專利名稱：一種利用傳代雞胚成纖維細(xì)胞制備傳染性法氏囊病毒活疫苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為一種利用傳代雞胚成纖維細(xì)胞制備傳染性法氏囊病毒活疫苗的方法，屬于生物疫苗領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
雞傳染性法氏囊病(Infeetious Bursal Disease, IBD)是由傳染性法氏囊病毒(Infeetious Bursal Disease Virus, IBDV)引起的一種高度接觸性傳染病,是目前危害世界養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一，主要侵害雛雞和青年雞的法氏囊器官，該病的危害不僅直接造成雞只死亡、增加淘汰率、影響增重，更重要的是破壞法氏囊中的B淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致免疫抑制，使病雞更易感其它疫病，對(duì)疫苗接種的免疫應(yīng)答下降或喪失。由于IBD在外界環(huán)境中較為穩(wěn)定，采取消毒和隔離措施來(lái)控制本病不易達(dá)到目的。本病至今仍無(wú)有效的治療方法，預(yù)防該病最行之有效的辦法就是疫苗的接種。目前，市售的法氏囊疫苗絕大多數(shù)為雞胚組織苗，相對(duì)于細(xì)胞苗而言，其具有成本高、產(chǎn)品質(zhì)量批間差較大、且容易產(chǎn)生雞源性潛在疾病的感染等缺點(diǎn)。2011年初，哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司分離了一株法氏囊病毒(命名為:H11株)，其具有在雞胚成纖維細(xì)胞上增值的特性，基于此，本研究針對(duì)該毒種良好的細(xì)胞噬性，從接種材料、培養(yǎng)液改良、培養(yǎng)環(huán)境維護(hù)、凍干保護(hù)劑組分等方面，對(duì)現(xiàn)有的生產(chǎn)方法進(jìn)行了改良，獨(dú)創(chuàng)了新的傳代細(xì)胞培養(yǎng)方法，按照本發(fā)明方法制備得到的活 疫苗具有耐熱性能好，病毒滴度高，穩(wěn)定性好，適合進(jìn)行大規(guī)模疫苗生產(chǎn)的特點(diǎn)，故而，申請(qǐng)人提出對(duì)優(yōu)化過(guò)接種材料、培養(yǎng)液改良、培養(yǎng)環(huán)境維護(hù)、凍干保護(hù)劑組分等條件的新生產(chǎn)方法進(jìn)行專利保護(hù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的為提供一種利用傳代雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)制備傳染性法氏囊病毒(IBDV)活疫苗的方法。按照本發(fā)明方法制備得到的活疫苗相較于雞胚組織苗，病毒含量、產(chǎn)品合格率和免疫攻毒保護(hù)率都有顯著的提高，疫苗的耐熱性能顯著，并且半成品陽(yáng)性雜檢率和單位體積的生產(chǎn)成本都有明顯的降低。本發(fā)明的一種利用傳代雞胚成纖維細(xì)胞制備傳染性法氏囊病毒活疫苗的方法，其特征在于包括以下步驟:(1)生產(chǎn)用毒種制備①毒種繁殖將毒種用滅菌生理鹽水作IO3 IO4倍稀釋后，接種單層雞胚成纖維細(xì)胞；棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液，按培養(yǎng)液體積的1/10接毒，37°C吸附I小時(shí)，加入培養(yǎng)液，并向其添加1%體積的10%還原型谷胱甘肽溶液；37°C，5%C02條件下，培養(yǎng)3 4天，待80%細(xì)胞出現(xiàn)特異性病變時(shí)收獲病毒液；于_20°C冰柜中反復(fù)凍融3次，收獲于滅菌容器內(nèi)，_20°C保存；②毒種鑒定
