克里斯丁·朗, 安德魯斯·拉布, 帕特里克·戈勒茨 申請(qǐng)人:有機(jī)平衡醫(yī)療股份公司