一種螠蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白及其在保鮮方面的應用和應用方法
【專利摘要】一種螠蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白及該蛋白在水產(chǎn)品保鮮上的應用和應用方法，按如下步驟制備蛋白：取菌株為螠蟶共附生蜂房芽孢桿菌進行培養(yǎng)，液體培養(yǎng)基配方為：葡萄糖40g/L和蛋白胨20g/L，pH調(diào)配成5；每瓶裝150-250mL液體培養(yǎng)基，溫度30-35℃，轉(zhuǎn)速為150-250rpm,搖床培養(yǎng)4-6天；4000r/min下離心去除菌體的發(fā)酵液50℃下減壓濃縮至原體積的二分之一，加入硫酸銨，飽和終濃度為90%，4℃靜置過夜，過濾將沉淀用PBS緩沖液溶解后，再用截留分子量為3600道爾頓的透析袋透析4天，取透析袋中物冷凍干燥，得螠蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白。本發(fā)明制備過程簡單、成本低廉。
【專利說明】一種螆蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白及其在保鮮方面的應用和應用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食品保鮮領(lǐng)域，特別是一種縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白及其應用和應用方法。
【背景技術(shù)】
[0002]水產(chǎn)品具有低脂肪、高蛋白的特點，是合理膳食結(jié)構(gòu)中不可缺少的重要組分，已成為人們攝取動物性蛋白質(zhì)的重要來源。并且魚、蝦、蟹等水產(chǎn)品肉質(zhì)鮮美，風味獨特，具有“海鮮”之美稱，深受廣大消費者的青睞。水產(chǎn)品的鮮度是其最主要的品質(zhì)指標，是決定其價格的主要因素，另外水產(chǎn)品容易腐敗變質(zhì)，因此加強水產(chǎn)品的保鮮技術(shù)研究，延長水產(chǎn)品的保質(zhì)期和貨架期，使新鮮水產(chǎn)品能夠遠距離運輸，滿足非沿海城市消費者對水產(chǎn)品的需求，對帶動水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有重大意義。 [0003]水產(chǎn)品等目前常用的保鮮劑從來源上分可以分為化學保鮮劑和天然保鮮劑，化學保鮮劑雖然化學防腐劑效果快、使用方便，但存在一些安全隱患，其殘留還會引起化學藥劑污染，因此人們將目光轉(zhuǎn)向?qū)Ω弊饔眯?、時效長的天然防腐保鮮劑的開發(fā)。近年來，生物保鮮技術(shù)已有了一定的發(fā)展，尤其在生物提取物保鮮方面進展迅速，但仍存在很多問題。一是酶制劑等價格昂貴限制了其推廣應用，二是許使用的天然微生物防腐保鮮劑，只有乳酸球菌素和納他霉素等少數(shù)幾種，其他生物技術(shù)應用很少，整體發(fā)展緩慢，品種單一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是擔提供一種操作簡單、成本低廉的縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白及其應用和應用方法，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0005]本發(fā)明的一種縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白，按如下步驟制備:
a.取菌株為縊蟶共附生蜂房芽孢桿菌110(feci77心alvei110)，該菌株已于2013年I月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號:CGMCCNo: 7079 ；
b.對縊蟶共附生蜂房芽孢桿菌110進行培養(yǎng)，蜂房芽孢桿菌110的液體培養(yǎng)基配方為:葡萄糖40 g/L和蛋白胨20 g/L，pH調(diào)配成5;
c.蜂房芽孢桿菌110發(fā)酵條件:每瓶裝150-250mL液體培養(yǎng)基，溫度30-35°C，轉(zhuǎn)速為150-250 rpm,搖床培養(yǎng)4-6天；
d.在4000r/min的條件下離心去除菌體的發(fā)酵液，在50°C下減壓濃縮至原體積的二分之一，然后加入硫酸銨，硫酸銨的飽和終濃度為90%，4°C靜置過夜，過濾將沉淀用PBS緩沖液溶解后，再用截留分子量為3600道爾頓的透析袋透析4天，取透析袋中物冷凍干燥，得縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白。
[0006]本發(fā)明的一種縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白在保鮮方面的應用。
[0007]本發(fā)明的一種縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白在保鮮方面的應用方法:將縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白配制成200μ g/mL的溶液，用于食品的保鮮，所述的食品包括水產(chǎn)品。
[0008]本發(fā)明的縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白制備過程簡單、成本低廉，從縊蟶共附生蜂房孢桿菌菌株110的發(fā)酵液中所提取的蛋白有明顯的抑菌保鮮活性，可以有效的抑制微生物繁殖，減緩PH值和TVB-N值的升高，減緩色澤氣味的改變。因此應用于水產(chǎn)品或其他食品等的保鮮效果好，具有產(chǎn)業(yè)價值。
[0009]本發(fā)明中的縊蟶源蜂房芽孢桿菌菌株已于2012年12月31日保藏于位于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號:CGMCC No: 7079。
