二聚噬菌體溶素的制作方法【專利摘要】本發(fā)明提供分離的二聚鏈球菌屬(streptococcus)-特異性噬菌體溶素具有彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬(streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體，及針對(duì)一種或更多鏈球茵屬(streptococcus)細(xì)菌具有殺滅活性。也提供二聚溶素的藥物組合物和它們用于治療性治療或緩和感染或細(xì)菌定居的用途。二聚溶素也可用于凈化多孔和非-多孔表面或裝置?！緦＠f(shuō)明】二聚嗤菌體溶素【【
技術(shù)領(lǐng)域：
】】[0001]本發(fā)明涉及用于檢測(cè)及殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌的二聚溶素的產(chǎn)生和使用，尤其是突變體溶素，其能二聚化為具有增強(qiáng)的活性和/或穩(wěn)定性的二聚溶素。本發(fā)明涉及用于細(xì)菌，特別鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌株，及相關(guān)的病情的預(yù)防性和治療性改善，去定居和處理的方法。本發(fā)明的方法利用二聚噬菌體溶素，特別二聚肺炎球菌噬菌體溶素，包括Cpl-1裂解性酶和其變體?！尽?br>背景技術(shù)：
】】[0002]隨著更多抗生素用于廣泛的病和其他病情，藥物抗性細(xì)菌的出現(xiàn)已是醫(yī)學(xué)中的主要問(wèn)題。醫(yī)院感染是美國(guó)死亡的第8號(hào)主導(dǎo)原因，大多由于耐藥的和新出現(xiàn)的病原體。更多抗生素使用和顯示抗性的細(xì)菌數(shù)提示了更長(zhǎng)治療時(shí)間。此外，現(xiàn)在更頻繁地使用廣譜非特異性抗生素，其中一些對(duì)患者具有有害效應(yīng)。隨此增加的使用的相關(guān)的問(wèn)題是許多抗生素不容易穿透粘液襯。此外，對(duì)抗生素過(guò)敏的人數(shù)呈現(xiàn)增加。因此，對(duì)新抗細(xì)菌方法，尤其經(jīng)新模式操作或提供殺滅病原性細(xì)菌的新手段的那些有商業(yè)需求。[0003]革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌被含有多肽和多糖的細(xì)胞壁圍裹。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)胞壁呈現(xiàn)為廣泛密壁，其20?80nm厚及由多個(gè)肽聚糖互連層組成。60%和90%之間的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)胞壁是肽聚糖，提供細(xì)胞形狀，剛性結(jié)構(gòu)，及對(duì)滲透休克的抗性。細(xì)胞壁不排斥革蘭氏染色結(jié)晶紫，允許細(xì)胞染成紫色，由此稱為"革蘭氏陽(yáng)性"。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌包括但不限于放線菌屬（Actinomyces),芽孢桿菌屬（Bacillus),利斯特菌屬（Listeria),乳球菌屬(Lactococcus)，葡萄球菌屬（Staphylococcus)，鏈球菌屬（Streptococcus)，腸球菌屬(Enterococcus)，分枝桿菌屬（Mycobacterium)，棒桿菌屬（Corynebacterium)和梭菌屬(Clostridium)。醫(yī)學(xué)上關(guān)聯(lián)物種包括釀膿鏈球菌（Streptococcuspyogenes),肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)，金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)和奠腸球菌(Enterococcusfaecalis)〇[0004]抑制細(xì)胞壁合成的抗細(xì)菌劑，諸如青霉素和頭孢菌素，干擾肽聚糖肽間連接及減弱革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁。因?yàn)楦锾m氏陽(yáng)性細(xì)菌的肽聚糖被暴露，革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌是更敏感于這些抗生素。有利地，缺乏細(xì)胞壁的真核生物細(xì)胞及不敏感于這些藥物或其他細(xì)胞壁劑。[0005]已嘗試通過(guò)使用噬菌體治療細(xì)菌疾病。但是，噬菌體直接導(dǎo)入動(dòng)物來(lái)預(yù)防或抵御疾病具有特定缺點(diǎn)。特別是，細(xì)菌和噬菌體需處于用于噬菌體附著的正確及同步的生長(zhǎng)循環(huán)。此外，必需有正確數(shù)量的噬菌體以附著于細(xì)菌；如果有太多或太少噬菌體，會(huì)無(wú)附接或無(wú)裂解酶產(chǎn)生。噬菌體必需也有足夠活性。噬菌體也被許多物質(zhì)抑制，包括來(lái)自其欲攻擊的生物的細(xì)菌碎片。使直接使用噬菌體治療細(xì)菌感染變得更復(fù)雜的是致使噬菌體非-功能性的免疫學(xué)反應(yīng)的可能性。[0006]新抗微生物治療方法包括基于酶的抗生素（"酶抗生素"）諸如噬菌體溶素。噬菌體使用這些溶素消化它們的細(xì)菌宿主的細(xì)胞壁，通過(guò)低滲裂解釋放病毒后代。當(dāng)純化的、重組溶素被外部添加到革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌時(shí)，導(dǎo)致類似結(jié)果。針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性病原體的溶素的高致死活性使得它們成為作為治療劑開(kāi)發(fā)的有吸引力的候選體。噬菌體溶素起初被建議用于根除病原性鏈球菌的鼻咽集落（Loeffler，J.M.etal(2001)Science294:2170-2172;Nelson,D.etal(2001)ProcNatlAcadSciUSA98:4107-4112)。溶素是雙鏈DNA(dsDNA)噬菌體用以使宿主裂解與完成病毒組裝配合而使用的裂解性機(jī)理的部分（Wang，I.N.等人(2000)AnnuRevMicrobiol54:799-825)。噬菌體編碼在細(xì)菌膜打開(kāi)孔隙的穿孔素，及被稱為使細(xì)菌壁中的鍵斷裂的溶素的肽聚糖水解酶。在感染后期，溶素轉(zhuǎn)位進(jìn)細(xì)胞壁基質(zhì)中，其中其快速水解對(duì)于肽聚糖完整性必要的共價(jià)鍵，導(dǎo)致細(xì)菌裂解和相伴的后代噬菌體釋放。[0007]溶素家族成員呈現(xiàn)模塊設(shè)計(jì)，其中催化性結(jié)構(gòu)域融合到特異性或結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Lopez，R.等人（1997)MicrobDrugResist3:199_211)。溶素可從細(xì)菌基因組之內(nèi)的病毒原噬菌體序列克隆，并用于治療（Beres，S.B.等人（2007)PL〇S0NE2(8):1-14)。當(dāng)外部添加時(shí)，溶素能接近革蘭氏陽(yáng)性細(xì)胞壁的鍵（圖1)(Fischetti，V.A.(2008)CurrOpinionMicrobiolll:393-400)。溶素已顯示針對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性病原體（尤其克隆它們的細(xì)菌）展示高致死活性，提起它們作為治療劑開(kāi)發(fā)的可能性（Fischetti，V.A.(2008)CurrOpinionMicrobiol11:393-400;Nelson，D.L.等人（2001)ProcNatlAcadSciUSA98:4107-4112)。[0008]噬菌體裂解性酶已建立為在評(píng)定和通過(guò)各種施用途徑特定治療各種類型的受試者感染中有用。例如，美國(guó)專利5,604,109(Fischetti等人）涉及通過(guò)酶促消化（通過(guò)半-純化的組C鏈球菌噬菌體關(guān)聯(lián)的溶素酶）而快速檢測(cè)臨床樣本中的組A鏈球菌。此酶工作成為另外的研究的基礎(chǔ)，導(dǎo)致治療疾病的方法。Fischetti及Loomis專利（美國(guó)Patents5,985,271，6,017,528和6,056,955)公開(kāi)了由用C1噬菌體感染的組C鏈球菌細(xì)菌產(chǎn)生的溶素酶的使用。美國(guó)專利6,248,324(Fischetti和Loomis)公開(kāi)了用于皮膚病學(xué)感染的組合物，其使用在由在適合局部應(yīng)用于真皮組織的載體中的裂解性酶。美國(guó)專利6,254,866(Fischetti和Loomis)公開(kāi)了治療消化道細(xì)菌感染的方法，包括施用特異于感染細(xì)菌的裂解性酶。用于遞送至少一種裂解性酶至消化道的載體選自：栓劑灌腸劑，糖漿或腸包被的丸劑。美國(guó)專利6,264,945(Fischetti和Loomis)公開(kāi)了由腸胃外導(dǎo)入（肌內(nèi)，皮下或靜脈內(nèi)）由用特異于該細(xì)菌的噬菌體感染的細(xì)菌產(chǎn)生的至少一種裂解性酶和用于將裂解性酶遞送進(jìn)患者的適當(dāng)?shù)妮d體來(lái)治療細(xì)菌感染的方法和組合物。[0009]已自各種噬菌體鑒定及克隆噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶，各顯示在殺滅特定細(xì)菌株中有效。