專利名稱：一種從劍麻榨汁提取蛋白酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)提取純化技術(shù)，具體說是一種從劍麻榨汁提取蛋白酶的方法。
背景技術(shù)：
劍麻蛋白酶是一種疏基蛋白酶，酶活力聞，溶解性好，熱穩(wěn)定性聞，酶制劑成品為白色或乳黃色粉末，在低溫冷藏條件下，穩(wěn)定性好，一年內(nèi)酶活力降低少于10%，廣泛用于食品、醫(yī)藥、化妝品、紡織、飼料、皮革等行業(yè)。蛋白質(zhì)的提取純化方法主要有鹽析、有機溶劑沉淀、等電點沉淀、離子交換層析、單寧沉淀、親和層析、超濾濃縮等方法。但是，單獨使用上述方法中的其中一種技術(shù)，提取純化劍麻蛋白酶的效果并不好。本發(fā)明首先將去除沉淀物的劍麻榨汁超濾濃縮，然后再加入硫酸銨來沉淀其中的劍麻蛋白酶，一方面可以在超濾過程中除去一部分小分子的蛋白質(zhì)，另一方面則可大量減少硫酸 銨的用量，降低了生產(chǎn)成本，也減少了環(huán)境污染，劍麻蛋白酶成品的活力高、質(zhì)量好。我國劍麻主產(chǎn)區(qū)在廣西、廣東、和海南等地區(qū)，目前廣西的劍麻種植面積最大。劍麻在加工抽取劍麻纖維之后，有大量的劍麻渣，目前還未得到開發(fā)利用。豐富的劍麻原料資源，為本發(fā)明的產(chǎn)業(yè)化提供了堅實的原料保障。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明首先將去除沉淀物的劍麻榨汁超濾濃縮，然后再加入硫酸銨來沉淀其中的劍麻蛋白酶，可以在超濾時除去分子量小的蛋白質(zhì)，還可以大量減少硫酸銨的用量，降低了成本，減少了環(huán)境污染，劍麻蛋白酶成品的活力高、質(zhì)量好。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn):一種從劍麻榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，包括如下步驟:(I)榨汁，將新鮮劍麻渣壓榨，得到劍麻榨汁；(2)過濾，將劍麻榨汁過濾，去掉粗渣，得到去除粗渣的濾液；(3)離心，將去粗渣的粗酶液離心，得到透明粗酶液；(4)超濾濃縮，將透明粗酶液超濾濃縮，得到濃縮酶液；(5)硫酸銨沉淀，在濃縮酶液中加入硫酸銨，使酶鹽析、沉淀得到酶沉淀物；(6)離心，將酶沉淀物進行離心收取膏狀的酶膏；(7)干燥和粉碎，將酶膏干燥，粉碎，得粉狀的蛋白酶成品。優(yōu)選的是，所述的新鮮劍麻渣為去纖維后的新鮮劍麻渣。優(yōu)選的是，所述步驟(2)的過濾為采用200目濾布的過濾。優(yōu)選的是，所述步驟(3)的離心是用高速碟片離心機離心，轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘 8000轉(zhuǎn)/分鐘。優(yōu)選的是，所述步驟(4)的超濾濃縮，使用6000 20000道爾頓的超濾膜，工作壓力為正0.03MPa 0.1MPa，溫度為15°C 30°C，濃縮比為10倍。
優(yōu)選的是，所述步驟(5)的硫酸銨濃度為20 % 50 %。優(yōu)選的是，所述步驟￠)的離心，轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分鐘 7000轉(zhuǎn)/分鐘。優(yōu)選的是，所述步驟(7)的干燥為冷凍干燥，溫度為-10°C _50°C。本發(fā)明的有益效果為:能耗少、成本底，工藝簡單，回收率高，節(jié)能環(huán)保。提取的劍麻蛋白酶成品的純度高，質(zhì)量好。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式并不局限于實施例表示的范圍。實施例1將新鮮劍麻渣進行壓榨，得到蛋白酶活力約為3000活力單位/毫升的劍麻榨汁；用200目濾布將劍麻榨汁過濾，去除其中的粗雜質(zhì)，得到去除粗渣的濾液；用碟片離心機將濾液離心，去除其中的顆粒細微的雜質(zhì)，得到透明粗酶液；超濾濃縮，使用10000道爾頓的超濾膜，在工作壓力為0.05MPa，溫度為15°C條件下，將透明粗酶液超濾濃縮至原體積的10%，得到蛋白酶活力為22000活力單位/毫升的濃縮酶液；在濃縮酶液中加硫酸銨至終濃度50%，使酶鹽析、沉淀；用無孔三 足離心機離心收集膏狀的酶膏；將酶膏冷凍干燥，然后將所得的干燥酶塊粉碎，得粉狀的蛋白酶成品，酶活力達到151萬單位/克。實施例2將新鮮劍麻渣進行壓榨，得到蛋白酶活力約為3500活力單位/毫升的劍麻榨汁；用200目濾布將劍麻榨汁過濾，去除其中的粗雜質(zhì)，得到去除粗渣的濾液；用碟片離心機將濾液離心，去除其中的顆粒細微的雜質(zhì)，得到透明粗酶液；超濾濃縮，使用20000道爾頓的超濾膜，在工作壓力為0.08MPa，溫度為17°C條件下，將透明粗酶液超濾濃縮至原體積的8%，得到蛋白酶活力為31000活力單位/毫升的濃縮酶液；在濃縮酶液中加硫酸銨至終濃度20%，用碟片離心機離心，去除沉淀(雜質(zhì))；在其酶液中補加硫酸銨至終濃度46%，使酶鹽析、沉淀；用無孔三足離心機離心收集膏狀的酶膏；將酶膏冷凍干燥，然后將所得的干燥酶塊粉碎，得粉狀的蛋白酶成品，酶活力達到183萬單位/克。