專利名稱：一株副干酪乳桿菌副干酪亞種菌株的制作方法
一株副干酪乳桿菌副干酪亞種菌株技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一株副干酪乳桿菌副干酪亞種菌株。背景技術(shù)：
隨著食品科學(xué)的發(fā)展，乳酸發(fā)酵也被用于果蔬汁飲料的加工中，乳酸菌發(fā)酵果蔬汁不僅可提供愉快的乳酸發(fā)酵風(fēng)味物質(zhì)，還能消除生青味、保護(hù)顏色、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收、產(chǎn)生人體所必需的多種維生素、乳酸菌素、消化酶等物質(zhì)，從而賦予果汁飲料整腸、健胃、助消化及提高機(jī)體免疫能力的功效。但是，將乳酸菌應(yīng)用于果蔬汁的發(fā)酵加工，面臨諸多挑戰(zhàn)。 由于果蔬汁缺乏乳酸菌增殖的重要促進(jìn)因子乳糖，用于果蔬汁乳酸發(fā)酵的乳酸菌就必須能利用果蔬汁所含的有機(jī)酸、葡萄糖等其他單糖及多糖類，獲得能量迅速增殖，并產(chǎn)生與果蔬汁風(fēng)味協(xié)調(diào)的發(fā)酵香，提高產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)與功能。而已有報(bào)道的果蔬汁乳酸發(fā)酵工藝多采用傳統(tǒng)應(yīng)用于酸奶發(fā)酵的乳酸菌，采用在原料中添加一定量乳粉或含乳培養(yǎng)基作為種子液， 或直接添加乳制品進(jìn)行發(fā)酵，不利于果汁清新爽朗的風(fēng)味保持。
為了解決上述問題本申請(qǐng)人于2009年07月29日申請(qǐng)的申請(qǐng)?zhí)枮?CN200910304966. 3、名稱為“一種枇杷果汁乳酸發(fā)酵液及其制備方法”的中國(guó)專利上已揭露不加乳粉而利用乳酸菌直接發(fā)酵的枇杷果汁乳酸發(fā)酵液，解決現(xiàn)有技術(shù)中枇杷產(chǎn)品的果汁果香不足、風(fēng)味單調(diào)缺陷、營(yíng)養(yǎng)成分不能為人體所充分吸收等缺點(diǎn)，其無(wú)需添加乳粉，保持了枇杷固有的營(yíng)養(yǎng)成分，又賦予了乳酸菌發(fā)酵枇杷果汁特有的營(yíng)養(yǎng)和風(fēng)味，是一種高品質(zhì)新型枇杷汁發(fā)酵飲料，豐富了乳酸發(fā)酵飲料的品種；本申請(qǐng)人于2011年09月20日申請(qǐng)的申請(qǐng)?zhí)枮镃N201110281566. 2、名稱為“一株植物乳桿菌R23”的中國(guó)專利上揭露了植物乳桿菌R23，及于2010年05月17日申請(qǐng)的申請(qǐng)?zhí)枮镃N201010174093.1、名稱為“一種果酒生物降酸新菌株及其應(yīng)用”的中國(guó)專利上揭露了命名為R35的乳桿菌屬的干酪乳桿菌，且該兩菌株均揭示于《熱帶作物學(xué)報(bào)》2011年第32卷第3期550-553頁(yè)的文獻(xiàn)上，該兩菌株均能快速適應(yīng)pH3. 2以上的酸性環(huán)境，并以有機(jī)酸為主要碳源進(jìn)行增殖，突破乳酸發(fā)酵的技術(shù)瓶頸， 同時(shí)產(chǎn)生與枇杷果汁相協(xié)調(diào)的愉快發(fā)酵香，并賦予枇杷果汁乳酸發(fā)酵特有的營(yíng)養(yǎng)和益生功倉(cāng)泛。
從業(yè)人員繼續(xù)深入研究，將乳酸發(fā)酵技術(shù)拓展應(yīng)用于葡萄果汁中，并希望能夠選育出葡萄乳酸發(fā)酵的適宜菌株，從而為乳酸發(fā)酵葡萄果汁飲料的研制提供了新的發(fā)酵菌源。說明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一株副干酪乳桿菌副干酪亞種菌株，該菌株為副干釀乳桿菌副干釀亞種 R37(Lactobacillus paracasei subsp. paracasei R37),且該副干酪乳桿菌副干酪亞種R37于2012年8月17日保藏于位于武漢市武漢大學(xué)的中 國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC N0:M2012311o
