專利名稱：葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶ugt1a1的特異性探針底物及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶UGTlAl的特異性探針底物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
葡萄糖醒酸轉(zhuǎn)移酶(Uridinediphosphate-glucuronosy I transferase, UGT)超家族是機(jī)體內(nèi)重要的II相代謝酶，催化化合物與輔因子尿苷二磷酸葡糖醛酸(UDPGA)結(jié)合，從而增加底物的親水性，使其能更 有效地從尿或膽汁中排出體外，這是機(jī)體的一個重要的解毒過程。多種外源性物質(zhì)，如SN-38和亞硝胺類化合物，以及內(nèi)源性物質(zhì)，如膽紅素和雌二醇的脫毒都通過葡萄糖醛酸化途徑來實現(xiàn)。人UGT可以分為4個家族:UGT1，UGT2，UGT3和UGT8。其中最重要的參與藥物結(jié)合反應(yīng)的酶屬于UGTl和UGT2家族。目前，已被鑒定的UGT亞型有25個，包括UGTlA中的16個以及UGT2B中的7個亞型。UGT2B在人肝臟中的表達(dá)量比UGTlA更豐富。其中，UGT2B4的含量最高，UGT2B15次之。值得注意的是，UGTlAl，1A4，1A6，1A9在人肝臟中都有中等程度的表達(dá)，但UGT1A3在人肝臟中表達(dá)量極低，同時UGT1A7，UGT1A8及UGT1A10僅在人腸道中表達(dá)。在UGTlA中，UGTlAl和人體健康的關(guān)系最為密切。它的基因缺失會影響膽紅素的代謝，從而導(dǎo)致嚴(yán)重的高膽紅素血癥如Crigler-Najjar綜合癥和Gilbert’s綜合癥。此夕卜，UGTlAl也是SN-38，一種廣泛使用的抗癌藥物伊立替康的活性代謝產(chǎn)物的主要代謝酶，UGTlAl的活性缺失被證明和伊立替康的毒性相關(guān)。因此，在患者用藥前，用IAl探針底物對其體內(nèi)的IAl酶活性進(jìn)行探測，對于臨床安全用藥有著重要意義。目前，已經(jīng)報道的最有可能成為UGTlAl的探針底物有3個，分別是膽紅素，雌二醇和依托泊甙，但是，由于膽紅素和雌二醇屬于內(nèi)源性化合物，不能作為體內(nèi)探針使用，而依托泊甙又具有細(xì)胞毒性，也限制了它成為體內(nèi)IAl探針底物。因此，UGTlAl的特異性探針?biāo)幬锏拈_發(fā)具有重要的臨床意義。本發(fā)明中補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚具有代謝產(chǎn)物單一(僅生成一個單葡萄糖醛酸化產(chǎn)物)、代謝酶高選擇性(肝臟主要由UGTlAl代謝，少量1A3參與極少部分代謝)、代謝產(chǎn)物易檢測等特點。此外，補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚作為一種天然的黃酮類化合物，具有毒性低的特點，因此其作為體內(nèi)UGTlAl的探針更加安全。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶UGTlAl的特異性探針底物及其應(yīng)用，該特異性探針底物是B環(huán)4’位具有羥基的黃酮類化合物補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚，與目前已報道的探針/標(biāo)準(zhǔn)底物雌二醇相比，補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚的代謝產(chǎn)物單一，更易于檢測；與已報道的探針/標(biāo)準(zhǔn)底物依托泊甙相比，具有安全性更高的優(yōu)點。因此，用補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚作為探針底物評估人肝等生物樣品中UGTlAl的酶活性，具有顯著的優(yōu)勢。
本發(fā)明提供了一種葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶UGTlAl的特異性探針底物，該特異性探針底物是B環(huán)4’位具有羥基的黃酮類化合物補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚，其結(jié)構(gòu)式見式(I )。
權(quán)利要求
1.一種葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶UGTlAl的特異性探針底物，其特征在于:該特異性探針底物是具有C-4’羥基的二氫黃酮類化合物，其結(jié)構(gòu)式見式(I)。
2.一種利用權(quán)利要求1所述特異性探針底物定量測定生物體系中UGTlAl酶活的方法，其特征在于:采用上述式(I)化合物作為底物，通過定量檢測單位時間內(nèi)的底物消除量或其葡萄糖醛酸產(chǎn)物的生成量來測定各生物樣品及細(xì)胞中UGTlAl酶的活性。
3.按照權(quán)利要求2所述利用特異性探針底物定量測定生物體系中UGTlAl酶活的方法，其特征在于:所述方法條件為:底物濃度介于l/l(TlOKm之間；孵育體系pH介于5.5^10.5之間；反應(yīng)溫度介于2(T60°C之間。
4.按照權(quán)利要求2所述利用特異性探針底物定量測定生物體系中UGTlAl酶活的方法，其特征在于:所述產(chǎn)物生成率或底物轉(zhuǎn)化率低于10%。
5.權(quán)利要求1所述 特異性探針底物的應(yīng)用，其特征在于:該特異性探針底物用于各種重組UGT1A1、人及動物組織制備液及各類組織細(xì)胞中UGTlAl酶活的定量測定；也用于體內(nèi)探針，評估膽紅素代謝酶UGTlAl的個體及種屬差異。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶UGT1A1的特異性探針底物及其應(yīng)用，該特異性探針底物是具有C-4'羥基的二氫黃酮類化合物，其酶活測定的流程如下選擇補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚的C-4’羥基-O-葡萄糖醛酸化代謝為探針反應(yīng)，通過定量檢測單位時間內(nèi)補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲醚的消除量或其葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物的生成量來測定各生物樣品、細(xì)胞、在體及整體器官中UGT1A1酶的活性。本發(fā)明可用于不同種屬、不同個體來源生物樣本中UGT1A1酶活的定量評估，以及不同來源的動物組織細(xì)胞培養(yǎng)液及細(xì)胞制備物中UGT1A1酶活的定量測定，以期實現(xiàn)對重要藥物代謝酶UGT1A1處置藥物能力的評估。
文檔編號C12Q1/48GK103146804SQ201310044800
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月4日
發(fā)明者楊凌, 葛廣波, 夏楊柳, 朱亮亮, 呂俠, 何桂元, 寧靜 申請人:中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所