符合生產(chǎn)用種子標(biāo)準(zhǔn)；③毒種保存在-20°c以下保存，不超過(guò)9個(gè)月；④毒種繼代不超過(guò)3代；(2)傳代細(xì)胞的制備取9 10日齡SPF雞胚，制備雞胚成纖維細(xì)胞，37°C培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的胰酶溶液進(jìn)行消化，加入原體積2倍的含10%初生牛血清的DMEM，吹打均勻，再取原體積細(xì)胞液至另外細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，直至長(zhǎng)成單層，傳代培養(yǎng)，傳代次數(shù)不超過(guò)5代；(3)傳染性法氏囊病毒病毒液的制備①接種棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液，取生產(chǎn)用種毒，用滅菌生理鹽水作IO3 IO4倍稀釋，按培養(yǎng)液體積的1/10接種傳代培養(yǎng)后的單層雞胚成纖維細(xì)胞；37°C吸附I小時(shí)，加入培養(yǎng)液，并向其中添加1%體積的10%還原型谷胱甘肽溶液，輕輕混勻，37°C培養(yǎng)；②培養(yǎng)病毒接種24小時(shí)后，每6小時(shí)向培養(yǎng)液中加入總體積0.2%的0.5moI/LNaHCO3,培養(yǎng)3 4天，待80%細(xì)胞出現(xiàn)特異性病變時(shí)收獲病毒液；③病毒液收獲將裝有病毒液的培養(yǎng)瓶，放入_20°C冰柜中反復(fù)凍融3次，收獲于滅菌容器內(nèi)，在-15°C以下保存，應(yīng)不超過(guò)I個(gè)月；(4)半成品檢驗(yàn)①無(wú)菌檢驗(yàn)每組病毒液分別取樣，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)；②病毒含量測(cè)定每0.2ml病毒含量應(yīng)為105_ 5EID50,方可配苗；(5)配苗及分裝①凍干保護(hù)劑的制備A液:明膠5g、蔗糖5g、糊精5g、胰蛋白胨2g，去離子水定容至100ml，116°C，高壓滅菌30min, 15°C保存,不超過(guò)7天；B液:維生素C0.lg、山梨醇2g、谷氨酸鈉1.5g，去離子水定容至100ml，0.22μπι濾膜過(guò)濾除菌，4°C保存，不超過(guò)3天；②分裝將保護(hù)劑A液、B液按1:1體積混合均勻，將檢驗(yàn)合格的細(xì)胞病毒液，按1:1體積比加入保護(hù)劑中，定量分裝；(6)凍干分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥。優(yōu)選的，所述毒種為傳染性法氏囊病毒雞胚成纖維細(xì)胞適應(yīng)株，所述的適應(yīng)株命名為Hll株，分類命名為傳染性法氏囊病毒，保藏編號(hào)為CGMCC N0.6910，保藏日期為2012年11月29日，保藏單位為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址位于北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院。進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了根據(jù)本發(fā)明所述的方法制備得到的傳染性法氏囊病毒活疫苗。及所述的傳染性法氏囊病毒活疫苗在制備預(yù)防雞傳染性法氏囊病藥物中的應(yīng)用。通過(guò)比較試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明利用傳代雞胚成纖維細(xì)胞生產(chǎn)疫苗的新方法比利用雞胚生產(chǎn)疫苗的老方法具有以下優(yōu)點(diǎn):1.改進(jìn)的細(xì)胞培養(yǎng)方法,病毒含量高于雞胚培養(yǎng)和普通原代CEF培養(yǎng)方法。2.病毒制造原料為傳代雞胚成纖維細(xì)胞，使產(chǎn)品質(zhì)量均一，生產(chǎn)成本顯著降低。3.添加了還原性谷胱甘肽的改良型細(xì)胞培養(yǎng)液,使得病毒在增殖速度和產(chǎn)量上都優(yōu)于目前雞胚培養(yǎng)方法和普通原代CEF培養(yǎng)方法。4.病毒培養(yǎng)過(guò)程添加NaHCO3,為病毒的增殖提供穩(wěn)定的pH環(huán)境，延長(zhǎng)了病毒增殖曲線高峰區(qū)的時(shí)間。

