抗體制劑和方法
【專利摘要】用于預(yù)防或治療淀粉樣變性(包括AA淀粉樣變性和AL淀粉樣變性)的抗體制劑和方法。
【專利說明】抗體制劑和方法
[0001]相關(guān)申請
[0002]要求2011年10月25日提交的美國臨時申請N0.61/551，406 (其通過引用整體并入本文)的優(yōu)先權(quán)。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明屬于免疫學(xué)和醫(yī)學(xué)的【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0004]發(fā)明背景
[0005]淀粉樣變性是描述特征在于病理形式的淀粉樣蛋白的存在的許多疾病的一般術(shù)語，所述疾病通常牽涉蛋白質(zhì)原纖維(fibril)的細胞外沉積，這形成了許多“淀粉樣蛋白沉積物”或“淀粉樣蛋白斑塊”，這可在局部部位發(fā)生或全身性發(fā)生。這些沉積物或斑塊主要包含天然存在的可溶性蛋白質(zhì)或肽，所述蛋白質(zhì)或肽在多個組織部位中裝配成直徑為10-100 μ m的廣泛不溶的沉積物。沉積物通常包含直徑約10-15nm的原纖維的側(cè)向聚集物。淀粉樣蛋白原纖維，當(dāng)用剛果紅染料染色時，在偏振光下產(chǎn)生特征性蘋果綠雙折射。通常地，這些沉積物的原纖維組分是各種形式的淀粉樣蛋白疾病的鑒定性特征。
[0006]形成斑塊沉積物的肽或蛋白質(zhì)通常從更大的前體蛋白質(zhì)產(chǎn)生。更具體地，淀粉樣蛋白聚集物例如原纖維沉積物的發(fā)病機制通常牽涉“異?！鼻绑w蛋白至聚集成反向平行β折疊片的片段的蛋白水解切割。 [0007]全身性淀粉樣變性是由錯誤折疊的蛋白質(zhì)的組織沉積引起的一組復(fù)雜的疾病，所述疾病導(dǎo)致進行性器官損傷。最常見的類型，AL淀粉樣變性或原發(fā)性淀粉樣變性，牽涉由產(chǎn)生錯誤折疊的免疫球蛋白輕鏈的克隆性漿細胞引起的血液學(xué)障礙。漿細胞過度產(chǎn)生錯誤折疊的輕鏈導(dǎo)致異常AL蛋白(淀粉樣蛋白)在具有AL淀粉樣變性的個體的組織和器官中沉積。AL淀粉樣變性的臨床特征包括一組癥狀和器官功能障礙，其可包括心臟、腎和肝功能障礙、胃腸受累、神經(jīng)病和巨舌癥。然而，促淀粉樣變性的免疫球蛋白輕鏈籍以導(dǎo)致器官功能障礙的機制尚未被良好表征，據(jù)猜測，淀粉樣蛋白沉積物和原纖絲(prefibrilIar)聚集物可促成在AL淀粉樣變性患者中觀察到的對器官的細胞毒性作用。AL淀粉樣變性是其自身的疾病實體，雖然AL淀粉樣變性可在小亞組(達到15% )的多發(fā)性骨髓瘤患者中同時存在。
[0008]AL淀粉樣變性是罕見障礙，其發(fā)病率據(jù)估計為8/1，000, 000人。在美國每年僅報告1200至3200例AL淀粉樣變性的新案例。2/3的AL淀粉樣變性患者是男性，少于5%的患者年齡在40歲以下。AL淀粉樣變性的病因和來源仍然知之甚少。
[0009]AL淀粉樣變性患者的現(xiàn)有療法的目的在于，減少或消除骨髓障礙，即負責(zé)產(chǎn)生輕鏈的漿細胞，從而限制或停止淀粉樣蛋白的產(chǎn)生。最具侵入性的治療選擇包括，對可耐受其的患者進行干細胞移植和高劑量化學(xué)療法。其它治療方案包括，通常用于治療血液腫瘤的藥物例如美法侖，潑尼松，地塞米松和蛋白體抑制劑例如硼替佐米的組合，以試圖減少輕鏈產(chǎn)生。目前尚沒有經(jīng)批準的、直接靶向促淀粉樣變性的蛋白的潛在毒性形式的AL淀粉樣變性的治療。[0010]不同形式的全身性淀粉樣變性，AA淀粉樣變性或繼發(fā)性淀粉樣變性，由于其它疾病例如慢性炎性疾病(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強直性脊柱炎)或慢性感染(例如，肺結(jié)核或骨髓炎)而“繼發(fā)性地”發(fā)生。在繼發(fā)性淀粉樣變性中，沉積的淀粉樣蛋白為淀粉樣蛋白A，來源于急性期蛋白血清淀粉樣蛋白A。繼發(fā)性淀粉樣變性的治療涉及治療基礎(chǔ)性疾病。
[0011]因此，存在對直接靶向病理性淀粉樣蛋白原纖維的、治療AA淀粉樣變性和AL淀粉樣變性的療法的需要。本發(fā)明提供了 2A4和7D8抗體以及其嵌合和人源化形式的藥物制劑，其由于AL和AA淀粉樣蛋白的病理形式的共有的免疫原性表位，而顯示對這些蛋白的高親和力結(jié)合。
[0012]發(fā)明概述
[0013]本發(fā)明提供了用于預(yù)防和治療淀粉樣蛋白疾病的抗體制劑。在本發(fā)明的一個方面，藥物制劑包含，(a)特異性地與2A4或7D8競爭對抗原的結(jié)合，和/或針對包含AEDS (SEQID NO: 18)的表位的抗體2A4 (ATCC登錄號PTA-9662)或抗體7D8 (ATCC登錄號PTA-9468)的嵌合或人源化形式或其片段，其中所述抗體以在約lmg/mL至約100mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在；(b)以在約20mM至約30mM的范圍內(nèi)的濃度存在的組氨酸緩沖劑；(c)以在約210mM至約250mM的范圍內(nèi)的濃度存在的海藻糖；和(d)以在按重量計約0.005%至約0.05%的范圍內(nèi)的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;其中所述制劑的特征在于在約6至約7的范圍內(nèi)的pH。例如，本發(fā)明的代表性制劑包含，具有含有SEQ ID N0:4所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和/或含有SEQ ID N0:5所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗體。更具體地，此類制劑包含，具有含有SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈的抗體，例如，具有含有SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列的重鏈的抗體。
[0014]本發(fā)明的其它 代表性制劑包含，(a)具有含有SEQ ID N0:6、7和8所示的3個互補決定區(qū)的輕鏈可變區(qū)和含有SEQ ID N0:9、10和11所示的3個互補決定區(qū)的重鏈可變區(qū)的抗體；和(b)具有含有SEQ ID NO: 12、7和8所示的3個互補決定區(qū)的輕鏈可變區(qū)和含有SEQIDN0:9、10和11所示的3個互補決定區(qū)的重鏈可變區(qū)的抗體。
[0015]在本發(fā)明的代表性制劑中，抗體以在約5mg/mL至約15mg/mL的范圍內(nèi)的濃度(例如約10mg/mL)存在，或以在約25_75mg/mL的范圍內(nèi)的濃度(例如，50mg/mL)存在。
[0016]在本發(fā)明的其它代表性制劑中，組氨酸緩沖劑以約25mM的濃度存在。組氨酸緩沖劑可包括L-組氨酸和L-組氨酸HCl —水合物。例如，可以以在約16mM至約22mM的范圍內(nèi)的濃度使用L-組氨酸，以及可以以在約4mM至約8mM的范圍內(nèi)的濃度使用L-組氨酸HCl一水合物。
[0017]在本發(fā)明的其它代表性制劑中，海藻糖以約230mM的濃度存在。
[0018]如本文中所述制備的本發(fā)明的代表性制劑，(a)特征在于約300m0sm/kg的重量摩爾滲透壓濃度(osmolality) ； (b)在制劑中包含少于約10%的以聚集物的形式存在的抗體；(C)還包含填充劑；(d)是無菌的；和/或(e)在冷凍和解凍后是穩(wěn)定的。
[0019]在本發(fā)明的一個方面，制劑包含，(a)包含含有SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈的抗體，并且所述抗體以約10mg/mL的濃度存在；(b)以約25mM的濃度存在的組氨酸緩沖劑；(c)以約230mM的濃度存在的海藻糖；⑷以約0.2g/L的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;和(e)約6.5的pH。[0020]在本發(fā)明的另一個方面，藥物制劑包含，(a)抗體，其為抗體2A4(ATCC登錄號PTA-9662)、抗體7D8 (ATCC登錄號PTA-9468)，或特異性地與2A4或7D8競爭對抗原的結(jié)合，和/或針對包含AEDS (SEQ ID NO: 18)的表位的抗體2A4或抗體7D8的嵌合或人源化形式或其片段，其中所述抗體以在約50mg/mL至約100mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在；(b)緩沖劑；
(c)非還原糖；和(d)非離子表面活性劑。在具體的實例中，所公開的制劑的抗體包含，含有SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列的重鏈。
[0021]在本發(fā)明的另一個方面，抗體制劑是冷凍干燥的。例如，代表性凍干制劑可包含:(a)抗體2A4 (ATCC登錄號PTA-9662)或抗體7D8 (ATCC登錄號PTA-9468)的人源化形式或其抗原結(jié)合片段；(b)組氨酸；(c)海藻糖；和(d)聚山梨醇酯20。凍干制劑，當(dāng)重構(gòu)時，可具有約6至約7的pH，例如當(dāng)重構(gòu)時pH6.5。凍干制劑通常包含約IOOmg至約1000mg的抗體。凍干制劑通常以在按重量計約0.005%至約0.05%的范圍內(nèi)的濃度包含聚山梨醇酯20。重構(gòu)后，凍干制劑產(chǎn)生水溶液，例如，水溶液包含:(a)包含含有SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈的抗體，并且所述抗體以約10mg/mL的濃度存在；(b)以約25mM的濃度存在的組氨酸緩沖劑；(c)以約230mM的濃度存在的海藻糖；⑷以約0.2g/L的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;和(e)約6.5的pH。代表性凍干制劑在利用無菌水重構(gòu)后包含約IOOmg的抗體。
[0022]還提供了編碼用于制備公開的制劑的抗體的核酸。例如，此類核酸包括，含有編碼SEQ ID NO: 13的抗體輕鏈的核苷酸序列的核酸和含有編碼SEQ ID NO: 14-16的任一個的抗體重鏈的核苷酸序列的核酸。例如，SEQ ID NO: 19和SEQ ID NO: 20 (其與SEQ ID NO: 19同一并且還包含編碼信號肽的序列)所示的核苷酸序列各自編碼SEQ ID NO: 13的人源化2A4輕鏈。作為另一個實例，SEQ ID NO: 22和SEQ ID NO: 23 (其與SEQ ID NO: 22同一并且還包含編碼信號肽的序列)所示的核苷酸序列各自編碼SEQ ID NO: 15的人源化2A4重鏈。
[0023]為了產(chǎn)生抗體，可將公開的核酸單個地或組合地(例如，編碼人源化2A4輕鏈的核酸和編碼人源化2A4重鏈的核酸的組合)包含在載體中。例如，載體可包含，含有編碼SEQID NO: 13-16,21和24的任一個的核苷酸序列的核酸；含有SEQ ID NO: 19-20和22-23的任一個的核苷酸序列的核酸，或其組合。本發(fā)明的代表性載體包括，(a)包含編碼SEQ ID NO: 13或21所示的人源化2A4輕鏈和SEQ ID NO: 15或24所示的人源化2A重鏈的核酸序列的載體；(b)包含具有SEQ ID NO: 19的核苷酸序列的核酸和具有SEQ ID NO:22的核苷酸序列的核酸的載體；和(c)包含具有SEQ ID NO:20的核苷酸序列的核酸和具有SEQ ID NO:23的核苷酸序列的核酸的載體。
[0024]還提供了已將本文中公開的一個或多個核酸穩(wěn)定地摻入它們的基因組的宿主細胞(例如，CHO細胞)。例如，宿主細胞可在其基因組中包含，含有編碼SEQ ID NO: 13-16、21和24的任一個的核苷酸序列的穩(wěn)定地整合的核酸；包含SEQ ID NO: 19-20和22-23的任一個的核苷酸序列的穩(wěn)定整合的核酸，或其組合。本發(fā)明的代表性宿主細胞包括，(a)包含編碼SEQ ID NO: 13或21所示的人源化2A4輕鏈和SEQ ID NO: 15或24所示的人源化2A重鏈的核酸序列的宿主細胞；(b)包含具有SEQ ID NO: 19的核苷酸序列的核酸和SEQ ID NO:22的核苷酸序列的核酸的宿主細胞；和(c)包含具有SEQ ID NO:20的核苷酸序列的核酸和具有SEQ ID NO:23的核苷酸序列的核酸的宿主細胞。
