砸碰錘的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種砸碰錘。該砸碰錘是分子生物學(xué)實驗中使用的一種震蕩裝置，由錘體和與所述錘體固定連接的手柄組成，所述錘體由一可開關(guān)的密閉盒體和與所述密閉盒體一端固定連接的彈性部件組成。所述密閉盒體可由相互配合的蓋體和杯體組成。所述彈性部件可為橡膠塊。使用本發(fā)明所提供的砸碰錘在距離桌面高30cm處向下敲擊5—6次，細菌沉淀即可全部懸浮；在脂肪RNA提取實驗的脂肪樣品均質(zhì)化和相分離兩個步驟中使用本發(fā)明所提供的砸碰錘，最終提取的總RNA量為10.5ug/100mg樣品。本發(fā)明的砸碰錘對目標物質(zhì)的分散效果明顯，且操作簡便，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】砸碰錘【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及分子生物學(xué)實驗中使用的一種震蕩裝置，具體為一種砸碰錘。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，在分子生物學(xué)、生態(tài)學(xué)、遺傳、雜交、育種、發(fā)酵、醫(yī)學(xué)、制藥、檢疫檢測、食品、環(huán)保等領(lǐng)域的生物實驗室中，對各種試劑、溶液、化學(xué)物質(zhì)進行固定、振蕩、混勻處理以及微生物培養(yǎng)、優(yōu)化、篩選和細胞組織生理及生化反應(yīng)時，常用的震蕩裝置有:旋渦混勻器、漩渦振蕩器、恒溫(全溫)搖床、恒溫振蕩器、微量振蕩器、水浴振蕩器等，這些儀器具有以下特點:(I)需要靠電能驅(qū)動；(2)轉(zhuǎn)速為0— 3000rpm;(3)振幅均小于35_ (5—35mm) ；(4)震蕩方式可分為垂直、往復(fù)、回旋、垂直往復(fù)合回旋往復(fù)等五種形式；(5)所產(chǎn)生的震蕩力遠遠不夠；(6)儀器容易出現(xiàn)故障。在分子生物學(xué)試驗中，研究人員經(jīng)常發(fā)現(xiàn)這些儀器不能滿足一些特殊實驗所需的劇烈強度。如提取RNA時，加入三氯甲烷后需要劇烈震蕩TRIzoI液以使得核酸物質(zhì)與組織和細胞中的有機質(zhì)分離；再如，提取質(zhì)粒時，需要懸浮擠菌后的菌落沉淀。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種砸碰錘，它由錘體和與所述錘體固定連接的手柄組成，所述錘體由一可開關(guān)的密閉盒體和與所述密閉盒體一端固定連接的彈性部件組成。
[0004]在上述砸碰錘中，所述密閉盒體可由相互配合的蓋體和杯體組成，所述彈性部件與所述杯體的一端固定連接。
[0005]在上述砸碰錘中，所述彈性部件可為橡膠塊。
[0006]在上述砸碰錘中，所述杯體可為圓柱型腔體，其側(cè)壁是透明的。
[0007]在上述砸碰錘中，所述橡膠塊可為以與所述密閉盒體的連接面為底面的圓柱體，也可為其他形狀。
[0008]在上述砸碰錘中，所述密閉盒體的高可為8.0—14.0cm，如10.0cm，底面直徑可為
4.0一6.0cm,如 4.0cm。
[0009]在上述砸碰錘中，所述橡膠塊的高可為1.5—2.0cm，如1.8cm，底面直徑為4.0—
6.0cm,如 4.0cm。
[0010]本發(fā)明砸碰錘的原理如下:舉起砸碰錘的過程中由于慣性，盒體底部會對其內(nèi)的離心管有撞擊力，砸碰錘下降過程中盒體上底(即蓋體)會對離心管有撞擊力，當砸碰錘落到硬支持物上后，接觸面的彈性橡膠會產(chǎn)生反向作用力迎面劇烈撞擊飛駛而來的離心管，從而造成離心管反復(fù)在盒體內(nèi)進行若干振蕩式撞擊，撞擊過程中離心管相互間也產(chǎn)生不同方向的撞擊。因此，砸碰錘產(chǎn)生的撞擊力是多角度的，立體式的，而渦旋振蕩器始終只有接觸面一處遭受撞擊。