5.全過(guò)程不添加任何抗生素。6.優(yōu)化的耐熱凍干保護(hù)劑組分，使成品保存條件為2 8°C保存。7.細(xì)胞苗的免疫效力不低于利用雞胚生產(chǎn)的傳染性法氏囊活疫苗。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。材料和試劑:毒株:傳染性法氏囊病毒雞胚成纖維細(xì)胞適應(yīng)株Hl I株，保藏編號(hào)為CGMCCN0.6910，保藏日期為2012年11月29日，保藏單位為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址位于北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院。材料:9 10日齡SPF雞胚為哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司SPF雞場(chǎng)種蛋在本研發(fā)中心孵化、雞胚原代成纖維細(xì)胞由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司研發(fā)中心制備、0.22 μ m濾膜購(gòu)自PALL公司。試劑:還原型谷胱甘肽購(gòu)自Sigma、胰酶購(gòu)自Gibco、明膠購(gòu)自Sigma、鹿糖購(gòu)自國(guó)藥化學(xué)試劑有限公司、糊精購(gòu)自上海酶聯(lián)生化試劑有限公司、胰蛋白胨購(gòu)自Amresco、維生素C購(gòu)自SIGMA、山梨醇購(gòu)自Amresco、谷氨酸鈉購(gòu)自MBCHEM實(shí)施例1利用傳代雞胚成纖維細(xì)胞生產(chǎn)IBDV Hll活疫苗(I)生產(chǎn)用毒種制備①毒種繁殖將毒種Hll株(保藏編號(hào)為CGMCC N0.6910)用滅菌生理鹽水作IO3 IO4倍稀釋后，接種單層雞胚成纖維細(xì)胞；棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液，按培養(yǎng)液體積的1/10接毒，37°c吸附I小時(shí)，加入培養(yǎng)液，并向其添加1%體積的10%還原型谷胱甘肽溶液；37°C，5%C02條件下，培養(yǎng)3 4天，待80%細(xì)胞出現(xiàn)特異性病變時(shí)收獲病毒液；于_20°C冰柜中反復(fù)凍融3次，收獲于滅菌容器內(nèi)，-20°C保存；②毒種鑒定符合生產(chǎn)用種子標(biāo)準(zhǔn)；③毒種保存在_20°C以下保存，不超過(guò)9個(gè)月；④毒種繼代不超過(guò)3代；(2)傳代細(xì)胞的制備取9 10日齡SPF雞胚，制備雞胚成纖維細(xì)胞，37°C培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的胰酶溶液進(jìn)行消化，加入原體積2倍的含10%初生牛血清的DMEM，吹打均勻，再取原體積細(xì)胞液至另外細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，直至長(zhǎng)成單層，即可使用；傳代次數(shù)不超過(guò)5代；(3)傳染性法氏囊病毒病毒液的制備①接種棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液，取生產(chǎn)用種毒，用滅菌生理鹽水作IO3 IO4倍稀釋，按培養(yǎng)液體積的1/10接種傳代培養(yǎng)后的單層雞胚成纖維細(xì)胞；37°C吸附I小時(shí)，加入培養(yǎng)液，并向其中添加1%體積的10%還原型谷胱甘肽溶液，輕輕混勻，37°C培養(yǎng)；②培養(yǎng)病毒接種24小時(shí)后，每6小時(shí)向培養(yǎng)液中加入總體積0.2%的0.5moI/LNaHCO3,培養(yǎng)3 4天，待80%細(xì)胞出現(xiàn)特異性病變時(shí)收獲病毒液；③病毒液收獲將裝有病毒液的培養(yǎng)瓶，放入_20°C冰柜中反復(fù)凍融3次，收獲于滅菌容器內(nèi)，在-15°C以下保存，應(yīng)不超過(guò)I個(gè)月；(4)半成品檢驗(yàn)①無(wú)菌檢驗(yàn)每組病毒液分別取樣，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)；②病毒含量測(cè)定每0.2ml病毒含量應(yīng)為105_ 