[0025] 本發(fā)明還提供了制備藥物制劑的方法。在本發(fā)明的一個方面，此類方法包括，(a)培養(yǎng)已將編碼鼠，嵌合或人源化2A4抗體或鼠，嵌合或人源化7D8抗體的輕鏈和重鏈的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組的哺乳動物細胞，以便細胞將抗體分泌進入細胞培養(yǎng)基，和從細胞培養(yǎng)基純化抗體；(b)和制備制劑，所述制劑包含(i)特異性地與2A4或7D8競爭對抗原的結(jié)合的抗體2A4(ATCC登錄號PTA-9662)或抗體7D8 (ATCC登錄號PTA-9468)的嵌合或人源化形式，或其片段，其中抗體以在約lmg/mL至約100mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在；(ii)以在約20mM至約30mM的范圍內(nèi)的濃度存在的組氨酸緩沖劑；(iii)以在約210mM至約250mM的范圍內(nèi)的濃度存在的海藻糖；和(iv)以在按重量計約0.005%至約0.05%的范圍內(nèi)的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;其中制劑的特征在于，在約6至約7的范圍內(nèi)的pH。例如，在本發(fā)明的一個方面，培養(yǎng)已將編碼人源化2A4抗體的輕鏈和重鏈的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組的哺乳動物細胞。用于該目的的哺乳動物細胞包括，(a)已將編碼SEQ ID NO: 13或21所示的人源化2A4輕鏈和SEQ ID NO: 15或24所示的人源化2A重鏈的核酸序列穩(wěn)定地整合進入其基因組的宿主細胞；(b)已將具有SEQ ID NO: 19的核苷酸序列的核酸和具有SEQ IDNO:22的核苷酸序列的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組的宿主細胞；和(c)已將具有SEQ IDNO:20的核苷酸序列的核酸和具有SEQ ID NO:23的核苷酸序列的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組的宿主細胞。在本發(fā)明的一些方面，公開的制備藥物制劑的方法包括，評價制劑中的抗體的至少一個性質(zhì)的額外步驟，所述性質(zhì)例如物理穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性和/或生物活性。
[0026]還提供了治療性或預(yù)防性治療患有特征在于淀粉樣蛋白原纖維的存在的淀粉樣變性或處于患所述疾病的風(fēng)險中的人患者的方法，所述方法包括，給患者施用有效劑量的本發(fā)明的制劑。順從治療的患者具有淀粉樣蛋白疾病例如淀粉樣蛋白A淀粉樣變性(其特征在于淀粉樣蛋白A蛋白原纖維的存在)，或AL淀粉樣變性(其特征在于淀粉樣蛋白輕鏈類型蛋白原纖維的存在)。具有AL淀粉樣變性的患者還可患有相關(guān)的B淋巴細胞譜系的惡液質(zhì)(dyscrasis)，例如惡性腫瘤例如多發(fā)性骨髓瘤。
[0027]公開的治療性和預(yù)防性治療法包括，由此引發(fā)協(xié)同作用結(jié)果的聯(lián)合治療(即，公開的抗體制劑與一種或多種另外的藥物一起施用)。兩種或更多種藥物同時施用或以任意順序相繼施用，即，在施用第二藥物之前，與第二藥物同時，或在第二藥物施用之后施用本發(fā)明的制劑。例如，可將本發(fā)明的制劑與美法侖組合同時或相繼地施用。作為另一個實例，可將本發(fā)明的制劑與硼替佐米、美法侖、來那度胺和卡非佐米中的一種或多種組合同時或相繼地施用。
[0028]根據(jù)公開的治療性和預(yù)防性療法，本發(fā)明的制劑可以以多個劑量施用，例如以約每天一次至約每年一次的頻率，例如以約每隔一周一次至約每三個月一次的頻率，或例如每月一次。在一個方面，以在約IOmg至約5000mg藥物的范圍內(nèi)的劑量靜脈內(nèi)施用本發(fā)明的抗體制劑。例如，可以以約每隔一周一次至約每隔一月一次的頻率，以約30mg至約2500mg人源化2A4藥物的劑量施用制劑。用于公開的方法的代表性劑量包括30mg、100mg、300mg、1000mg、2000mg 和 2500mg 的人源化 2A4 藥物。
[0029]在本發(fā)明的一個方面，治療性或預(yù)防性治療患有特征在于淀粉樣蛋白原纖維、沉積物或原纖絲聚集物的存在的輕鏈(AL)淀粉樣變性或處于患所述疾病的風(fēng)險中的人患者的方法包括，給患者施用有效劑量的藥物制劑，所述藥物制劑包含:(a)包含含有SEQ IDNO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈的抗體，并且所述抗體以約10mg/mL的濃度存在；(b)以約25mM的濃度存在的組氨酸緩沖劑；(C)以約230mM的濃度存在的海藻糖；(d)以約0.2g/L的濃度存在的聚山梨醇酯20 ；和(e)約6.5的pH。在此類方法中，劑量通常為以約每周一次至約每季度一次的頻率(例如，每28天一次)靜脈內(nèi)或皮下施用的約0.5mg/kg至約30mg/kg的抗體(例如，約0.5mg/kg 至約 8mg/kg,或約 8mg/kg 至約 30mg/kg)。
[0030]本發(fā)明還提供了藥物產(chǎn)品(pharmaceutical product),其包含:(a)裝有IOOmg以粉劑形式存在的抗體的小瓶；(b)抗體重構(gòu)說明書；和(c)制備用于輸注的重構(gòu)的抗體的說明書，其中⑴抗體包含，含有SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ IDNO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈；和(ii)重構(gòu)說明書要求，利用注射用水重構(gòu)至IOmL的可抽出體積。
[0031]附圖概述
[0032]圖1A-1B顯示不同的人源化2A4抗體的輕鏈和重鏈序列。粗體和下劃線標示的是，用于N連接的糖基化的共有序列。
[0033]圖2顯示鼠2A4和7D8的輕鏈可變區(qū)(VL)及重鏈可變區(qū)(VH)的序列。雙下劃線標示的是，前導(dǎo)序列；下劃線標示的是，互補決定區(qū)(CDR)序列。
[0034]圖3顯示人源化2A4形式3的輕鏈可變區(qū)(VL)和重鏈可變區(qū)(VH)的序列。小寫字母標示的是，回復(fù)突變。
[0035]圖4A-4B顯示，編碼人源化2A4形式3的重鏈(圖4A)和輕鏈(圖4B)序列的核酸序列。單下劃線標示的是，前導(dǎo)序列；無下劃線的是，可變區(qū)；雙下劃線標示的是，恒定區(qū)。
[0036]發(fā)明詳述
[0037]本發(fā)明提供了用于預(yù)防和治療淀粉樣蛋白疾病的抗體制劑。在本發(fā)明的一個方面，藥物制劑包含，(a)特異性地與2A4或7D8競爭對抗原的結(jié)合，和/或針對包含AEDS (SEQID NO: 18)的表位的抗體2A4 (ATCC登錄號PTA-9662)或抗體7D8 (ATCC登錄號PTA-9468)的嵌合或人源化形式或其片段，其中抗體以在約lmg/mL至約100mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在；(b)以在約20mM至約30mM的范圍內(nèi)的濃度存在的組氨酸緩沖劑；(c)以在約210mM至約250mM的范圍內(nèi)的濃度存在的海藻糖；和(d)以在按重量計約0.005%至約0.05%的范圍內(nèi)的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;其中所述制劑的特征在于，在約6至約7的范圍內(nèi)的pH。
[0038]在本文描述的本發(fā)明的一個方面，人源化2A4為鼠2A4的IgGl，κ同種型形式。在人源化2Α4的特異性表征的過程中，發(fā)現(xiàn)抗體還以高親和力和以構(gòu)象依賴性方式與輕鏈淀粉樣蛋白原纖維中的輕鏈、但不與循環(huán)中的游離輕鏈反應(yīng)。
[0039]本發(fā)明提供了用于靜脈內(nèi)輸注靶向AA淀粉樣變性和AL淀粉樣變性患者中的錯誤折疊的淀粉樣蛋白的人源化2Α4和/或人源化7D8抗體的方法。一些人源化2Α4抗體特異性結(jié)合AL和SAA的病理性淀粉樣蛋白形式，但不結(jié)合這些病理形式所源自的親代分子(SAA，天然免疫球蛋白輕鏈[LC]，完整免疫球蛋白[Ig])。
[0040]1.藥物制劑和產(chǎn)品
[0041]LA.特征
[0042]本文中提供了藥物制劑，其包含分別與2Α4或7D8特異性地競爭對抗原(即，人AA或AL蛋白)的結(jié)合，和/或針對表位AEDS (SEQ ID NO: 18)的抗體2Α4 (ATCC登錄號ΡΤΑ-9662)或抗體7D8(ATCC登錄號ΡΤΑ-9468)的嵌合或人源化形式或其片段。還提供了包含鼠抗體2A4或鼠抗體7D8或其片段的藥物制劑。抗體以在約lmg/mL至約100mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在。制劑的特征在于在約6至約7的范圍內(nèi)的pH，并且以在約20mM至約30mM的范圍內(nèi)的濃度包含組氨酸緩沖劑、以在約210mM至約250mM的范圍內(nèi)的濃度包含海藻糖；和以在按重量計約0.005%至約0.05%的范圍內(nèi)的濃包含聚山梨醇酯20。
[0043]術(shù)語“人源化免疫球蛋白”或“人源化抗體”是指，包含至少一個人源化免疫球蛋白或抗體鏈(即，至少一個人源化輕鏈或重鏈)的免疫球蛋白或抗體。術(shù)語“人源化免疫球蛋白鏈”或“人源化抗體鏈”(即，“人源化免疫球蛋白輕鏈”或“人源化免疫球蛋白重鏈”)是指這樣的免疫球蛋白或抗體鏈(即，分別地輕鏈或重鏈)，其具有包括大體上來自人免疫球蛋白或抗體的可變構(gòu)架區(qū)和大體上來自非人免疫球蛋白或抗體的互補決定區(qū)(CDR)(例如，至少一個⑶R，優(yōu)選兩個⑶R，更優(yōu)選三個⑶R)的可變區(qū)，并且還包括恒定區(qū)(例如，在輕鏈的情況下，至少一個恒定區(qū)或其部分，和在重鏈的情況下優(yōu)選三個恒定區(qū))。術(shù)語“人源化可變區(qū)”(例如，“人源化輕鏈可變區(qū)”或“人源化重鏈可變區(qū)”)是指，包括大體上來自人免疫球蛋白或抗體的可變構(gòu)架區(qū)和大體上來自非人免疫球蛋白或抗體的互補決定區(qū)(CDR)的可變區(qū)。
[0044]短語“大體上來自人免疫球蛋白或抗體”或“大體上人”意指，當(dāng)為了比較目的與人免疫球蛋白或抗體氨基酸序列進行比對時，區(qū)域與人構(gòu)架區(qū)或恒定區(qū)序列共有至少80-90%，優(yōu)選90-95%，更優(yōu)選95-99%的同一性(即，局部序列同一性)，允許例如進行保守置換、共有序列置換、種系置換、回復(fù)突變等。保守置換、共有序列置換、種系置換、回復(fù)突變等的引入通常稱為人源化抗體或鏈的“優(yōu)化”。短語“大體上來自非人免疫球蛋白或抗體”或“大體上非人”意指，具有與非人生物例如非人哺乳動物的免疫球蛋白或抗體具有至少80-95 %，優(yōu)選90-95 %，更優(yōu)選96 %、97 %、98 %或99 %的同一性的免疫球蛋白或抗體序列。
[0045]因此，人源化免疫球蛋白或抗體的或人源化免疫球蛋白或抗體鏈的所有區(qū)域或殘基(除了可能地CDR外)與一 個或多個天然人免疫球蛋白序列的對應(yīng)區(qū)域或殘基大體上同一。術(shù)語“對應(yīng)區(qū)域”或“對應(yīng)殘基”是指，當(dāng)為了比較目的將第一與第二序列最佳地比對時，占據(jù)與第一氨基酸或核苷酸序列上的區(qū)域或殘基相同(即，等同)的位置的第二氨基酸或核苷酸序列上的區(qū)域或殘基。