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題的
本申請(qǐng)人從自然發(fā)酵的枇杷酒中分離并初步篩選出具有蘋果酸乳酸發(fā)酵能力的乳酸菌，并對(duì)所得乳酸菌進(jìn)行進(jìn)一步地篩選以獲得其中一株蘋果酸乳酸發(fā)酵能力最強(qiáng)的菌株，通過對(duì)該菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化和16S rDNA序列測(cè)定與同源性分析，最終鑒定其為副干酪乳桿菌副干酪亞種的一個(gè)菌株。
該所得菌株能夠在生產(chǎn)葡萄果汁乳酸發(fā)酵無(wú)菌飲料中進(jìn)行應(yīng)用，具體地于無(wú)菌發(fā)酵罐內(nèi)裝入經(jīng)95 100°C處理IOmin的葡萄果汁,并所得菌株以107cfu/mL的接種量接至該無(wú)菌發(fā)酵罐內(nèi)，且發(fā)酵溫度為30°C ±5°C，發(fā)酵48±24小時(shí)后得適度乳酸發(fā)酵的活性果汁乳酸發(fā)酵液，將所得活性果汁乳酸發(fā)酵液過濾后進(jìn)行飲料調(diào)配以制成活性果汁乳酸發(fā)酵液質(zhì)量百分比為20%的乳酸發(fā)酵飲料即得所述葡萄果汁乳酸發(fā)酵無(wú)菌飲料，最后將葡萄果汁乳酸發(fā)酵無(wú)菌飲料灌裝即可。
本發(fā)明的有益效果在于提供一株副干酪乳桿菌副干酪亞種R37 (Lactobacillus paracasei subsp. paracasei R37),該菌株不僅具有較強(qiáng)的蘋果酸乳酸轉(zhuǎn)化活力、抗逆性和益生特性，而且能在葡萄果汁中快速繁殖，產(chǎn)生與葡萄果汁風(fēng)味相協(xié)調(diào)的獨(dú)特發(fā)酵香，并賦予葡萄果汁更多的功能營(yíng)養(yǎng)因子，提高發(fā)酵果汁的抗氧化功能，從而為乳酸發(fā)酵葡萄果汁飲料的研制提供了新的發(fā)酵菌源。

下面參照附圖結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
圖1是本發(fā)明中菌株R37與相關(guān)種的16SrDNA序列系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。
圖 2是本發(fā)明中菌株R37的菌落形態(tài)圖。
圖3是本發(fā)明中菌株R37的細(xì)胞形態(tài)圖(掃描電鏡)。
圖4是本發(fā)明中菌株R37的革蘭氏染色示意圖。
圖5是本發(fā)明中菌株R37的粘附能力示意圖。
圖6是本發(fā)明中菌株R37胞內(nèi)外代謝產(chǎn)物的抗氧化能力示意圖。
圖 7是本發(fā)明中膽固醇含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
圖 8是本發(fā)明中GABA含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
圖9是本發(fā)明中菌株R37在“桂葡I號(hào)”葡萄果汁中的生長(zhǎng)曲線。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明副干酪乳桿菌副干酪亞種R37 (Lactobacillus paracasei subsp. paracasei R37)是從自然發(fā)酵的枇杷酒中分離篩選出來(lái)的。
一、菌株R37的獲得
