專利名稱:脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及脆弱擬桿菌的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用。
背景技術(shù):
放射治療是腫瘤的重要治療手段之一,大約60%_70%的腫瘤患者在病程的不同時(shí)期需要接受放射治療,而放射性腸炎是盆腔、腹腔或者腹膜后惡性腫瘤放射治療后的常見并發(fā)癥,分別可累及小腸、結(jié)腸和直腸,故又稱為放射性直腸、結(jié)腸、小腸炎。由于神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)放射線的反應(yīng),早期即可出現(xiàn)胃腸道的癥狀。一般多出現(xiàn)在放療開始后I 2周內(nèi)。惡心、嘔吐、腹瀉、排出粘液或血樣便。累及直腸者伴有里急后重。持久便血可引起缺鐵性貧血。便秘少見。偶有低熱。痙攣性腹痛則提示小腸受累,乙狀結(jié)腸鏡檢查可見粘膜水腫、充血,嚴(yán)重者可有糜爛或潰瘍。近年來,隨著腫瘤發(fā)病率的不斷上升及放療應(yīng)用的日益增多,放射性腸炎的發(fā)病率也在逐年增加,受到國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的普遍關(guān)注。目前治療放射性腸炎的藥物療效不夠理想,而益生菌在胃腸道疾病的治療中有著獨(dú)到的優(yōu)勢(shì),特別是對(duì)于腸道粘膜的保護(hù)及修復(fù)起到重要作用。脆弱擬桿菌(ifecieroiofes fragilis')作為一種革蘭氏染色陰性、桿狀、兩端鈍圓而濃染,有莢膜、無芽胞、無動(dòng)力的專性厭氧細(xì)菌,分產(chǎn)腸毒素型和非產(chǎn)腸毒素型。脆弱擬桿菌作為人及動(dòng)物腸道正常菌群的一部分,主要存于結(jié)腸中,此外,呼吸道、胃腸道及泌尿生殖道粘膜也可定植生長。目前研究較多的是脆弱擬桿菌作為一種條件致病菌,當(dāng)宿主粘膜受損時(shí),可侵犯粘膜下層,引起感染,也可經(jīng)血液流動(dòng),引起身體其它器官如腸道、腹腔、肝、肺、腦組織化膿性感染并伴發(fā)膿腫和引起急慢性腹瀉等。此外,其對(duì)結(jié)腸、直腸癌的發(fā)生也有促進(jìn)作用。然而,脆弱擬桿菌并非只是一種條件致病菌。1991年張季階發(fā)表了《一種無毒脆弱擬桿菌的分離鑒定》,報(bào)導(dǎo)了關(guān)于1983年9月從一個(gè)發(fā)育良好的嬰兒糞便中分離出量大而又較純的細(xì)菌,經(jīng)以系列的鑒定、基礎(chǔ)試驗(yàn)和臨床應(yīng)用觀察,屬于脆弱擬桿菌群中的一株無毒菌,是人體的益生菌,定名為BF839菌株。由此,研究發(fā)現(xiàn)了,脆弱擬桿菌也是一種益生菌。但是,脆弱擬桿菌作為一種益生菌,并且在制備治療急性放射性腸炎組合物的相關(guān)應(yīng)用,目前尚未有報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用。為了解決上述問題,本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
提供脆弱擬桿菌在制備治療急 性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用,所述的脆弱擬桿菌保藏單位名稱為中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,保藏單位地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào),保藏日期為2013年3月12日,保藏編號(hào)為CGMCC N0.7280,分類命名為 Bac teroi des fragi Iis0其中,所述組合物為至少含有能治療急性放射性腸炎的脆弱擬桿菌的食品或藥物組合物。其中,所述組合物選自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基發(fā)酵食品、發(fā)酵谷類食品中的任意一種。其中,所述組合物為丸劑、片劑、顆粒制劑、膠囊、口服液或者管飼制劑。其中,所述組合物為含有所述脆弱擬桿菌的液體細(xì)菌懸浮液。其中,所述脆弱擬桿菌在所述組合物中的含量為KTlOiciCfu /ml。本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明發(fā)掘了脆弱擬桿菌新的用途,開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)證明,脆弱擬桿菌安全無毒,藥理作用強(qiáng),對(duì)于急性放射性腸炎有很好的治療效果、成本低,從而預(yù)示了脆弱擬桿菌具有很好的食療和藥用前景。脆弱擬桿菌作為一種益生菌,可用于制備治療急性放射性腸炎的食品或藥物。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明,這些實(shí)施例僅用來說明本發(fā)明,并不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1脆弱擬桿菌菌液的制備 (O由嬰兒糞便中分離脆弱擬桿菌
