用于再生干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于將來自老年人的干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為年輕的干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合物，更具體地涉及一種用于培養(yǎng)干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合物，用于將來自老年人的干細(xì)胞再生為具有與年輕人的干細(xì)胞類似的特性，并涉及一種再生干細(xì)胞的方法，包括在所述培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)來自老年人的干細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，即使自超過60歲的老年人收集的間充質(zhì)干細(xì)胞也可被轉(zhuǎn)化為具有高分化能力、高端粒酶活性和高干細(xì)胞標(biāo)記表達(dá)能力的年輕的間充質(zhì)干細(xì)胞。因此，本發(fā)明能夠顯著地提高采用間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞治療的療效。
【專利說明】用于再生干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于將來自老年人的干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為年輕的干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合 物，更具體地涉及一種用于培養(yǎng)干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合物，用于將來自老年人的干細(xì)胞再生 為具有與年輕人的干細(xì)胞類似的特性，并涉及一種再生干細(xì)胞的方法，包括在所述培養(yǎng)基 組合物中培養(yǎng)來自老年人的干細(xì)胞。

【背景技術(shù)】
[0002] 間充質(zhì)干細(xì)胞是源自諸如骨髓細(xì)胞、臍帶血細(xì)胞、胎盤細(xì)胞（胎盤組織細(xì)胞）或脂 肪細(xì)胞（或脂肪組織細(xì)胞）的各種成體細(xì)胞的多能干細(xì)胞。例如，來自骨髓的間充質(zhì)干細(xì) 胞具有多能性而分化為脂肪組織、骨/軟骨組織和肌肉組織，因此已經(jīng)進(jìn)行了各種研究來 開發(fā)采用間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞治療劑。
[0003] 近年來，由于利用間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞治療技術(shù)受到了關(guān)注，因而需要發(fā)展來自 人體的間充質(zhì)干細(xì)胞的活化技術(shù)以適合于治療目的。特別地，老年人占細(xì)胞治療患者的很 大一部分，而從老年人的組織收集的間充質(zhì)干細(xì)胞由于較低的增殖和分化能力而具有較低 的療效。此外，需要將來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞活化為具有與來自年輕人的間充質(zhì)干細(xì) 胞類似特性的技術(shù)。
[0004] 眾所周知，類似于其他原代培養(yǎng)的人類細(xì)胞，當(dāng)在體外培養(yǎng)時(shí)，間充質(zhì)干細(xì)胞由 于與端粒縮短不相關(guān)的衰老機(jī)制而分裂非常緩慢（Shibata, K. R. et al.，Stem cells, 25 ; 2371-2382, 2007)。尚未清楚地發(fā)現(xiàn)這種衰老機(jī)制，但已知主要是因?yàn)樵陂L期體外培養(yǎng)中 環(huán)境脅迫積累，使得Cdk抑制蛋白pl6(INK4a)表達(dá)并積累而抑制了參與細(xì)胞生長的Cdk蛋 白的活性。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)誘導(dǎo)腫瘤基因 Bmi-1在間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)而抑制pl6的表達(dá) 時(shí)，細(xì)胞的衰老就會(huì)受到抑制（Zhang, X.et al. Biochemical and biophysical research communications351 ;853-859, 2006)。此外，據(jù)報(bào)道，當(dāng)在培養(yǎng)期間用FGF-2對(duì)間充質(zhì)干細(xì) 胞進(jìn)行處理以抑制p21 (Cipl)、p53和pl6 (INK4a)的mRNA表達(dá)時(shí)，間充質(zhì)干細(xì)胞的生長在 G1 期停滯的情況就會(huì)受到抑制（Ito, T. et al·，Biochemical and biophysical research communications, 359 ;108-1142007)。此外，韓國專利公開 No. 10-2009-0108141 公開了一 種通過將編碼Wipl蛋白的基因轉(zhuǎn)化間充質(zhì)干細(xì)胞而抑制間充質(zhì)干細(xì)胞衰老的方法。
