專利名稱：一種黑麥草種子與農桿菌共培養(yǎng)的轉基因技術的制作方法
技術領域：
一種黑麥草種子與農桿菌共培養(yǎng)的轉基因技術屬于生物技術領域，更具體的說是一種通過黑麥草種子與農桿菌接種液共同培養(yǎng)的辦法實現(xiàn)自動轉基因接種。
背景技術：
目前，黑麥草的轉基因一般采用農桿菌侵染愈傷或基因槍轟擊法，但是這2種方法都是基于組織培養(yǎng)技術，都存在轉化周期長、花費較大、技術和設備要求高的缺點。

發(fā)明內容
一種黑麥草種子與農桿菌共培養(yǎng)的轉基因技術發(fā)明的目的是采用一種黑麥草種子與農桿菌共同培養(yǎng)的方法，使二者在相互密切接觸的情況下進行自動接種，以期改變現(xiàn)有技術轉化周期長、花費較大、技術和設備要求高的狀況。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的1. 一種黑麥草種子與農桿菌共培養(yǎng)轉基因技術的特征在于，以黑麥草種子與農桿菌接種液共同培養(yǎng)實現(xiàn)自動轉基因接種，它包括①黑麥草種子消毒，②與菌液共同培養(yǎng)接種，③暗箱培養(yǎng)，④育苗栽培4個步驟。2.黑麥草種子消毒選取飽滿的黑麥草種子先后用乙醇和84消毒液進行消毒，然后用滅菌水洗凈種子。3.將滅菌后的種 子轉入到OD6c 為O. 3的載入了雙元載體的農桿菌接種液中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱中震蕩培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)溫度為28°C，震蕩速度為lOOrpm。4.將與菌液共培養(yǎng)后的種子取出置于發(fā)芽盒中，6°C恒溫暗培養(yǎng)4天，注意保濕。5.將培養(yǎng)后的種子單粒播到營養(yǎng)缽中，置于22°C下生長，3葉期即可進行轉基因植株的鑒定。本發(fā)明的有益效果一種黑麥草種子與農桿菌共培養(yǎng)的轉基因技術避開了傳統(tǒng)的農桿菌侵染愈傷后或基因松轟擊后再組織培養(yǎng)的技術路線，與現(xiàn)有方法相比有以下幾個優(yōu)點第一，所需時間減少I個月左右，農桿菌侵染法從愈傷誘導到獲得轉基因植株一般需要3-4個月，本方法從接種開始到鑒定完成只需2-3個月；第二，本方法對技術要求不高，而黑麥草組織培養(yǎng)難度大，愈傷易褐化，因此對實驗者的技術和實驗的條件要求高，而本方法不涉及組織培養(yǎng)過程，因此大大降低了技術難度和實驗條件；第三，本方法所需費用較少，現(xiàn)有的轉基因技術需要借助植物組織培養(yǎng)技術，而組織培養(yǎng)的各種試劑較貴，而且需要建立組培室并配備大量的儀器設備才能開展工作，而本發(fā)明免除了這部分的花費，節(jié)約了大量資金。
具體實施例方式
下面結合具體實例對本發(fā)明進行進一步的描述。實施例1 :將1305GFP載體轉入到黑麥草品種長江2號的植株中1.黑麥草種子消毒選取200粒飽滿的黑麥草長江2號種子首先用70%乙醇消毒2min，然后用84消毒液消毒15min，消毒結束后用滅菌水洗凈種子。2.將滅菌后的長江2號種子轉入到OD6tltl為O. 3的已載入1305GFP載體的農桿菌接種液中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)溫度為28°C，震蕩速度為lOOrpm。3.將與菌液共培養(yǎng)后的種子取出置于發(fā)芽盒中，6°C恒溫暗培養(yǎng)4天，注意保濕。4.將培養(yǎng)后的種子單粒播到營養(yǎng)缽中，置于22°C下生長，在3葉期進行轉基因植株的鑒定。通過以上步驟共獲得109株黑麥草幼苗，經鑒定有21株為轉基因植株。歷時55天，比現(xiàn)有的轉基因 技術減少60天左右。
權利要求
1.一種黑麥草種子與農桿菌共培養(yǎng)轉基因技術的特征在于，以黑麥草種子與農桿菌接種液共同培養(yǎng)實現(xiàn)自動接種，它包括①黑麥草種子消毒，②與菌液共同培養(yǎng)接種，③暗箱培養(yǎng)，④育苗栽培4個步驟。
2.根據權利要求1所述的技術，其特征在于，所述的黑麥草種子消毒的做法是選取籽粒飽滿的黑麥草種子，順序用乙醇和84消毒液消毒，消毒結束后用滅菌水洗凈種子。
3.根據權利要求1所述的技術，其特征在于，所述的與菌液共同培養(yǎng)接種的做法是將滅菌后的種子轉入到0D_為O. 3的轉入了雙元載體的農桿菌接種液中，于恒溫震蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)溫度為28°C，震蕩速度為lOOrpm。
4.根據權利要求1所述的技術，其特征在于，所述的暗箱培養(yǎng)的做法是將與菌液共培養(yǎng)后的種子取出置于發(fā)芽盒中，6°C恒溫暗培養(yǎng)4天，注意保濕。
5.根據權利要求1所述的技術，其特征在于，所述的育苗栽培的做法是將培養(yǎng)后的種子單粒播到營養(yǎng)缽中，置于22°C下生長，3葉期即可進行轉基因植株的鑒定。
全文摘要
一種黑麥草種子與農桿菌共培養(yǎng)的轉基因技術，屬于生物技術領域。將黑麥草種子消毒后充分洗凈，與OD600為0.3的已載入雙元載體的農桿菌接種液于恒溫震蕩器中共同震蕩培養(yǎng)，再對種子進行暗箱培養(yǎng)，促進農桿菌侵染并在體內大量增殖擴散，然后將萌發(fā)的種子單粒播于營養(yǎng)缽中，3葉期即可進行轉基因鑒定。本方法簡便，操作容易，費用低廉。
文檔編號C12N15/82GK103031332SQ20131001903
公開日2013年4月10日 申請日期2013年1月19日 優(yōu)先權日2013年1月19日
發(fā)明者李杰勤, 王麗華, 詹秋文, 張俊, 趙庭, 萬海波, 周青, 王茂輝, 王薇薇 申請人:安徽科技學院