專(zhuān)利名稱(chēng)：一種MnSOD-Hemolin融合蛋白及其結(jié)晶方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及DNA重組技術(shù)和蛋白質(zhì)技術(shù)領(lǐng)域,特別是涉及一種MnSOD-Hemolin融合蛋白及其結(jié)晶方法。
背景技術(shù)：
蛋白結(jié)晶技術(shù)的發(fā)展是本世紀(jì)的重要項(xiàng)目，不僅僅對(duì)研究蛋白尤其是膜蛋白的結(jié)構(gòu)和功能有作用，還在病毒學(xué)中有著一定的應(yīng)用。但是現(xiàn)有的蛋白結(jié)晶技術(shù)，不但要求蛋白具有活性而且必須具有很高的純度，其蛋白的結(jié)晶條件也很難摸索。已有文獻(xiàn)報(bào)道運(yùn)用共結(jié)晶技術(shù)可以幫助某些蛋白的結(jié)晶，且MnSOD的結(jié)晶技術(shù)已經(jīng)很成熟，故可利用MnSOD-Hemolin的共結(jié)晶對(duì)Hemolin結(jié)晶條件進(jìn)行探索。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種MnSOD-Hemolin融合蛋白及其結(jié)晶方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種MnSOD-Hemolin融合蛋白，其氨基酸序列如SEQID NO 2 所示。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種上述MnSOD-Hemolin融合蛋白的結(jié)晶方法，所述方法包括以下步驟
1)Hemolin基因的獲得;
2)重組表達(dá)載體pET-28a-MnS0D-Hemolin的構(gòu)建； 3)重組蛋白的表達(dá)；
4)重組蛋白的初步純化；
5)重組目的蛋白的進(jìn)一步純化；
6)重組目的蛋白的結(jié)晶。優(yōu)選地，其中所述結(jié)晶方法包括以下步驟
1)通過(guò)設(shè)計(jì)引物，以家蠶蠶蛹CDNA為模板擴(kuò)增，獲得Hemolin基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO 1 所示;
2)將步驟I)所得Hemolin基因連接到ρΕΤ-28&-#/ 5 9載體中，構(gòu)建重組表達(dá)載體成rX-1^rMnSOD-Hemo I in ；
3)將步驟2)所得重組表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌BL21中，誘導(dǎo)表達(dá)獲得大量重組蛋白；
4)將步驟3)所得重組蛋白與鎳離子親和層析柱結(jié)合，然后用20mM/L的咪唑洗雜蛋白，200mM/L的咪唑洗脫重組目的蛋白；
5)將步驟4)所得重組目的蛋白濃縮后，利用superdex75進(jìn)一步分離純化，得到較純的重組目的蛋白；
6)收集步驟5)中的第一個(gè)峰的所有溶液，并濃縮，將濃縮好的蛋白用于點(diǎn)晶。優(yōu)選地，其中所述步驟I)中擴(kuò)增方法為PCR擴(kuò)增方法。
優(yōu)選地，其中所述步驟3)中，將步驟2)所得重組表達(dá)載體m-2Sa-MnSOD-Hemolin轉(zhuǎn)化至大腸桿菌疋co7iBL21 (DE3)感受態(tài)細(xì)胞中，獲得重組基因工程菌ρΕΤ-28α-#/ 5 9-汝 o/i/ ，將該重組基因工程菌成IHMnSOD-Hemo I in在在含50mg/mL氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中于37°C，220 rpm振蕩培養(yǎng)至0D600=0. 5時(shí)，加終濃度為ImM的IPTG，37°C誘導(dǎo)培養(yǎng)4h，獲得大量重組目的蛋白。