[0005] 然而，目前還沒有對(duì)再生從老年人的組織收集的老化的間充質(zhì)干細(xì)胞的方法的報(bào) 道。
[0006] 因此，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，當(dāng)將從分離自老年患者的脂肪組織收集的間充質(zhì)干細(xì)胞在含 有抗氧化劑和生長因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，能夠產(chǎn)生具有與年輕人的間充質(zhì)干細(xì)胞的活性 類似的間充質(zhì)干細(xì)胞，因此完成了本發(fā)明。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種用于再生來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)基 組合物。
[0008] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種再生間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，包括使用所述培養(yǎng)基 組合物培養(yǎng)來自老年人的充質(zhì)干細(xì)胞。
[0009] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種用于再生來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞的培 養(yǎng)基組合物，所述培養(yǎng)基組合物含有FBS (胎牛血清）、抗氧化劑、細(xì)胞因子和NAC(N_乙 酰-L-半胱氨酸）。
[0010] 本發(fā)明還提供了一種再生來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，所述方法包括在上 述培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011] 圖1示出了來自20幾歲的人和30幾歲的人的脂肪干細(xì)胞在每種培養(yǎng)基中作4輪 傳代培養(yǎng)的顯微圖片。
[0012] 圖2示出了來自70幾歲的人和80幾歲的人的脂肪干細(xì)胞在其培養(yǎng)基中作4輪傳 代培養(yǎng)的顯微圖片。
[0013] 圖3是示出來自年輕人（20幾歲和30幾歲）的細(xì)胞和來自老年人（70幾歲和80 幾歲）的細(xì)胞在10種不同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞群倍增水平（CPDL)的圖表。
[0014] 圖4是示出來自年輕人（20幾歲和30幾歲）的細(xì)胞和來自老年人（70幾歲和80 幾歲）的細(xì)胞在各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞群倍增水平（CPDL)的圖表。
[0015] 圖5是示出在五種不同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的源自不同年齡的人的脂肪干細(xì)胞的端 粒酶活性的圖表。
[0016] 圖6是不出在兩種不同的培養(yǎng)基（1號(hào)培養(yǎng)基和9號(hào)培養(yǎng)基）中培養(yǎng)的來自20幾 歲、30幾歲、70幾歲和80幾歲的人的脂肪干細(xì)胞的端粒酶活性的圖表。
[0017] 圖7是示出在使用1號(hào)培養(yǎng)基和9號(hào)培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞作4輪傳代培養(yǎng)和6輪傳代培 養(yǎng)后，端粒酶活性變化的測量結(jié)果的圖表。
[0018] 圖8示出了在1號(hào)培養(yǎng)基和9號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)3輪的脂肪干細(xì)胞中的多能性標(biāo)記 oct4、nanog和Rexl的表達(dá)水平的測量結(jié)果。
[0019] 圖9示出了在1號(hào)培養(yǎng)基和9號(hào)培養(yǎng)基中培養(yǎng)4輪的脂肪干細(xì)胞中的多能性標(biāo)記 oct4、nanog和Rexl的表達(dá)水平的測量結(jié)果。