【具體實施方式】
[0010]本發(fā)明一種縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白，按如下步驟制備:
a.將生產(chǎn)菌株婦経共附生蜂房芽孢桿菌110 (Bacillus alvei 110),接種于葡萄糖40g/L和蛋白胨20 g/L, pH為5的液體培養(yǎng)基中，每瓶裝150 mL或200 mL或250 mL液體培養(yǎng)基，溫度30°C或35°C，轉(zhuǎn)速為150 rpm或200rpm或250rpm，搖床培養(yǎng)4天或5天或6天。該蜂房芽孢桿菌于2012年12月31日保藏于位于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號:CGMCC No: 7079。
[0011]b.用濾紙片法檢測發(fā)酵液的抑菌活性。大腸桿菌Escherichia coli (EC)、變形桿菌 Proteus vulgaris (PV)、金黃色葡萄球菌 Staphylococcus aureus (SA)、產(chǎn)氣桿菌Enterobacter aerogenes (EA)和枯草芽抱桿菌 Bacillus subtilis (BS)均米用現(xiàn)有的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。上述均受贈于中科院大連化學物理研究所。將各菌種分別接種于牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)24 h作指示菌。
[0012]分別用移液槍 取指示菌液100 μ L于牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上，用無菌三角涂棒涂抹均勻，然后用記號筆在培養(yǎng)皿底部的外面將牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基培養(yǎng)皿分成三個區(qū)，每個區(qū)分別放入一張濾紙片(直徑6 _)，再用移液槍移分別取縊蟶共附生菌株110的發(fā)酵物液、75%酒精和無菌水各10 μ L分別滴到每個區(qū)的濾紙片中央，置于37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天。做3次重復處理，陽性對照為75%酒精，陰性對照為無菌水。觀察指示菌的生長情況，測定抑菌圈的直徑大小。結(jié)果表明110菌株發(fā)酵液對五種指示菌的抑菌直徑分別為 11 mm, 10 mm, 12 mm, 11.2 mm, 14.8 mm。
[0013]c.將4000 r/min離心去除菌體的發(fā)酵液在50°C下減壓濃縮至原體積的二分之一，然后加入飽和度分別為70%、75%、80%、90%和95%的硫酸銨，4°C靜置過夜，過濾將沉淀用蒸餾水溶解后，再用截留分子量為3600道爾頓的透析袋透析4天，取透析袋中物冷凍干燥，配制成形同濃度的溶液，用濾紙片法(同上)檢測抑菌活性，結(jié)果表明硫酸銨飽和終濃度為90%的沉淀物活性最好，得率最高，SDS-PAGE電泳結(jié)果表明該沉淀物為蛋白質(zhì)。
[0014]d.鮮蝦保鮮實驗:
I)市場購買的蝦立刻用冰塊覆蓋，到實驗室后，挑取鮮度、大小盡可能一致的新鮮對蝦。清洗干凈，去污，剔出破損的和鮮度不夠的蝦，去除差異較大的個體，然后將試樣個體隨機分組，每組0.5 Kg，分別用200 mg/ L的蜂房芽孢桿菌110蛋白溶液，浸泡處理5 min,并以蒸餾水作對照。濾去浸泡液，將蝦裝入保鮮盒中，置于4°C冷藏。每隔24 h進行觀察，共觀察10天。一直到奸的pH >8.0或TVB_N>35 mg N per 100 g樣品。[0015]2)pH的測定:稱取各組樣品5 g,加入50 mL蒸懼水,研磨攪拌均勻，過濾,取濾液用酸度計測定，直接讀取PH值，結(jié)果如表所示110蛋白處理的樣品pH增加明顯低于對照。
[0016]
【權(quán)利要求】
1.一種縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白，其特征在于:按如下步驟制備: a.取菌株為縊蟶共附生蜂房芽孢桿菌110(feci77心alvei110)，該菌株已于2013年I月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號:CGMCCNo: 7079 ； b.對縊蟶共附生蜂房芽孢桿菌110進行培養(yǎng)，蜂房芽孢桿菌110的液體培養(yǎng)基配方為:葡萄糖40 g/L和蛋白胨20 g/L，pH調(diào)配成5; c.蜂房芽孢桿菌110發(fā)酵條件:每瓶裝150-250mL液體培養(yǎng)基，溫度30-35°C，轉(zhuǎn)速為150-250 rpm,搖床培養(yǎng)4-6天； d.在4000r/min的條件下離心去除菌體的發(fā)酵液，在50°C下減壓濃縮至原體積的二分之一，然后加入硫酸銨，硫酸銨的飽和終濃度為90%，4°C靜置過夜，過濾將沉淀用PBS緩沖液溶解后，再用截留分子量為3600道爾頓的透析袋透析4天，取透析袋中物冷凍干燥，得縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白在保鮮方面的應用。
3.一種根據(jù)權(quán)利要 求2所述的縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白在保鮮方面的應用方法:其特征在于:將縊蟶源蜂房芽孢桿菌蛋白配制成200μ g/mL的溶液，用于食品的保鮮，所述的食品包括水廣品。
【文檔編號】C12R1/07GK103966286SQ201310034691
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2013年1月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月30日
【發(fā)明者】張付云, 蒼桂璐, 楊陽, 王維才, 劉曄 申請人:大連海洋大學, 張付云