糖化血紅蛋白的測定方法、測定試劑和測定試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供不受血紅蛋白的影響、準確且高靈敏度地測定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的方法。一種含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的測定方法，其特征在于，在表面活性劑存在下使蛋白質(zhì)分解酶作用于含有血紅蛋白的試樣、然后使用果糖基肽氧化酶進行作用的反應中，在鹵素氧化物存在下進行該反應，并且對生成的過氧化氫進行測定。根據(jù)本發(fā)明，提供含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的測定方法，其可用于對糖尿病的診斷有用的糖化血紅蛋白的測定等。
【專利說明】糖化血紅蛋白的測定方法、測定試劑和測定試劑盒
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及糖化血紅蛋白的測定方法、測定試劑和測定試劑盒。【背景技術】
[0002]糖化血紅蛋白是在血紅蛋白上結(jié)合葡萄糖而成的糖化物。血紅蛋白具有由α鏈、β鏈構(gòu)成的四聚體結(jié)構(gòu)，將β鏈的N末端糖化后的血紅蛋白稱為血紅蛋白Alc(以下也記作HbAlc)，血糖值越高越增加，因此，作為糖尿病標志物而在臨床檢查中進行測定。
[0003]作為糖化血紅蛋白的測定方法，已知HPLC法等色譜法、電泳法、膠乳免疫凝集法等利用抗體的免疫測定法、使用作用于糖化蛋白的酶和作用于糖化肽和/或糖化氨基酸的酶的酶測定法等。
[0004]作為糖化血紅蛋白的酶測定法，已知如下方法(吸光度法)等:首先，利用變性劑使含有血紅蛋白的試樣中的血紅蛋白變性，使蛋白質(zhì)分解酶作用于變性后的血紅蛋白，接著使糖化肽氧化酶作用于生成的糖化肽，使生成的過氧化氫在過氧化物酶等過氧化活性物質(zhì)存在下與氧化顯色型色原體反應而生成色素，由生成的色素的吸光度測定糖化血紅蛋白。
[0005]但是，利用該吸光度法的糖化血紅蛋白的測定中，大量存在于試樣中的血紅蛋白的影響成為問題。作為針對該問題的解決方法，已知例如:使用陽離子型表面活性劑和/或兩性表面活性劑的方法(專利文獻I)、使用砜化合物和/或硝基化合物的方法(專利文獻
2、專利文獻3)、使用四 唑化合物的方法(專利文獻4)、使用聚氧乙烯烷基醚硫酸鹽類等
特定的陰離子系表面活性劑的方法(專利文獻5)等。
[0006]但是，這些方法中，也未必能夠避免血紅蛋白的影響，因而需要不受血紅蛋白影響的、準確地測定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的方法。
[0007]另外，基于氧化還原反應的底物和酶的測定方法中，已知為了避免還原劑、特別是抗壞血酸的妨礙而使用碘酸鹽的方法(專利文獻6)。但是，還不知道為了避免血紅蛋白的影響而使用碘酸鹽等鹵素氧化物的方法。
[0008]現(xiàn)有技術文獻
[0009]專利文獻
[0010]專利文獻1:日本特開平3-010696號公報
[0011]專利文獻2:W02003/107011小冊子
[0012]專利文獻3:日本特開2007-147630號公報
[0013]專利文獻4:日本特開2000-210100號公報
[0014]專利文獻5:W02005/049858小冊子
[0015]專利文獻6:日本特開昭56-151358號公報

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016]發(fā)明所要解決的問題
[0017]本發(fā)明的目的在于提供用于不受血紅蛋白的影響、準確且高靈敏度地測定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的方法和試劑。[0018]用于解決問題的方法
[0019]本發(fā)明人進行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了如下見解:在表面活性劑存在下使蛋白質(zhì)分解酶作用于含有血紅蛋白的試樣、然后使用果糖基肽氧化酶進行作用的反應中，在鹵素氧化物存在下進行該反應，并對生成的過氧化氫進行測定，由此，能夠不受血紅蛋白的影響、準確且高靈敏度地測定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明涉及以下[I]~[18]項。