美國(guó)專利7,402,309,7,638,600及公開(kāi)的？(：1'申請(qǐng)冊(cè)2008/018854提供作為治療或減少炭疽芽孢桿菌（Bacillusanthracis)感染的抗細(xì)菌劑有用的不同噬菌體-關(guān)聯(lián)的裂解性酶。美國(guó)專利7,569,223描述肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)的肺炎球菌噬菌體裂解性酶Pal。對(duì)于腸球菌屬（^Enterococcus)(糞腸球菌(B.faecalis)及屎腸球菌（E.faecium)，包括萬(wàn)古霉素抗性株）有用的溶素描述于美國(guó)專利7,582291。US2008/0221035描述在殺滅組B鏈球菌中高度有效的突變PlyGBS溶素。表示為ClyS的嵌合溶素，其具有針對(duì)葡萄球菌屬（Staphylococci)細(xì)菌，包括金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的活性，詳述于W02010/002959。[0010]肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)(肺炎鏈球菌（S.pneumoniae))，革蘭氏陽(yáng)性包裹的雙球菌，是人病諸如菌血癥，腦膜炎，肺炎，中耳炎及鼻竇炎的主要病原因子。此細(xì)菌負(fù)責(zé)每年世界上>1百萬(wàn)5歲以下兒童的死亡（English，M(2000)PaediatrRespirRevl:21-5)和社區(qū)-獲取的肺炎是USA中死亡的第6大最常見(jiàn)原因（File，TM(2004)AmJMedll7Suppl3A:39S?50S)。而且，肺炎鏈球菌（S.pneumoniae)是世界上急性中耳炎的主要原因，每年在USA影響多于5百萬(wàn)兒童的疾病（⑶C(2009)Pneumococcaldiseases,p.217-30.Inff.Atkinson,etal(ed.),Epidemiologyandpreventionofvaccine-preventablediseases(11thed),PublicHealthFoundation,WashingtonDC)〇最后，流感大流行病所致的繼發(fā)感染占>90%的死亡，其中肺炎鏈球菌（S.pneumoniae)是這些死亡的主導(dǎo)原因（Brundage，JFShanksGD(2008)EmergInfectDisl4:1193_9;Brundage,JFShanksGD(2007)JInfectDisl96:1717-8；Morens,DMetal(2009)NEnglJMed361:225-9;Morens,DMetal(2009)PublicHealthRepl24:22-5)。肺炎球菌感染常常用抗生素治療，但由于就大環(huán)內(nèi)酯，氟喹諾酮和頭孢菌素報(bào)道的增加的抗性發(fā)生率（Reinert，RR(2009)ClinMicrobiolInfectl5Suppl3:l_3)而細(xì)菌學(xué)地被確認(rèn)治療失?。∕andell，LAetal(2002)ClinInfectDis35:721-7)。治療百萬(wàn)中耳炎病例所致的抗生素的過(guò)度使用和誤用僅貢獻(xiàn)于抗性株的出現(xiàn)（Goossens，H(2009)ClinMicrobiolInfectl5Suppl3:12-5)?？傊?，這些觀察促使了對(duì)于由完全不同機(jī)理的發(fā)揮作用，用于治療和預(yù)防肺炎球菌關(guān)聯(lián)的疾病的新藥物的需求。[0011]在發(fā)現(xiàn)抗生素之前，噬菌體，細(xì)菌的天然主要捕食者，被視為控制病原性細(xì)菌的可能的方法。那時(shí)公開(kāi)了成功的使用噬菌體治療感染的幾則報(bào)道（SulakVelidze，AandBarrow,P(2005)Phagetherapyinanimalsandagribusiness,p.335-71.InE.KutterandA.Sulakvelidze(ed.),Bacteriophages:BiologyandApplications,CRCPress,USA；Sulakvelidze,AandKutter,E(2005)Bacteriophagetherapyinhumans,p.381-426.InE.KutterandA.Sulakvelidze(ed.),Bacteriophages:BiologyandApplications,CRCPress,USA)，但40年代抗生素的出現(xiàn)導(dǎo)致西方世界噬菌體治療研究的快速減少。過(guò)去的幾十年見(jiàn)到對(duì)噬菌體治療和噬菌體來(lái)源的抗-細(xì)菌化合物的新興趣（Borysowski，J等人(2006)ExpBiolMed231:366-77；Fischetti,VA(2008)CurrOpinMicrobiolll:393-400)〇[0012]這些產(chǎn)品之一，噬菌體內(nèi)溶素或溶素，已被開(kāi)發(fā)用于它們對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的快速殺滅作用（Borysowski，J等人（2006)ExpBiolMed231:366_77;Fischetti，VA(2008)CurrOpinMicrobiolll:393-400)。這些特定酶在噬菌體后代要逃脫細(xì)菌宿主時(shí)產(chǎn)生。肺炎球菌噬菌體Cp-Ι產(chǎn)生溶素Cpl-l，37kDa酶。此溶素如全部此類內(nèi)溶素一樣構(gòu)成，具有2個(gè)由柔性的接頭連接的良好定義的結(jié)構(gòu)域。催化性活性局限于N-端結(jié)構(gòu)域，而含有6個(gè)膽堿-結(jié)合重復(fù)子（ChBR)和13個(gè)氨基-酸的C-端尾的C-端部分，在肺炎球菌細(xì)胞壁中的底物結(jié)合中需要。Cpl-1屬于靶向肽聚糖中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰-D-葡萄糖胺殘基之間的β1，4連接的溶菌酶的家族（PereZ-D〇rad〇，INEetal(2007)JBiolChem282:24990-9)。其膽堿-依賴性活性使Cpl-1高度特異于肺炎鏈球菌（S.pneumonia)(Garcia,JL等人（1987)JVirol61:2573-80)。Cpl-1基因已被克隆進(jìn)高表達(dá)載體pinlllAn，然后被過(guò)表達(dá)及純化（Loeffler，JMetal(2003)InfectImmun71:6199-204)。[0013]純化的Cpl-1已成功地在嚙齒動(dòng)物模型中被測(cè)試用于治療肺炎球菌膿毒癥（Jado，Ietal(2003)JAntimicrobChemother52:967-73;Loeffler，JMandFischetti，VA(2003)AntimicrobAgentsChemother47:375_7)，心內(nèi)膜炎（Entenza，JMetal(2005)AntimicrobAgentsChemother49:4789_92)，肺炎球菌腦膜炎（Grandgirard，Detal(2008)JInfectDisl97:1519-22),及肺炎（Witzenrath，M等人（2009)CritCareMed37:642-9)。然而，蛋白通常快速體內(nèi)清除，而在至今實(shí)施的許多研究中需要Cpl_l的重復(fù)的注射或甚至連續(xù)輸注（Entenza，JMetal(2005)AntimicrobAgentsChemother49:4789-92.31；ffitzenrath,Metal(2009)CritCareMed37:642-9)〇[0014]這些結(jié)果可為Cpl-1和類似溶素的臨床開(kāi)發(fā)的缺點(diǎn)。本領(lǐng)域需要具有殺滅活性且增強(qiáng)的臨床-關(guān)聯(lián)參數(shù)，諸如更長(zhǎng)半衰期或減少的體內(nèi)清除的可用于治療肺炎球菌疾病的改良的溶素。[0015]【發(fā)明概述】[0016]在總的方面，本發(fā)明提供突變體溶素，突變得具有容易二聚化的能力，由此產(chǎn)生具有增強(qiáng)的活性或細(xì)菌殺滅活性，及更大穩(wěn)定性，包括在動(dòng)物或哺乳動(dòng)物中更長(zhǎng)期穩(wěn)定性和在臨床學(xué)相關(guān)的或生物學(xué)相關(guān)的環(huán)境中更久發(fā)揮細(xì)菌殺滅能力的二聚溶素。[0017]一方面，本發(fā)明提供分離的二聚抗-細(xì)菌噬菌體溶素，其包含2個(gè)特異于細(xì)菌的彼此共價(jià)連接的噬菌體溶素單體，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多特定細(xì)菌具有殺滅活性。一方面，本發(fā)明提供分離的二聚鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素，其包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌具有殺滅活性。在特定實(shí)施方式中，溶素單體與圖1和6和SEQIDNO:1中所示未突變的Cpl-1溶素具有至少80%，至少90%，至少95%氨基酸序列同一性。在特定實(shí)施方式中，溶素單體與圖7和SEQIDN0:5中所示未突變的Pal溶素具有至少80%，至少90%，至少95%氨基酸序列同一性。[0018]在特定實(shí)施方式中，溶素單體彼此化學(xué)交聯(lián)。