枇杷果實(shí)經(jīng)去核、破碎、打漿，之后將枇杷果漿分裝在5L發(fā)酵罐中且于20_25°C下自然發(fā)酵；并采用紙上層析法定性檢測(cè)枇杷酒醪中蘋果酸乳酸含量，選擇發(fā)生蘋果酸乳酸發(fā)酵且SO2濃度為40-100mg/L的枇杷酒醪作為分離源，備用；在無(wú)菌操作下，分離源進(jìn)行10 倍梯度稀釋，且選取稀釋度為10_2的稀釋液，吸取O.1mL所選取的稀釋液涂布于ATB分離培養(yǎng)基，置28°C培養(yǎng)6d，挑取圓形稍扁平的單菌落，在MRS平板上進(jìn)行多次劃線傳代直至獲得純菌株；將所得菌株進(jìn)行分離，各菌株均經(jīng)革蘭氏染色、接觸酶反應(yīng)、吲哚試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)和乳酸發(fā)酸能力的測(cè)試，初步篩選出具有蘋果酸乳酸發(fā)酵能力的乳酸菌，之后對(duì)所得乳酸菌進(jìn)行進(jìn)一步地篩選以獲得其中蘋果酸乳酸發(fā)酵能力最強(qiáng)的菌株，并命名該菌株為菌株 R37。
二、菌株R37的鑒定
1.菌株R37的形態(tài)學(xué)與生理生化學(xué)特征
對(duì)所得菌株R37的形態(tài)及理化特性等進(jìn)行研究，得到該菌株R37的主要形態(tài)及培養(yǎng)特征如下如圖2所示，菌落直徑0. 7 1. 3mm,呈圓形，濕潤(rùn)，表面光滑，凸起，乳白色，不透明，邊緣整齊；將菌株R37置于掃描電鏡下進(jìn)行觀察(掃描電鏡示意圖如圖3所示)、并對(duì)菌株R37進(jìn)行革蘭氏染色(示意圖如圖4所示)可知，細(xì)胞桿狀，菌體大小為O. 5 μ mX1. 0 1.67ym (長(zhǎng)X寬)，細(xì)胞呈單個(gè)、成對(duì)或短鏈狀排列，無(wú)芽孢；液體培養(yǎng)菌液渾濁，無(wú)菌膜， 無(wú)氣泡，分層明顯、底部有白色沉淀；以下表I是菌株R37的生理學(xué)特征、表2是菌株R37的糖代謝試驗(yàn)結(jié)果
表1菌株R37的生理學(xué)特征
權(quán)利要求
1.一株副干酪乳桿菌副干酪亞種菌株，其特征在于該菌株為副干酪乳桿菌副干酪亞種 R37(Lactobacillus paracasei subsp. paracasei R37)，于 2012 年 8 月 17 日保藏于位于武漢市武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC N0:M2012311o
全文摘要
本發(fā)明提供一株副干酪乳桿菌副干酪亞種菌株，該菌株為副干酪乳桿菌副干酪亞種R37(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei R37)，于2012年8月17日保藏于位于武漢市武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M2012311。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于該菌株即副干酪乳桿菌副干酪亞種R37不僅具有較強(qiáng)的蘋果酸乳酸轉(zhuǎn)化活力、抗逆性和益生特性，而且能在葡萄果汁中快速繁殖，產(chǎn)生與葡萄果汁風(fēng)味相協(xié)調(diào)的獨(dú)特發(fā)酵香，并賦予葡萄果汁更多的功能營(yíng)養(yǎng)因子，提高發(fā)酵果汁的抗氧化功能，從而為乳酸發(fā)酵葡萄果汁飲料的研制提供了新的發(fā)酵菌源。
文檔編號(hào)C12R1/225GK103060243SQ201310019848
公開日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2013年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月17日 公開號(hào)201310019848.發(fā)明者何志剛, 梁璋成, 任香蕓, 林曉姿, 李維新, 魏巍 申請(qǐng)人:福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究所