專利名稱：Dna片段及其在制備雄性不育辣椒中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種DNA片段及其在制備雄性不育辣椒中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
辣椒(Capsicumannuum L.)為爺科(Solanaceae)辣椒屬(Capsicum)草本植物，是一種重要的世界性蔬菜作物，具有明顯的雜種優(yōu)勢。從遺傳角度可將雄性不育劃分為兩大類，一類是細(xì)胞質(zhì)雄性不育(cytoplasmic male sterility, CMS),育性由細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核基因共同控制；另一類是細(xì)胞核雄性不育(nuclear male sterility, NMS),育性僅由細(xì)胞核基因控制，不受細(xì)胞質(zhì)影響。對辣椒雄性不育形態(tài)學(xué)研究來看，雄性不育植株的花藥出現(xiàn)干癟現(xiàn)象，花藥中的花粉粒數(shù)量急劇減小。對辣椒小孢子敗育機(jī)理進(jìn)行的細(xì)胞學(xué)研究認(rèn)為，辣椒雄性不育均直接或間接與絨氈層的發(fā)育相關(guān)。VIGS是指攜帶植物功能基因cDNA的病毒，在侵染植物體后可誘導(dǎo)植物發(fā)生基因沉默而出現(xiàn)表型變異，從而可以通過植物表型或生理指標(biāo)上的變化反映該基因的功能。煙草脆裂病毒(TRV)可有效的把沉默信號傳遞到植物的生長點(diǎn)，為研究植物發(fā)育器官中的基因功能提供了可靠的途徑。TRV可以有力地蔓延整個植物組織，包括分生組織，而且侵染的全部癥狀與其它病毒相比更加溫和。TRV是一種雙鏈病毒，由RNAl和RNA2兩條單鏈RNA組成，RNAl編碼RNA依賴的RNA聚合酶，RNA2編碼外殼蛋白，目的基因通常被插入到RNA2結(jié)構(gòu)中。PI基因?qū)儆贛ADS-box基因家族中的AP3/PI亞家族成員，為ABC花發(fā)育模型理論中的B功能基因。在花發(fā)育的ABC模型理論中，B類基因控制雙子葉植物花瓣和雄蕊的發(fā)育，屬于MADS-box基因家族，編碼轉(zhuǎn)錄因子，其功能喪失會使花瓣轉(zhuǎn)變?yōu)檩嗥?，雄蕊轉(zhuǎn)變?yōu)樾钠ぁM南芥等植物中控制花瓣和雄蕊發(fā)育的B類基因是APETALA3 (AP3)和PISTILLATA(PI)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種DNA片段及其在制備雄性不育辣椒中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的一種DNA片段，如序列表的序列2自5’末端第729至924位核苷酸所示。該DNA片段是從辣椒品種“伏地尖”中發(fā)現(xiàn)的。含有所述DNA片段的重組載體或重組菌均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述重組載體為將所述DNA片段插入表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。所述表達(dá)載體具體可為質(zhì)粒PTRV2。所述重組載體具體可為在質(zhì)粒pTRV2的EcoR I和BamH I酶切位點(diǎn)之間插入所述DNA片段得到的重組質(zhì)粒。所述DNA片段編碼的RNA片段也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明還保護(hù)一種試劑盒，由重組質(zhì)粒pTRV2-pPPI和質(zhì)粒pTRVl組成。所述重組質(zhì)粒pTRV2-pPPI可為將所述DNA片段插入質(zhì)粒pTRV2的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。所述重組質(zhì)粒pTRV2-pPPI具體可為在質(zhì)粒pTRV2的EcoR I和BamH I酶切位點(diǎn)之間插入所述DNA片段得到的重組質(zhì)粒。所述試劑盒的功能為如下(a)或(b):(a)制備雄性不育辣椒；(b)抑制PPI基因表達(dá)；所述PPI基因?yàn)榫幋aPPI蛋白的DNA分子；所述PPI蛋白為如下(c)或(d): (c)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(d)將序列I的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物雄性育性相關(guān)的由序列I衍生的蛋白質(zhì)。所述PPI基因具體可為如下I)至4)中任一所述的DNA分子:I)編碼區(qū)如序列表中序列2自5’端第81至728位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2所示的DNA分子；3)在嚴(yán)格條件下與I)或2)限定的DNA序列雜交且編碼植物雄性育性相關(guān)蛋白的DNA分子；4)與I)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼植物雄性育性相關(guān)蛋白的DNA分子。所述嚴(yán)格條件為在0.1 X SSPE (或0.1XSSC)、0.1% SDS的溶液中，65°C條件下雜交并洗膜。