在一該實(shí)例中，單體可經(jīng)反應(yīng)性基團(tuán)或經(jīng)單體序列中的氨基酸，包括修飾的，改變的或突變氨基酸化學(xué)交聯(lián)。溶素單體可彼此由-硫鍵共價(jià)連接。在特定例不實(shí)施方式中，各溶素單體在緊鄰于C-端，特別在自C-端14和20個(gè)氨基酸之間具有Cys殘基。在特定實(shí)施方式中，溶素單體在頭45個(gè)殘基中不具有Cys殘基。例示突變Cpl-1溶素在本文提供，包括在圖6和表1中。在一特定實(shí)施方式中，溶素單體具有圖6中所示或表1中提供的氨基酸序列。在另一實(shí)施方式中，溶素單體具有圖7所示的氨基酸序列。在特定實(shí)施方式中，溶素單體包含第1鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素的催化性結(jié)構(gòu)域和第2鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。[0019]本發(fā)明提供通過(guò)施用包含治療有效量的包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體的二聚溶素的組合物來(lái)治療由鏈球菌感染導(dǎo)致的哺乳動(dòng)物患疾病或病情的方法，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌具有殺滅活性。在特定實(shí)施方式中，感染由肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)導(dǎo)致。由月市炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)感染導(dǎo)致的疾病或病情可為菌血癥，腦膜炎，肺炎，中耳炎，或鼻竇炎中的至少一種。[0020]本發(fā)明提供通過(guò)施用包含治療有效量的包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬(Streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體的二聚溶素的組合物來(lái)抑制或去定居哺乳動(dòng)物中的鏈球菌感染的方法，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌具有殺滅活性。在特定實(shí)施方式中，感染由肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)導(dǎo)致。由肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)感染導(dǎo)致的疾病或病情可為菌血癥，腦膜炎，肺炎，中耳炎，或鼻竇炎中的至少一種。[0021]在本發(fā)明的一方面，提供殺滅革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的方法，包括使細(xì)菌與包含一定量的對(duì)于殺滅革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌有效的突變二聚溶素多肽的組合物接觸的步驟，其中單體溶素被修飾或改變?yōu)榘舜斯矁r(jià)連接的2個(gè)抗細(xì)菌性噬菌體溶素單體和對(duì)于殺滅革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌有效的二聚溶素多肽。在特定該方面，提供殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌的方法，包括使細(xì)菌與包含一定量的對(duì)于殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌有效的突變二聚溶素多肽的組合物接觸的步驟，其中單體鏈球菌屬（Streptococcus)溶素被修飾或改變?yōu)榘舜斯矁r(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬（Streptococcus)噬菌體溶素單體和對(duì)于殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌有效的二聚溶素多肽。[0022]由此，提供殺滅鏈球菌屬（Str印tococcus)細(xì)菌的方法，包括使細(xì)菌與包含一定量的對(duì)于殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌有效的分離的二聚鏈球菌屬（Streptococcus)Cpl-1溶素多肽（含有包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)Cpl-1溶素單體的突變Cpl-1溶素的分離的溶素多肽）的組合物接觸的步驟。在特定方面，提供殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌的方法，包括使細(xì)菌與包含一定量的對(duì)于殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌有效的分離的溶素多肽（包含SEQIDN0:3的氨基酸序列或與SEQIDN0:3的多肽具有至少80%同源性，85%同源性，90%同源性或95%同源性和對(duì)于殺滅革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌有效的其變體的分離的溶素多肽）的組合物接觸的步驟。[0023]還提供殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌的方法，包括使細(xì)菌與包含一定量的對(duì)于殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌有效的分離的二聚鏈球菌屬（Streptococcus)Pal溶素多肽（含有包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)Pal溶素單體的突變Pal溶素的分離的溶素多肽）的組合物接觸的步驟。在特定方面，提供殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌的方法，包括使細(xì)菌與包含一定量的對(duì)于殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌有效的分離的溶素多肽（包含SEQIDN0:6的氨基酸序列或與SEQIDN0:6的多肽具有至少80%同源性，85%同源性，90%同源性或95%同源性和對(duì)于殺滅革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌有效的其變體的分離的溶素多肽）的組合物接觸的步驟。[0024]本發(fā)明提供藥物組合物，其包含治療有效量的包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬(Streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體的二聚溶素，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌具有殺滅活性，及藥學(xué)可接受的載體。[0025]本發(fā)明提供藥物組合物，其包含治療有效量的包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體的二聚溶素，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌具有殺滅活性，且其中所述殺滅活性大于鏈球菌屬(Streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體中的任何一種的殺滅活性，及藥學(xué)可接受的載體。[0026]在另外的方面，本發(fā)明提供用于清潔或凈化多孔或非-多孔表面的抗-微生物組合物，其包含包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體的二聚溶素，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌具有殺滅活性。[0027]本發(fā)明的組合物可針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌株特別展示或具有殺滅活性，特別選自：豬鏈球菌（Streptococcussuis)，馬鏈球菌（Streptococcusequi),無(wú)乳鏈球菌（Streptococcusagalactiae)(GBS),釀胺鏈球菌（Streptococcuspyogenes)(GAS),血鏈球菌（Streptococcussanguinis),格氏鏈球菌（Streptococcusgordonii)，停乳鏈球菌（Streptococcusdysgalactiae)，鏈球菌屬（Streptococcus)GES和月市炎鏈球菌（Streptococcuspneumonia)〇[0028]本發(fā)明提供凈化懷疑含有感染性細(xì)菌的無(wú)生命的表面的方法，包括用殺細(xì)菌地或抑細(xì)菌地有效量的包含包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬（Str印tococcus)-特異性噬菌體溶素單體的二聚溶素的清潔或凈化多孔或非-多孔表面的抗-微生物組合物處理所述表面，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌具有殺滅活性。[0029]本發(fā)明包括包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的二聚蛋白。