[0046]在一些制劑中，抗體包含含有SEQ ID NO: 1、2或4的任一個所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。在一些制劑中，抗體包含含有SEQ ID N0:3或5所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。在一些制劑中，抗體包含含有SEQ ID NO: 1、2或4的任一個所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和含有SEQ ID N0:3或5所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。在一些制劑中，抗體包含含有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和含有SEQ ID NO: 3所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。在一些制劑中，抗體包含含有SEQ ID N0:4所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和含有SEQ ID NO: 5所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。在一些制劑中，抗體包含含有SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和含有SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
[0047]在一些制劑中，抗體包含含有SEQ ID NO: 6、7和8所示的3個互補決定區(qū)的輕鏈可變區(qū)和含有SEQ IDN0:9、10和11所示的3個互補決定區(qū)的重鏈可變區(qū)。在其它制劑中，抗體包含含有SEQ ID NO: 12,7和8所示的3個互補決定區(qū)的輕鏈可變區(qū)和含有SEQ ID N0:9、10和11所示的3個互補決定區(qū)的重鏈可變區(qū)。
[0048]在本發(fā)明的其它制劑中，抗體包含鼠，嵌合，或人源化2A4抗體或鼠，嵌合或人源化7D8抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)，如美國專利N0.7,928, 203和PCT國際公開案W02009/086539(其各自通過引用整體并入本文)中描述的，將所述專利和公開案中描述的輕鏈和重鏈可變區(qū)序列明確地通過引用并入本文。
[0049]在一些制劑中，抗體包含含有SEQ ID NO: 13或21所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16和24的任一個所示的氨基酸序列的重鏈?？贵w可以包括或可以不包括上述輕鏈和重鏈氨基酸序列的前導(dǎo)序列。
[0050]在其它制劑中，抗體是2A4或7D8抗體的片段，包括其嵌合和人源化形式，例如Fab片段、Fab’片段、F (ab’) 2片段、Fv片段或ScFv片段。
[0051]在本發(fā)明的一些方面，抗體特異性結(jié)合聚集的淀粉樣蛋白，而不特異性地結(jié)合單體淀粉樣蛋白(例如，對于淀粉樣蛋白的單體形式的特異性結(jié)合親和力，至少10倍和通常至少100倍更低)。
[0052]在一些制劑中，抗體以在約5mg/mL至約100mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在。在一些制劑中，抗體以在約5mg/mL至約15mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在。在一些制劑中，抗體以在約25mg/mL至約75mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在。例如，抗體可以以約10mg/mL的濃度存在，或以約50mg/mL的濃度存在。抗體可以以約50mg/瓶至約500mg/瓶或更大的量的無菌液體劑型存在。例如，抗體可以以約IOOmg/瓶的無菌液體劑型存在。
[0053]可將用于公開的制劑的抗體與治療性部分例如細胞毒性劑、放射治療劑、免疫調(diào)節(jié)劑、第二抗體(例如，以形成抗體異綴合物)或促進或增強嵌合或人源化2A4或嵌合或人源化7D8抗體的活性的任何其它生物活性劑偶聯(lián)。代表性治療部分包括，已知對于淀粉樣蛋白疾病或淀粉樣蛋白的癥狀的治療、控制或改善是有用的試劑。
[0054] 還可將用于公開的制劑的抗體與可檢測標記物偶聯(lián)，例如，以用于診斷淀粉樣蛋白障礙，監(jiān)控淀粉樣蛋白疾病的進展，和/或評價治療的效力。如所描述配制的抗體對于在患有AA淀粉樣變性或AL淀粉樣變性或?qū)λ黾膊∫赘械氖茉囌咧?，或在獲自此類受試者的適當(dāng)?shù)纳飿悠分羞M行此類測定是特別有用的?？杀慌悸?lián)或連接至人源化2A4抗體或人源化7D8抗體的代表性可檢測標記物包括，各種酶例如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；輔基，例如鏈霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；熒光材料例如但不限于傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、二氯三嗪基胺熒光素、丹磺酰氯或藻紅蛋白；發(fā)光材料例如魯米諾；生物發(fā)光材料例如螢光素酶、螢光素和水母熒光素；放射性材料例如但不限于碘(131Ι、125Ι、123Ι、121Ι，)、碳(14C)、硫(5S)、氣(3H)、銦(115In、113In、112In、mIn，)和锝("Tc)、鉈(201Ti)、鎵(68Ga、67Ga)、鈀(103Pd)、鑰(99Mo),氙(133Xe)、氟(18F),153Sm,177Lu,159Gd,149Pm,140La,175Yb,166Ho,90Y,47Sc,186Re,188Re,142Pr,105Rh,97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn 和 117Tin ;使用各種正電子發(fā)射斷層攝影術(shù)的正電子發(fā)射金屬、非放射性順磁性金屬離子，和放射性標記或綴合至特定放射性同位素的分子。
[0055]可使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)，將治療性部分和/或可檢測的物質(zhì)直接或通過中間體(例如，接頭)間接偶聯(lián)或綴合至鼠，嵌合或人源化2A4抗體或鼠，嵌合或人源化7D8抗體。參見，例如，Arnon等人，"Monoclonal Antibodies ForImmunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy"，in Monoclonal Antibodies AndCancer Therapy, Reisfeld 等人(eds.), pp.243-56 (Alan R.Lissj Inc.1985)；Hellstrom 等人,"Antibodies For Drug Delivery", in Control led DrugDelivery (第 2 版)，Robinson 等人(eds.)，pp.623-53(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe, "Antibodies Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review", inMonoclonal Antibodies84:Biological And Clinical Applications,Pinchera 等人(eds.)，pp.475-506(1985) !"Analysis, Results, And Future Prospective Of TheTherapeutic Use Of Radiolabeled Antibodies In Cancer Therapy",in MonoclonalAntibody For Cancer Detection And Therapy, Baldwin 等人(eds.), pp.303-16 (AcademicPressl985)和 Thorpe 等人,Tmmunol.Rev., 1982, 62:119-58。
[0056]公開的制劑中使用的抗體還包括，鼠，嵌合或人源化2A4抗體或鼠，嵌合或人源化7D8抗體的修飾形式，所述修飾形式相較于對應(yīng)的未修飾抗體具有增加的體內(nèi)半衰期?？梢岳缤ㄟ^糖基化、乙?；?、PEG化、磷酸化、酰胺化、衍生化(通過已知的保護/封閉基團)、蛋白水解切割、至細胞配體或其它蛋白質(zhì)的連接等來制備此類修飾形式。作為一個實例，用于抗體半衰期延長的代表性方法描述于PCT國際公開案N0.W002/060919中。
[0057]本發(fā)明包括，具有在38°C _42°C持續(xù)至少約30天的穩(wěn)定性(如通過高效尺寸排阻色譜法(HPSEC)評估的)的抗體制劑，具有在20°C _24°C持續(xù)至少約I年的穩(wěn)定性的制劑，和具有在2V -4°C具有持續(xù)至少約3年的穩(wěn)定性的制劑。更具體地，公開的制劑顯示，低至不可檢測的水平的抗體聚集和/或片段化，或高于初始水平的、低的或不可檢測的抗體片段化和/或聚集的增加(例如，低于約10%的聚集)。具有低至不可檢測的水平的片段化的制劑，例如在單個峰中(如通過高效尺寸排阻色譜法(HPSEC)測定的)或在還原毛細管凝膠電泳(rCGE)的兩個(2)峰(對應(yīng)于抗體重鏈和抗體輕鏈的每一個)中，包含至少約80 %、85 %、90 %、95 %、98 %或99 %的總蛋白質(zhì)(其代表非降解抗體)，并且不包含各自具有超過5%、超過4%、超過3%、超過2%、超過1%或超過0.5%的總蛋白質(zhì)的其它單峰。具有低至不可檢測的 水平的聚集的制劑包含，按重量計不超過約15%、不超過約10%、不超過約5%、不超過約4%、不超過約3%、不超過約2%、不超過約I %或不超過約0.5%的聚集蛋白質(zhì)，如通過高效尺寸排阻色譜法(HPSEC)測量的。例如，在一些制劑中，少于約10%的抗-淀粉樣蛋白抗體以聚集物的形式存在。本發(fā)明的穩(wěn)定的制劑還顯示幾乎無或無嵌合或人源化2A4或嵌合或人源化7D8的生物活性(例如可通過ELISA和/或其它功能測定測量的結(jié)合親和力)的喪失，例如至少約50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90 %、95 %、98 %或99 %的給定的活性的初始可測量值。
[0058]組氨酸緩沖劑可以以約25mM的濃度存在于一些制劑中。在一些制劑中，組氨酸緩沖劑包含L-組氨酸和L-組氨酸HCl—水合物。例如，在一些制劑中，L-組氨酸以在約16mM至約22mM的范圍內(nèi)的濃度存在并且L-組氨酸HCl —水合物以在約4mM至約8mM的范圍內(nèi)的濃度存在。
[0059]在一些制劑中，海藻糖以約210mM至約250mM例如約230mM的濃度存在。在一些制劑中，使用不同的非還原糖例如蔗糖、甘露醇或山梨醇。
[0060]在一些制劑中，聚山梨醇酯20以在按重量計約0.005%至約0.05%的范圍內(nèi)的濃度，例如，0.005%,0.01%,0.015%,0.02%,0.025%,0.03%,0.035%,0.04%,0.045%或0.05%的濃度存在?；蛘撸谝恍┲苿┲?，聚山梨醇酯20以在約0.05g/L、0.1g/L、0.15g/L、0.2g/L、0.25g/L、0.3g/L、0.35g/L、0.4g/L、0.45g/L 或 0.5g/L 的濃度存在。一些制劑以0.2g/L的濃度包含聚山梨醇酯20。
[0061]一些制劑的特征在于，在約6-7的范圍內(nèi)的pH，例如，6.0,6.1,6.2,6.3,6.4,6.5、
6.6,6.7,6.8,6.9 或 7.0 的 pH。一些制劑具有約 6.5 的 pH。