[0020] 用于實(shí)施本發(fā)明的最佳實(shí)施方式
[0021] 一方面，本發(fā)明涉及一種用于再生來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合物， 所述培養(yǎng)基組合物含有FBS(胎牛血清）、抗氧化劑、細(xì)胞因子和NAC(N-乙酰-L-半胱氨 酸）。
[0022] 如在此使用的，術(shù)語"干細(xì)胞"是指這樣的細(xì)胞，其不僅具有自我復(fù)制的能力而且 還具有分化為至少兩種類型的細(xì)胞的能力，而"成體干細(xì)胞"是指出現(xiàn)在發(fā)育過程后形成胚 胎的各器官的時(shí)期或出現(xiàn)在成年期的干細(xì)胞。
[0023] 如在此使用的，術(shù)語"間充質(zhì)干細(xì)胞"是指從人類或哺乳動(dòng)物的各種組織中分離的 未分化干細(xì)胞。特別地，本發(fā)明中的間充質(zhì)干細(xì)胞可以是臍帶源性間充質(zhì)干細(xì)胞、臍帶血 源性間充質(zhì)干細(xì)胞、骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞、肌肉源性間充質(zhì)干細(xì) 胞、神經(jīng)源性間充質(zhì)干細(xì)胞、皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞、羊膜源性間充質(zhì)干細(xì)胞和胎盤源性間 充質(zhì)干細(xì)胞。從各組織分離干細(xì)胞的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。
[0024] 如在此使用的，術(shù)語"脂肪源性干細(xì)胞"是指從脂肪組織中分離的未分化干細(xì)胞。 例如，可按以下方式分離脂肪源性干細(xì)胞。具體地，可通過以下方式分離脂肪源性干細(xì)胞： 將通過抽脂術(shù)獲得的脂肪在生理鹽水中懸浮，培養(yǎng)懸浮液，用胰蛋白酶處理貼附至培養(yǎng)容 器（如燒瓶）的脂肪細(xì)胞層，并收集經(jīng)處理的脂肪細(xì)胞，或者用刮刀收集懸浮在生理鹽水中 的少量脂肪細(xì)胞。
[0025] 如在此使用的，措詞"再生干細(xì)胞"是使來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞的表型類似于 來自年輕人的間充質(zhì)干細(xì)胞的表型。所述表型包括細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞增殖速率、端粒酶活性、 干細(xì)胞標(biāo)記（0ct4、SSEA-l、Tral-60、Tral_81、Nanog等）的表達(dá)水平和干細(xì)胞的分化能力。 在本發(fā)明中，來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞優(yōu)選為分離自60-120歲的老人的細(xì)胞。
[0026] 如在此使用的，措詞"使來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞的表型類似于來自年輕人的 間充質(zhì)干細(xì)胞的表型"是指與第一輪中分離的來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞相比，表型變得 更類似于來自年輕人的組織的干細(xì)胞的狀態(tài)，或者與在不同于本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物中培 養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞相比，表型變得更類似于年輕人的干細(xì)胞的狀態(tài)。
[0027] 在本發(fā)明中，所述培養(yǎng)基組合物可進(jìn)一步含有胰島素或胰島素樣生長因子以及 氫化可的松，并且所述培養(yǎng)基組合物中的細(xì)胞因子可以是EGF(表皮生長因子）和/或 bFGF (堿性成纖維細(xì)胞生長因子）。
[0028] 本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物中使用的抗氧化劑可以是硒、維生素 E、抗壞血酸、兒茶素、 番茄紅、β-胡蘿卜素、輔酶Q-l〇、EPA(二十碳五烯酸）、DHA(二十二碳六烯酸）等。優(yōu)選 地，抗氧化劑可以是硒。
[0029] 因此，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)FBS、bFGF和EGF是培養(yǎng)來自所有年齡組的人的脂肪干細(xì)胞的必 需因子。并且還發(fā)現(xiàn)來自年輕人的細(xì)胞比來自老年人的細(xì)胞的多能性、分化率或端粒酶活 性高，而且在不含F(xiàn)BS、bFGF或EGF的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞顯示出降低的生長速率、分化率 和端粒酶活性，這表明FBS、bFGF和EGF是細(xì)胞生長和細(xì)胞活性的必需因子。