5EID50,方可配苗；(5)配苗及分裝①凍干保護(hù)劑的制備A液:明膠5g、蔗糖5g、糊精5g、胰蛋白胨2g，去離子水定容至100ml，116°C，高壓滅菌30min, 15°C保存,不超過(guò)7天；B液:維生素C0.lg、山梨醇2g、谷氨酸鈉1.5g,去離子水定容至100ml,0.22μηι濾膜過(guò)濾除菌，4°C保存，不超過(guò)3天；②分裝將保護(hù)劑A液、B液按1:1體積混合均勻，將檢驗(yàn)合格的細(xì)胞病毒液，按1:1體積比加入保護(hù)劑中，定量分裝；(6)凍干

分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥。
試驗(yàn)例I利用雞胚生產(chǎn)IBDV活疫苗1、生產(chǎn)用毒種制備(I)毒種繁殖將毒種Hll株(保藏編號(hào)為CGMCC N0.6910)用滅菌生理鹽水作100 1000倍稀釋后，經(jīng)絨毛尿囊膜途徑接種10 12日齡SPF雞胚，每胚0.2ml。置37°C孵育，選接種48 120小時(shí)死亡雞胚，收取病變胎兒及尿囊膜，裝于無(wú)菌容器內(nèi)，同時(shí)吸取部分雞胚液作無(wú)菌檢驗(yàn)。將培養(yǎng)無(wú)菌的雞胚、尿囊膜剪碎混合，用普通肉湯或同批尿囊液制成5倍稀釋的乳齊U，離心去渣，上清液加適量的抗生素分裝，_20°C保存。注明收獲日期、毒種代次及裝量。(2)毒種鑒定應(yīng)符合生產(chǎn)用種子標(biāo)準(zhǔn)。(3)毒種保存在-10°C以下保存，應(yīng)不超過(guò)6個(gè)月。(4)毒種繼代應(yīng)不超過(guò)3代。2、制苗材料選擇 選擇發(fā)育良好，10 12日齡SPF雞胚作為制苗材料。3、制苗毒液的制備( I)接種取生產(chǎn)用毒種Hll株，用滅菌生理鹽水稀釋50 100倍，每胚經(jīng)尿囊腔或絨毛尿囊膜接種0.1 0.2ml，封口后，置37°C繼續(xù)孵育，不必翻蛋。(2)孵育和觀察接種后，將36小時(shí)前死亡的雞胚棄去。36小時(shí)后，每隔4 8小時(shí)照蛋一次，隨時(shí)取出48 168小時(shí)死亡雞胚，置2 8°C冷卻。(3)收獲將冷卻4 24小時(shí)的雞胚取出，用碘酊消毒氣室部，以無(wú)菌手術(shù)除去蛋殼，收獲胎兒和尿囊膜，分組置于無(wú)菌容器內(nèi)，置-10°c以下冷凍保存。在收獲的同時(shí)，應(yīng)逐個(gè)檢查胎兒病變，須具有傳染性法氏囊病病毒Hll株所引起的特異性病變。4、半成品檢驗(yàn)(I)無(wú)菌檢驗(yàn)每組雞胚分別取樣，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。(2)病毒含量測(cè)定每0.2ml病毒含量應(yīng)為105_ 5EID50,方可配苗。5、配苗及分裝將檢驗(yàn)合格的雞胚、雞胚尿囊膜磨碎，按適當(dāng)比例加入5%蔗糖脫脂奶制成乳劑，同時(shí)加入適量的抗生素充分混勻，定量分裝。6、凍干分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥。試驗(yàn)例2利用原代雞胚成纖維細(xì)胞生產(chǎn)IBDV Hll活疫苗(I)生產(chǎn)用毒種制備
①毒種繁殖將毒種Hll株(保藏編號(hào)為CGMCC N0.6910)用滅菌生理鹽水作IO3 IO4倍稀釋后，接種單層雞胚成纖維細(xì)胞；棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液，按培養(yǎng)液體積的1/10接毒，37°c吸附I小時(shí)，加入培養(yǎng)液，并向其添加1%體積的10%還原型谷胱甘肽溶液；37°C，5%C02條件下，培養(yǎng)3 4天，待80%細(xì)胞出現(xiàn)特異性病變時(shí)收獲病毒液；于_20°C冰柜中反復(fù)凍融3次，收獲于滅菌容器內(nèi)，_20°C保存；②毒種鑒定符合生產(chǎn)用種子標(biāo)準(zhǔn)；③毒種保存在_20°C以下保存，不超過(guò)9個(gè)月；④毒種繼代不超過(guò)3代；(2)制苗材料制備取9 10日齡SPF雞胚，制備雞胚成纖維細(xì)胞，37°C培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，SP可使用；(3)傳染性法氏囊病毒病毒液的制備①接種