優(yōu)選地，其中所述步驟4)中，將步驟3)所得基因重組工程菌成IHMnSOD-Hemo I in擴(kuò)大培養(yǎng)，之后于4°C下6000rpm離心30min，棄去培養(yǎng)基，沉淀即為菌體，然后超聲破碎，于4°C下12000rpm離心30min，分為沉淀和上清，將含有目的蛋白的上清溶液過(guò)O. 45 μ m纖維素膜過(guò)濾后，與鎳離子親和層析柱結(jié)合，然后用20mM/L的咪唑溶液洗雜蛋白，200mM/L的咪唑溶液洗脫目的蛋白。優(yōu)選地，其中所述步驟4)中，將步驟3)所得重組目的蛋白通過(guò)0.45 μ m纖維素膜過(guò)濾后，與鎳離子親和層析柱結(jié)合，然后用20mM/L的咪唑溶液洗雜蛋白，200mM/L的咪唑溶液洗脫目的蛋白。優(yōu)選地，其中所述步驟5)中，將步驟4)所得目的蛋白經(jīng)過(guò)50kD的超濾管濃縮，利用Superdex 75進(jìn)一步分離純化,得到較純的目的蛋白。優(yōu)選地，其中所述步驟6)中點(diǎn)晶具體包括
(1)對(duì)24孔晶體培養(yǎng)板上的小孔進(jìn)行編號(hào)，每一個(gè)編號(hào)小孔對(duì)應(yīng)一個(gè)的蛋白結(jié)晶試劑盒篩選的條件，每個(gè)小孔中依次加入200 μ L不同試劑盒中不同條件的結(jié)晶緩沖液，參考MnSOD-Hemolin的蛋白性質(zhì)預(yù)測(cè)信息，共使用了 500個(gè)蛋白結(jié)晶的條件；
(2)用結(jié)晶專(zhuān)用移液器吸取IUL純化后的目的蛋白樣品，然后滴在硅化蓋玻片上，每個(gè)蓋玻片上點(diǎn)3個(gè)不同濃度的目的蛋白樣品；同時(shí)要在每個(gè)點(diǎn)好的目的蛋白樣品中滴入Iμ L的結(jié)晶緩沖液，將其混勻；` (3)將上述滴有目的蛋白樣品和結(jié)晶緩沖液的蓋玻片翻轉(zhuǎn)垂直蓋于24晶體孔培養(yǎng)板的相應(yīng)小孔上；等加完所用的目的蛋白樣品和結(jié)晶緩沖液后，蓋上24孔板的板蓋；并將上述蛋白晶體培養(yǎng)板放于16°C的晶體培養(yǎng)室中培養(yǎng)。本發(fā)明具有以下有益效果
本發(fā)明所提供的結(jié)晶方法流程簡(jiǎn)單，且獲得的晶體分辨率高，為研究未知蛋白或者結(jié)晶比較困難的蛋白的三維結(jié)構(gòu)和功能提供重要的條件。


圖1是本發(fā)明Hemolin基因的PCR擴(kuò)增回收結(jié)果圖；M DNA Ladder Mix ；1 PCR擴(kuò)增條帶；
圖2是本發(fā)明重組表達(dá)載體m-UnSOD-Hemolin的PCR擴(kuò)增及雙酶切圖；M DNALadder Mix ；1 =Hemolin 基因片段的 PCR 擴(kuò)增；2、經(jīng) BamH I ,Xho I 雙酶切；
圖3是本發(fā)明融合蛋白MnSOD-Hemolin的表達(dá)圖；M :低分子質(zhì)量蛋白標(biāo)準(zhǔn)；1:未誘導(dǎo)的 MnSOD-Hemolin ；2 :誘導(dǎo)的 MnSOD-Hemolin ；
圖4是本發(fā)明融合蛋白MnSOD-Hemolin的初步純化圖。M :低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白；1 :離心后的上清溶液；2 :未與Ni2+-NTA柱結(jié)合的蛋白；4-9 :分別用30 mM/L、50 mM/LUOO mM/L、150 mM/L,200 mM/L,500 mM/L 咪唑溶液洗脫；圖5是本發(fā)明的MnSOD-Hemolin融合蛋白用Superdex 75色譜純化的曲線 圖6A是本發(fā)明的MnSOD-Hemolin融合蛋白用Superdex 75色譜純化的出峰后第一個(gè)峰的蛋白樣品鑒定圖；M :低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白；1 =Ni2+-NTA柱純化后的蛋白；數(shù)字對(duì)應(yīng)Superdex 75色譜收集峰號(hào)；