[0062]一些制劑的特征在于約300m0sm/kg的重量摩爾滲透壓濃度。
[0063]填充劑也可包含在一些制劑中。
[0064]通常地，制劑是無菌的，例如，如通過使用0.2μπι或0.22 μ m濾器無菌過濾實現(xiàn)的。本發(fā)明的制劑在冷凍和解凍后通常也是穩(wěn)定的。
[0065]任選地，本發(fā)明的制劑還可包含其它賦形劑，例如糖、多元醇和氨基酸(例如，精氨酸、賴氨酸和甲硫氨酸)。在其它方面，本發(fā)明還提供了大體上不含表面活性劑、無機鹽、另外的糖和/或其它賦形劑，即少于約0.0005%、少于0.0003%或少于0.0001%的此類化合物的制劑。
[0066]示例性制劑包含抗體，所述抗體包含含有SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID N0:14、15或16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈，所述抗體以約10mg/mL的濃度存在；以約25mM的濃度存在的組氨酸緩沖劑；以約230mM的濃度存在的海藻糖；以約0.2g/L的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;并且pH為約6.5。
[0067]1.B.藥物制劑的制備
[0068]本發(fā)明還提供 制備藥物制劑的方法。在本發(fā)明的一個方面，此類方法包括，(a)培養(yǎng)已將編碼鼠抗體2A4(ATCC登錄號PTA-9662)或抗體7D8 (ATCC登錄號PTA-9468)或其嵌合或人源化形式的重鏈或輕鏈的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組的哺乳動物細胞，以便細胞將抗體分泌進入細胞培養(yǎng)基，和從細胞培養(yǎng)基純化抗體；(b)和制備制劑，所述制劑包含，
(i)以在約lmg/mL至約100mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在的純化的抗體；(ii)以在約20mM至約30mM的范圍內(nèi)的濃度存在的組氨酸緩沖劑以在約210mM至約250mM的范圍內(nèi)的濃度存在的海藻糖；和(iv)以在按重量計約0.005%至約0.05%的范圍內(nèi)的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;其中制劑的特征在于在約6至約7的范圍內(nèi)的pH。
[0069]在本發(fā)明的一些方面，公開的制備藥物制劑的方法包括，評價制劑中的抗體的至少一個性質(zhì)的另外的步驟，所述性質(zhì)選自物理穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性和生物活性。
[0070]例如，在本發(fā)明的一個方面，培養(yǎng)哺乳動物細胞以產(chǎn)生抗體，其中哺乳動物細胞已將編碼人源化2A4抗體的輕鏈和重鏈的核酸穩(wěn)定地整合進入它們的基因組。用于該目的的哺乳動物細胞包括，(a)已將編碼SEQ ID NO: 13或21所示的人源化2A4輕鏈和SEQ ID NO: 15或24所示的人源化2A重鏈的核酸序列穩(wěn)定地整合進入其基因組的宿主細胞；(b)已將具有SEQ ID NO: 19的核苷酸序列的核酸和具有SEQ ID NO: 22的核苷酸序列的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組的宿主細胞；和(c)已將具有SEQ ID NO:20的核苷酸序列的核酸和具有SEQID NO:23的核苷酸序列的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組的宿主細胞。
[0071]為了產(chǎn)生抗體，將公開的核酸包含在載體中。在一些實例中，載體包含，有效地連接至能夠?qū)崿F(xiàn)DNA在宿主細胞中表達的適當(dāng)?shù)目刂菩蛄械木幋a鼠2A4或7D8抗體或其嵌合或人源化形式的核酸。此類控制序列包括，實現(xiàn)轉(zhuǎn)錄的啟動子(例如，本領(lǐng)域已知的組成型啟動子或誘導(dǎo)型啟動子)、控制此類轉(zhuǎn)錄的任選的操縱子序列、編碼適當(dāng)?shù)膍RNA核糖體結(jié)合位點的序列、增強子、多腺苷酸化信號以及控制轉(zhuǎn)錄和翻譯的終止的序列。載體可以是質(zhì)粒、噬菌體顆粒(例如，病毒載體例如腺病毒、腺相關(guān)病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、皰疹病毒、痘苗病毒、慢病毒、痘病毒和巨細胞病毒載體)，或僅僅是基因組插入物。當(dāng)轉(zhuǎn)化進入適當(dāng)?shù)乃拗骱?，抗體核酸可整合進入宿主的基因組，或載體可以不依賴于宿主基因組而復(fù)制和起作用。
[0072]可將公開的核酸單獨地或組合地(例如，編碼抗體輕鏈的核酸和編碼抗體重鏈的核酸的組合)包含在載體中。例如，載體可包含，含有編碼SEQ ID N0:13-16、21或24的任一個的核苷酸序列的核酸；含有SEQ ID NO: 19-20和22-23的任一個的核苷酸序列的核酸，或其組合。本發(fā)明的代表性載體包括，(a)包含編碼SEQ ID NO: 13所示的人源化2A4輕鏈和SEQ ID NO: 15所示的人源化2A重鏈的核酸序列的載體；(b)包含具有SEQ ID NO: 19的核苷酸序列的核酸和具有SEQ ID NO:22的核苷酸序列的核酸的載體；和(c)包含具有SEQ IDNO:20的核苷酸序列的核酸和具有SEQ ID NO:23的核苷酸序列的核酸的載體。
[0073]用于制備本發(fā)明的抗體制劑的宿主細胞包括哺乳動物細胞(包括人來源的細胞)，例如猴腎細胞、人胚胎腎細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、小鼠塞爾托利細胞、人宮頸癌(HeLa)細胞、犬腎細胞、人肺細胞、人肝細胞、小鼠乳房腫瘤細胞和NSO細胞。例如，宿主細胞可在其基因組中包含，含有編碼SEQ ID NO: 13-16,21和24的任一個的核苷酸序列的穩(wěn)定地整合的核酸；含有SEQ ID NO: 19-20和22-23的任一個的核苷酸序列的穩(wěn)定整合的核酸，或其組合。本發(fā)明的代表性宿主細胞包括，(a)包含編碼SEQ IDNO: 13或21所示的人源化2A4輕鏈和SEQ ID NO: 15或24所示的人源化2A重鏈的核酸序列的宿主細胞；(b)包含具有SEQ ID NO: 19的核苷酸序列的核酸和具有SEQ ID NO: 22的核苷酸序列的核酸的宿主細胞；和(c)包含具有SEQ ID NO:20的核苷酸序列的核酸和具有SEQID NO:23的核苷酸序列的核酸的宿主細胞。 [0074]在本發(fā)明的另一個方面，嵌合或人源化2A4抗體或嵌合或人源化7D8抗體通過化學(xué)合成來制備，隨后將其用于公開的制劑中。
[0075]用于制備公開的制劑的抗體通常是分離的或純化的，即大體上不含來自產(chǎn)生它們的細胞的細胞材料或其它污染性蛋白質(zhì)，或當(dāng)化學(xué)合成時，大體上不含化學(xué)藥物前體或其它化學(xué)藥物。例如，大體上不含細胞材料的抗體包括，具有少于約30 %、25 %、20 %、15 %、10%、8%、5%、2%、1%、0.5%、0.1%或更少(按干重計)的污染性蛋白質(zhì)的抗體的制劑。當(dāng)重組產(chǎn)生抗體時，其還大體上不含細胞培養(yǎng)基，從而細胞培養(yǎng)基構(gòu)成少于約30 %、25 %、20%,15%,10%,8%,5%,2%,1%>0.5%,0.1 %或更少的蛋白質(zhì)制劑的體積。當(dāng)通過化學(xué)合成產(chǎn)生抗體時，其優(yōu)選大體上不含化學(xué)藥物前體或參與蛋白質(zhì)合成的其它化學(xué)藥物，或與所述化學(xué)藥物前體或其它化學(xué)藥物分離。因此，此類抗體制劑具有少于約30%、25%、20%,15%,10%,8%,5%,2%U%>0.5%,0.1%或更少(按干重計)的化學(xué)藥物前體或除抗體藥物外的化合物。重組表達的抗體的純化可利用本領(lǐng)域已知的許多方法中的任何方法，例如親和層析、酸處理、深度過濾、陰離子交換層析、陽離子交換層析、納米過濾、超濾、透析和滲濾(diafiltration)。
[0076]可將純化的抗體藥物調(diào)整成包含本文中描述的任何制劑的溶液，其稀釋至期望的濃度并貯存以待使用。任選地，可將制劑以濃縮的形式貯存以待使用。取決于它們的穩(wěn)定性特征，液體制劑可在冷凍條件下以冰凍的形式貯存，或在室溫下貯存，這可根據(jù)經(jīng)驗來確定。在一些情況下，使用進一步的過濾步驟?？蓪⒈疚闹忻枋龅囊恍┲苿├鋬龈稍锊⒁苑蹌┬问劫A存。取決于它們的穩(wěn)定性特征，凍干制劑可在冷凍條件下以冰凍形式貯存或在室溫下貯存，這可根據(jù)經(jīng)驗來確定。例如，可在約2°C至8°C的溫度下貯存凍干制劑。在此類情況下，可在給患者施用之前重構(gòu)制劑，以產(chǎn)生具有以本文中描述的濃度存在的抗體和賦形劑的液體制劑。在一些情況下，在無菌水中重構(gòu)制劑。在一些情況下，重構(gòu)制劑，將其添加至用于給患者施用的輸液袋中。可在給患者施用之前在冷凍條件下或在室溫下貯存重構(gòu)的制劑，進行與穩(wěn)定性特征一致的時間。冷凍干燥和重構(gòu)技術(shù)在本領(lǐng)域是已知的并且描述于實施例中。
[0077]因此，本發(fā)明還包括，包含凍干的抗體藥物以及重構(gòu)和使用說明書的藥物產(chǎn)品。例如，代表性藥物產(chǎn)品可包括:(a)裝有約IOOmg以粉劑形式存在的抗體的小瓶；(b)抗體重構(gòu)說明書；和(c)制備用于輸注的重構(gòu)抗體的說明書，其中⑴抗體包含含有SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈；和
(ii)重構(gòu)說明書要求，用注射用水重構(gòu)至IOmL的可抽出體積。
[0078]I1.診斷和治療的方法
[0079]還提供了治療性或預(yù)防性治療患有特征在于淀粉樣蛋白原纖維的存在的淀粉樣變性或處于患所述疾病的風(fēng)險中的人患者的方法，所述方法包括給患者施用有效劑量的本文中描述的制劑的任何制劑。
[0080]I1.A.順從診斷和治療的受試者
[0081]人源化2A4藥物將用于治療全身性淀粉樣變性，例如牽涉淀粉樣蛋白輕鏈AL或淀粉樣蛋白A(AA)蛋白的淀粉樣變性。全身性淀粉樣變性是由錯誤折疊的蛋白質(zhì)的組織沉積引起的一組復(fù)雜的疾病，其導(dǎo)致進行性器官損傷。最常見的類型，AL淀粉樣變性或原發(fā)性淀粉樣變性，牽涉由產(chǎn)生錯誤折疊的免疫球蛋白輕鏈的克隆性漿細胞引起的血液學(xué)障礙。漿細胞過度產(chǎn)生錯誤折疊的輕 鏈導(dǎo)致異常AL蛋白(淀粉樣蛋白)在患有AL淀粉樣變性的個體的組織和器官中沉積。AL淀粉樣變性的臨床特征包括一組癥狀和器官功能障礙，其可包括心臟、腎和肝功能障礙、GI受累、神經(jīng)病和巨舌癥。不同形式的全身性淀粉樣變性，AA淀粉樣變性或繼發(fā)性淀粉樣變性，由于其它疾病例如慢性炎性疾病(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和強直性脊柱炎)或慢性感染(例如，肺結(jié)核或骨髓炎)而“繼發(fā)性”發(fā)生。在繼發(fā)性淀粉樣變性中，沉積的淀粉樣蛋白是淀粉樣蛋白A，來源于急性期蛋白血清淀粉樣蛋白A。
[0082]周圍淀粉樣變性順從于該類型的淀粉樣蛋白-特異性免疫療法(通過在AA淀粉樣蛋白中以及AL淀粉樣蛋白中鑒定的新表位的抗體靶向)。AA和AL的動物模型中的研究已顯示，合理劑量的抗體能夠獲得顯著的積極治療作用。