本發(fā)明提供包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬(Streptococcus)-特異性噬菌體溶素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的二聚蛋白，其中所述噬菌體溶素結(jié)合結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)還綴合標(biāo)記物。標(biāo)記物可為產(chǎn)生，或可被誘導(dǎo)產(chǎn)生，可檢測(cè)的信號(hào)的任何分子。標(biāo)記物的非限制性例包括放射性同位素，酶，酶片段，酶底物，酶抑制物，輔酶，催化齊U，熒光團(tuán)，染料，化學(xué)發(fā)光劑，發(fā)光劑或敏化劑；非-磁或磁粒子，固體支持物，脂質(zhì)體，配體，或受體。[0030]本發(fā)明的診斷實(shí)用性延伸至將本溶素多肽用于篩選革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的存在，篩選易感的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的存在，或測(cè)定細(xì)菌對(duì)由本發(fā)明的一種或更多溶素多肽殺滅或裂解的易感性的測(cè)定。[0031]在本文涵蓋及提供被修飾及嵌合或是融合蛋白，或被標(biāo)記的溶素多肽。在嵌合或融合蛋白中，本發(fā)明的溶素多肽可共價(jià)附接于可提供另外的功能或增強(qiáng)溶素多肽的用途或應(yīng)用的實(shí)體，包括例如標(biāo)簽，標(biāo)記物，祀向部分或配體，細(xì)胞結(jié)合或細(xì)胞識(shí)別基序或試劑，抗細(xì)菌劑，抗體，抗生素。例示標(biāo)記物包括放射性標(biāo)記物，諸如同位素3H，14C，32P，35S，36C1，51Cr，57C〇,58C〇,59Fe，9°Y，125I，131I和186Re。標(biāo)記物可為酶，標(biāo)記的溶素多肽的檢測(cè)可由本領(lǐng)域知道的任何目前利用的或接受的比色，分光光度計(jì)測(cè)量，熒光分光光度計(jì)測(cè)量，電流測(cè)定或氣體定量技術(shù)實(shí)現(xiàn)。[0032]本領(lǐng)域技術(shù)人員參看以下說(shuō)明，參照以下例示圖而明晰其他目的和優(yōu)勢(shì)。【【專利附圖】【附圖說(shuō)明】】[0033]圖l.Cpl-l(SEQIDN0:1)和肺炎鏈球菌（S.pneumoniae)LytA(SEQIDN0:2)氨基酸序列的ClustalW比對(duì)。2個(gè)催化性殘基（D10和E94)以紅色顯示。lytA的天然的二聚化中涉及的13個(gè)氨基酸及Cpl-1中的對(duì)應(yīng)氨基酸通過(guò)加下劃線顯示。殘基D324以藍(lán)色顯不。[0034]圖2A?2C描繪（A)純化的Cpl-1的考馬斯染色的非-還原SDS-PAGE凝膠。泳道1，分子量標(biāo)志物，及泳道2,由在DEAE-瓊脂糖上親和純化獲得的純化的Cpl-1。（B)純化的Cpl-嚴(yán)5S'D324e突變體的考馬斯染色的非-還原SDS-PAGE凝膠。泳道1，分子量標(biāo)志物。泳道2,由在DEAE-瓊脂糖上親和純化獲得的純化的Cpl-1G45S'D324G，及泳道3,用10mM的DTT還原的Cpl-le45S，D324e。（C)在S印hadexGlOO上凝膠過(guò)濾之后純化的Cpl-le45S，D324e突變二聚體富集物的考馬斯染色的非-還原SDS-PAGE凝膠。泳道1，分子量標(biāo)志物。泳道2,由在S印hadexG100上凝膠過(guò)濾獲得的純化的Cpl-1G45S'D324G二聚體（第1純化），及泳道3,由在S印hadexG100上凝膠過(guò)濾獲得的純化的Cpl-1G45S'D324G二聚體（第2純化）。[0035]圖3顯示于37°C溫育15分鐘之后Cpl-1對(duì)肺炎鏈球菌（S.pneumoniae)DCC1490的5.108CFU/ml懸浮液的體外抗-細(xì)菌活性。Cpl-lwt(實(shí)心圓形），ImMDTT中的Cpl-lc45S，D324c單體形式（空心矩形），及〇?1-1^'1)324°二聚體（開(kāi)環(huán)）。對(duì)于各酶和條件11=4。[0036]圖4.小鼠中酶抗生素的血漿清除。給Balb/c小鼠注射100μ1PB50mM，pH7.4中的12.16nmol的Cpl-1(實(shí)心圓形）或Cplle45S'D324e二聚體（開(kāi)環(huán)），對(duì)于各時(shí)間點(diǎn)η=3。[0037]圖5.于37°C，幾種純化的Cpl-1突變二聚體對(duì)肺炎鏈球菌（S.pneumoniae)DCC1490的5.108CFU/ml懸浮液的體外抗-微生物活性。Cpl-lwt(實(shí)心圓形），Cpl-le45S，Q85C二聚體（實(shí)心菱形），Cpl-le45S'D194e二聚體（實(shí)心三角形），Cpl-嚴(yán)s'N214e二聚體（實(shí)心矩形），Cpl-1G45S'G216G二聚體（空心三角形），Cpl-1G45S'D256G二聚體（菱形），Cpl-1G45S'S269G二聚體（開(kāi)環(huán)），Cpl-le45S'D324e二聚體（空心矩形）。以0.5mg/ml的濃度測(cè)試全部酶。各點(diǎn)表示3次實(shí)驗(yàn)的平均值。[0038]圖6描繪（未突變的）Cpl-1(SEQIDN0:1)，及突變體溶素C45S(SEQIDN0:4)和C45S，D324C(SEQIDN0:3)的對(duì)齊的氨基酸序列。突變體中的氨基酸變化加了下劃線。[0039]圖7描繪Cpl-1(SEQIDNO:1)，Pal(SEQIDN0:5)和肺炎鏈球菌（S.pneumoniae)LytA(SEQIDN0:2)氨基酸序列的對(duì)齊的氨基酸序列。在全部3個(gè)序列之中相同的氨基酸由星號(hào)*表示。LytA的天然的二聚化中涉及的13個(gè)氨基酸和Cpl-1及Pal中的類似氨基酸通過(guò)加下劃線及加粗指示?？蜃pl-1(殘基D324)和Pal(殘基D280)的例示二聚體突變體中突變的對(duì)應(yīng)氨基酸。[0040]【發(fā)明詳述】[0041]在本文描述針對(duì)肺炎鏈球菌（S.pneumoniae)具有殺滅活性的二聚鏈球菌屬(Streptococcus)-特異性噬菌體溶素。一般而言，二聚噬菌體溶素含有彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌具有活性。溶素二聚體的溶素單體可與未突變的Cpl-1(圖1，SEQIDN0:1)具有至少80%，85%，90%，95%，97%，98%，99%或甚至至少99.5%氨基酸序列同一性。溶素二聚體的溶素單體可與未突變的Pal(圖7,SEQIDN0:5)具有至少80%，85%，90%，95%，97%，98%，99%或甚至至少99.5%氨基酸序列同一性。本文提供的穩(wěn)定化的二聚溶素展示增加的細(xì)菌殺滅活性，原單體分子的大致兩倍體外抗-細(xì)菌活性。二聚溶素也在感染后5分鐘和5小時(shí)之間顯示接近10倍降低的血漿清除，在血漿或動(dòng)物中具有降低的血漿清除或增加的穩(wěn)定性。[0042]圖1展示LytA的C-端區(qū)的氨基酸序列和鏈球菌屬（Streptococcus)溶素Cpl-1同源（73/142相同殘基，及55/69個(gè)殘基是保守性取代）。C-端13個(gè)氨基酸負(fù)責(zé)肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)自溶素LytA的二聚化。有趣的是，在此區(qū)內(nèi)，Cpl-1和LytA之間10/13氨基酸是同一的。完全有活性的LytA是由通過(guò)膽堿相互作用起始的2個(gè)LytA單體的尾尾關(guān)聯(lián)組成的膽堿-結(jié)合同源二聚體。二聚化的主驅(qū)動(dòng)力由C-端膽堿結(jié)合區(qū)6和7中的幾個(gè)殘基之間的分子間疏水相互作用產(chǎn)生的疏水核心提供（8)。LytA的13個(gè)C-端殘基負(fù)責(zé)有活性的同源二聚體的形成，其活性顯著地大于天然單體。實(shí)際上，缺少此13個(gè)氨基酸延伸物的LytA的重組單體形式（27)保留小于10%的酶的催化效率（24)。Cpl-1和LytA的序列比對(duì)揭示的延伸的相似性，尤其在LytA二聚化中涉及的酶的C-端尾之內(nèi)（圖1)。人中被估計(jì)大致60?65kDa的血管球過(guò)濾閾值的存在（17)提示Cpl-1的二聚形式（74kDa的MW)可顯示相比單體系統(tǒng)性清除顯著減小。由共價(jià)鍵連接及由二硫鍵穩(wěn)定化的2個(gè)單體組成的Cpl-1二聚體由此已在本文加工及檢查其相比Cpl-1的單體形式的體外活性和體內(nèi)血漿清除。而且，及因?yàn)閹追N其他噬菌體溶素已顯示或懷疑二聚化（25,26)，此代表增加特定噬菌體溶素的活性和/或藥代動(dòng)力學(xué)的一般方式。[0043]根據(jù)本發(fā)明可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員的技能之內(nèi)的常規(guī)分子生物學(xué)，微生物學(xué)和重組DNA技術(shù)。該技術(shù)在文獻(xiàn)中完全解釋。見(jiàn)，例如，Sambrook等人，"MolecularCloning:ALaboratoryManual"（1989)；^CurrentProtocolsinMolecularBiology〃VolumesI-III[Ausubel，R.M.，ed.