圖6B是本發(fā)明的MnSOD-Hemolin融合蛋白用Superdex 75色譜純化的出峰后第二個(gè)峰的蛋白樣品鑒定圖；M:低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白；1 =Ni2+-NTA柱純化后的蛋白；數(shù)字對(duì)應(yīng)Superdex 75色譜收集峰號(hào)；
圖7A是本發(fā)明5mg/mL的蛋白在PEG/Ion 2 Screen HR2-098的46號(hào)條件下晶體初探的晶體電鏡 圖7B是本發(fā)明3mg/mL的蛋白在Index HR2-144的72號(hào)條件下晶體初探的晶體電鏡
圖7C是本發(fā)明5mg/mL的蛋白在Index HR2-144的72號(hào)條件下晶體初探的晶體電鏡圖。
具體實(shí)施例方式應(yīng)該指出，以下具體說(shuō)明都是事例性的，旨在對(duì)本發(fā)明提供進(jìn)一步說(shuō)明，除非另有說(shuō)明，本文中使用的所有科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域人員通常理解的相同含義。下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例1 :Hemolin目的基因的猶得
擴(kuò)增Hemolin基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，引物設(shè)計(jì)如下
F: 5’ -ATCGGATCCATGCAGCCCGTTAATTCCGG-3> (下劃線為 BatnH I 位點(diǎn))
R: 5，-CTGCTCGAGTTAAGCGACTTGAAG-3，(下劃線為通ο I 位點(diǎn))
實(shí)施例2 :重組表達(dá)載體pET-28a-#/ 5a9-"￡ o7i/ 的構(gòu)建
(I)以家蠶蠶蛹cDNA(浙江中奇生物藥業(yè)股份有限公司)為模板，用所設(shè)計(jì)引物F和R擴(kuò)增特異性片段，具體程序?yàn)?4°C預(yù)變性4min，94°C變性45s，56°C退火45s，72°C延伸60s，循環(huán)30次；最后72°C延伸4min。在50 μ L離心管中，加入下列組分
ddH20 25 μ L 2mM dNTPs 7. 5 μ L TAQ Buffer 5 μ L cDNA 5μ L F 2. 5μ L R 2. 5 μ L TAQ Polymerase (2U/ μ L)_2. 5 μ L
50 μ L
各組分混合均勻后，放入PCR儀中，按上述反應(yīng)參數(shù)設(shè)計(jì)30個(gè)循環(huán)。待反應(yīng)結(jié)束后，電泳鑒定擴(kuò)增片段，同時(shí)割膠回收目的片段。(2)以步驟⑴中回收產(chǎn)物為模板，F(xiàn)和R第2次擴(kuò)增目的片段，具體程序同上。最后回收的片段(如圖1)。(3)將第2次PCR割膠回收產(chǎn)物和載體pET-28a-#/ 5a9(張小宿，楊波，王小飛等.MnSOD融合表達(dá)家蠶核型多角體病毒PlO蛋白并進(jìn)行共結(jié)晶條件初篩
. [2012-11-26].中國(guó)科技論文在線，http://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201211-468),用 I ( Fermentas 公司)和ZSo I ( Fermentas 公司)同時(shí)進(jìn)行雙酶切，將酶切回收的產(chǎn)物用ligation high( Fermentas公司)進(jìn)行室溫連接30min,并轉(zhuǎn)化到疋coli TGl感受態(tài)細(xì)胞(購(gòu)自Invitrogen公司)中。挑取單菌落搖菌培養(yǎng)后抽提質(zhì)粒，重組好的質(zhì)粒用PCR和雙酶切進(jìn)行鑒定(見(jiàn)圖2)，將鑒定好的陽(yáng)性克隆送華大基因測(cè)序，其結(jié)果與預(yù)期相同，說(shuō)明克隆成功。實(shí)施例3 :重組蛋白的表達(dá)