[0083]順從于使用公開的抗體制劑的治療的受試者或患者包括，處于發(fā)生疾病的風(fēng)險中但未顯示癥狀的個體，以及已顯示淀粉樣蛋白疾病的癥狀的患者。因此，可給一般群體預(yù)防性施用本發(fā)明的方法，而無需對受試患者進行任何風(fēng)險評估。例如，本發(fā)明的方法對于確實具有已知的自身免疫障礙遺傳風(fēng)險的個體是特別有用的。此類個體包括，具有已經(jīng)歷該疾病的親戚的個體和其風(fēng)險已通過遺傳或生物化學(xué)標志物的分析得到確定的個體。作為另一個實例，患有AA淀粉樣變性的患者可長期無癥狀，這使得在淀粉樣蛋白沉積物廣泛出現(xiàn)之前，AA淀粉樣變性的臨床診斷通常被耽誤或錯失。對于無癥狀的這些患者，據(jù)估計僅53%的病例被診斷出來。參見，例如，L.E.K.Consulting, Independent Market Research(2003)。預(yù)防性施用公開的抗體制劑可降低AA淀粉樣變性的發(fā)病率。
[0084]本發(fā)明的方法對于確實具有已知的患AA淀粉樣變性或AL淀粉樣變性的風(fēng)險或懷疑患有所述疾病或已被診斷為患有所述疾病的個體是特別有用的。此類個體包括但不限于，患有慢性炎性疾病、遺傳性炎性疾病和慢性微生物感染，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、銀屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)病、Reiter s綜合征、成人Still’s病、Behcet’s綜合征、克羅恩病、家族性地中海熱、麻瘋病、肺結(jié)核、支氣管擴張癥、壓力性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髓炎、Whipple’s病、骨髓瘤、巨球蛋白血癥、免疫細胞惡液質(zhì)、單克隆丙種球蛋白病、潛隱性惡液質(zhì)的個體。慢性炎性和感染性病況是AA淀粉樣變性發(fā)展的前提，并且表現(xiàn)為局部結(jié)節(jié)性淀粉樣變性的AL淀粉樣變性可與慢性炎性疾病相關(guān)。確實具有已知的患AA淀粉樣變性的風(fēng)險的個體還包括但不限于，具有惡性腫瘤如何杰金氏淋巴瘤、腎癌、腸癌、肺癌和泌尿生殖道癌、基底細胞癌和多毛細胞白血病的那些個體。此外，具有已知的患AA淀粉樣變性的風(fēng)險的個體還包括但不限于，具有淋巴組織增殖性疾病例如Castleman’s病的個體。一些此類患者具有特征在于淀粉樣蛋白A蛋白原纖維的存在的AA淀粉樣變性。一些此類患者具有特征在于淀粉樣蛋白輕鏈類型蛋白原纖維的存在的AL淀粉樣變性。一些患者具有歸因于AL淀粉樣變性的全身性器官功能障礙，包括心臟、腎、肝、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、胃腸系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)、肺和/或軟組織或淋巴系統(tǒng)的功能障礙。
[0085]順從于治療的患者還包括，已接受、目前正接受或以后將接受替代療法以治療淀粉樣蛋白疾病或相關(guān)病況例如炎性疾病、慢性微生物感染、惡性腫瘤、遺傳性炎性疾病和淋巴組織增殖性疾病的那些患者。例如，患者還可接受或已接受本文中針對聯(lián)合治療而鑒定的一種或多種治療劑。作為具體的實例，患有AL的患者還可接受或已接受，硼替佐米、美法侖、來那度胺和/或卡非佐米。對于先前已接受用于治療淀粉樣蛋白疾病的替代療法的那些患者，此類療法根據(jù)相關(guān)臨床測量可以是成功的或可以是未成功的。
[0086]I1.B.治療方案 [0087]如本文中所用，術(shù)語“治療”和“醫(yī)治”是指，與疾病相關(guān)的一個或多個癥狀或效應(yīng)的緩解或改善，疾病的一個或多個癥狀或效應(yīng)的發(fā)作的防止、抑制或延遲，疾病的一個或多個癥狀或效應(yīng)的嚴重度或頻率的減輕，和/或期望的結(jié)果的增加或趨向，如本文中描述的。
[0088]本文中公開的治療的期望結(jié)果可根據(jù)淀粉樣蛋白疾病和患者特征(patientprofile)而變化，并且對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是可容易地確定的。一般而言，期望的結(jié)果包括可測量的指標，例如病理性淀粉樣蛋白原纖維的減少或清除，減少的或抑制的淀粉樣蛋白聚集和/或淀粉樣蛋白原纖維的沉積，以及增強的對病理性和/或聚集的淀粉樣蛋白原纖維的免疫應(yīng)答。期望的結(jié)果還包括淀粉樣蛋白疾病特異性癥狀的改善。例如，AL淀粉樣變性的治療的期望的結(jié)果包括，已知癥狀包括器官功能障礙、外周和自律神經(jīng)病變、腕管綜合征、巨舌癥、限制性心肌病、大關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)病、免疫惡液質(zhì)、骨髓瘤以及潛隱的惡液質(zhì)的發(fā)病率或嚴重度的降低。作為另一個實例，AA的治療的期望的結(jié)果包括，相關(guān)炎癥、關(guān)節(jié)炎、銀屑病、微生物感染、惡性腫瘤或AA淀粉樣變性所繼發(fā)自的其它先前存在或共同存在的疾病的癥狀的減少。
[0089]公開的療法的期望結(jié)果，相較于對照或基線測量值，通常是可定量的量度。如本文中所用，相對性術(shù)語例如"改善”、"增加"或"減少"表示，相對于對照例如在開始本文中描述的治療之前相同個體中的測量值或?qū)φ諅€體或組中的測量值的值。對照個體是患有與待治療的個體相同的淀粉樣蛋白疾病的個體，其與待治療的個體年齡大致相同(以確保被治療的個體和對照個體中的疾病的分期是相當(dāng)?shù)?，但未曾接受使用公開的抗體制劑的治療。在該情況下，公開的抗體制劑的效力通過遠離未治療對照中的可測量的指標的偏移或趨勢來評估?；蛘?，對照個體是健康個體，其與待治療的個體年齡大致相同。在該情況下，公開的抗體制劑的效力通過朝向健康對照中的可測量的指標的偏移或趨勢來評估。對療法的反應(yīng)的變化或改善通常是統(tǒng)計學(xué)上顯著的，并且通過P-值來描述，小于或等于0.1，小于0.05，小于0.01，小于0.005或小于0.001的p_值可被認為是顯著的。
[0090]在無癥狀和有癥狀的患者中，根據(jù)公開的方法的治療可始于潛在AA或AL淀粉樣蛋白疾病的診斷之前或之后的任意時間。治療通常必需在一段時間內(nèi)施用多個劑量。治療可通過隨時間過去測定抗體或使用放射性標記的SAP閃爍顯像來監(jiān)測。如果反應(yīng)下降，可表明需要加強劑量。AL淀粉樣變性患者對治療的反應(yīng)可通過評估心臟標志物例如NT-proBNP和/或肌鈣蛋白、血清肌酸和/或堿性磷酸酶；通過進行無血清輕鏈(SFLC)測定、定量免疫球蛋白測定、活組織檢查、血清蛋白電泳(SPEP)、尿蛋白質(zhì)電泳(UPEP)、血清、尿免疫固定電泳(IFE)和/或器官成像技術(shù)來監(jiān)測?？筛鶕?jù)反應(yīng)標準例如血清和尿的陰性IFE、正常κ/λ比率和/或骨髓中少于5%的漿細胞來確定示例性完全反應(yīng)(CR)?？蓮牡陀?0mg/L的dFLC確定示例性很好的部分反應(yīng)(VGPR)。可從≥50%的dFLC減少確定示例性部分反應(yīng)(PR)。在腎中，可以例如在≥25%的eGFR的減少或≥0.5mg/dL的血清肌酸的增加不存在的情況下，從24小時尿蛋白質(zhì)排泄的> 50%的減少(例如，>0.5g/24小時)確定對治療的反應(yīng)。在肝中，可以例如從初始升高的堿性磷酸酶的> 50%的減少或根據(jù)CT掃描或MRI的肝尺寸的≥2cm的減小確定對治療的反應(yīng)。在心臟中，可以例如從具有>650ng/L的NT-proBNP基線的患者的NT-proBNP的≥30%和300ng/L的減少確定對治療的反應(yīng)。
[0091]對于所述患者,可在約IOmg至約5000mg的劑量范圍內(nèi)，例如以約10mg、約30mg、約lOOmg、約300mg、約lOOOrng、約2000mg或約2500mg靜脈內(nèi)施用抗體制劑。還可在約0.lmg/kg至約50mg/kg,或約0.5mg/kg至約30mg/kg宿主體重的劑量范圍內(nèi)靜脈內(nèi)施用抗體制劑。例如，劑量可以為約0.5mg/kg體重、約1.0mg/kg、約1.5mg/kg、約2.0mg/kg、約 4.0mg/kg、約 5.0mg/kg、約 8.0mg/kg、約 10mg/kg、約 15mg/kg、約 16mg/kg、約 20mg/kg、約25mg/kg,或約30mg/kg體重。個體患者的劑量增加可由處方醫(yī)生在不存在任何臨床上顯著的事件的情況下自行確定，所述臨床上顯著的事件可被處方醫(yī)生合理地認為給患者帶來過度的安全性風(fēng)險，例如，等級> 3的非血液學(xué)毒性、等級> 3的不受最大止嘔吐/抗腹瀉療法控制的惡心、嘔吐或腹瀉、在生長因子支持不存在的情況下持續(xù)>7天的等級4的中性粒細胞減少癥、伴隨> 38.5°C的發(fā)熱和/或全身性感染的任何持續(xù)時間的等級3或4的中性粒細胞減少癥，或其它等級> 4的血液學(xué)毒性。
[0092]通常在多種情況下施用抗體。示例性治療方案使得必需進行每兩周一次、每月一次或每3-6個月一次的施用。例如，患者可接受每4周一次的抗體制劑(作為一個周期)，例如每28天一個周期。取決于抗體制劑在患者中的藥代動力學(xué)特征(pharmacokineticprofile)，可調(diào)整給藥頻率。例如，抗體的半衰期可允許兩周的給藥頻率。在一些方法中，同時施用兩種或更多種具有不同結(jié)合特異性的單克隆抗體，在該情況下施用的每一種抗體的劑量落在指定的范圍內(nèi)。單次劑量之間的間隔可以是每周I次、每月I次或每年I次。間隔也可以是無規(guī)律的，如通過測量患者中針對淀粉樣蛋白(例如，AA)的抗體的血液水平所指示的。在一些方法中，調(diào)整劑量以達到約1-1000 μ g/ml或約25-300 μ g/ml的血漿抗體濃度?；蛘?，可將抗體作為持續(xù)釋放制劑來進行施用，在該情況下需要更少頻率的施用。
[0093]劑量和頻率取決于抗體在患者中的半衰期而變化。一般而言，人抗體顯示最長半衰期，隨后為人源化抗體、嵌合抗體和非人抗體。施用的劑量和頻率可取決于治療是預(yù)防性的還是治療性的而變化。在預(yù)防性應(yīng)用中，在長時期內(nèi)以相對不頻繁的間隔施用相對低的劑量。一些患者在其余生中持續(xù)接受治療。在治療性應(yīng)用中，有時需要以相對短的間隔施用相對高的劑量，直至疾病的進展減小或終止，直至實現(xiàn)部分或完全反應(yīng)，和/或直至患者顯示疾病癥狀的減輕或改善。此后，可對患者施用預(yù)防性方案。
[0094]本文中公開的制劑可以以適合于胃腸外(例如，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下)施用的劑型提供。視具體應(yīng)用而定，可以以適合于直腸、經(jīng)皮膚、經(jīng)鼻、經(jīng)陰道、吸入、經(jīng)眼或其它施用的劑量可選擇地提供制劑。通常按照常規(guī)藥學(xué)實踐制備藥物制劑。參見例如，Remington:TheScience and Practice of Pharmacy,(第 19 版)ed.A.R.Gennaro, 1995, Mack PublishingCompany, Easton, Pa.和 Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds.J.Swarbrick和 J.C.Boylan, 1988-1999，Marcel Dekker, N.Y.。
[0095]在本發(fā)明的一個方面，治療性或預(yù)防性治療患有特征在于淀粉樣蛋白原纖維、沉積物或原纖絲聚集物的存在的輕鏈(AL)淀粉樣變性或處于患所述疾病的風(fēng)險中的人患者的方法，包括給患者施用有效劑量的藥物制劑，所述藥物制劑包含:(a)抗體，其包含含有SEQ ID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一項所示的氨基酸序列的重鏈，并且其以約10mg/mL的濃度存在；(b)以約25mM的濃度存在的組氨酸緩沖劑；
(c)以約230mM的濃度存在的海藻糖；⑷以約0.2g/L的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;和(e)約6.5的pH。在此類方法中，劑量通常為以約每周一次至約每季度一次(例如，每28天一次)的頻率靜脈內(nèi)或皮下施用的約0.5mg/kg至約30mg/kg的抗體(例如，約0.5mg/kg至約 8mg/kg,或約 8mg/kg 至約 30mg/kg)。