(1994)];"CellBiology:ALaboratoryHandbook"VolumesI_III[J·E.Celis,ed.(1994))]/'CurrentProtocolsinImmunology^VolumesI-III[Coligan，J.E.，ed.(1994)];"01igonucleotideSynthesis"(M.J.Gaited.1984);''NucleicAcidHybridization^[B.D.Hames&S.J.Higginseds.(1985)];〃TranscriptionAndTranslation^[B.D.Hames&S.J.Higgins,eds.(1984)];〃AnimalCellCulture"[R.I.Freshney,ed.(1986)]/'ImmobilizedCellsAndEnzymes"[IRLPress,(1986)]；B.Perbal,〃APracticalGuideToMolecularCloning"（1984)〇[0044]因此，如果在本文出現(xiàn)，以下術(shù)語(yǔ)應(yīng)具有如以下及此部分提供及給出的定義。[0045]術(shù)語(yǔ)〃鏈球菌屬（Streptococcus)二聚體溶素〃，〃Cpl_l二聚溶素〃，〃Cpl_l二聚體"，"二聚Cpl-Γ'和未特別列出的任何變體，可在本文互換使用，及如貫穿本申請(qǐng)和權(quán)利要求使用指稱包括單或多個(gè)蛋白，及特別二聚體蛋白的蛋白性物質(zhì)，及延伸至具有本文所述的及圖6和表1，及SEQIDN0:3中顯示的氨基酸序列數(shù)據(jù)，及本文及權(quán)利要求中所述的活性特征的那些蛋白。因此，同樣涵蓋顯示基本上相當(dāng)或改變的活性的蛋白。這些修飾可為有意的，例如，諸如通過(guò)定點(diǎn)誘變獲得的修飾，或可為意外的，諸如通過(guò)作為復(fù)合物或其命名的亞基的生產(chǎn)者的宿主中突變獲得的那些。而且，術(shù)語(yǔ)〃鏈球菌屬（Streptococcus)二聚體溶素〃，〃Cpl-l二聚溶素〃，〃Cpl-l二聚體"，"二聚Cpl-Γ'旨在包括在本文特別引用的蛋白以及全部基本上同源類似物，片段或截短，及等位基因變異的范圍之內(nèi)。[0046]術(shù)語(yǔ)〃鏈球菌屬（Streptococcus)二聚體溶素〃，〃pal二聚溶素〃，〃pal二聚體"，"二聚Pal"和未特別列出的任何變體，可在本文互換使用，及如貫穿本申請(qǐng)和權(quán)利要求使用指稱包括單或多個(gè)蛋白，及特別二聚體蛋白的蛋白性物質(zhì)，及延伸至具有本文所述及圖7中，及SEQIDN0:5中顯示的氨基酸序列數(shù)據(jù)，及本文及權(quán)利要求中所述的活性特征的那些蛋白。因此，蛋白顯示基本上相當(dāng)體或改變的活性同樣涵蓋。這些修飾可為有意的，例如，諸如通過(guò)定點(diǎn)誘變獲得的修飾，或可為意外的，諸如通過(guò)作為復(fù)合物或其命名的亞基的生產(chǎn)者的宿主中突變獲得的那些。而且，術(shù)語(yǔ)〃鏈球菌屬（Str印tococcus)二聚體溶素〃，"pal二聚溶素〃，〃pal二聚體"，"二聚Pal"旨在包括在本文特別引用的蛋白以及全部基本上同源類似物，片段或截短，及等位基因變異的范圍之內(nèi)。[0047]【多肽和裂解性酶】[0048]〃裂解性酶〃包括在適合的條件下及在關(guān)聯(lián)時(shí)期期間殺滅一種或更多細(xì)菌的任何細(xì)菌細(xì)胞壁裂解性酶。裂解性酶的例包括，無(wú)限制地，各種酰胺酶細(xì)胞壁裂解性酶。[0049]〃鏈球菌屬（Streptococcus)裂解性酶〃包括能在適合的條件下及在關(guān)聯(lián)時(shí)期期間殺滅至少一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌的裂解性酶。[0050]"噬菌體裂解性酶"指稱自噬菌體提取的或分離的裂解性酶或具有維持裂解性酶功能性的類似蛋白結(jié)構(gòu)的合成的裂解性酶。[0051]裂解性酶能特別切割存在于細(xì)菌細(xì)胞的肽聚糖的鍵而破壞細(xì)菌細(xì)胞壁。目前也假定細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖在多數(shù)細(xì)菌之中高度保守，及僅少個(gè)鍵合的切割可破壞細(xì)菌細(xì)胞壁。噬菌體裂解性酶可為酰胺酶，盡管其他類型的酶是可能的。切割這些鍵的裂解性酶的例是各種酰胺酶諸如胞壁質(zhì)酶，氨基葡萄糖苷酶，內(nèi)肽酶或N-乙酰-胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶。Fischetti等人（2008)報(bào)道C1鏈球菌噬菌體溶素酶是酰胺酶。Garcia等人（1987,1990)報(bào)道來(lái)自Cp-Ι噬菌體的來(lái)自肺炎鏈球菌（S.pneumoniae)的Cpl溶素是溶菌酶。Caldentey及Bamford(1992)報(bào)道來(lái)自phi6假單胞菌屬（Pseudomonas)噬菌體的裂解性酶是分裂由間-二氨基庚二酸和D-丙氨酸形成的肽橋的內(nèi)肽酶。大腸埃希氏菌（E.coli)Tl和T6噬菌體裂解性酶是如來(lái)自利斯特菌屬（Listeria)噬菌體（ply)的裂解性酶的酰胺酶（Loessner等人，1996)。也有本領(lǐng)域知道的能切割細(xì)菌細(xì)胞壁的其他裂解性酶。[0052]〃由噬菌體遺傳編碼的裂解性酶〃包括能例如通過(guò)具有針對(duì)宿主細(xì)菌的至少一些細(xì)胞壁裂解性活性殺滅宿主細(xì)菌的多肽。多肽可具有包括天然序列裂解性酶和其變體的序列。多肽可從各種來(lái)源，諸如自噬菌體（"噬菌體"）分離，或由重組或合成方法制備，諸如由Garcia等人描述的那些和也如在本文提供。多肽可在羧基末端側(cè)包含膽堿結(jié)合部分和可特征在于在氨基末端側(cè)能切割細(xì)胞壁肽聚糖的酶活性（諸如作用于肽聚糖中的酰胺鍵的酰胺酶活性）。已描述包括多種酶活性，例如2個(gè)酶促結(jié)構(gòu)域的裂解性酶，諸如PlyGBS溶素。一般而言，裂解性酶的分子量可在25,000和35,000Da之間及包含單個(gè)多肽鏈；但是，此可依賴于酶鏈改變。分子量可通過(guò)在變性十二烷基硫酸鈉凝膠電泳上測(cè)定和與分子量標(biāo)志物比較來(lái)最便利地測(cè)定。[0053]"天然序列噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶"包括與源于細(xì)菌的酶具有相同的氨基酸序列的多肽。該天然序列酶可是分離的或可由重組或合成手段產(chǎn)生。[0054]術(shù)語(yǔ)〃天然序列酶〃包括酶的天然存在的形式（例如，替代性地剪接的或改變的形式）和天然存在的變體。在本發(fā)明的一實(shí)施方式中，天然序列酶是由來(lái)自特異于鏈球菌屬（Streptococcus)的噬菌體的基因遺傳編碼，及特別是天然Cpl-Ι溶素或天然Pal溶素的成熟或全長(zhǎng)多肽。當(dāng)然，許多變體是可能的及知道的，如在出版物諸如Lopezetal.,MicrobialDrugResistance3:199-211(1997)；Garciaetal.,Gene86:81-88(1990)；Garciaetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:914-918(1988)；Garciaetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:914-918(1988)；Garciaetal.,StreptococcalGenetics(J.J.FerrettiandCurtiseds.,1987)；Lopezetal.,FEMSMicrobiol.Lett.100:439-448(1992)；Romeroetal.,J.Bacterio1.172:5064-5070(1990)；Rondaetal.,Eur.J.Biochem.l64:621-624(1987)andSanchezetal.,Gene61:13-19(1987)中公認(rèn)的。各這些參考文獻(xiàn)的內(nèi)容，特別序列表及比較序列的關(guān)聯(lián)的文本，包括關(guān)于序列同源性的聲明，特別通過(guò)引用以它們的整體并入本文。[0055]"變體序列裂解性酶"包括由不同于裂解性酶的多肽序列，但保留功能活性表征的裂解性酶。裂解性酶可，在一些實(shí)施方式中，由特異于鏈球菌屬（Streptococcus)的噬菌體遺傳編碼，其與本裂解性酶序列，如圖1，圖6和圖7中提供的，包括SEQIDN0:3,4和5的變體裂解性酶具有特定氨基酸序列同一性。例如，在一些實(shí)施方式中，有功能活性的裂解性酶可通過(guò)破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌，及其他敏感的細(xì)菌，如在本文提供，或如之前描述及本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的。有活性的裂解性酶（如圖1，圖6和圖7中提供的，包括SEQIDNO:3,4和5的變體裂解性酶）可與本裂解性酶序列具有60，65,70,75,80,85,90,95,97,98,99或99.5%氨基酸序列同一性。該噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶變體包括，例如，包括在本裂解性酶序列的序列N或C末端改變或添加或刪除一個(gè)或更多氨基酸殘基的裂解性酶多肽。