本發(fā)明還保護(hù)所述試劑盒的應(yīng)用，為如下(e)或(f):(e)制備雄性不育辣椒；(f)抑制所述PPI基因表達(dá)。本發(fā)明還保護(hù)一種培育雄性不育辣椒的方法，是在目的辣椒中導(dǎo)入所述重組質(zhì)粒pTRV2-pPPI和質(zhì)粒pTRVl，得到雄性不育辣椒。所述目的辣椒具體可為辣椒品種“伏地尖”。所述雄性不育具體體現(xiàn)為 花藥發(fā)育變小和/或花藥干癟。本發(fā)明還保護(hù)一種抑制辣椒的所述PPI基因表達(dá)的方法，是在辣椒中導(dǎo)入所述重組質(zhì)粒pTRV2-pPPI和質(zhì)粒pTRVl，從而抑制辣椒中的所述PPI基因表達(dá)。所述辣椒具體可為辣椒品種“伏地尖”。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一種特異DNA片段，本發(fā)明還保護(hù)將所述DNA片段插入質(zhì)粒pTRV2的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)將重組質(zhì)粒和質(zhì)粒pTRVl導(dǎo)入辣椒后可以高效抑制辣椒中PPI基因的表達(dá)，進(jìn)而得到花藥干癟的雄性不育辣椒。應(yīng)用本發(fā)明提供的方法制備雄性不育辣椒，大大縮短了育種年限，節(jié)省了育種經(jīng)費(fèi)。本發(fā)明提供的DNA片段及其應(yīng)用方法為辣椒雄性不育植株的獲得提供了新方法，為辣椒育種的研究提供了新思路，同時為其它園藝作物育性研究提供了重要的技術(shù)和理論支持。本發(fā)明為辣椒新品種的選育及實(shí)現(xiàn)農(nóng)民種植辣椒經(jīng)濟(jì)效益的提高提供了有力的途徑，具有重大應(yīng)用前景。


圖1為質(zhì)粒pTRV2的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為重組質(zhì)粒pTRV2_pPPI的結(jié)構(gòu)示意圖。圖3為辣椒植株花的照片。圖4為辣椒花粉粒的I個視野的部分截圖。圖5為PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖。
具體實(shí)施方式
以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。實(shí)施例中，酶切所用的各種限制性內(nèi)切酶和酶聯(lián)反應(yīng)所用的T4連接酶均購自MBIfermentas公司，反轉(zhuǎn)錄用的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶購自TAKARA公司，RNA提取試劑盒購自美國Promega 公司。煙草脆裂病毒介導(dǎo)的基因沉默需要雙價病毒載體，即質(zhì)粒pTRVl和質(zhì)粒pTRV2，質(zhì)粒pTRVl攜帶煙草脆裂病毒RNAl的編碼基因，質(zhì)粒pTRV2攜帶煙草脆裂病毒RNA2的編碼基因，使用時將目的片段插入RNA2的編碼基因中。辣椒品種“伏地尖”(即文獻(xiàn)中的伏地尖辣椒):公眾可從中國農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得；參考文獻(xiàn):王仁祥、沈美娟，伏地尖辣椒的種性研究，湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報1993年03期，270-275。根癌農(nóng)桿菌GV3101:公眾可從中國農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得；參考文獻(xiàn):Delay ofpostharvest ripening and senescence of tomato fruit throughvirus—inducedLeACS2gene silencing, Postharvest Biology and Technology42 (2006)8 - 15。質(zhì)粒pTRVl (又稱載體pTRVl):公眾可從中國農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得；參考文獻(xiàn):YuleLiu,Michael Schiff and S.P.Dinesh-Kumar, Virus-1nduced gene silencing intomato, The Plant Journal (2002)31(6)，777-786。質(zhì)粒pTRV2 (又稱載體pTRV2，結(jié)構(gòu)示意圖見圖1):公眾可從中國農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得；參考文獻(xiàn):Yule Liu, Michael Schiff and S.P.Dinesh-Kumar, Virus-1nduced genesilencing in tomato, The Plant Journal(2002)31(6)，777-786。實(shí)施例1、用于干擾辣椒PPI基因表達(dá)的特異DNA片段的發(fā)現(xiàn)辣椒的PPI基因?qū)儆贛ADS-bo`x基因家族中控制花器官發(fā)育的B類基因，主要控制花器官發(fā)育中花瓣和雄蕊的發(fā)育，是花器官正常發(fā)育過程中的重要基因。