將實(shí)施例2鑒定成功的重組表達(dá)載體mUMnSOD-Hemo I in轉(zhuǎn)化至Ε· co7iBL21 (DE3)感受態(tài)細(xì)胞(購(gòu)自Invitrogen公司)中，獲得重組基因工程菌成IHMnSOD-Hemo I in，將該重組基因工程菌成IHMnSOD-Hemo I in在含50 mg/mL氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中于37°C，220 rpm振蕩培養(yǎng)至0D600 ^ O. 5時(shí)，加入IPTG(購(gòu)自Promega公司，終濃度O.1 mM), 37°C誘導(dǎo)培養(yǎng)4h，獲得大量重組蛋白。然后取1. 5mL菌液于12000rpm離心后，將沉淀加入50 μ LI XPBS重懸，然后取40 μ L，加入IOyL 5 X上樣緩沖液100°C煮沸10 min, 12000rpm離心5 min，上清用12%SDS_PAGE鑒定，結(jié)果如圖3所示，在72 kDa處，2號(hào)泳道的蛋白比I號(hào)泳道明顯濃度多，表明目的蛋白MnSOD-Hemolin已誘導(dǎo)表達(dá)。實(shí)施例4 :重組蛋白的初步純化
將實(shí)施例3所得基因重組工程菌mUMnSOD-Hemo I in擴(kuò)大培養(yǎng)，即，將菌種與培養(yǎng)基按照1:100的體積比進(jìn)行搖菌培養(yǎng)，培養(yǎng)10瓶，每瓶300mL的菌體，之后于4°C下6000rpm離心30min,棄去培養(yǎng)基,沉淀即為菌體，然后超聲破碎，于4°C下12000rpm離心30min,分為沉淀和上清，將含有目的蛋白的上清溶液或?qū)嵤├?所得重組蛋白過(guò)O. 45 μ m纖維素膜過(guò)濾后，與鎳離子親和層 析柱結(jié)合，用不同濃度的咪唑溶液進(jìn)行洗滌，分別取不同濃度的咪唑洗脫液(30 mM/L,50 mM/LUOO mM/L、150 mM/L,200 mM/L,500 mM/L 的咪唑溶液)制備蛋白樣品(分別取洗脫液40 μ L，5*的Loading Buffer 10 μ L，混合后，100°C金屬浴上煮10min)，走12%SDS-PAGE。結(jié)果如圖4所示，在第8泳道時(shí)，目的蛋白濃度較高，雜蛋白濃度較低，所以經(jīng)上述不同濃度咪唑溶液洗滌摸索后，可以用20mM/L的咪唑溶液洗脫雜蛋白，用200mM/L的咪唑溶液洗脫重組目的蛋白。實(shí)施例5 :重組目的蛋白的進(jìn)一步純化
將實(shí)施例4純化后的重組目的蛋白經(jīng)過(guò)50kD的超濾管濃縮，利用Superdex 75分離。主要步驟為將凝膠過(guò)濾層析柱Superdex 75(柱體積為120 mL)接入AKTA explorer 10。平衡用Tris · HCl溶液平衡凝膠過(guò)濾層析柱，流速為1. 5 mL/min,約平衡1. 5個(gè)柱體積(180 mL)，至UV 280 nm監(jiān)測(cè)曲線為水平。上樣在上樣環(huán)中注入2 mL的DEAE離子交換層析分離后的濃縮樣品。洗脫用Tris · HCl溶液洗脫，流速為1. 5 mL/min。收集用2 mLEP管收集洗脫下的蛋白峰，1. 5 mL/管。Superdex 200洗脫后的峰如圖5所示，選取主要的峰用SDS-PAGE檢測(cè)(圖6A、圖6B)，結(jié)果顯示第一個(gè)峰主要是重組目的蛋白，且比較純，可以看出Superdex 75分離純化的效果較好。
實(shí)施例6 融合蛋白的點(diǎn)晶
將實(shí)施例5中純化后的第一個(gè)峰濃縮后，利用BCA定量法定量后蛋白濃度為5 mg/mL,用于點(diǎn)晶。(I)對(duì)24孔晶體培養(yǎng)板上的小孔進(jìn)行編號(hào)，每一個(gè)編號(hào)小孔對(duì)應(yīng)一個(gè)的蛋白結(jié)晶試劑盒(Molecular Dimension公司)篩選的條件,每個(gè)小孔中依次加入200 μ L不同試劑盒中不同條件的結(jié)晶緩沖液，參考MnSOD的結(jié)晶條件以及MnSOD-Hemolin的預(yù)測(cè)所得到的蛋白性質(zhì)共使用了 500個(gè)蛋白結(jié)晶的條件(本實(shí)驗(yàn)室所具有的全部點(diǎn)晶試劑盒)；