[0096]I1.C.聯(lián)合藥物療法治療方案
[0097] 本發(fā)明還包括，用于治療或預(yù)防淀粉樣蛋白疾病，特別地AA淀粉樣變性和AL淀粉樣變性的聯(lián)合治療。此類聯(lián)合治療通過將本發(fā)明的抗體制劑與一種或多種第二治療劑(例如視情況而定，治療或預(yù)防AA淀粉樣變性或AL淀粉樣變性的另一種療法)結(jié)合施用來進行。還可將根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合治療與用于治療或預(yù)防與淀粉樣蛋白疾病相關(guān)的疾病或病況例如炎性疾病、慢性微生物感染、腫瘤(包括惡性腫瘤)、遺傳性炎性疾病和/或淋巴組織增生性障礙的第二療法結(jié)合施用。許多治療可獲得用于商業(yè)用途，用于臨床評價和用于臨床前開發(fā)，其任一種可被選擇來與公開的抗體制劑組合使用。此類治療可以是一種或多種化合物或治療，其選自但不限于幾個主要種類，即，(i)非類固醇抗炎藥(NSAIDj^如，detopiOfen、雙氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、非諾洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、萘丁美酮、萘普生鈉、奧沙普秦、吡羅昔康、舒林酸、托美丁、塞來考昔、羅非昔布、阿司匹林、水楊酸膽堿、salsalte、以及水楊酸鈉和水楊酸鎂)；(ii)類固醇(例如，可的松、地塞米松、氫化可的松、甲潑尼龍、潑尼松龍、潑尼松、曲安西龍)；(iii)DMARD，即，改善病情抗風(fēng)濕藥(例如，環(huán)孢菌素、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、來氟米特、環(huán)磷酰胺、輕氯喹、柳氮磺胺吡啶、D-青霉胺、米諾環(huán)素和金)；(iv)重組蛋白(例如，ENBREL? (依那西普，可溶性TNF受體)和REMICADE? (英夫利昔單抗)嵌合單克隆抗-TNF抗體)；(v)干細胞移植；和/或(vi)化學(xué)療法。AL淀粉樣變性患者還可接受治療方案，所述治療方案包括，以護理標準范圍內(nèi)的劑量施用的、通常用于治療血液惡性腫瘤的藥物或藥物的組合，所述藥物例如美法侖、潑尼松、地塞米松、來那度胺(REVLM1D⑩)和蛋白體抑制劑例如硼替佐米(VELCADE?)和卡非佐米(kyprolis?)。
[0098]聯(lián)合治療的持續(xù)時間取決于待治療的淀粉樣蛋白疾病的類型、與淀粉樣蛋白疾病相關(guān)的任何基礎(chǔ)性疾病、患者的年 齡和狀況、患者疾病的分期和類型、患者對治療的反應(yīng)等。醫(yī)生可密切地觀察治療效果，并根據(jù)需要進行任何調(diào)整。此外，具有更大的發(fā)生AA淀粉樣變性或AL淀粉樣變性的風(fēng)險的人(例如，在遺傳上易罹患或先前患有炎性病癥或其它基礎(chǔ)性疾病的人)可接受預(yù)防性聯(lián)合治療，以抑制或延遲AAAL聚集物例如原纖維的產(chǎn)生，或作為治療后維持療法。
[0099]當(dāng)進行聯(lián)合治療時，可同時施用或以任意順序依次施用兩種或更多種藥物，即在施用第二藥物之前，與第二藥物同時，或在施用第二藥物之后施用本發(fā)明的制劑。例如，聯(lián)合治療可通過在施用第二試劑/療法之前(例如，之前I分鐘、5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、I小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、I周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、與之同時，或在其之后(例如，之后I分鐘、5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、I小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、I周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)施用第一療法而進行。
[0100]可獨立地控制組合治療的每一種組分的施用劑量、頻率和模式。例如，可每天3次口服施用一種治療劑/療法，而可每天一次肌內(nèi)施用第二治療劑/療法。聯(lián)合治療可以以包括休息期的間歇性周期提供。還可將化合物混合或另外配制在一起，以便一次施用遞送兩種化合物。在該情況下，每一種治療劑通常以按重量計1-95%的組合物總重量的量存在。或者，可分開地并以單獨的劑量配制本發(fā)明的抗體制劑和第二治療劑。用于治療的藥物組合可以以藥物包裝的組分提供。
[0101]優(yōu)選地，公開的聯(lián)合治療引發(fā)協(xié)同治療作用，即，大于它們各自的作用或治療結(jié)果之和的作用?？蓽y量的治療結(jié)果描述于本文中。例如，協(xié)同治療作用可以是這樣的作用，其為由給定的組合的單一試劑引發(fā)的治療作用之和的至少約2倍，或至少約5倍，或至少約10倍或至少約20倍，或至少約50倍，或至少約100倍。協(xié)同治療作用還可被觀察為，相較于由給定的組合的單一試劑引發(fā)的治療作用之和，至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或至少100%或更多的治療作用的增加。協(xié)同作用還可以是，當(dāng)將組合施用治療劑時，允許減少治療劑的劑量的作用。
實施例
[0102]下列實施例用于舉例說明本發(fā)明的實施方案。下列實施例的某些方面根據(jù)在本發(fā)明的實踐中良好地工作的、由本申請共同發(fā)明人發(fā)現(xiàn)或考慮的技術(shù)和方法進行描述?；诒竟_內(nèi)容和本領(lǐng)域技術(shù)人員的一般水平，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，下列實施例僅意欲為示例性的，并且可進行許多變化、修飾和改變而不背離本發(fā)明的范圍。
[0103]實施例1.用于治療AL淀粉樣變性的人源化2A4的選擇
[0104]制備IgGl、κ同種型抗體，其為鼠抗體2A4的人源化形式。代表性人源化2A4抗體的輕鏈和重鏈序列示于圖1A-1B和3中。編碼特定人源化2A4抗體形式3 (其氨基酸序列不于圖3中)的核酸描述于圖4A-4B中。
[0105]親代單克隆2A4抗體針對人血清淀粉樣蛋白A(sAA)的新-羧基末端表位(其因天然sAA分子在氨基酸殘基76上的切割而產(chǎn)生)。鼠抗體不與IgG或游離輕鏈(LC)交叉反應(yīng)，并且其已顯示針對迄今為止檢查的患者來源的AL淀粉樣蛋白樣品的廣泛的同種型識別。2A4識別AL輕鏈淀粉樣蛋白的多種形式，包括可溶性多聚體和不溶性沉積物。此外，已顯示，抗體在小鼠異種移植物模型中促進淀粉樣瘤的消退。鼠2A4抗體的輕鏈和重鏈序列示于圖2中。
[0106]實施例2.人源化2A4抗體的劑量測定
[0107]TRIAD小鼠模型和食蟹猴的非臨床研究已利用4和40mg/kg的劑量(在小鼠中)和10、50和100mg/kg的劑量(猴子中)。基于mg/kg的至人等效劑量(HED)的轉(zhuǎn)化(因它們限制于血管空間而為最適當(dāng)?shù)挠糜趩慰寺】贵w的轉(zhuǎn)化)給出0.32和3.2(對于小鼠)以及3.2、16和32(對于猴子)的HED。基于目前可獲得的數(shù)據(jù)，預(yù)期兩個物種中的NOAEL為最高施用劑量。通過使用3.2的小鼠HED (因給藥限制而為最敏感的物種)和IOX安全系數(shù)，在首次人給藥中MRSD為約0.32mg/kg?；趧游镅芯?，對人的施用始于0.5mg/kg的劑量。
[0108]實施例3.表達載體的制備
[0109]為了產(chǎn)生最終的h2A4IgGlHC 載體，使用質(zhì)粒 CET1019AS-hygro-h2A4VH3_Sce4.23.07作為模板通過PCR分離重鏈的可變區(qū)。用于擴增的引物在片段的5’末端引入MfeI限制位點和在3’末端引入BlpI限制位點，用于亞克隆。將可變區(qū)克隆進入MfeI和BamHI消化的真核生物表達載體PB1-61，所述載體包含Glm(3)同種異型的人IgGl的基因組恒定區(qū)。所得的重組表達載體PB 1-61 /2A4 IgG 1-REM大小為9，015個堿基對，并且具有在DHFR啟動子控制之下的來自倉鼠的可選擇標記二氫葉酸還原酶(DHFR)和多腺苷酸化信號。該載體還包含用于在大腸桿菌(E.coli)中進行選擇的β-內(nèi)酰胺酶基因以及大腸桿菌(ColElori)、SV40 (SV40ori)和絲狀噬菌體f I (f lori)的復(fù)制起始點。HC的表達由與來源于倉鼠基因組的轉(zhuǎn)錄增強元件(TE)組合的來自人巨細胞病毒(CMV)的立即早期啟動子/增強子區(qū)域驅(qū)動。為了轉(zhuǎn)錄終止和穩(wěn)定，使用來自倉鼠生長激素的多腺苷酸化信號；為了增強轉(zhuǎn)錄，使用來源于倉鼠基因組的非編碼序列(TE)。
[0110]使用質(zhì)粒CET1019AS-hu2A4VL3-hck-puro-Sce4.19.07 作為模板，通過 PCR 分離h2A4LC的可變區(qū)，并在片段5’末端引入SgrAI限制位點和在3’末端引入KpnI限制位點，用于亞克隆入利用相同限制性內(nèi)切酶消化的終真核生物表達載體PB1-60。該載體包含人κ鏈的基因組恒定區(qū)。所得的重組表達載體PB1-60/2A4LC大小為7，144個堿基對，并且包含在SV40啟動子的控制之下的可選擇標記新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶突變體，其賦予對遺傳霉素的抗性。為了轉(zhuǎn)錄終止，使用來自單純皰疹(Herpes simplex)的胸苷激酶的多腺苷酸化信號。該載體還包含用于在大腸桿菌中進行選擇的內(nèi)酰胺酶基因以及大腸桿菌(ColElori)和絲狀噬菌體fl(flori)的復(fù)制起始點。LC的表達由與來源于倉鼠基因組的轉(zhuǎn)錄增強元件(TE)組合的來自人巨細胞病毒(CMV)的立即早期啟動子/增強子區(qū)域驅(qū)動。為了轉(zhuǎn)錄終止和穩(wěn)定，使用來自倉鼠生長激素的多腺苷酸化信號；為了增強轉(zhuǎn)錄，使用來源于倉鼠基因組的非編碼序列(TE)。
[0111]實施例4.人源化2A4抗體(混合來源的材料)的產(chǎn)生[0112]在生長于無任何牛來源的組分的化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基中的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中產(chǎn)生人源化2A4。將來自生產(chǎn)性細胞系最終所源自的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞的抗體混合。通過蛋白A親和層析純化混合來源的材料。將該材料在食蟹猴中用于人組織交叉反應(yīng)性研究和單劑量藥代動力學(xué)(PK)研究。人源化2A4抗體的制劑為10mg/mL抗體、25mM L-組氨酸
/L-組氨酸HCl —水合物、230禮脫水海藻糖、0.02% (w/v)聚山梨醇酯(HBEN?) 20，pH
=6.5o
[0113]實施例5.人源化2A4抗體(克隆來源的材料)的產(chǎn)生
[0114]從實施例3中描述的細胞混合物中分離單個CHO細胞克隆，在無任何牛材料的情況下，將其用于建立原始細胞庫(Master Cell Bank) (MCB)。使用與人源化2A4的GMP臨床形式(2，OOOL規(guī)模)相同的細胞培養(yǎng)和純化方法(除了按比例放大外)，以80L規(guī)模生產(chǎn)用于非臨床研究的人源化2A4。來自2，OOOL生產(chǎn)規(guī)模的材料也可用于非臨床研究。
[0115]實施例6.制造人源化2A4抗體的方法
