專利名稱：一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，具體涉及ー種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)：
路鄧葡萄球菌，由Freney等于1988年首次報(bào)道。近年來，路鄧葡萄球菌引起的侵襲性感染的報(bào)道日趨增多。它作為具有顯著臨床微生物學(xué)特征的致病菌引起學(xué)者廣泛關(guān)注，更有學(xué)者將其稱為Surreptitious Staphylococcus或“披著羊皮的狼”。路鄧葡萄球菌與多種臨床疾病密切相關(guān)，包括膿腫、心內(nèi)膜炎、腹膜炎、泌尿道感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、骨關(guān)節(jié)感染等。
由于路鄧葡萄球菌為人體皮膚的正常菌群，采血操作消毒不徹底的話，路鄧葡萄球菌很容易混入血液中，造成血液污染而傳播疾病。故而，高效、可靠的路鄧葡萄球菌培養(yǎng)是用于研究、鑒定該菌種的基礎(chǔ)。由于既往路鄧葡萄球菌常被作為培養(yǎng)污染菌，因此目前尚缺乏用于路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供ー種對(duì)路鄧葡萄球菌分離率高的選擇性培養(yǎng)基。本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有
麥芽浸粉15g ；
雞蛋蛋白液150ml ；
氯化鈉5g ；
枸櫞酸鎂0. 5g ；
瓊脂15g ；
假細(xì)錐甲素8 12mg;
6-0-こ酰黃S 苷0. 03g ；
磷酸ニ氫鉀0. 2g ；
蒸餾水加至1000ml。優(yōu)化方案中，每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅6mg。優(yōu)化方案中，每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸0. lg。優(yōu)化方案中，每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的山藥水煮液200 300ml。最優(yōu)化方案中，姆IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅6mg ；L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的山藥水煮液20(T300ml。
一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟
(1)取山藥加水煮沸I小時(shí)，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得山藥水煮液；
(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；6-0_こ酰黃豆苷；磷酸ニ氫鉀；L_半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得山藥水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。其中所述的麥芽浸粉、雞蛋蛋白液提供碳氮源和能量；枸櫞酸鎂和磷酸ニ氫鉀為緩沖劑，并可以抑制雜菌生長(zhǎng)山-半胱氨酸屬氨基酸類，為營(yíng)養(yǎng)劑；瓊脂是選擇性培養(yǎng)基的凝固劑；假細(xì)錐甲素對(duì)于金葡菌具有特異的抑菌作用，對(duì)于路鄧葡萄球菌無效；雞蛋蛋白液含有各種多肽、脂肪、生長(zhǎng)因子、激素等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)路鄧葡萄球菌的繁殖和生長(zhǎng)都是很重要的因素，此外雞蛋蛋白液還具有維持選擇性培養(yǎng)基PH值恒定的作用。6-0-こ酰黃豆苷為針對(duì)路鄧葡萄球菌的特異性營(yíng)養(yǎng)劑，可以特異性的増加路鄧葡萄球菌繁殖速度。
銅離子屬于重金屬離子，在6mg/L這個(gè)濃度劑量下，銅離子沉積于金葡菌內(nèi)部，導(dǎo)致胞壁消失或變薄，核糖體聚集成團(tuán)塊，最終導(dǎo)致細(xì)菌變形及破裂，呈現(xiàn)重金屬源性損傷，而路鄧葡萄球菌對(duì)重金屬的運(yùn)輸能力和滲透能力低于金葡菌，也即重金屬的抗性較高，即使6mg/L這個(gè)濃度也可以耐受，故而加入硫酸銅可以有效地抑制金葡菌生長(zhǎng)。山藥為為薯蕷科植物薯菌Dioscorea opposita Thunb.的干燥根莖,含有蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、還元糖、氨基酸等多種成分，可以提供能量代謝、細(xì)胞發(fā)育、新陳代謝因子，尤其是山藥塊莖含薯蕷皂甙元(diosgenin)和多酚氧化酶，有助于促進(jìn)路鄧葡萄球菌生長(zhǎng)，尤其是重金屬環(huán)境下菌落的生長(zhǎng)。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、路鄧葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)際情況，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。實(shí)施例1，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素8mg ;6_0_こ酰黃豆苷0. 03g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;蒸餾水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；6-0_こ酰黃豆苷；磷酸ニ氫鉀溶于蒸餾水中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。實(shí)施例2，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素12mg ;6_0_こ酰黃豆苷0. 03g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅6mg ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；6-0_こ酰黃豆苷；磷酸ニ氫鉀；硫酸銅溶于蒸餾水中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min,滅菌后分裝。實(shí)施例3，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素IOmg ;6_0_こ酰黃豆苷0. 03g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ；L-半胱氨酸0.1g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；6-0_こ酰黃豆苷；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸溶于蒸餾水中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min，滅菌后分裝。實(shí)施例4，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素9mg ;6_0_こ酰黃豆苷0. 03g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;濃度200g/L的山藥水煮液200ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法