在特定方面，噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶會(huì)與天然噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶序列具有至少約80%或85%氨基酸序列同一性，特別至少約90%(例如90%)氨基酸序列同一性。最特別噬菌體關(guān)聯(lián)的二聚裂解性酶變體會(huì)與本天然噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶序列（如在圖1，圖6和圖7或表1中提供的或包括SEQIDNO:1或5的本序列，或SEQIDN0:3,4或6的突變體序列）具有至少約95%(例如·95%)氨基酸序列同一性。[0056]關(guān)于本文鑒定的噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶序列的〃百分率氨基酸序列同一性〃在本文被定義為，在相同的閱讀框?qū)R序列及，如果必需，導(dǎo)入間隔而達(dá)到最大百分率序列同一性，及不考慮作為序列同一性的部分的任何保守性取代之后，與噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶序列中的氨基酸殘基同一的候選序列中的氨基酸殘基的百分率。[0057]關(guān)于本文鑒定的噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶序列的〃百分率核酸序列同一性〃在本文定義為，在對(duì)齊序列及，如果必需，導(dǎo)入間隔而達(dá)到最大百分率序列同一性之后，與噬菌體關(guān)聯(lián)的裂解性酶序列中的核苷酸同一的候選體序列中的核苷酸的百分率。[0058]為了測(cè)定2個(gè)核苷酸或氨基酸序列的百分率同一性，為最佳比較目的對(duì)齊序列(例如，可在第1核苷酸序列的序列中導(dǎo)入間隔）。然后比較在對(duì)應(yīng)核苷酸或氨基酸位置的核苷酸或氨基酸。當(dāng)?shù)?序列中的位置被與第2序列中的對(duì)應(yīng)位置的相同的核苷酸或氨基酸占據(jù)，則分子在該位置同一。2個(gè)序列之間的百分率同一性是由序列共享的同一位置數(shù)的函數(shù)（即，％同一性=同一位置#/位置總#X100)。[0059]2個(gè)序列之間的百分率同一性的測(cè)定可通過(guò)使用數(shù)學(xué)算法實(shí)現(xiàn)。用于比較2個(gè)序列的數(shù)學(xué)算法的優(yōu)選的，非限制性例是Karlin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:5873-5877(1993)的算法。該算法將合入NBLAST程序，其可用于鑒定與本發(fā)明的核苷酸序列具有期望的同一性的序列。為了比較目的而獲得帶空位的比對(duì)，可如描述于NucleicAcidsRes,25:3389-3402(1997)使用空位BLAST。當(dāng)利用BLAST和空位BLAST程序時(shí)，可使用相應(yīng)程序（例如，NBLAST)的默認(rèn)參數(shù)。見(jiàn)由NationalCenterforBiotechnologyInformation,NationalLibraryofMedicine,NationalInstitutesofHealth提供的程序。在一實(shí)施方式中，用于序列比較的參數(shù)可設(shè)置為W=12。參數(shù)也可改變（例如，W=5或W=20)。值"W〃決定對(duì)于將2個(gè)序列鑒定為含有同一性區(qū)的程序而言，多少連續(xù)核苷酸必需是同一的。[0060]〃多肽〃包括聚合物分子由以線性方式接合的多個(gè)氨基酸組成。多肽可，在一些實(shí)施方式中，對(duì)應(yīng)于由天然存在的多核苷酸序列編碼的分子。多肽可包括保守性取代，其中天然存在的氨基酸被具有類似性質(zhì)的氨基酸取代，其中該保守性取代不改變多肽的功能(見(jiàn)，例如，Lewin〃GenesV〃0xfordUniversityPress第1章，ρρ·9-131994)。[0061]術(shù)語(yǔ)〃改變的裂解性酶〃包括改組的和/或嵌合裂解性酶。[0062]特異于用特定噬菌體感染的細(xì)菌的噬菌體裂解性酶已發(fā)現(xiàn)有效和高效破壞目標(biāo)細(xì)菌的細(xì)胞壁。裂解性酶被認(rèn)為缺乏蛋白水解酶促活性，因此當(dāng)在細(xì)菌細(xì)胞壁的消化期間存在時(shí)對(duì)于哺乳動(dòng)物蛋白和組織是非-毀壞性的。如由科學(xué)期刊在線公開(kāi)的Loeffler等人，''RapidKillingofStreptococcuspneumoniaewithaBacteriophageCellWallHydrolase,"Science,294:2170-2172(2001年12月7日）和其補(bǔ)充性材料（其通過(guò)引用以它們的整體并入本文）顯示，純化的肺炎球菌噬菌體裂解性酶，諸如Pal,能殺滅各種肺炎球菌。Loeffler等人通過(guò)這些實(shí)驗(yàn)顯示，在接觸之后數(shù)秒內(nèi)，裂解性酶Pal能體外殺滅肺炎鏈球菌（S.pneumoniae)的15個(gè)臨床染色斑，包括最常分離的血清群和青霉素抗性染色斑。用Pal治療小鼠也能以劑量-依賴性方式消除或顯著減少血清型14的鼻集落。此夕卜，因?yàn)橐寻l(fā)現(xiàn)Pal的作用（像其他噬菌體裂解性酶，但不像抗生素），更特異于靶向病原體，正常菌群會(huì)保持基本上完整是可能的（M.J.Loessner,G.wendlinger,S.scherer,MolMicrobioll6，1231-41。（1995)通過(guò)引用在本文合并）。如在本文展示，例如，突變Cpl-1溶素，特別是二聚溶素，二聚Cpl-1溶素，在殺滅鏈球菌屬（Streptococcus)株，包括肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumonia)中有效。[0063]本發(fā)明的裂解性酶或多肽可作為為預(yù)防已暴露于由得病而具有感染癥狀的其他的那些的預(yù)防性治療，或作為為已成為由感染患病的那些的治療性治療，用特定噬菌體感染后由細(xì)菌生物產(chǎn)生。在本文提供越多溶素多肽序列和編碼溶素多肽的核酸，裂解性酶/多肽可優(yōu)選經(jīng)來(lái)自噬菌體基因組的分離的裂解性酶的基因產(chǎn)生，將基因放入轉(zhuǎn)移載體，及將所述轉(zhuǎn)移載體克隆進(jìn)表達(dá)系統(tǒng)，使用本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)方法，如本文例示包括。裂解性酶或多肽可為截短，嵌合，改組的或〃天然的〃，且可為這些的組合。關(guān)聯(lián)美國(guó)專利No.5,604,109以其整體通過(guò)引用并入本文?！ǜ淖兊摹呀庑悦缚梢栽S多方式產(chǎn)生。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，將來(lái)自噬菌體基因組的改變的裂解性酶基因投入轉(zhuǎn)移或可移動(dòng)的載體，優(yōu)選質(zhì)粒，及將質(zhì)粒克隆進(jìn)表達(dá)載體或表達(dá)系統(tǒng)。用于產(chǎn)生本發(fā)明的溶素多肽或酶的表達(dá)載體可適宜于大腸埃希氏菌（E.coli)，芽孢桿菌屬(Bacillus)或許多其他適合的細(xì)菌。載體系統(tǒng)也可為無(wú)細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)。表達(dá)基因或基因組合的全部這些方法為本領(lǐng)域所知。裂解性酶也可通過(guò)用特異于鏈球菌屬（Streptococcus)的噬菌體感染鏈球菌屬（Streptococcus)來(lái)產(chǎn)生，其中所述至少一種裂解性酶唯獨(dú)裂解對(duì)其他，例如天然的或共生的，存在的細(xì)菌菌群具有至多最小效應(yīng)的所述鏈球菌屬（Streptococcus)的細(xì)胞壁。[0064]"嵌合蛋白"或"融合蛋白"包含可操作地連接至異源多肽的本發(fā)明的多肽的全部或（優(yōu)選有生物學(xué)活性的部分或結(jié)構(gòu)域）部分。嵌合蛋白或肽，例如，通過(guò)組合具有2個(gè)或更多活性位點(diǎn)的2種或更多蛋白來(lái)產(chǎn)生。嵌合蛋白和肽可獨(dú)立地作用于相同的或不同分子，及因此具有同時(shí)治療2種或更多不同細(xì)菌感染的潛力。嵌合蛋白和肽也可用于通過(guò)在多于一個(gè)位置切割細(xì)胞壁來(lái)治療細(xì)菌感染，由此潛在地提供由單溶素分子或嵌合肽更快速或有效（或協(xié)同）殺滅。[0065]DNA構(gòu)建體或肽構(gòu)建體的〃異源〃區(qū)是未發(fā)現(xiàn)性質(zhì)上與更大分子關(guān)聯(lián)的更大DNA分子之內(nèi)的DNA或更大肽分子之內(nèi)的肽的可鑒定的段。由此，當(dāng)異源區(qū)編碼哺乳動(dòng)物基因時(shí)，基因側(cè)翼通常會(huì)有在源生物基因組中不側(cè)接哺乳動(dòng)物基因組DNA的DNA。異源編碼序列的另一例是編碼序列本身未在自然中發(fā)現(xiàn)的構(gòu)建體（例如，基因組編碼序列含有內(nèi)含子的cDNA，或具有不同于天然基因的密碼子的合成序列）。等位基因變異或天然存在的突變事件不產(chǎn)生本文定義的DNA或肽的異源區(qū)。[0066]術(shù)語(yǔ)〃可操作地連接的〃是指公開(kāi)的多肽和異源多肽是框內(nèi)融合的。異源多肽可融合到公開(kāi)的多肽的N-端或C-端。嵌合蛋白由化學(xué)合成，或由重組DNA技術(shù)酶學(xué)地產(chǎn)生。