[0030] 此外，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)在不含硒的培養(yǎng)基和含硒的對(duì)照培養(yǎng)基中，源自年輕組和源自 老年組的干細(xì)胞的細(xì)胞分化率是類似的。然而，兩種培養(yǎng)基中的端粒酶活性檢測結(jié)果表明 在不含硒的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的老年組細(xì)胞的端粒酶活性比年輕組細(xì)胞的端粒酶活性低，這表 明硒實(shí)質(zhì)上應(yīng)包含在用于培養(yǎng)來自老年人的細(xì)胞的培養(yǎng)基中，以提供高的端粒酶活性。
[0031] 另一方面，本發(fā)明涉及一種再生來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，所述方法包 括在上述培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞，所述培養(yǎng)基組合物用于將來自 老年人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)為來自年輕人間充質(zhì)干細(xì)胞，所述培養(yǎng)基組合物含有FBS (胎牛 血清）、抗氧化劑、細(xì)胞因子和NAC(N_乙酰-L-半胱氨酸）。
[0032] 用于培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基可以是本領(lǐng)域已知的常規(guī)的適合于培養(yǎng)干 細(xì)胞的培養(yǎng)基，例如，DMEM、MEM或K-SFM培養(yǎng)基。優(yōu)選地，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基。 更優(yōu)選地，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為K-SFM (角化細(xì)胞-SFM ;角化細(xì)胞無血清培養(yǎng)基）。
[0033] 用于培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)基可補(bǔ)充本領(lǐng)域已知的添加劑，以抑制間充質(zhì)干細(xì) 胞的分化，同時(shí)促進(jìn)其未分化表型的增殖。
[0034] 此外，所述培養(yǎng)基可含有等滲溶液的中性緩沖液（例如，磷酸鹽和/或高濃度碳酸 氫鹽）以及蛋白營養(yǎng)物（例如，血清如FBS、血清替代品、白蛋白或必需氨基酸及非必需氨基 酸如谷氨酰胺）。此外，所述培養(yǎng)基可含有脂類（脂肪酸、膽固醇、血清HDL或LDL提取物） 以及在大多數(shù)這類培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的其他成分（例如，胰島素或轉(zhuǎn)鐵蛋白、核苷或核苷酸、丙 酮酸、糖源如葡萄糖、呈任何離子形式或鹽的硒、糖皮質(zhì)激素如氫化可的松和/或還原劑如 β-巰基乙醇）。
[0035] 此外，為了防止細(xì)胞彼此貼附或貼附在容器壁上，或防止形成大的聚簇，培養(yǎng)基中 含有抗凝劑會(huì)是有利的，例如由Invitrogen出售的抗凝劑（Cat#0010057AE)。
[0036] 其中，采用選自以下添加劑中的一種或多種添加劑會(huì)是有利的：
[0037] -干細(xì)胞因子（SCF、Steel因子）、二聚化c-kit的其他配體或抗體，以及相同信號(hào) 傳導(dǎo)通路的其他激活子；
[0038] -其他酪氨酸激活酶相關(guān)受體的配體，所述受體例如血小板源性生長因子 (TOGF)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子、Flt-3配體以及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)的受體；
[0039] -提高環(huán)腺苷酸cAMP水平的因子，如弗斯可林（forskolin);
[0040] -誘導(dǎo)gpl30的因子，如LIF或制瘤素 -Μ ;
[0041] -造血生長因子，如血栓形成素（ΤΡ0);
[0042] -轉(zhuǎn)化生長因子，如TGF β 1 ;
[0043] -神經(jīng)生長因子，如CNTF。
[0044] 根據(jù)本發(fā)明待培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞可通過例如以下方法獲得。