(1)取山藥加水煮沸I小時(shí)，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得山藥水煮液；
(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；6-0_こ酰黃豆苷；磷酸ニ氫鉀；溶于步驟I所得山藥水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。實(shí)施例5，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素Ilmg ;6_0_こ酰黃豆苷0. 03g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅6mg ;L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的山藥水煮液300ml ;蒸懼水加至IOOOmlo制備方法為
(1)取山藥加水煮沸I小時(shí)，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得山藥水煮液；
(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；6-0_こ酰黃豆苷；磷酸ニ氫鉀；L_半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得山藥水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。所述的山藥水煮液濃度為200g/L，指的是每升山藥水煮液中含有生藥200g。本發(fā)明所得路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基具有檢出可靠、路鄧葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)，為臨床資料充分證明，有關(guān)資料如下。I對(duì)象與方法。1.1選擇性培養(yǎng)基制備共設(shè)3組，分別為對(duì)照組、實(shí)施例1方案組、實(shí)施例5方案組。對(duì)照組為葡萄球菌選擇性瓊脂110 (CHAPMAN瓊脂)，配方為胰酪蛋白胨、酵母浸粉、明膠、D-甘露醇、乳糖、氯化鈉、磷酸氫ニ鉀、瓊脂。實(shí)施例1方案組、實(shí)施例5方案組的配方和制備方法見實(shí)施例。1. 2方法將40份經(jīng)由PCR確定路鄧葡萄球菌陽性的標(biāo)本中混入金色葡萄球菌，接種于培養(yǎng)基上，在37°C下孵育24小吋。1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS 13. 0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Pく 0. 05表示有顯著性意義。2結(jié)果在40份接種標(biāo)本中，細(xì)菌培養(yǎng)分離并鑒定為路鄧葡萄球菌的，實(shí)施例1方案組為32例，實(shí)施例5方案組為36例。對(duì)照組CHAPMAN瓊脂培養(yǎng)基菌落經(jīng)鑒定最后被證實(shí)均為金葡菌，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，本發(fā)明各實(shí)施例組與對(duì)照組比較具有明顯差異(P〈0. 001)。結(jié)果表明，本發(fā)明實(shí)施例路鄧葡萄球菌分離率明顯高于現(xiàn)有的選擇性培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有 麥芽浸粉15g ； 雞蛋蛋白液150ml ； 氯化鈉5g ； 枸櫞酸鎂O. 5g ； 瓊脂15g ； 假細(xì)錐甲素8 12mg; 6-0-乙酰黃丑苷O. 03g ； 磷酸二氫鉀O. 2g ； 蒸餾水加至1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅6mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸O. lg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的山藥水煮液20(T300ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅6mg ；L-半胱氨酸O.1g ;濃度200g/L的山藥水煮液20(T300ml。
6.一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取山藥加水煮沸I小時(shí)，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得山藥水煮液； (2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；6-0_乙酰黃豆苷；磷酸二氫鉀；L_半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得山藥水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min，滅菌后分裝。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種路鄧葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法。其特征在于，配制1000ml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g；雞蛋蛋白液150ml；氯化鈉5g；枸櫞酸鎂0.5g；瓊脂15g；假細(xì)錐甲素8~12mg；6-O-乙酰黃豆苷0.03g；磷酸二氫鉀0.2g；蒸餾水加至1000ml。最佳優(yōu)化配方制備方法為取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；6-O-乙酰黃豆苷；磷酸二氫鉀；L-半胱氨酸及硫酸銅溶于山藥水煮液中，混勻，定容，滅菌后分裝。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、路鄧葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12R1/44GK103014124SQ201310010739
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2013年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月13日
發(fā)明者姜美婷 申請(qǐng)人:姜美婷