[0116]小瓶解凍及接種物擴增。將來自MCB的細胞解凍，轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)募毎囵B(yǎng)瓶中。將細胞在約37°C進行溫育。將解凍的培養(yǎng)物擴增I至4天(細胞解凍后的第一代)。為了進行傳代培養(yǎng)，將等分的生長的細胞培養(yǎng)物(和確定體積的、預(yù)加溫的、0.22 μ m或更小過濾的接種培養(yǎng)基)用于在約0.02L至IL工作體積的標準細胞培養(yǎng)容器中達到約0.1-0.5xl06個細胞/mL的接種密度。例如，可在0.125L或0.25L或0.5L培養(yǎng)容器中進行第一代培養(yǎng)，隨后在IL培養(yǎng)容器 中進行傳代?？稍谠撆囵B(yǎng)階段起始原種培養(yǎng)。為了制備用于單個生產(chǎn)發(fā)酵罐的接種培養(yǎng)物，將原種培養(yǎng)物的等分進行擴增，以產(chǎn)生達到25L體積的培養(yǎng)物。通常地，將細胞培養(yǎng)物從IL培養(yǎng)物按比例放大至2個或更多個IL或2L培養(yǎng)物，隨后放大至2個或更多個2L或3L培養(yǎng)物，最終放大至2個或更多個達到25L培養(yǎng)體積/容器的培養(yǎng)物。將來自幾個容器的生長細胞懸浮物混合，隨后用于接種80L生物反應(yīng)器。搖瓶、方瓶(T-flask)、轉(zhuǎn)瓶(spinner flask)和袋可用作標準細胞培養(yǎng)容器用于上述培養(yǎng)步驟。
[0117]生物反應(yīng)器中的種子培養(yǎng)物。在用細胞接種之前，將0.22 μ m或更小過濾的生長培養(yǎng)基添加至生物反應(yīng)器。將加載的生物反應(yīng)器的內(nèi)容物加溫至約37°C，并在細胞的整個溫育過程中維持在該溫度。將來自接種培養(yǎng)物的細胞轉(zhuǎn)移至預(yù)加溫的培養(yǎng)基中。將初始細胞密度定在0.1-0.5xl06個細胞/mL的范圍內(nèi)。將細胞在80L生物反應(yīng)器中培養(yǎng)，隨后在400L生物反應(yīng)器中培養(yǎng)。大致每2至4天將細胞傳代培養(yǎng)。在該階段，可將細胞轉(zhuǎn)移至相同或更大體積的另一個容器中。通常地，將細胞培養(yǎng)物從IxSOL生物反應(yīng)器培養(yǎng)按比例放大至lx400L培養(yǎng)。為了起始生產(chǎn)階段，將細胞從生長的400L細胞懸浮物轉(zhuǎn)移至約2，OOOL工作體積的生產(chǎn)生物反應(yīng)器。
[0118]2，OOOL生物反應(yīng)器中的生產(chǎn)培養(yǎng)。在接種細胞之前，將0.22 μ m或更小過濾的生產(chǎn)培養(yǎng)基添加至生產(chǎn)生物反應(yīng)器。將加載的生產(chǎn)生物反應(yīng)器的內(nèi)容物加溫至約37°C，并在細胞的整個溫育過程中維持在該溫度。將生產(chǎn)階段的初始細胞密度定在0.1-0.5xl06個細胞/mL的范圍內(nèi)。以分批補料方式運行生產(chǎn)生物反應(yīng)器。為了支持抗體的生產(chǎn)和延長培養(yǎng)持續(xù)時間，在生產(chǎn)階段添加營養(yǎng)補料培養(yǎng)基。通過培養(yǎng)時間或細胞密度確定起始進料的時間點。需要時，可在生產(chǎn)階段添加葡萄糖溶液和/或谷氨酰胺溶液，以避免這些物質(zhì)在生產(chǎn)過程中耗盡。2，OOOL生產(chǎn)生物反應(yīng)器的運行時間通常為8至14天。體外測試收獲前樣品的無菌性、支原體和外來病毒。[0119]收獲和澄清。在生產(chǎn)階段培養(yǎng)8至14天后，將細胞培養(yǎng)液體與細胞分離。在收獲前取樣后并在收獲之前，可調(diào)整培養(yǎng)物的PH和溫度以促進在收獲過程中去除細胞、碎片和顆粒。為了除去細胞，將培養(yǎng)物通過離心+死端式過濾部件。將細胞離心和/或通過膜保留。將收獲的培養(yǎng)液體通過0.22 μ m孔徑或更小孔徑的過濾器，收集在適當(dāng)?shù)娜萜髦小？赏ㄟ^用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗,從收獲系統(tǒng)除去殘留培養(yǎng)液，以從收獲系統(tǒng)回收殘留產(chǎn)物。將所得的回收的產(chǎn)物與收獲的培養(yǎng)液體收集在一起以形成收獲混合物，也稱為收獲的無細胞培養(yǎng)液(HCCF)。調(diào)整HCCF的pH和溫度以有利于隨后的下游處理步驟。
[0120]純化。通過一系列步驟(包括親和層析、酸處理、深度過濾、陰離子交換層析、陽離子交換層析、納米過濾和超濾/滲濾，可以以數(shù)個循環(huán)進行其中的幾個步驟)從HCCF純化抗體。為了除去污染物，親和層析處理步驟特異性地結(jié)合抗體產(chǎn)物。將HCCF用于填充有MabSelect基質(zhì)的層析柱?；|(zhì)在中性pH上結(jié)合抗體，而污染則出現(xiàn)在流通液體中并且被除去。在洗脫步驟中，用IOOmM醋酸/醋酸鈉溶液pH3.5洗脫柱子。為了滅活潛在的病毒污染物，將抗體溶液在pH3.5±0.1在室溫溫育最少60分鐘。在溫育后,使用2M氨丁三醇溶液將酸處理混合物調(diào)整至PH7.2，隨后經(jīng)歷深度過濾以進行澄清。對于陰離子交換層析，用注射用水(WFI)將深度過濾的產(chǎn)物混合物調(diào)整至< 7mS/cm的電導(dǎo)率。將調(diào)整的混合物用于填充有Q Sepharose FF樹脂的層析柱?？贵w通過陰離子交換基質(zhì)，而不結(jié)合。監(jiān)測流通液體，基于吸光度測量值收集含有抗體的級分。對于陽離交換層析，通過添加醋酸將產(chǎn)物混合物調(diào)整至5.5±0.1的pH，用WFI調(diào)整至≤7.5mS/cm的電導(dǎo)率。將調(diào)整的產(chǎn)物混合物用于填充有SP Sepharose FF陽離子交換樹脂的層析柱。以結(jié)合_洗脫模式進行該層析步驟?？贵w結(jié)合陽離子交換基質(zhì)。在洗脫步驟中，用IOOmM醋酸/醋酸鈉和138.5mM氯化鈉溶液pH5.5洗脫柱子。通過將抗體溶液通過0.1 μ m預(yù)濾器和以Planova20N納米過濾器的Ibar分壓的最大壓力通過Planova20N納米過濾器來除去潛在病毒污染物。在超濾/滲濾(UF/DF)期間，將產(chǎn)物濃縮至目標濃度，將緩沖液更換為制劑緩沖液。使用具有約30kD的截斷值的超濾膜進行濃縮 和滲濾。通過將產(chǎn)物濃縮至30-100mg/mL來處理材料。用25mM L-組氨酸，pH6.5的溶液來對30kD混合物進行滲濾,隨后沖洗至約60-70mg/mL的濃度。可立即在-40°C貯存30kD混合物直至進行配制。對于配制，將30kD產(chǎn)物混合物調(diào)整至包含17.5mML-組氨酸/7.5禮1^-組氨酸鹽酸鹽、230禮海藻糖和0.02% (w/v)聚山梨醇酯20，pH = 6.5的溶液。最后用配制緩沖液將抗體稀釋至lOmg/mL的期望的目標濃度。將所得的藥物通過
0.22 um過濾器過濾以除去任何潛在的外來微生物污染物和顆粒材料?？蓪⑺幬镉赺40°C冷凍貯存直至充注。
[0121]實施例7.包含人源化2A4抗體的藥物的表征
[0122]用于制劑的人源化2A4包含兩個異二聚體。每一個異二聚體包含約50kDa(449個氨基酸)的重鏈多肽和約24kDa(219個氨基酸)的κ輕鏈多肽。抗體蛋白具有人源化氨基酸序列，擁有約147kDa的總分子量?？贵w分子的4條多肽鏈通過二硫鍵連接在一起。每一個重鏈多肽包含一個被占據(jù)的用于N連接糖基化的共有序列(位置299至301，在圖1A中以粗體和下劃線突出顯示)。每個抗體分子存在2個針對血清淀粉樣蛋白A表位的結(jié)合部位。
[0123]競爭性結(jié)合ELISA已被建立來測量人源化2A4對其抗原(CGGHEDT(SEQ ID NO: 17)，當(dāng)綴合至卵白蛋白時)的結(jié)合，并與參照標準比較。[0124]實施例8.人源化2A4藥物的組分和組成
[0125]用于臨床使用的人源化2A4藥物(lOOmg/瓶)是由25mL小瓶(20R)中的1mL裝填物組成的無菌液體劑型。非臨床人源化2A4藥物(200mg/瓶)為25mL小瓶(20R)中的20mL裝填物。表1中提供了人源化2A4的非臨床和臨床制劑。人源化2A4藥物的終制劑在20°C和pH6.5下具有1.034g/mL的密度。
[0126]表1.非臨床和臨床人源化2A4藥物的組成
[0127]
【權(quán)利要求】
1.一種藥物制劑，其包含: (a)特異性地與2A4或7D8競爭對抗原的結(jié)合的抗體2A4(ATCC登錄號PTA-9662)或抗體7D8 (ATCC登錄號PTA-9468)的嵌合或人源化形式，或其片段，其中所述抗體以在約Img/mL至約100mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在； (b)以在約20mM至約30mM的范圍內(nèi)的濃度存在的組氨酸緩沖劑； (c)以在約210mM至約250mM的范圍內(nèi)的濃度存在的海藻糖；和 (d)以在按重量計約0.005%至約0.05%的范圍內(nèi)的濃度存的聚山梨醇酯20 ； 其中所述制劑的特征在于，在約6至約7的范圍內(nèi)的pH。
2.權(quán)利要求1的制劑，其中所述抗體是抗體2A4的人源化形式。
3.權(quán)利要求1的制劑，其中所述抗體包含含有SEQID N0:4所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
4.權(quán)利要求1的制劑，其中所述抗體包含含有SEQID NO:5所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
5.權(quán)利要求3的制劑，其中所述抗體包含含有SEQID NO:5所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
6.權(quán)利要求5的制劑，其中所述抗體包含含有SEQID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈。
7.權(quán)利要求6的制劑，其中所述抗體包含含有SEQID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列的重鏈。
8.權(quán)利要求1的制劑，其中所述抗體包含，含有SEQID N0:6、7和8所示的3個互補決定區(qū)的輕鏈可變區(qū)，和含有SEQ ID N0:9U0和11所示的3個互補決定區(qū)的重鏈可變區(qū)。
9.權(quán)利要求1的制劑，其中所述抗體是由ATCC登錄號PTA-9468產(chǎn)生的抗體7D8的人源化或嵌合形式。
10.權(quán)利要求1的制劑，其中所述抗體包含，含有SEQID NO: 12、7和8所示的3個互補決定區(qū)的輕鏈可變區(qū)，和含有SEQ ID N0:9U0和11所示的3個互補決定區(qū)的重鏈可變區(qū)。
11.權(quán)利要求1-10的任一項的制劑,其中所述抗體以在約5mg/mL至約15mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在。
12.權(quán)利要求11的制劑，其中所述抗體以約10mg/mL的濃度存在。
13.權(quán)利要求1-10的任一項的制劑，其中所述抗體以在約25-75mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在。
14.權(quán)利要求13的制劑，其中所述抗體以約50mg/mL的濃度存在。
15.權(quán)利要求1-14的任一項的制劑，其中所述組氨酸緩沖劑以約25mM的濃度存在。
16.權(quán)利要求15的制劑，其中所述組氨酸緩沖劑包含L-組氨酸和L-組氨酸HCl—水合物。
17.權(quán)利要求16的制劑，其中所述L-組氨酸以在約16mM至約22mM的范圍內(nèi)的濃度存在，并且L-組氨酸HCl —水合物以在約4mM至約8mM的范圍內(nèi)的濃度存在。