[0020][I] 一種含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的測定方法，其特征在于，在表面活性劑存在下使蛋白質(zhì)分解酶作用于含有血紅蛋白的試樣、然后使用果糖基肽氧化酶進行作用的反應中，在鹵素氧化物存在下進行該反應，并對生成的過氧化氫進行測定。
[0021][2]如[I]所述的方法，其中，鹵素氧化物為選自由碘酸或其鹽、溴酸或其鹽和高碘酸或其鹽組成的組中的鹵素氧化物。
[0022][3]如[I]或[2]所述的方法，其中，表面活性劑為陽離子型表面活性劑。
[0023][4]如[3]所述的方法其中，陽離子型表面活性劑為選自由下述通式(I)表示的吡
啶I!鹽、下述通式(II)表示的鱗鹽和下述通式(in)表示的季銨鹽組成的組中的陽離子
型表面活性劑，
[0024]
【權(quán)利要求】
1.一種含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白的測定方法，其特征在于，在表面活性劑存在下使蛋白質(zhì)分解酶作用于含有血紅蛋白的試樣、然后使用果糖基肽氧化酶進行作用的反應中，在鹵素氧化物存在下進行該反應，并對生成的過氧化氫進行測定。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，鹵素氧化物為選自由碘酸或其鹽、溴酸或其鹽和高碘酸或其鹽組成的組中的鹵素氧化物。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，表面活性劑為陽離子型表面活性劑。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，陽離子型表面活性劑為選自由下述通式(I)表示的批啶鋪鹽、下述通式(II)表示的善:鹽和下述通式(III)表示的季銨鹽組成的組中的陽離子型表面活性劑，

5.如權(quán)利要求1~4中任一項所述的方法，其中，過氧化氫的測定使用過氧化氫測定試劑進行。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中，過氧化氫測定試劑為含有過氧化物酶和無色型色原體的試劑。
7.一種糖化血紅蛋白測定試劑，用于測定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白，其特征在于，含有蛋白質(zhì)分解酶、果糖基肽氧化酶、鹵素氧化物和表面活性劑。
8.如權(quán)利要求7所述的試劑，其中，鹵素氧化物為選自由碘酸或其鹽、溴酸或其鹽和高碘酸或其鹽組成的組中的鹵素氧化物。
9.如權(quán)利要求7或8所述的試劑，其中，表面活性劑為陽離子型表面活性劑。
10.如權(quán)利要求9所述的試劑，其中，陽離子型表面活性劑為選自由下述通式(I)表示的吡啶錢鹽、下述通式(II)表示的鱗鹽和下述通式(III)表示的季銨鹽組成的組中的陽離子型表面活性劑，
11.如權(quán)利要求7~10中任一項所述的試劑，其中，還含有過氧化氫測定試劑。
12.如權(quán)利要求11所述的試劑，其中，過氧化氫測定試劑為含有過氧化物酶和無色型色原體的試劑。
13.一種糖化血紅蛋白測定試劑盒，用于測定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白，其特征在于，包含含有蛋白質(zhì)分解酶、鹵素氧化物和表面活性劑的第一試劑以及含有果糖基肽氧化酶的第二試劑。
14.一種糖化血紅蛋白測定試劑盒，用于測定含有血紅蛋白的試樣中的糖化血紅蛋白，其特征在于，包含含有蛋白質(zhì)分解酶和表面活性劑的第一試劑以及含有果糖基肽氧化酶和鹵素氧化物的第二試劑。
15.如權(quán)利要求13或14所述的試劑盒，其中，鹵素氧化物為選自由碘酸或其鹽、溴酸或其鹽和高碘酸或其鹽組成的組中的鹵素氧化物。
16.如權(quán)利要求13~15中任一項所述的試劑盒，其中，表面活性劑為陽離子型表面活性劑。
17.如權(quán)利要求16所述的試劑盒，其中，陽離子型表面活性劑為選自由下述通式(I)表示的吡啶鐵鹽、下述通式(II)表示的鱗鹽和下述通式(III)表示的季銨鹽組成的組中的陽離子型表面活性劑，
18.如權(quán)利要求13~17中任一項所述的試劑盒，其中，在第一試劑和第二試劑中或者在第二試劑和第一試劑中還分別含有過氧化物酶和無色型色原體。
【文檔編號】C12Q1/28GK103620052SQ201280029249
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2012年6月14日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月17日
【發(fā)明者】征矢陽代 申請人:協(xié)和梅迪克斯株式會社