實施例3將新鮮劍麻渣進行壓榨，得到蛋白酶活力約為3100活力單位/毫升的劍麻榨汁；用200目濾布將劍麻榨汁過濾，去除其中的粗雜質(zhì)，得到去除粗渣的濾液；用碟片離心機將濾液離心，去除其中的顆粒細微的雜質(zhì)，得到透明粗酶液；超濾濃縮，使用20000道爾頓的超濾膜，在互作壓力為0.lOMPa，溫度為22°C條件下，將透明粗酶液超濾濃縮至原體積的9%，得到蛋白酶活力為26000活力單位/毫升的濃縮酶液；在濃縮酶液中加硫酸銨至終濃度25%，用碟片離心機離心，去除沉淀(雜質(zhì))；在其酶液中補加硫酸銨至終濃度45%，使酶鹽析、沉淀；用無孔三足離心機離心收集膏狀的酶膏；將酶膏冷凍干燥，然后將所得的干燥酶塊粉碎，得粉狀的蛋白酶成品，酶活力達到168萬單位/克。盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與 描述的實施例。
權(quán)利要求
1.一種從劍麻榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)榨汁，將新鮮劍麻渣壓榨，得到劍麻榨汁； (2)過濾，將劍麻榨汁過濾，去掉粗渣，得到去除粗渣的濾液； (3)離心，將去粗渣的粗酶液離心，得到透明粗酶液； (4)超濾濃縮，將透明粗酶液超濾濃縮，得到濃縮酶液； (5)硫酸銨沉淀，在濃縮酶液中加入硫酸銨，使酶鹽析、沉淀得到酶沉淀物； (6)離心，將酶沉淀物進行離心收取膏狀的酶膏； (7)干燥和粉碎，將酶膏干燥，粉碎，得粉狀的蛋白酶成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從劍麻榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述的新鮮劍麻渣為去纖維后的新鮮劍麻渣。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從劍麻榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(2)的過濾為采用200目濾布的過濾。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從劍麻榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(3)的離心是用高速碟片離心機離心 ，轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘 8000轉(zhuǎn)/分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從劍麻 榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(4)的超濾濃縮，使用6000 20000道爾頓的超濾膜，工作壓力為正0.03MPa 0.1MPaJ^度為15°C 30°C，濃縮比為10倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從劍麻榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(5)的硫酸銨濃度為20% 50%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從劍麻榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(6)的離心，轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分鐘 7000轉(zhuǎn)/分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從劍麻榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(7)的干燥為冷凍干燥，溫度為-10°C -50°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從劍麻渣榨汁提取劍麻蛋白酶的方法，它包括如下步驟榨汁，將新鮮劍麻渣壓榨，得到劍麻榨汁；過濾，將劍麻榨汁過濾，去掉粗渣，得到去除粗渣的濾液；離心，將去粗渣的粗酶液離心，得到透明粗酶液；超濾濃縮，將透明粗酶液超濾濃縮，得到濃縮酶液；硫酸銨沉淀，在濃縮酶液中加入硫酸銨，使酶鹽析、沉淀得到酶沉淀物；離心，將酶沉淀物進行離心收取膏狀的酶膏；干燥和粉碎，將酶膏干燥，粉碎，得粉狀的蛋白酶成品。用本發(fā)明所提取的劍麻蛋白酶品質(zhì)好、純度高。本發(fā)明具有工藝簡單，生產(chǎn)成本低，回收率高，節(jié)能環(huán)保等優(yōu)點。
文檔編號C12N9/50GK103088006SQ20131000778
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月9日
發(fā)明者彭勝良 申請人:廣西南劍生物科技有限公司