(2)用結(jié)晶專(zhuān)用移液器吸取Iμ L純化后的蛋白樣品，然后滴在硅化蓋玻片上，每個(gè)蓋玻片上點(diǎn)3個(gè)不同濃度的蛋白樣品；同時(shí)要在每個(gè)點(diǎn)好的蛋白樣品中滴入I UL的結(jié)晶緩沖液，將其混勻；
(3)將上述滴有蛋白樣品和結(jié)晶緩沖液的蓋玻片翻轉(zhuǎn)垂直蓋于24晶體孔培養(yǎng)板的相應(yīng)小孔上；等加完所用的蛋白樣品和結(jié)晶緩沖液后，蓋上24孔板的板蓋；并將上述蛋白晶體培養(yǎng)板放于16°C的晶體培養(yǎng)室中培養(yǎng)。為了探索MnSOD蛋白晶體生長(zhǎng)的狀況，我們一天早晚各觀察晶體生長(zhǎng)I次( 每次都利用顯微鏡)，并記錄晶體的生長(zhǎng)情況，晶體的生長(zhǎng)結(jié)果如圖7A、圖7B、圖7C所示，可以在從圖中看出規(guī)則且不同的蛋白晶體。以上所述，僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)中的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明的核心技術(shù)特征的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些潤(rùn)飾和改進(jìn)也應(yīng)屬于本發(fā)明的專(zhuān)利保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種MnSOD-Hemolin融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。
2.—種權(quán)利要求1所述MnSOD-HemoI in融合蛋白的結(jié)晶方法,其特征在于，所述方法包括以下步驟 1)Hemolin基因的獲得; 2)重組表達(dá)載體x&mMnSOD-HemoI in的構(gòu)建； 3)重組蛋白的表達(dá)； 4)重組蛋白的初步純化； 5)重組目的蛋白的進(jìn)一步純化； 6)重組目的蛋白的結(jié)晶。
3.如權(quán)利要求2所述的結(jié)晶方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟 1)通過(guò)設(shè)計(jì)引物，以家蠶蠶蛹cDNA為模板擴(kuò)增，獲得Hemolin基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO 1 所示; 2)將步驟I)所得Hemolin基因連接到ρΕΤ-28&-#/ 5 9載體中，構(gòu)建重組表達(dá)載體成rX-1^rMnSOD-Hemo I in ； 3)將步驟2)所得重組表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌BL21中，誘導(dǎo)表達(dá)獲得大量重組蛋白； 4)將步驟3)所得重組蛋白與鎳離子親和層析柱結(jié)合，然后用20mM/L的咪唑洗雜蛋白，200mM/L的咪唑洗脫重組目的蛋白； 5)將步驟4)所得重組目的蛋白濃縮后，利用superdex75進(jìn)一步分離純化，得到較純的重組目的蛋白； 6)收集步驟5)中的第一個(gè)峰的所有溶液，并濃縮，將濃縮好的蛋白用于點(diǎn)晶。
4.如權(quán)利要求2所述的結(jié)晶方法，其特征在于，所述步驟I)中擴(kuò)增方法為PCR擴(kuò)增方法。
5.如權(quán)利要求2所述的結(jié)晶方法，其特征在于，所述步驟3)中，將步驟2)所得重組表達(dá)載體pET-28a-#/ 5a9-"￡ o7i/ 轉(zhuǎn)化至大腸桿菌疋coli BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中，獲得重組基因工程菌ρΕΤ-28α-#/ 5 9-汝 o7i/ ，將該重組基因工程菌成IHMnSOD-Hemo I in在含50 mg/mL氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中于37°C，220 rpm振蕩培養(yǎng)至0D600=0. 5時(shí)，加終濃度為ImM的IPTG，37°C誘導(dǎo)培養(yǎng)4h，獲得大量重組目的蛋白。