1、2012年春天在中國農(nóng)業(yè)大學(xué)上莊實(shí)驗(yàn)站大棚內(nèi)常規(guī)種植“伏地尖”在開花期取花瓣已開始變白的花蕾，剝?nèi)』ㄋ幜⒓从靡旱鋬霾⒃?70°C保存，取花藥，按照美國Promega 公司 SV Total RNA Isolation System kit 操作說明書提取總 RNA,用 M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA。2、根據(jù)SSH技術(shù)構(gòu)建的辣椒育性恢復(fù)基因誘導(dǎo)表達(dá)的消減cDNA，從中篩選得到的一個EST片段，與擬南芥AP3基因有很高的同源性，進(jìn)一步利用RACE技術(shù)獲得了該基因全長，命名為PPI基因。辣椒的PPI基因如序列表的序列2所不，其開放閱讀框?yàn)樾蛄斜淼男蛄?自5’末端第81至728位核苷酸，編碼序列表的序列I所示的蛋白質(zhì)。3、根據(jù)辣椒的PPI基因序列，篩選獲得了一個可以干擾辣椒PPI基因表達(dá)的特異DNA片段，如序列表的序列2自5’末端第729至924位核苷酸所示。實(shí)施例2、干擾載體的構(gòu)建1、合成序列表的序列2所示的雙鏈DNA分子。2、以步驟I合成的雙鏈DNA分子為模板，用V-PPIs和V-PPIas組成的引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。V-PPIs ( h游引物):5’ -GGAATTC CTGCATTATTAATTAAIT-3’(下劃線標(biāo)注 EcoR I識別序列)；
V-PPIas (下游引物):5’ -CGGGATCC AGTCAGTACTCCATCTA-3’ (下滑線標(biāo)注 BamH I識別序列)。PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件:94°C預(yù)變性5分鐘；94°C 30秒、45°C 30秒、72°C 40秒，27個循環(huán)；72°C延伸5分鐘。3、用限制性內(nèi)切酶EcoR I和BamH I雙酶切步驟2的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，回收酶切產(chǎn)物。4、用限制性內(nèi)切酶EcoR I和BamH I雙酶切質(zhì)粒pTRV2，回收載體骨架(約9650bp)。5、將步驟3的酶切產(chǎn)物和步驟4的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒pTRV2_pPPI (結(jié)構(gòu)示意圖見圖2)。根據(jù)測序結(jié)果對重組質(zhì)粒pTRV2-pPPI進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下:在質(zhì)粒pTRV2的EcoR I和BamH I酶切位點(diǎn)之間插入了序列表的序列2自5’末端第729至924位核苷酸所示的DNA分子。實(shí)施例3、應(yīng)用重組質(zhì)粒pTRV2_pPPI制備雄性不育植株一、重組農(nóng)桿菌的制備1、將實(shí)施例2構(gòu)建的重組質(zhì)粒pTRV2_pPPI轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞，得到重組農(nóng)桿菌甲。2、將質(zhì)粒pTRVl轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞，得到重組農(nóng)桿菌乙。

3、將質(zhì)粒pTRV2轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞，得到重組農(nóng)桿菌丙。二、轉(zhuǎn)基因植株的獲得1、將辣椒品種“伏地尖”的種子進(jìn)行高溫處理(先40°C恒溫烘箱中放置2天，然后75°C恒溫烘箱中放置I天；目的是預(yù)防種子攜帶病毒)，然后催芽(先用55°C蒸餾水浸種15分鐘，然后用25-30°C蒸餾水浸泡24小時，然后將種子放入帶有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，25-30°C培養(yǎng)，直至種子裂嘴)。2、將完成步驟I的種子播種于128孔穴盤中(基質(zhì)為等質(zhì)量混合的草炭和蛭石)，播種后覆蛭石于表面，澆水，正常培養(yǎng)至兩片真葉期(培養(yǎng)條件:白天溫度為24°C，夜間溫度為16°C，每天光照時間16h)。3、菌懸液甲的制備①將重組農(nóng)桿菌甲接種至IOml LB培養(yǎng)基(含50 u g/mL卡那霉素和25 u g/mL利福平)，28°C、200rpm振蕩培養(yǎng)過夜。②取20ml步驟①得到的菌液，接種至100ml LB培養(yǎng)基(含10mM2_嗎啉乙磺酸、20mM乙酰丁香酮、50 ii g/mL卡那霉素和25 y g/mL利福平)，28°C、200rpm振蕩培養(yǎng)過夜。③取步驟②得到的菌液，離心收集菌體，然后用侵染液(含10mM2_嗎啉乙磺酸、200mM乙酰丁香酮、IOmM MgCl 2的蒸餾水；用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值到5.6)重懸菌體，得到OD600nm=L 0-2.0的菌懸液甲。