[0011]實驗證明，在細菌沉淀懸浮實驗中，使用本發(fā)明所提供的砸碰錘在距離桌面高30cm處向下敲擊5—6次,細菌沉淀即可全部懸浮，而使用潤旋振蕩器在轉(zhuǎn)速為2850rpm條件下震蕩IOmin后仍有沉淀結(jié)塊，菌液懸浮效果較差；在脂肪總RNA提取實驗中，在脂肪樣品均質(zhì)化和相分離兩個步驟中使用本發(fā)明所提供的砸碰錘，最終提取的總RNA量為
10.5ug/100mg樣品，而在這兩個步驟中分別使用組織破碎儀和渦旋振蕩器，最終提取的總RNA量為L5ug/100mg樣品。本發(fā)明的砸碰錘對目標物質(zhì)的分散、勻質(zhì)效果明顯，且經(jīng)濟環(huán)保，操作簡便，因此具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1為本發(fā)明砸碰錘的側(cè)視圖。其中，I為蓋體,2為杯體,3為橡膠塊,4為手柄?！揪唧w實施方式】
[0013]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0014]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0015]實施例1、本發(fā)明的砸碰錘
[0016]本發(fā)明所提供的砸碰錘(如圖1所示)是由錘體和與所述錘體固定連接的手柄4組成，所述錘體由一可開關(guān)的密閉盒體和與所述密閉盒體一端固定連接的彈性部件組成。所述密閉盒體由相互配合的蓋體I和杯體2組成。所述彈性部件與所述杯體2的底端固定連接，所述彈性部件為橡膠塊3。所述杯體2為圓柱型腔體，其側(cè)壁是透明的。所述橡膠塊為以與所述密閉盒體的連接面為底面的圓柱體。所述密閉盒體的高為10.0cm (8.0—14.0cm均可)，底面直徑為4.0cm (4.0—6.0cm均可)。所述橡膠塊的高為1.8cm (1.5一2.0cm均可)，底面直徑為4.0cm (4.0—6.0cm均可)。
[0017]在上述本發(fā)明的砸碰錘中，所述可開關(guān)的密閉盒體還可設(shè)為側(cè)面設(shè)開口的盒體。所述密閉盒體及彈性部件的形狀和大小也可根據(jù)實際需要進行確定。
[0018]使用本發(fā)明的砸碰錘時，先將所述密閉盒體打開，放入裝有需要震蕩的物質(zhì)的密閉容器(如離心管)，再密封。然后手握手柄，將彈性部件端朝向硬支持物(如桌面)進行敲擊，最終將需要震蕩的物質(zhì)充分分散。
[0019]實施例2、本發(fā)明砸碰錘的應(yīng)用
[0020]一、細菌沉淀的懸浮實驗
[0021]在分子生物學(xué)實驗過程中，工程菌在分子克隆中起著不可替代的作用?；蚩寺〖拜d體的構(gòu)建主要分為基因的擴增、酶切，連接、轉(zhuǎn)化及質(zhì)粒提取等步驟。其中，在質(zhì)粒轉(zhuǎn)化工程菌后進行的質(zhì)粒提取過程中，細菌沉淀的重懸是提取質(zhì)粒的重要環(huán)節(jié)。具體的步驟如下(以大腸桿菌DH5ci為例):
[0022]1、細菌沉淀的獲得
[0023]I)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細菌
[0024]取IOOiU解凍后的大腸桿菌(E.coli) DH5a (購自天根生化科技(北京，貨號為CB101)有限公司)感受態(tài)細胞，加50ng質(zhì)粒pcDNA?3.1(+)(購自Invitrogen公司，貨號為V790-20)，冰上靜置30min后，42°C水浴90s，再冰上靜置5min，加入800 u I LB液體培養(yǎng)基(不含氨芐青霉素)，37°C搖床200rpm培養(yǎng)50min后，取培養(yǎng)液涂布到LB固體培養(yǎng)基(含氨芐青霉素IOOng/yl)中，37°C培養(yǎng)14 一 16h，獲得抗性單克隆菌落。