許多嵌合裂解性酶已被產(chǎn)生及研究。使分別自噬菌體phiX174和MS2裂解蛋白E和L構(gòu)建的基因E-L，嵌合裂解經(jīng)歷內(nèi)部缺失，以產(chǎn)生具有改變的裂解或殺滅性質(zhì)的一系列新E-L克隆。在此研究中研究親本基因E，L，E-L，及E-L的內(nèi)部截短的形式的裂解性活性，以基于不同跨膜結(jié)構(gòu)域的體系結(jié)構(gòu)的差異表征不同裂解機(jī)理。電子顯微鏡檢和用于細(xì)胞質(zhì)和周質(zhì)空間的標(biāo)志物酶的釋放揭示，2種不同裂解機(jī)理可依賴于大腸埃希氏菌（E.coli)的內(nèi)膜或內(nèi)和外膜的蛋白的穿透區(qū)別（FEMSMicrobiol,lett。（1998)164(1):159-67(通過(guò)引用在本文合并）。有用的融合蛋白的一例是公開(kāi)的多肽融合到GST序列的C-端的GST融合蛋白。該嵌合蛋白可輔助公開(kāi)的重組多肽的純化。[0067]在另一實(shí)施方式中，嵌合蛋白或肽在其N-端含有異源信號(hào)序列。例如，公開(kāi)的多肽的天然信號(hào)序列可去除及被來(lái)自另一蛋白的信號(hào)序列取代。例如，可將桿狀病毒包膜蛋白的gp67分泌序列用作異源信號(hào)序列（CurrentProtocolsinMolecularBiology,Ausubeletal.，eds·，JohnWiley&Sons,1992，通過(guò)引用在本文合并）。真核生物異源信號(hào)序列的其他例包括蜂毒肽和人胎盤堿性磷酸酶的分泌序列（Stratagene;LaJolla,Calif.)。在仍另一例中，有用的原核生物異源信號(hào)序列包括phoA分泌信號(hào)(Sambrook等人，見(jiàn)上）和蛋白A分泌信號(hào)（PharmaciaBiotech;Piscataway,N.J.)。[0068]融合蛋白可組合溶素多肽與具有不同能力，或給溶素多肽提供另外的能力或添加的特征的蛋白或多肽。融合蛋白可為公開(kāi)的多肽的全部或部分融合到源于免疫球蛋白家族成員的序列的免疫球蛋白融合蛋白。免疫球蛋白可為抗體，例如針對(duì)敏感的或靶向細(xì)菌的表面蛋白或表位的抗體。可將免疫球蛋白融合蛋白摻入藥物組合物，并施用于受試者而抑制（可溶性或膜結(jié)合）配體和細(xì)胞表面上的蛋白（受體）之間的相互作用，由此抑制體內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。免疫球蛋白融合蛋白可改變公開(kāi)的多肽的同源配體的生物利用度。配體/受體相互作用的抑制可為有用的治療，二者用于調(diào)節(jié)（即促進(jìn)或抑制）細(xì)胞存活的治療細(xì)菌-關(guān)聯(lián)的疾病和病癥。而且，可將公開(kāi)的免疫球蛋白融合蛋白用作免疫原來(lái)在受試者中產(chǎn)生針對(duì)公開(kāi)的多肽的抗體，純化配體及在篩選測(cè)定中鑒定抑制受體與配體的相互作用的分子。公開(kāi)的嵌合和融合蛋白和肽可由標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)產(chǎn)生。[0069]融合基因可由常規(guī)技術(shù)，包括自動(dòng)化的DNA合成儀合成?；蛘?，基因片段的PCR擴(kuò)增可使用在隨后可退火及再擴(kuò)增而產(chǎn)生嵌合基因序列的2個(gè)連續(xù)基因片段之間引起互補(bǔ)懸伸的錨定引物實(shí)施（見(jiàn)，即，Ausubel等人，見(jiàn)上）。而且，許多表達(dá)載體是已編碼融合部分（即，GST多肽）的可商購(gòu)品。編碼本發(fā)明的多肽的核酸可克隆進(jìn)該表達(dá)載體使得融合部分框內(nèi)連接至本發(fā)明的多肽。[0070]如本文所用，已隨機(jī)切割用于多于一種相關(guān)的噬菌體蛋白或蛋白肽片段的改組的蛋白或肽，基因產(chǎn)物，或肽及重組裝為更有活性的或特異性蛋白。選擇或篩選改組的寡核苷酸，肽或肽片段分子來(lái)鑒定具有期望的功能性質(zhì)的分子。此方法描述于，例如，Stemmer，美國(guó)專利No.6,132,970.(改組多核苷酸的方法）；Kauffman，美國(guó)專利No.5,976,862(經(jīng)基于密碼子的合成演化）和Huse，美國(guó)專利No.5,808,022(直接密碼子合成）。這些專利的內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。改組可用于產(chǎn)生更有活性的蛋白，例如有達(dá)模板蛋白的10?100倍活性的蛋白。在不同種溶素蛋白之中選擇模板蛋白。改組的蛋白或肽構(gòu)成，例如，一個(gè)或更多結(jié)合結(jié)構(gòu)域及一個(gè)或更多催化性結(jié)構(gòu)域。各結(jié)合或催化性結(jié)構(gòu)域源于相同的或不同噬菌體或噬菌體蛋白。改組的結(jié)構(gòu)域是基于寡核苷酸的分子，如單獨(dú)或與其他可翻譯成肽片段的基因或基因產(chǎn)物組合的基因或基因產(chǎn)物，或它們是基于肽的分子?；蚱伟―NA，RNA，DNA-RNA雜交體，反義RNA，核酶，EST，SNIP和其他基于寡核苷酸的分子的任何分子，其單獨(dú)或與其他分子組合而產(chǎn)生能或不能翻譯成肽的寡核苷酸分子。[0071]如在本文公開(kāi)的溶素蛋白或肽和肽片段的二聚形式包括化學(xué)合成的或由重組DNA技術(shù)制備的，或兼二者得到的蛋白或肽和肽片段。這些技術(shù)包括，例如，嵌合及改組。當(dāng)?shù)鞍谆螂挠苫瘜W(xué)合成產(chǎn)生時(shí)，其優(yōu)選基本上無(wú)化學(xué)前體或其他化學(xué)品，即，其從涉及蛋白的合成的化學(xué)前體或其他化學(xué)品分離。因此該蛋白制備物具有少于約30^,20^,10^,5%(以干重計(jì)）的非目標(biāo)多肽的化學(xué)前體或化合物。[0072]多肽的信號(hào)序列可輔助公開(kāi)的蛋白和肽和肽片段跨膜移動(dòng)至粘膜及自粘膜跨膜移動(dòng)，以及輔助目標(biāo)分泌的蛋白或其他蛋白的分泌和分離。信號(hào)序列一般特征在于在一次或更多切割事件中，在分泌期間通常自成熟蛋白切割的疏水氨基酸核心。該信號(hào)肽含有允許信號(hào)序列隨它們經(jīng)過(guò)通過(guò)分泌通路自成熟蛋白切割的加工位點(diǎn)。由此，公開(kāi)可屬于具有信號(hào)序列的描述的多肽，以及屬于信號(hào)序列本身及屬于缺失信號(hào)序列的多肽（即，切割產(chǎn)物）。公開(kāi)的編碼信號(hào)序列的核酸序列可在表達(dá)載體中可操作地連接于目標(biāo)蛋白，諸如通常不分泌的或難分離的蛋白。信號(hào)序列指導(dǎo)蛋白，諸如自轉(zhuǎn)化進(jìn)表達(dá)載體的真核生物宿主分泌，及信號(hào)序列隨后或同時(shí)被切割。蛋白可然后由領(lǐng)域認(rèn)可的方法容易自細(xì)胞外培養(yǎng)基純化?；蛘?，可將信號(hào)序列使用輔助純化的序列，諸如用GST結(jié)構(gòu)域連接到目標(biāo)蛋白。[0073]本發(fā)明也屬于本發(fā)明的多肽的其他變體。該變體可具有可發(fā)揮激動(dòng)劑（模仿物）或拮抗劑功能的改變的氨基酸序列。變體可由誘變，即，離散點(diǎn)突變或截短產(chǎn)生。激動(dòng)劑可保留基本上相同的，或子集的蛋白的天然存在的形式的生物學(xué)活性。蛋白的拮抗劑可通過(guò)，例如，與包括目標(biāo)蛋白的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)的下游或上游成員競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合來(lái)抑制一種或更多蛋白的天然存在的形式的活性。由此，特定生物學(xué)效應(yīng)可通過(guò)用具有有限的功能的變體處理來(lái)引發(fā)。相對(duì)于用蛋白的天然存在的形式處理，用具有蛋白的天然存在的形式的子集的生物學(xué)活性的變體處理受試者可在受試者中具有更少副作用。發(fā)揮激動(dòng)劑（模仿物）或拮抗劑功能的公開(kāi)的蛋白變體可通過(guò)就激動(dòng)劑或拮抗劑活性篩選公開(kāi)的蛋白的突變體，即，截短突變體的組合庫(kù)來(lái)鑒定。在一實(shí)施方式中，變體雜庫(kù)由在核酸水平組合的誘變產(chǎn)生及由雜基因庫(kù)編碼。變體雜庫(kù)可產(chǎn)生由，例如，將合成寡核苷酸的混合物酶學(xué)地連接進(jìn)基因序列，使得簡(jiǎn)并組的潛在蛋白序列可作為個(gè)體多肽，或替代性地，作為一組更大融合蛋白（即，為噬菌體展示）表達(dá)。有可用于自簡(jiǎn)并寡核苷酸序列產(chǎn)生公開(kāi)的多肽的潛在變體庫(kù)的各種方法。用于合成簡(jiǎn)并寡核苷酸的方法為本領(lǐng)域所知（見(jiàn)，即，似四叩（1983)丁61:四116(11'〇1139:3;1七&1〇1四6七&1.(1984)八111111.1^￥.13;[0(3116111.53:323;Itakuraetal.(1984)Sciencel98:1056;Ikeetal.(1983)NucleicAcidRes.11:477，全部通過(guò)引用在本文合并）。[0074]此外，公開(kāi)的多肽的編碼序列的片段庫(kù)可用于產(chǎn)生多肽用于篩選及隨后選擇變體，活性片段或截短的雜群。