[0045] 分離通過抽脂術(shù)或類似技術(shù)從腹部獲得的人體脂肪組織并用PBS洗滌。然后，細(xì) 致切割所述組織，并用含膠原酶的DMEM培養(yǎng)基降解所述組織，之后用PBS洗滌并以lOOOrpm 離心5分鐘。除去上清液，用PBS洗滌殘留的沉淀并以lOOOrpm離心5分鐘。通過100 μ m 過濾網(wǎng)除去上清液并用PBS洗滌殘留的細(xì)胞。然后，將細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)基（10%FBS、2mM NAC、0. 2mM抗壞血酸）中培養(yǎng)過夜，培養(yǎng)之后，用PBS洗滌未貼附至培養(yǎng)容器的細(xì)胞并在 Keratinocyte-SFM培養(yǎng)基（含有NAC、抗壞血酸、鈣、rEGF、BPE、胰島素以及氫化可的松）中 培養(yǎng)，同時(shí)每隔2天更換培養(yǎng)基。從培養(yǎng)基分離間充質(zhì)干細(xì)胞并傳代培養(yǎng)，從而獲得間充質(zhì) 干細(xì)胞。此外，也可按照本領(lǐng)域已知的任何方法獲得間充質(zhì)干細(xì)胞。
[0046] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，優(yōu)選地采用0. 5-lng/mL量的硒作為抗氧化劑。如果培 養(yǎng)基中硒的含量小于0. 5 μ g/Ι，則培養(yǎng)基將對(duì)氧中毒敏感，而如果培養(yǎng)基中硒的含量大于 10 μ g/Ι，則將引起嚴(yán)重的細(xì)胞毒性。
[0047] 在本發(fā)明中，可將胰島素樣生長因子用作胰島素的替代品。胰島素樣因子的作用 是增強(qiáng)葡萄糖代謝和蛋白質(zhì)代謝以促進(jìn)細(xì)胞生長。優(yōu)選地，本發(fā)明中采用重組IGF-1 (胰島 素樣生長因子-1)。培養(yǎng)基中胰島素樣生長因子的含量優(yōu)選為10-50ng/ml。如果胰島素 樣生長因子的含量小于l〇ng/ml，則將出現(xiàn)細(xì)胞凋亡，而如果胰島素樣生長因子的含量大于 50 μ g/Ι，將引起細(xì)胞毒性并將增加培養(yǎng)基的成本。
[0048] 此外，在本發(fā)明的實(shí)施例中，培養(yǎng)基中使用表皮生長因子（EGF)。EGF可誘導(dǎo)各種 類型細(xì)胞的體內(nèi)增殖并優(yōu)選為重組EGF。培養(yǎng)基中EGF的含量優(yōu)選為10-50ng/mL。如果 培養(yǎng)基中EGF的含量小于10ng/mL，則將沒有特別的效果，而如果培養(yǎng)基中EGF的含量大于 50ng/mL，則將有細(xì)胞毒性。
[0049] 此外，在本發(fā)明中，培養(yǎng)基中使用堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF)。bFGF可誘導(dǎo) 各種類型細(xì)胞的體內(nèi)增殖并優(yōu)選為重組bFGF。培養(yǎng)基中bFGF的含量優(yōu)選為1-lOOng/mL。
[0050] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，可發(fā)現(xiàn)FBS、bFGF和EGF是培養(yǎng)來自所有年齡組的人脂 肪干細(xì)胞的必需因子。特別地，發(fā)現(xiàn)缺乏bFGF對(duì)培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞有重要影響。此外，發(fā)現(xiàn) 隨著細(xì)胞源自的人的年齡減小，細(xì)胞的生長速率增加。
[0051] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，發(fā)現(xiàn)FBS、bFGF和EGF是決定脂肪干細(xì)胞的端粒酶活 性的重要因子。此外，可以看出來自20幾歲的人的細(xì)胞中的端粒酶活性較高，且在不含硒 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞具有低的端粒酶活性。此外，發(fā)現(xiàn)當(dāng)在含硒的培養(yǎng)基中培養(yǎng)來自老 年人的脂肪干細(xì)胞時(shí)，它們可具有類似于源自年輕人的脂肪干細(xì)胞的端粒酶活性。
[0052] 以下，將參照實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將顯而易 見的是，這些實(shí)施例僅是解釋性的目的，而不被理解為限制本發(fā)明的范圍。
[0053] 實(shí)施例1人脂肪纟目織源件間充質(zhì)干細(xì)朐的分離