[0025]2)抗性細菌的培養(yǎng)和沉淀[0026]挑取步驟I)獲得的單克隆菌落于5ml LB液體培養(yǎng)基(含氨芐青霉素IOOng/ U I)中，37°C，180rpm，搖菌15小時；取該5mL菌液分4次加入到同一個1.5ml離心管中并進行8000rpm離心2min，去除上清液，細菌以沉淀的方式留于離心管底部。
[0027]2、細菌沉淀的懸浮
[0028]取6管按步驟I中2)的方法獲得的細菌沉淀，每管中加入0.25mL溶液I (溶劑為水，溶質(zhì)及其終濃度分別為:葡萄糖50mmol/L，Tris ? Cl (pH8.0) 25mmol/L, EDTA (pH8.0) lOmmol/L)，蓋嚴離心管后，隨機分成兩組(每組3管)，每組各進行如下兩種不同的懸浮處理:
[0029]處理A (對照):將離心管用LSE渦旋振蕩器(型號:6776LSE Vortex Mixer，美國corning)按使用說明在2850rpm下震蕩lOmin。
[0030]處理B:將離心管放于實施例1的砸碰錘中，在距離桌面高30cm處將砸碰錘向下尚支擊5—6次。
[0031 ] 結(jié)果:處理A中的3管中均仍有少許沉淀沒有被懸浮，而處理B中的3管沉淀全部被懸浮。
[0032]二、脂肪組織的總RNA提取實驗
[0033]脂肪組織RNA量少，且總RNA與脂質(zhì)纏裹很難分離，目前有關(guān)脂肪組織的RNA提取已成為科學(xué)界的一大難題。本實驗在脂肪組織總RNA提取過程中在樣品均質(zhì)化和相分離兩個步驟中使用本發(fā)明所提供的砸碰錘，以使用組織破碎儀為對照，具體方法和結(jié)果如下:
[0034]1、使用本發(fā)明的砸碰錘
[0035]I)樣品的均質(zhì)化
[0036]取100毫克羊臀部脂肪組織樣品，放入5.0mL離心管中，加入Iml TRIzol試齊[I(Invitrogen),先使用組織破碎儀(型號:PT_1305,生產(chǎn)商為瑞士 EQUL-kinematica)25000rpm轉(zhuǎn)速下勻衆(zhòng)5min,再將勻衆(zhòng)液轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中(含若干直徑為1mm的鋼珠)旋緊管蓋，將離心管放入實施例1的砸碰錘中，在距離桌面高30cm處向下敲擊20次(15秒)，重復(fù)4-5遍(砸碰錘在此處執(zhí)行的是均質(zhì)化作用)。
[0037]2)相分離
[0038]將經(jīng)步驟I)均質(zhì)化的樣品于15 — 30°C孵育5分鐘以利于勻漿樣品中核蛋白體完全分離，每管加入0.2ml氯仿，旋緊管蓋，將離心管放入實施例1的砸碰錘中進行在距離桌面高30cm處向下敲擊20次(約15秒。此步驟中砸碰錘可產(chǎn)生超級剪切力，將RNA與蛋白、脂肪等有機質(zhì)充分分離。在提取脂肪總RNA時，RNA很難和大量油脂剝離，產(chǎn)生超級震蕩能力的砸碰錘可以很好的將RNA與油脂和其他有機質(zhì)剝離而溶于水相。目前這一步國內(nèi)一般使用手臂搖擺晃動液體或在旋渦震蕩儀上而進行震蕩)。取出離心管，15-30°C孵育2-3分鐘后，于2-8°C、12，000 X g下離心15分鐘。離心后，混合物分離為紅色下層(酚-氯仿相)、中間相以及上層的無色水相。RNA存在于水相。
[0039]3) RNA 沉淀
[0040]將步驟2)中存在RNA的水相轉(zhuǎn)移到一個新的離心管，加入0.5mL異丙醇混合，以從水相中沉淀RNA。15-30°C孵育樣品10分鐘，2-8°C，12，OOOXg離心10分鐘。離心后在管側(cè)面和底部形成一個凝膠樣沉淀。
[0041]4) RNA 洗滌[0042]將經(jīng)步驟3)處理后的上清去除，用75%的乙醇溶液洗滌RNA沉淀一次，渦旋混合。2-8°C, 7, 500Xg 離心 5 分鐘。
[0043]5)重新溶解RNA
[0044]將經(jīng)步驟4)洗滌的RNA沉淀真空干燥5-10分鐘。部分溶解RNA樣品，其A260/280比值〈1.6。在無RNA酶的水中吹打幾次溶解RNA，并在55_60°C孵育10分鐘，獲得RNA溶液。