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棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液，取生產(chǎn)用種毒，用滅菌生理鹽水作IO3 IO4倍稀釋，按培養(yǎng)液體積的1/10接種單層原代雞胚成纖維細(xì)胞；37°C吸附I小時(shí)，加入培養(yǎng)液，并向其中添加1%體積的10%還原型谷胱甘肽溶液，輕輕混勻，37°C培養(yǎng)；②培養(yǎng)病毒接種24小時(shí)后，每6小時(shí)向培養(yǎng)液中加入總體積0.2%的0.5moI/LNaHCO3,培養(yǎng)3 4天，待80%細(xì)胞出現(xiàn)特異性病變時(shí)收獲病毒液；③病毒液收獲將裝有病毒液的培養(yǎng)瓶，放入_20°C冰柜中反復(fù)凍融3次，收獲于滅菌容器內(nèi)，在-15°C以下保存，應(yīng)不超過(guò)I個(gè)月；(4)半成品檢驗(yàn)①無(wú)菌檢驗(yàn)每組病毒液分別取樣，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)；②病毒含量測(cè)定每0.2ml病毒含量應(yīng)為105_ 5EID50,方可配苗；(5)配苗及分裝①凍干保護(hù)劑的制備A液:明膠5g、蔗糖5g、糊精5g、胰蛋白胨2g，去離子水定容至100ml，116°C，高壓滅菌30min, 15°C保存,不超過(guò)7天；B液:維生素C0.lg、山梨醇2g、谷氨酸鈉1.5g,去離子水定容至100ml,0.22μηι濾膜過(guò)濾除菌，4°C保存，不超過(guò)3天；②分裝將保護(hù)劑A液、B液按1:1體積混合均勻，將檢驗(yàn)合格的細(xì)胞病毒液，按1:1體積比加入保護(hù)劑中，定量分裝；(6)凍干分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥。試驗(yàn)例3通過(guò)本發(fā)明傳代細(xì)胞培養(yǎng)獲得的細(xì)胞毒與雞胚培養(yǎng)獲得的組織毒和普通原代CEF培養(yǎng)獲得的細(xì)胞毒相比較，現(xiàn)將其中一些指標(biāo)的比較結(jié)果總結(jié)如下:表I兩種種毒雞胚毒力的比較
權(quán)利要求
1.一種利用傳代雞胚成纖維細(xì)胞制備傳染性法氏囊病毒活疫苗的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)生產(chǎn)用毒種制備 ①毒種繁殖 將傳染性法氏囊病毒毒種用滅菌生理鹽水作IO3 IO4倍稀釋后，接種單層雞胚成纖維細(xì)胞；棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液，按培養(yǎng)液體積的1/10接毒，37°C吸附I小時(shí)，加入培養(yǎng)液，并向其添加1%體積的10%還原型谷胱甘肽溶液；37°C，5%C02條件下，培養(yǎng)3 4天，待80%細(xì)胞出現(xiàn)特異性病變時(shí)收獲病毒液；于_20°C冰柜中反復(fù)凍融3次，收獲于滅菌容器內(nèi)，_20°C保存； ②毒種鑒定 符合生產(chǎn)用種子標(biāo)準(zhǔn)； ③毒種保存 在-20°C以下保存，不超過(guò)9個(gè)月； ④毒種繼代 不超過(guò)3代； (2)傳代細(xì)胞的制備 取9 10日齡SPF雞胚，制備雞胚成纖維細(xì)胞，37°C培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的胰酶溶液進(jìn)行消化，加入原體積2倍的含10%初生牛血清的DMEM，吹打均勻，再取原體積細(xì)胞液至另外細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，直至長(zhǎng)成單層，傳代培養(yǎng)，傳代次數(shù)不超過(guò)5代； (3)傳染性法氏囊病毒病毒液的制備 ①接種 棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液，取生產(chǎn)用種毒，用滅菌生理鹽水作IO3 IO4倍稀釋，按培養(yǎng)液體積的1/10接種傳代培養(yǎng)后的單層雞胚成纖維細(xì)胞；37°C吸附I小時(shí)，加入培養(yǎng)液，并向其中添加1%體積的10%還原型谷胱甘肽溶液，輕輕混勻，37°C培養(yǎng)； ②培養(yǎng) 病毒接種24小時(shí)后，每6小時(shí)向培養(yǎng)液中加入總體積0.2%的0.5moI/LNaHCO3,培養(yǎng)3 4天，待80%細(xì)胞出現(xiàn)特異性病變時(shí)收獲病毒液； ③病毒液收獲 將裝有病毒液的培養(yǎng)瓶，放入_20°C冰柜中反復(fù)凍融3次，收獲于滅菌容器內(nèi)，在_15°C以下保存，應(yīng)不超過(guò)I個(gè)月； (4)半成品檢驗(yàn) ①無(wú)菌檢驗(yàn) 每組病毒液分別取樣，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)； ②病毒含量測(cè)定 每0.2ml病毒含量應(yīng)為IO5 5EID5tl，方可配苗； (5)配苗及分裝 ①凍干保護(hù)劑的制備 A液:明膠5g、蔗糖5g、糊精5g、胰蛋白胨2g，去離子水定容至100ml，116°C，高壓滅菌30min, 15°C保存，不超過(guò)7天；B液:維生素C0.lg、山梨醇2g、谷氨酸鈉1.5g,去離子水定容至IOOml,0.22μηι濾膜過(guò)濾除菌，4°C保存，不超過(guò)3天； ②分裝 將保護(hù)劑A液、B液按1:1體積混合均勻，將檢驗(yàn)合格的細(xì)胞病毒液，按1:1體積比加入保護(hù)劑中，定量分裝； (6)凍干 分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的傳染性法氏囊病毒毒種為傳染性法氏囊病毒雞胚成纖維細(xì)胞適應(yīng)株，所述的適應(yīng)株命名為Hll株，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCCN0.6910。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法制備得到的傳染性法氏囊病毒活疫苗。
4.權(quán)利要求3所述的傳染性法氏囊病毒活疫苗在制備預(yù)防雞傳染性法氏囊病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用傳代雞胚成纖維細(xì)胞制備傳染性法氏囊病毒活疫苗的方法。本發(fā)明依次經(jīng)過(guò)生產(chǎn)用毒種制備、制苗材料制備、IBDV細(xì)胞病毒液制備、成品檢驗(yàn)、配苗及分裝、凍干等步驟制得IBDV活疫苗，本發(fā)明從接種材料、培養(yǎng)液改良、培養(yǎng)環(huán)境維護(hù)、凍干保護(hù)劑組分等方面，對(duì)現(xiàn)有的生產(chǎn)方法進(jìn)行了改良，獨(dú)創(chuàng)了新的傳代細(xì)胞培養(yǎng)方法。此外，還包括通過(guò)本發(fā)明方法制得的IBDV活疫苗在預(yù)防雞傳染性法氏囊病中的應(yīng)用。由本發(fā)明方法制備得到的IBDV活疫苗具有耐熱性能好，病毒滴度高，穩(wěn)定性好，適合進(jìn)行大規(guī)模疫苗生產(chǎn)的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N7/00GK103143007SQ201310061699
公開(kāi)日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2013年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月27日
發(fā)明者劉洪斌, 張楊, 楊萬(wàn)秋, 丁國(guó)杰, 李東偉, 楊朋欣, 焦利紅, 孫心, 李敏, 張明艷 申請(qǐng)人:哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司