4、菌懸液乙的制備用重組農(nóng)桿菌乙代替重組農(nóng)桿菌甲，其它同步驟3，得到OD6tltol=L 0-2.0的菌懸液乙。5、將菌懸液甲和菌懸液乙等體積混合,室溫暗培養(yǎng)4-6小時。6、用注射器吸取步驟5得到的混合液，對步驟I得到的辣椒幼苗進(jìn)行如下注射:在葉片背面葉脈之間注射約I平方厘米的注射水潰斑，兩片子葉均注射。三、轉(zhuǎn)空載體植株的獲得用重組農(nóng)桿菌丙代替重組農(nóng)桿菌甲，其它同步驟二。四、花粉育性鑒定將20株完成步驟二的注射的植株(轉(zhuǎn)基因植株)、5株完成步驟三的注射的植株(轉(zhuǎn)空載體植株)和5株辣椒品種“伏地尖”分別進(jìn)行如下鑒定，1、將辣椒植株轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)室，22°C培養(yǎng)50天(16小時光照/8小時黑暗)，轉(zhuǎn)空載體植株的所有植株的花均形態(tài)正常。辣椒品種“伏地尖”的所有植株的花均形態(tài)正常。轉(zhuǎn)空載體植株的所有植株的花均形態(tài)正常。20株轉(zhuǎn)基因植株中，7株花呈現(xiàn)明顯的雄性不育表型，其它13株形態(tài)正常，即干擾效率為35%。花的照片見圖3 (A為辣椒品種“伏地尖”的花，B為轉(zhuǎn)基因植株的雄性不育表型的花)。2、花粉采集取充分成熟將要開花的花蕾，剝除花被片等，取出花藥。3、鏡檢將花藥置于載玻片上，加I滴蒸餾水，用鑷子將花藥充分搗碎，使花粉粒釋放，再加2滴碘-碘化鉀溶液(將3g碘化鉀和Ig碘溶于IOOml蒸餾水)，蓋上蓋玻片，于放大倍數(shù)40X顯微鏡下觀察。每個植株取10視野取平均值，統(tǒng)計(jì)形態(tài)正常的花粉的數(shù)量，以數(shù)量表示花粉的育性。辣椒品種“伏地尖 ”中，第一株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為19個(十個視野的平均值)，第二 株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為15個(十個視野的平均值)，第三株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為17個(十個視野的平均值)，第四株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為16個(十個視野的平均值)，第五株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為20個(十個視野的平均值)。轉(zhuǎn)空載體植株中，第一株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為15個(十個視野的平均值)，第二株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為17個(十個視野的平均值)，第三株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為18個(十個視野的平均值)，第四株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為13個(十個視野的平均值)，第五株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為17個(十個視野的平均值)。顯示雄性不育表型的7株轉(zhuǎn)基因植株中，第一株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為0個(十個視野的平均值)，第二株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為0個(十個視野的平均值)，第三株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為0個(十個視野的平均值)，第四株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為0個(十個視野的平均值)，第五株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為0個(十個視野的平均值)，第六株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為0個(十個視野的平均值)。第七株植株每個視野中正常發(fā)育的花粉粒為平均值為0個(十個視野的平均值)。顯示雄性不育表型的轉(zhuǎn)基因植株可以觀察到視野中有絮狀物，即發(fā)育不正常的花粉壁碎屑?！昀苯菲贩N“伏地尖”的I個視野的部分截圖見圖4A，一株轉(zhuǎn)空載體植株的I個視野的部分截圖見圖4B，一株顯示雄性不育表型的轉(zhuǎn)基因植株的I個視野的部分截圖見圖4C。