18.權(quán)利要求1-17的任一項的制劑，其中所述海藻糖以約230mM的濃度存在。
19.權(quán)利要求1-18的任一項的制劑，其特征在于約300m0sm/kg的重量摩爾滲透壓濃度。
20.權(quán)利要求1-19的任一項的制劑，其中少于約10%的抗體以聚集物的形式存在于制劑中。
21.權(quán)利要求1-20的任一項的制劑，其還包含填充劑。
22.權(quán)利要求1-21的任一項的制劑，其是無菌的。
23.權(quán)利要求1-22的任一項的制劑，其在冷凍和解凍后是穩(wěn)定的。
24.一種藥物制劑，其包含: (a)包含含有SEQID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈的抗體，并且其以約10mg/mL的濃度存在； (b)以約25mM的濃度存在的組氨酸緩沖劑； (c)以約230mM的濃度存在的海藻糖； (d)以約0.2g/L的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;和
(e)約6.5 的 pH。
25.權(quán)利要求24的制劑，其中所述抗體包含含有SEQID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列的重鏈。
26.—種藥物制劑，其包含: (a)抗體，其為抗體2A4(ATCC登錄號PTA-9662)、抗體7D8 (ATCC登錄號PTA-9468)，或特異性地與2A4或7D8競爭對抗原的結(jié)合的抗體2A4或抗體7D8的嵌合或人源化形式，或其片段，其中所述抗體以在約50mg/mL至約100mg/mL的范圍內(nèi)的濃度存在； (b)緩沖劑； (c)非還原糖；和 (d)非離子表面活性劑。
27.一種抗體的凍干制劑，其包含 (a)抗體2A4(ATCC登錄號PTA-9662)或抗體7D8 (ATCC登錄號PTA-9468)的人源化形式或其抗原結(jié)合片段； (b)組氨酸； (c)海藻糖；和 (d)聚山梨醇酯20。
28.權(quán)利要求27的凍干制劑，其中當(dāng)重構(gòu)時，所述制劑具有約6至約7的pH。
29.權(quán)利要求28的凍干制劑，其中當(dāng)重構(gòu)時，所述制劑具有約6.5的pH。
30.權(quán)利要求27的凍干制劑，其包含約IOOmg至約1000mg的抗體。
31.權(quán)利要求27的凍干制劑，其中所述聚山梨醇酯20以在按重量計約0.005%至約0.05%的范圍內(nèi)的濃度存在。
32.權(quán)利要求27的凍干制劑，其使得能夠重構(gòu)以產(chǎn)生水溶液，所述溶液包含: (a)包含含有SEQID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈的抗體，并且其以約10mg/mL的濃度存在； (b)以約25mM的濃度存在的組氨酸緩沖劑； (c)以約230mM的濃度存在的海藻糖； (d)以約0.2g/L的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;和
(e)約6.5 的 pH。
33.權(quán)利要求32的凍干制劑，其中所述凍干制劑包含約IOOmg的抗體并且使得能夠用無菌水重構(gòu)。
34.一種核酸，其包含編碼SEQ ID NO: 13的核苷酸序列。
35.權(quán)利要求34的核酸，其包含SEQID NO: 19的核苷酸序列。
36.權(quán)利要求35的核酸，其包含SEQID NO:20的核苷酸序列。
37.一種核酸，其包含編碼SEQ ID NO: 14-16的任一個的核苷酸序列。
38.權(quán)利要求37的核酸，其包含編碼SEQID NO: 15的核苷酸序列。
39.權(quán)利要求38的核酸，其包含SEQID NO:22的核苷酸序列。
40.權(quán)利要求39的核酸，其包含SEQID NO:23的核苷酸序列。
41.一種載體,其包含權(quán)利要求34-40的任一項的核酸。
42.一種載體，其包含權(quán)利要求34和38的核酸。
43.—種載體,其包含權(quán)利要求35和39的核酸。
44.一種載體,其包含權(quán)利要求36和40的核酸。
45.一種宿主細胞，其已將權(quán)利要求34-40的任一項的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組。
46.權(quán)利要求45的宿主細胞，其中所述宿主細胞是CHO細胞。
47.權(quán)利要求45的宿主細胞，其已將包含編碼SEQID NO: 13的核苷酸序列的核酸和包含編碼SEQ ID NO: 14-16的任一個的核苷酸序列的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組。
48.權(quán)利要求38的宿主細胞，其已將包含編碼SEQID NO: 19的核苷酸序列的核酸和包含編碼SEQ ID NO:22的核苷酸序列的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組。
49.權(quán)利要求38的宿主細胞，其已將包含編碼SEQID NO:20的核苷酸序列的核酸和包含編碼SEQ ID NO:23的核苷酸序列的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組。
50.權(quán)利要求47-49的任一項的宿主細胞，其中所述宿主細胞是CHO細胞。
51.—種制備藥物制劑的方法,其包括: (a)培養(yǎng)已將一個或多個編碼人源化2A4抗體的輕鏈和重鏈的核酸穩(wěn)定地整合進入其基因組的哺乳動物細胞，以便所述細胞將所述抗體分泌進入細胞培養(yǎng)基，和從所述細胞培養(yǎng)基純化所述抗體； (b)和制備權(quán)利要求1的制劑。
52.權(quán)利要求51的方法，其中所述編碼人源化2A4抗體的輕鏈的核酸包含編碼SEQID NO: 13的核苷酸序列，并且其中所述編碼人源化2A4抗體的重鏈的核酸包含編碼SEQ IDNO: 14-16的任一個的核苷酸序列。
53.權(quán)利要求52的方法，其中所述編碼人源化2A4抗體的輕鏈的核酸包含編碼SEQID NO: 13的核苷酸序列，并且其中所述編碼人源化2A4抗體的重鏈的核酸包含編碼SEQ IDNO: 15的核苷酸序列。
54.權(quán)利要求53的方法，其中所述編碼人源化2A4抗體的輕鏈的核酸包含SEQID NO: 19的核苷酸序列，并且其中所述編碼人源化2A4抗體的重鏈的核酸包含SEQ ID NO: 22的核苷酸序列。
55.權(quán)利要求54的方法，其中所述編碼人源化2A4抗體的輕鏈的核酸包含SEQID NO:20的核苷酸序列，并且其中所述編碼人源化2A4抗體的重鏈的核酸包含SEQ ID NO:23的核苷酸序列。
56.權(quán)利要求51-55的任一項的方法，其還包括評價制劑中的抗體的至少一個性質(zhì)，所述性質(zhì)選自物理穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性和生物活性。
57.權(quán)利要求51-55的任一項的方法，其中所述哺乳動物細胞是CHO細胞。
58.一種方法，所述方法治療性或預(yù)防性治療患有特征在于淀粉樣蛋白原纖維的存在的淀粉樣變性或處于患所述疾病的的風(fēng)險中的人患者，所述方法包括給所述患者施用有效劑量的權(quán)利要求1-33的任一項的制劑。
59.權(quán)利要求58的方法，其中所述人患者具有特征在于淀粉樣蛋白A蛋白原纖維的存在的淀粉樣蛋白A淀粉樣變性。
60.權(quán)利要求59的方法，其中所述制劑是權(quán)利要求25的制劑。
61.權(quán)利要求60的方法，其中所述人患者具有特征在于淀粉樣蛋白輕鏈類型蛋白原纖維的存在的AL淀粉樣變性。
62.權(quán)利要求61的方法，其中所述制劑是權(quán)利要求25的制劑。
63.權(quán)利要求61或62的方法，其中所述患者還用美法侖、硼替佐米、來那度胺或卡非佐米的一種或兩種來治療。
64.權(quán)利要求63的方法，其中所述患者在用權(quán)利要求1-33的任一項的制劑治療之前，用美法侖和/或硼替佐米來治療。
65.權(quán)利要求64的方 法，其中所述患者在用權(quán)利要求1-33的任一項的制劑治療的同時，用美法侖和/或硼替佐米來治療。
66.權(quán)利要求64的方法，其中所述患者在用權(quán)利要求1-33的任一項的制劑治療之后，用美法侖和/或硼替佐米來治療。
67.權(quán)利要求58-66的任一項的方法，其中所述AL淀粉樣變性與B淋巴細胞譜系的惡液質(zhì)相關(guān)。
68.權(quán)利要求67的方法，其中所述惡液質(zhì)是惡性腫瘤。
69.權(quán)利要求68的方法，其中所述惡性腫瘤是多發(fā)性骨髓瘤。
70.權(quán)利要求58-69的任一項的方法，其中所述制劑以多個劑量施用。
71.權(quán)利要求70的方法，其中以約每日一次至約每年一次的頻率施用所述制劑。
72.權(quán)利要求71的方法，其中所述頻率在約每隔一周一次至約每三個月一次的范圍內(nèi)。
73.權(quán)利要求58-72的任一項的方法，其中以在約IOmg至約5000mg人源化2A4藥物的范圍內(nèi)的劑量靜脈內(nèi)施用所述制劑。
74.權(quán)利要求73的方法，其中以約每隔一周一次至約每隔一月一次的頻率，以在約30mg至約2500mg人源化2A4藥物的范圍內(nèi)的劑量施用所述制劑。
75.權(quán)利要求73或74的方法，其中每月一次施用所述制劑。
76.權(quán)利要求73-75的任一項的方法，其中所述劑量為約30mg人源化2A4藥物。
77.權(quán)利要求73-75的任一項的方法，其中所述劑量為約IOOmg人源化2A4藥物。
78.權(quán)利要求73-75的任一項的方法，其中所述劑量為約300mg人源化2A4藥物。
79.權(quán)利要求73-75的任一項的方法，其中所述劑量為約1000mg人源化2A4藥物。
80.權(quán)利要求73-75的任一項的方法，其中所述劑量為約2500mg人源化2A4藥物。
81.一種方法，所述方法治療性或預(yù)防性治療患有特征在于淀粉樣蛋白原纖維、沉積物或原纖絲聚集物的存在的輕鏈(AL)淀粉樣變性或處于患所述疾病的風(fēng)險中的人患者，包括給所述患者施用有效劑量的藥物制劑，所述制劑包含: (a)包含含有SEQID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈的抗體，并且所述抗體以約10mg/mL的濃度存在； (b)以約25mM的濃度存在的組氨酸緩沖劑； (c)以約230mM的濃度存在的海藻糖； (d)以約0.2g/L的濃度存在的聚山梨醇酯20 ;和
(e)約6.5 的 pH。
82.權(quán)利要求81的方法，其中所述劑量為，以約每周一次至約每季度一次的頻率靜脈內(nèi)或皮下施用約0.5mg/kg至約30mg/kg的所述抗體。
83.權(quán)利要求82的方法，其中施用頻率為每28天一次。
84.權(quán)利要求82的方法,其中所述劑量為約0.5mg/kg至約8mg/kg。
85.權(quán)利要求82的方法,其中所述劑量為約8mg/kg至約30mg/kg。
86.一種藥物產(chǎn)品 ，其包含: (a)裝有約IOOmg的以粉劑形式存在的抗體的小瓶； (b)抗體重構(gòu)說明書；和 (c)制備用于輸注的重構(gòu)的抗體的說明書， 其中: (i)所述抗體包含含有SEQID NO: 13所示的氨基酸序列的輕鏈和含有SEQ ID NO: 14-16的任一個所示的氨基酸序列的重鏈；和 (ii)所述重構(gòu)說明書要求，用注射用水重構(gòu)至IOmL的可抽出體積。
【文檔編號】C12P21/08GK104023743SQ201280052471
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2012年10月25日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月25日
【發(fā)明者】P·加里德爾, I·C·漢德森, P·克萊因 申請人:昂克雷夫治療有限公司