[0045]2、對照
[0046]I)樣品的均質(zhì)化[0047]取100毫克羊臀部脂肪組織樣品，放入5.0mL離心管中，加入Iml TRIzol試劑(Invitrogen),使用組織破碎儀(型號:PT_1305,生產(chǎn)商為瑞士 EQUL-kinematica)25000rpm轉(zhuǎn)速下勻漿5分鐘。
[0048]2)相分離
[0049]將經(jīng)步驟I)均質(zhì)化的樣品于移至1.5ml離心管，15—30°C孵育5分鐘(以利于勻漿樣品中核蛋白體完全分離)，每管加入0.2ml氯仿，旋緊管蓋，使用LSE渦旋振蕩器(型號:6776LSE Vortex Mixer,美國corning)按使用說明在2850rpm下震蕩15秒。取離心管，15-30°C孵育2-3分鐘后，于2-8°C、12，OOOXg下離心15分鐘。離心后，混合物分離為紅色下層(酚-氯仿相)、中間相以及上層的無色水相。RNA存在于水相。
[0050]3) RNA 沉淀
[0051]與步驟I中3)的方法相同。
[0052]4) RNA 洗滌
[0053]與步驟I中4)的方法相同。
[0054]5)重新溶解RNA
[0055]與步驟I中5)的方法相同。
[0056]3、RNA含量測定
[0057]使用NanoDrop3300熒光分光光度計測定步驟I和2中步驟5)獲得的RNA溶液在260nm波長下的吸光值A(chǔ)260，按照I個單位的A260=40 u g/mL的RNA濃度，再按照初始樣品的量進行轉(zhuǎn)換，得出步驟I使用砸碰錘提取脂肪總RNA的量為10.5ug/100mg樣品，步驟2提取脂肪總RNA的量為1.5ug/100mg樣品。
【權(quán)利要求】
1.一種砸碰錘，由錘體和與所述錘體固定連接的手柄組成,其特征在于:所述錘體由一可開關(guān)的密閉盒體和與所述密閉盒體一端固定連接的彈性部件組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的砸碰錘，其特征在于:所述密閉盒體由相互配合的蓋體和杯體組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的砸碰錘，其特征在于:所述彈性部件為橡膠塊。
4.根據(jù)權(quán)利要求1一3中任一所述的砸碰錘，其特征在于:所述杯體為圓柱型腔體，其側(cè)壁是透明的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1一4中任一所述的砸碰錘，其特征在于:所述橡膠塊為以與所述密閉盒體的連接面為底面的圓柱體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1一5中任一所述的砸碰錘，其特征在于:所述密閉盒體的高為8.0—14.0cm,底面直徑為 4.0一6.0cm。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的砸碰錘，其特征在于:所述密閉盒體的高為10.0cm，底面直徑為 4.0cm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1一7中任一所述的砸碰錘，其特征在于:所述橡膠塊的高為1.5-2.0cm,底面直徑為 4.0一6.0cm。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所 述的砸碰錘，其特征在于:所述橡膠塊的高為1.8cm，底面直徑為4.0cm0
【文檔編號】C12M1/00GK103740580SQ201310060725
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年2月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年2月26日
【發(fā)明者】甘尚權(quán), 高蕊, 王新華, 沈敏 申請人:新疆農(nóng)墾科學(xué)院