3、分子鑒定用Promega 公司 SV Total RNA Isolation System kit 操作說明書提取步驟 2 的轉(zhuǎn)基因植株的干癟花藥或步驟2得到的轉(zhuǎn)空載體植株的正?；ㄋ幍腞NA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，進(jìn)行PCR鑒定(內(nèi)參基因?yàn)槔苯稟ctin基因)。鑒定PPI基因的引物對由PPI s和PPI as組成，鑒定Actin基因的引物對由Acts和Act as組成。PPI s:5’ -TACTACGATGAGTGATATACTAGAT-3’ ；PPI as:5’ -AGTCAGTACTCCATCTATGTATTAG-3’。Act s:5’ -ATGGCATCATACTTTCTACAAT-3，；Act as:5， -CATCAGGTTATCAGTTAGGTCA-3，。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖見圖5。圖5中:M =Marker ；1:轉(zhuǎn)基因植株的干癟花藥；CK:轉(zhuǎn)空載體植株的正?；ㄋ?。結(jié)果表明:在轉(zhuǎn)基因植株的干癟花藥和轉(zhuǎn)空載體植株的正?；ㄋ幹?，看家基因Actin的表達(dá)量是一致的；與轉(zhuǎn)空載體植株的正?；ㄋ幭啾?，轉(zhuǎn)基因植株的干癟花藥中PPI基因的表達(dá)量顯著降低。結(jié)果表明，重組質(zhì)粒pTRV2-pPPI確實(shí)抑制了辣椒植株中PPI基因的表達(dá)，并通過抑制PPI基 因的表達(dá)得到了雄性不育植株。
權(quán)利要求
1.一種DNA片段，如序列表的序列2自5’末端第729至924位核苷酸所示。
2.含有權(quán)利要求1所述DNA片段的重組載體或重組菌。
3.如權(quán)利要求2所述的重組載體，其特征在于:所述重組載體為將權(quán)利要求1所述DNA片段插入表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。
4.如權(quán)利要求3所述的重組載體，其特征在于:所述表達(dá)載體為質(zhì)粒PTRV2。
5.權(quán)利要求1所述DNA片段編碼的RNA片段。
6.一種試劑盒，由權(quán)利要求4所述重組載體和質(zhì)粒pTRVl組成。
7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒的功能為如下(a)或(b):(a)制備雄性不育辣椒；(b)抑制PPI基因表達(dá)； 所述PPI基因?yàn)榫幋aPPI蛋白的DNA分子；所述PPI蛋白為如下(c)或(d): (c)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； Cd)將序列I的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物雄性育性相關(guān)的由序列I衍生的蛋白質(zhì)。
8.權(quán)利要求6所述試劑盒的應(yīng)用，為如下(e)或(f):(e)制備雄性不育辣椒；(f)抑制PPI基因表達(dá)； 所述PPI基因?yàn)榫幋aPPI蛋白的DNA分子；所述PPI蛋白為如下(c)或(d): (c)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； Cd)將序列I的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物雄性育性相關(guān)的由序列I衍生的蛋白質(zhì)。
9.一種培育雄性不育辣椒的方法，是在目的辣椒中導(dǎo)入權(quán)利要求4所述重組載體和質(zhì)粒pTRVl，得到雄性不育辣椒。
10.一種抑制辣椒中的PPI基因表達(dá)的方法，是在辣椒中導(dǎo)入權(quán)利要求4所述重組載體和質(zhì)粒pTRVl，從而抑制辣椒中的PPI基因表達(dá)； 所述PPI基因?yàn)榫幋aPPI蛋白的DNA分子；所述PPI蛋白為如下(c)或(d): (c)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； Cd)將序列I的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物雄性育性相關(guān)的由序列I衍生的蛋白質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種DNA片段及其在制備雄性不育辣椒中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的一種DNA片段，如序列表的序列2自5’末端第729至924位核苷酸所示。本發(fā)明還保護(hù)將所述DNA片段插入質(zhì)粒pTRV2的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)將重組質(zhì)粒和質(zhì)粒pTRV1導(dǎo)入辣椒后可以高效抑制辣椒中PPI基因的表達(dá)，進(jìn)而得到花藥干癟的雄性不育辣椒。應(yīng)用本發(fā)明提供的方法制備雄性不育辣椒，大大縮短了育種年限，節(jié)省了育種經(jīng)費(fèi)。本發(fā)明為辣椒雄性不育植株的獲得提供了新方法，為辣椒育種的研究提供了新思路，同時為其它園藝作物育性研究提供了重要的技術(shù)和理論支持，具有重大應(yīng)用前景。
文檔編號C12N15/113GK103160508SQ201310066090
公開日2013年6月19日 申請日期2013年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月1日
發(fā)明者沈火林, 馬寧, 劉辰 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)