6.如權(quán)利要求2所述的結(jié)晶方法，其特征在于，所述步驟4)中，將步驟3)所得基因重組工程菌vH-MnSOD-Hemo I in擴(kuò)大培養(yǎng)，之后于4°C下6000rpm離心30min，棄去培養(yǎng)基，沉淀即為菌體，然后超聲破碎，于4°C下12000rpm離心30min，分為沉淀和上清，將含有目的蛋白的上清溶液過(guò)O. 45 μ m纖維素膜過(guò)濾后，與鎳離子親和層析柱結(jié)合，然后用20mM/L的咪唑溶液洗雜蛋白，200mM/L的咪唑溶液洗脫目的蛋白。
7.如權(quán)利要求2所述的結(jié)晶方法，其特征在于，所述步驟4)中，將步驟3)所得重組目的蛋白通過(guò)O. 45 μ m纖維素膜過(guò)濾后，與鎳離子親和層析柱結(jié)合，然后用20mM/L的咪唑溶液洗雜蛋白，200mM/L的咪唑溶液洗脫目的蛋白。
8.如權(quán)利要求2所述的結(jié)晶方法，其特征在于，所述步驟5)中，將步驟4)所得目的蛋白經(jīng)過(guò)50kD的超濾管濃縮,利用Superdex 75進(jìn)一步分離純化,得到較純的目的蛋白。
9.如權(quán)利要求2所述的結(jié)晶方法，其特征在于，所述步驟6)中點(diǎn)晶具體包括(1)對(duì)24孔晶體培養(yǎng)板上的小孔進(jìn)行編號(hào)，每一個(gè)編號(hào)小孔對(duì)應(yīng)一個(gè)的蛋白結(jié)晶試劑盒篩選的條件，每個(gè)小孔中依次加入200 μ L不同試劑盒中不同條件的結(jié)晶緩沖液，參考MnSOD-Hemolin的蛋白性質(zhì)預(yù)測(cè)信息，共使用了 500個(gè)蛋白結(jié)晶的條件； (2)用結(jié)晶專(zhuān)用移液器吸取IUL純化后的目的蛋白樣品，然后滴在硅化蓋玻片上，每個(gè)蓋玻片上點(diǎn)3個(gè)不同濃度的目的蛋白樣品；同時(shí)要在每個(gè)點(diǎn)好的目的蛋白樣品中滴入Iμ L的結(jié)晶緩沖液，將其混勻； (3)將上述滴有目的蛋白樣品和結(jié)晶緩沖液的蓋玻片翻轉(zhuǎn)垂直蓋于24晶體孔培養(yǎng)板的相應(yīng)小孔上；·等加完所用的目的蛋白樣品和結(jié)晶緩沖液后，蓋上24孔板的板蓋；并將上述蛋白晶體培養(yǎng)板放于16°C的晶體培養(yǎng)室中培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種MnSOD-Hemolin融合蛋白及其結(jié)晶方法，屬于DNA重組技術(shù)和蛋白純化技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過(guò)引物設(shè)計(jì)，構(gòu)建重組表達(dá)載體pET-28a-MnSOD-Hemolin，誘導(dǎo)表達(dá)得到大量重組目的蛋白，然后20mM/L的咪唑溶液洗雜蛋白，200mM/L的咪唑溶液洗脫重組目的蛋白；將得到的重組目的蛋白在經(jīng)過(guò)superdex75分離，可以得到較純的重組目的蛋白，再將該重組目的蛋白進(jìn)行點(diǎn)晶條件的探索，液滴中可以看到不規(guī)則結(jié)構(gòu)形成。本發(fā)明提供的方法，流程簡(jiǎn)單，對(duì)蛋白結(jié)晶的一種全新的探索方法，具有重要意義。
文檔編號(hào)C12N15/70GK103060280SQ20131000145
公開(kāi)日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2013年1月4日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月4日
發(fā)明者張耀洲, 杜瑤瑤, 劉玲玲, 王鑒, 陳劍清, 舒特俊 申請(qǐng)人:天津耀宇生物技術(shù)有限公司