新型鏈狀二萜類化合物的制備與應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及六個新型鏈狀二萜類化合物的制備方法及應用，包括該類成分從山楝中分離，體外試驗證實這六個新型鏈狀二萜類化合物具有顯著細胞毒活性，可作為抗腫瘤藥物的應用。
【專利說明】新型鏈狀二萜類化合物的制備與應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及六個新型鏈狀二萜類化合物的制備方法及應用，包括該類成分從山楝中分離，體外試驗證實這六個新型鏈狀二萜類化合物具有顯著細胞毒活性，可作為抗腫瘤藥物的應用。
【背景技術(shù)】:
[0002]腫瘤是目前危害人民生命和健康的嚴重疾病之一，目前，治療癌癥的方法主要包括手術(shù)、放療、化療、免疫治療、中醫(yī)中藥治療等多種?；熤饕揽炕瘜W藥物，而化學藥物產(chǎn)生的耐藥性以及毒副作用，亟待新型抗腫瘤藥物的發(fā)現(xiàn)。天然藥物富含多種結(jié)構(gòu)新穎且活性顯著的抗腫瘤化合物，引起世界范圍的廣泛關(guān)注。因此，從天然藥物中尋找高效、低毒的抗癌活性成分一直是化學家和藥理學家關(guān)注熱點。山楝為(Aphanamixis polystachya)為楝科(Meliaceae)山楝屬(Aphanamixis)植物,主要分布于廣東、廣西、云南等省的低海拔至中海拔山地溝谷密林或疏林中。文獻報道該植物提取物具有昆蟲拒食、防護劑的作用。我們在前期的體外抗腫瘤實驗篩選時發(fā)現(xiàn)，其醇提取物具有顯著性的抗腫瘤活性。通過深入研究，確定了抗腫瘤活性部位，并確定了該活性部位主要由6個新穎的二萜類成分組成，這些成分為:Aphanamixin A(I), Aphanamixin B(2), Aphanamixin C(3), AphanamixinD(4), Aphanamixin E(5), Aphanamixin F(6)。迄今為止,這些研究成果尚未有專利或文獻報道。 [0003]本發(fā)明的有益效果和意義在于:本發(fā)明之目的在于充分利用我國豐富的山楝植物資源，深入進行研究開發(fā)，明確該該植物有效部位的組成及其制劑的臨床應用，即該藥用植物提取物由8 二萜類成分組成，該提取物具有顯著的體外抗腫瘤活性，以期為臨床提供一種抗癌的現(xiàn)代中藥制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]1.本實驗室利用現(xiàn)代分離技術(shù)和結(jié)構(gòu)測定手段對楝科山楝屬山楝抗腫瘤活性部位進行化學成分研究過程中，從中分離得到8個二職類成分，分別為AphanamixinA(I), Aphanamixin B (2), Aphanamixin C (3), Aphanamixin D (4), Aphanamixin E (5),Aphanamixin F(6)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0005]圖1化合物1-6的化學結(jié)構(gòu)【具體實施方式】
[0006]根據(jù)本發(fā)明所公開的技術(shù)內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將很清楚本發(fā)明的其他實施方案，下述實施方案僅作示例。在不違反本發(fā)明主旨及范圍的情況下，可對本發(fā)明進行各種改變和改進。這些改變和改進均應在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。[0007]實施案例(一)
[0008]取山楝莖皮2Kg，陰干后粉碎，醇類溶劑進行提取。提取液經(jīng)濃縮至無醇味后，得到提取液。提取液經(jīng)有機溶劑分配法進行萃取，分別采用石油醚、氯仿和乙酸乙酯進行萃取，濃縮萃取液后得分別到萃取部位B、C、D。其中部位C經(jīng)體外實驗發(fā)現(xiàn)具有顯著地抗腫瘤活性，結(jié)果見表2。進一步對部位C進行系統(tǒng)分離，利用薄層色譜發(fā)對部位C進行分離條件選擇，經(jīng)過大量實驗發(fā)現(xiàn)在石油醚-乙酸乙酯體系下，分離效果較好。以此，利用硅膠柱色譜進行粗分離，經(jīng)過柱色譜粗分離后共收集8個流份(Fr.1-VIII)。Fr.1I經(jīng)凝膠柱色譜分離，氯仿:甲醇1:1體系洗脫，收集洗脫液，濃縮后得到不同的流份。利用高效液相色譜法對不同流份進行分離，采用甲醇-水不同體積比的溶劑進行洗脫，收集液相色譜圖中為單峰的色譜峰，濃縮收集的洗脫液，得到化合物I ;化合物2-8分別從Fr.1I1-Fr.VIII中分離得到，分離流程同化合物I。應用波譜學技術(shù)對化合物的結(jié)構(gòu)進行鑒定，結(jié)果化合物1-6均為結(jié)構(gòu)新穎的二萜類化合物。它們的化學結(jié)構(gòu)見圖1，波譜數(shù)據(jù)見表1和表2。
[0009]表1化合物1-3的核磁共振波譜數(shù)據(jù)
[0010]
【權(quán)利要求】
1.制備六個新型鏈狀二萜類化合物的方法，該方法包括如下步驟: (1)山楝乙醇提取物用氯仿和/或甲醇溶解； (2)將步驟(1)中所得的溶液經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用石油醚，石油醚-乙酸乙酯(9: 1)，石油醚-乙酸乙酯(4: 1)，石油醚-乙酸乙酯(2:1)洗脫，洗脫液濃縮，依次得到不同極性的洗脫物； (3)將步驟(2)中得到的洗脫物，溶解后經(jīng)凝膠柱層析，用氯仿:甲醇的體積比為1: 1的溶劑進行洗脫，并收集洗脫液； (4)將步驟(3)中的洗脫液濃縮，經(jīng)色譜檢識合并，進一步得到不同的流份； (5)將步驟(4)所得流份進行高效液相色譜分離，利用水:甲醇不同體積比的混合溶劑進行洗脫，得到本發(fā)明中的六個新型化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述，采用MTT法進行體外抗腫瘤實驗，所用的五種細胞株分別為H印G2、KB-3-1、NC1-H460、MCF-7、A-549。
3.根據(jù)權(quán)利2要求的方法，上述步驟中所使用的凝膠柱為S^hadexLH-20柱。
4.根據(jù)權(quán)利2要求的方法，所述方法中高效液相色譜為分析型液相色譜或制備型液相色譜，配備半制備型色譜柱或制備型色譜柱。
5.權(quán)利要求1所述組合物具有顯著的抑制腫瘤細胞生長活性，該提取物及其制劑可用于抗腫瘤藥物的制備。
6.一種具有抗腫瘤的組合物，含有只有一種權(quán)利要求1的化合物。
7.權(quán)利要求1所述組合物在制備輔助治療癌癥有關(guān)疾病的保健品中的應用。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗腫瘤的藥物，其特征在于:所述的藥物為膠囊(軟膠囊)、顆粒劑(干混懸劑)、片劑(分散片、泡騰片、咀嚼片、口崩片)、溶液劑(糖漿)、丸劑(濃縮丸、滴丸、微丸)，或者為注射劑型。
【文檔編號】A23L1/30GK103923075SQ201310014885
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2013年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月16日
【發(fā)明者】許旭東, 張小坡, 吳海峰, 馬國需, 鄭慶霞, 孫照翠, 吳麗真 申請人:中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所