[0054] 從20幾歲、30幾歲、70幾歲和80幾歲的患者的腹部分離脂肪組織并用PBS洗滌。 細(xì)致切割洗滌后的脂肪組織并用含1型膠原酶（lmg/ml)的DMEM培養(yǎng)基在37°C降解2小時(shí)。 用PBS洗滌經(jīng)膠原酶處理的組織，然后以lOOOrpm離心5分鐘。除去上清液，然后用PBS洗 滌殘留的沉淀并以l〇〇〇rpm離心5分鐘。通過100 μ m過濾網(wǎng)過濾離心后的組織以除去上 清液，然后用PBS洗滌并在含有10 % FBS、2mM NAC (N-乙酰-L-半胱氨酸）和0. 2mM抗壞血 酸的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。
[0055] 然后，用PBS洗滌未貼附的細(xì)胞，并在含有5% FBS、2mM NAC、0. 2mM抗壞血酸、 0.09mM|丐、5ng/ml rEGF、5yg/ml 膜島素、10ng/mL bFGF、74ng/ml 氧化可的松以及 lng/ml 硒的Keratinocyte-SFM培養(yǎng)基（RKCM)中傳代培養(yǎng)，同時(shí)每隔2天更換培養(yǎng)基。細(xì)胞傳代 培養(yǎng)三次之后，分析來自20幾歲、40幾歲和70幾歲的人的脂肪干細(xì)胞的活性。
[0056] 為分析干細(xì)胞的活性，測量了干細(xì)胞的微觀形態(tài)、分化標(biāo)記、端粒酶活性、端粒長 度以及分化能力。
[0057] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離自20幾歲、40幾歲和70幾歲的人的脂肪干細(xì)胞在傳代培養(yǎng)三次之 后具有類似的活性。
[0058] 實(shí)施例2、再牛干細(xì)朐的培養(yǎng)某纟目合物的確定
[0059] 制備不含作為活性成分添加至用于實(shí)施例1中的RKCM培養(yǎng)基的FBS、NAC、抗壞血 酸、鈣、rEGF、5 μ g/ml胰島素、bFGF氫化可的松和硒中之一的培養(yǎng)基。此外，分析來自20幾 歲、30幾歲、70幾歲和80幾歲的患者的脂肪干細(xì)胞在不含每一種活性成分的培養(yǎng)基中的表 型。
[0060] 制備1號(hào)至10號(hào)培養(yǎng)基。1號(hào)培養(yǎng)基為RKCM培養(yǎng)基，而2號(hào)至10號(hào)培養(yǎng)基為不 含RKCM培養(yǎng)基中的每一種活性成分的培養(yǎng)基。下表1中示出了培養(yǎng)基中不含的活性成分。
[0061] 表 1
[0062]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于再生來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)基組合物，所述培養(yǎng)基組合物含有 FBS (胎牛血清）、抗氧化劑、細(xì)胞因子和NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸）。
2. 如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合物，其中所述培養(yǎng)基組合物進(jìn)一步含有胰島素或胰 島素樣生長因子。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基組合物，其中所述培養(yǎng)基組合物進(jìn)一步含有氫化可 的松。
4. 如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合物，其中在所述培養(yǎng)基組合物中的細(xì)胞因子是 EGF (表皮生長因子）和/或bFGF (堿性成纖維細(xì)胞生長因子）。
5. 如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合物，其中所述抗氧化劑選自由硒、抗壞血酸、維生素 E、兒茶素、番茄紅、β-胡蘿卜素、輔酶Q-10、EPA(二十碳五烯酸）和DHA(二十二碳六烯 酸）構(gòu)成的組。
6. 如權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)基組合物，其中所述抗氧化劑是硒。
7. 如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基組合物，其中所述老年人是60-120歲的人。
8. -種再生來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，所述方法包括在如權(quán)利要求1至7中 任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)來自老年人的間充質(zhì)干細(xì)胞。
【文檔編號(hào)】C12N5/02GK104114691SQ201280068567
【公開日】2014年10月22日 申請(qǐng)日期:2012年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月1日
【發(fā)明者】姜成根, 羅廷燦, 樸亨根, 李亢永 申請(qǐng)人:K-干細(xì)胞有限公司