例如，編碼序列片段庫(kù)可通過(guò)在切割以僅約每分子一次發(fā)生的條件下用核酸酶處理目標(biāo)編碼序列的雙鏈PCR片段，變性雙鏈DNA，自不同切割的產(chǎn)物復(fù)性DNA而形成可包括正義/反義對(duì)的雙鏈DNA，由用S1核酸酶處理而從改性的雙聯(lián)體移出單鏈部分，及將得到的片段庫(kù)連接進(jìn)表達(dá)載體來(lái)產(chǎn)生。由此方法，可衍生編碼各種尺寸的目標(biāo)蛋白的N-端和內(nèi)部片段的表達(dá)庫(kù)。用于篩選由點(diǎn)突變或截短制造的組合庫(kù)的基因產(chǎn)物，及就具有選擇的性質(zhì)的基因產(chǎn)物篩選cDNA庫(kù)的幾種技術(shù)為本領(lǐng)域所知。服從高通量分析，用于篩選大基因庫(kù)的最廣泛使用的技術(shù)一般包括將基因庫(kù)克隆進(jìn)可復(fù)制的表達(dá)載體，用得到的載體庫(kù)轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)募?xì)胞，及在期望的活性的檢測(cè)輔助編碼檢測(cè)其產(chǎn)物的基因的載體的分離的條件下表達(dá)組合的基因。遞歸總體誘變（REM)，增強(qiáng)庫(kù)中功能突變體頻度的技術(shù)，可與篩選測(cè)定組合使用來(lái)鑒定公開(kāi)的蛋白的變體（ArkinandYourvan(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:7811-7815;Delgraveetal.(1993)ProteinEngineering6(3):327-331)蛋白或肽片段的有免疫學(xué)活性的部分包括與識(shí)別噬菌體酶的抗體結(jié)合的區(qū)。在此情景中，蛋白(或編碼蛋白的核酸）的最小部分根據(jù)實(shí)施方式是可識(shí)別為特異于制造溶素蛋白的噬菌體的表位。因此，可被預(yù)期結(jié)合抗體和對(duì)于一些實(shí)施方式有用的最小多肽（及編碼多肽的關(guān)聯(lián)的核酸）可為8,9,10,11，12,13,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,75,85或100個(gè)氨基酸長(zhǎng)。盡管短至8,9,10,11，12或15個(gè)氨基酸長(zhǎng)的小序列可靠地包含足夠的結(jié)構(gòu)而發(fā)揮表位的作用，5,6或7個(gè)氨基酸長(zhǎng)的更短序列可在一些條件呈現(xiàn)表位結(jié)構(gòu)及在一實(shí)施方式中具有價(jià)值。[0075]實(shí)施方式的蛋白或肽片段的有生物學(xué)活性的部分，如本文所述，包括包含足夠同一于或源于公開(kāi)的噬菌體蛋白的氨基酸序列的氨基酸序列的多肽，其相比噬菌體蛋白的全長(zhǎng)蛋白包括更少氨基酸及呈現(xiàn)對(duì)應(yīng)全長(zhǎng)蛋白的至少一種活性。一般而言，有生物學(xué)活性的部分包含具有對(duì)應(yīng)蛋白的至少一種活性的結(jié)構(gòu)域或基序。公開(kāi)的蛋白或蛋白片段的有生物學(xué)活性的部分可為例如，長(zhǎng)度少于或多于10,25,50,100個(gè)氨基酸的多肽。而且，刪除，或添加其他蛋白區(qū)的其他有生物學(xué)活性的部分，可由重組技術(shù)制備及就一種或更多實(shí)施方式的多肽的天然形式的功能活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。[0076]本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)同意可制備與該小蛋白和/或核酸（或更大分子的蛋白和/或核酸區(qū)）共享功能性的同源蛋白和核酸?？赏吹母蠓肿拥脑撔》肿雍投虆^(qū)特別旨在包括在實(shí)施方式中。優(yōu)選地，該有價(jià)值的區(qū)與本文提供的溶素多肽（包括圖1和6所示的多肽）具有至少50%，65%，75%，80%，85%和優(yōu)選至少90%，95%，97%，98%或至少99%的同源性。這些百分率同源性值不包括由于保守性氨基酸取代所致的改變。[0077]當(dāng)至少約70%的氨基酸殘基（優(yōu)選至少約80%，至少約85%，及優(yōu)選至少約90或95%)相同，或表示保守性取代時(shí)，2個(gè)氨基酸序列是"基本上同源的"。當(dāng)溶素多肽的一個(gè)或更多，或幾個(gè)，或達(dá)10%，或達(dá)15%，或達(dá)20%的氨基酸被類似或保守性氨基酸取代取代時(shí)，相當(dāng)?shù)娜芩?，諸如相當(dāng)?shù)腃pl-1溶素，或相當(dāng)?shù)逆溓蚓鷮伲⊿treptococcus)溶素的序列是基本上同源的，且其中相當(dāng)?shù)娜芩鼐哂性诒疚墓_(kāi)的溶素，諸如Cpl-1溶素的活性特征，抗-細(xì)菌效應(yīng)和/或細(xì)菌特異性。[0078]本文所述的氨基酸殘基優(yōu)選為〃L"異構(gòu)體形式。但是，可用〃D"異構(gòu)體形式的殘基代替任何L-氨基酸殘基，只要多肽保留免疫球蛋白-結(jié)合的期望的功能性質(zhì)。NH2指游離的氨基存在于多肽的氨基末端。C00H指游離的羧基存在于多肽的羧基末端。與標(biāo)準(zhǔn)多肽命名法保持一致，J.Biol.Chem.,243:3552-59(1969)，氨基酸殘基的縮寫顯示于以下對(duì)應(yīng)表：[0079]【對(duì)應(yīng)表】[0080]【氨基酸符號(hào)】[0081]【權(quán)利要求】1.分離的二聚鏈球菌屬（streptococcus)-特異性噬菌體溶素，其包含彼此共價(jià)連接的2個(gè)鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素單體，其中所述二聚體針對(duì)一種或更多鏈球菌屬（Streptococcus)細(xì)菌具有殺滅活性。2.權(quán)利要求1的溶素，其中所述溶素單體是與未突變的Cpl-1(SEQIDN0:1)具有至少90%氨基酸序列同一性的Cpl-1單體，或是與未突變的Pal(SEQIDN0:5)具有至少90%氨基酸序列同一性的Pal單體。3.權(quán)利要求1的溶素，其中所述溶素單體彼此化學(xué)交聯(lián)。4.權(quán)利要求2的溶素，其中所述溶素單體彼此由二硫鍵共價(jià)連接。5.權(quán)利要求4的溶素，其中各單體具有在自C-端14和20個(gè)氨基酸之間的Cys殘基。6.權(quán)利要求5的溶素，其中所述溶素單體在頭45個(gè)殘基中不具有Cys殘基。7.權(quán)利要求5的溶素，其中所述溶素單體選自：包含圖6所示的氨基酸序列的突變Cpl-1溶素（SEQIDNO:3)和包含圖7所示的氨基酸序列的突變Pal溶素（SEQIDNO:5)。8.權(quán)利要求1的溶素，其中所述溶素單體包含第1鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素的催化性結(jié)構(gòu)域和第2鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。9.權(quán)利要求8的溶素，其中第1鏈球菌屬（Streptococcus)-特異性噬菌體溶素的催化性結(jié)構(gòu)域是突變Cpl-1(SEQIDNO:3)，突變Pal(SEQIDNO:5)或另一鏈球菌噬菌體溶素。10.權(quán)利要求8的溶素，其中第2鏈球菌屬（Str印tococcus)-特異性噬菌體溶素的結(jié)合結(jié)構(gòu)域是突變Cpl-1(SEQIDNO:3)，突變Pal(SEQIDNO:5)或另一鏈球菌噬菌體溶素。11.權(quán)利要求1?10之任一項(xiàng)的溶素，其針對(duì)肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)具有殺滅活性。12.通過(guò)施用包括治療有效量的權(quán)利要求1?11之任一項(xiàng)的溶素的組合物治療患由鏈球菌感染導(dǎo)致的疾病或病情的哺乳動(dòng)物的方法。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述感染由肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)導(dǎo)致。14.權(quán)利要求12的方法，其中所述疾病或病情是選自下列的一種或更多疾病或病情：菌血癥，腦膜炎，肺炎，中耳炎及鼻竇炎。15.通過(guò)施用包括治療有效量的權(quán)利要求1?11之任一項(xiàng)的溶素的組合物使患由鏈球菌感染導(dǎo)致的疾病或病情或處于由鏈球菌感染導(dǎo)致的疾病或病情風(fēng)險(xiǎn)的哺乳動(dòng)物中的鏈球菌去定居的方法。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述感染由肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae)導(dǎo)致。17.藥物組合物，其包含治療有效量的權(quán)利要求1?11之任一項(xiàng)的二聚溶素，及藥學(xué)可接受的載體。18.抗-微生物組合物，其用于清潔或凈化多孔或非-多孔表面，所述組合物包含權(quán)利要求1的溶素。19.凈化懷疑含有感染性細(xì)菌的無(wú)生命的表面的方法，包括用殺細(xì)菌地或抑細(xì)菌地有效量的權(quán)利要求17的組合物處理所述表面?！疚臋n編號(hào)】C12N7/00GK104114695SQ201280057094【公開(kāi)日】2014年10月22日申請(qǐng)日期:2012年10月4日優(yōu)先權(quán)日:2011年10月5日【發(fā)明者】V·A·菲謝蒂,G·雷施申請(qǐng)人:洛克菲勒大學(xué)