按“正常 菌群檢查法”稱取0.5克大便,置于先裝有4.5ml生理鹽水的試管中,以此連續(xù)稀釋成10_卜10_6,由高稀積度向低稀積度滴到Bd培養(yǎng)基平板上,置于厭氧產(chǎn)氣盒中加厭氧產(chǎn)氣袋進(jìn)行厭氧培養(yǎng)。置37°C,2 7天后開罐檢查。選取單一菌落進(jìn)行純培養(yǎng)、染色鏡檢、培養(yǎng)特性、生理生化檢測。(2)脆弱擬桿菌的增菌培養(yǎng)及菌液制備
選取純化后的單個(gè)菌落接種于改良的胰蛋白胨肉湯中進(jìn)行增菌培養(yǎng),所得菌液離心沉淀,轉(zhuǎn)速3000r/min,離心15min,去上清,沉淀物用生理鹽水洗漆后,沉淀物用生理鹽水稀釋,用麥?zhǔn)媳葷峁茏鼍鷶?shù)測定,稀釋至IO8 cfu /ml, IO9 cfu /ml, IO10 cfu /ml,保存?zhèn)溆?。?shí)施例2脆弱擬桿菌毒力實(shí)驗(yàn)
采用實(shí)施例1制備的脆弱擬桿菌菌液進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):
(O小鼠急性毒力實(shí)驗(yàn)
取體重22±2克C57BR/C小鼠(雌雄各半)60只,分成高劑量組、低劑量組和對(duì)照組,各組20只。高劑量組每只小鼠每天灌胃IO12 cfu /ml菌液0.5ml,低劑量組每天灌胃IO9 cfu/ml菌液0.5ml,對(duì)照組每天灌胃0.5ml生理鹽水。連續(xù)觀察14天。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:小鼠正常生長,未見死亡,LD50測不出。(2)大鼠毒力實(shí)驗(yàn)
取150±20克SD大鼠30只(雌雄各半),分為3組:高低劑量組和對(duì)照組。高劑量組每只大鼠每天灌胃1012cfu/ml菌液2ml,低劑量組每天灌胃109cfu/ml菌液2ml,對(duì)照組每天灌胃2ml生理鹽水。連續(xù)觀察14天,14天后抽靜脈血測血象、肝腎功。取胃腸肝脾組織做病理切片電鏡觀察。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:均未見明顯異常。(3)恒河猴毒力實(shí)驗(yàn)
取恒河猴10只(雌雄各半),分為2組:高低劑量組和對(duì)照組。高劑量組每只恒河猴每天口服1012cfu/ml菌液100ml,低劑量組每天口服109cfu/ml菌液100ml。連續(xù)觀察60天。14天、30天、45天、60天后分別抽靜脈血測血象、肝腎功,測心電圖。取胃腸肝脾組織做病理切片電鏡觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:均未見明顯異常。實(shí)施例3脆弱擬桿菌對(duì)于急性放射性腸炎的治療作用 采用實(shí)施例1制備的脆弱擬桿菌菌液進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):
模型建立及分組:150只SD大鼠隨機(jī)分為3組:A組為正常對(duì)照組(30只大鼠),B組為常規(guī)劑量照射組(60只大鼠),C組為高劑量照射組(60只大鼠)。大鼠禁食12-14h,稱重后用水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔麻醉后,以仰臥體位固定在有機(jī)玻璃板上,以高能X線直線加速器給予全腹部照射,從劍突至恥骨聯(lián)合,照射面積7*5cm2,其余部位以5cm厚鉛板屏蔽,源皮距98cm,發(fā)生劑量率為500cGy/min。其中B組照射劑量為10Gy,C組照射劑量為15Gy,正常對(duì)照A組大鼠不予照射。實(shí)驗(yàn)組B組、C組再分別隨機(jī)分為2組:BI和B2組,Cl和C2組,每組30只,B1、Cl組照射后給予蒸餾水灌胃,每天每只lml/100g體質(zhì)量;B2、C2組照射后給予109cfu/ml的脆弱擬桿菌菌液,每天每只1.0ml/lOOg體質(zhì)量灌胃。觀察指標(biāo)及標(biāo)本采集:造模成功后,每日觀察大鼠一般情況,主要是排便情況、精神狀態(tài)及活動(dòng)度。實(shí)驗(yàn)組分別于照射后第2、4、7天取大鼠10只(均為灌胃后6h),同時(shí)正常對(duì)照組在照射后第2、4、7天取大鼠10只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。處死前禁食水12h,頸椎脫白處死后再嚴(yán)格無菌狀態(tài)下取回腸系膜 淋巴結(jié)2粒,稱重后待做細(xì)菌培養(yǎng)以測細(xì)菌移位率;分別在距Treitz韌帶遠(yuǎn)端3-4cm處取約3cm長的空腸段和2cm長的直腸上段做病理切片。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:照射后各組均出現(xiàn)腹瀉,且有不同程度的血便,BI組比B2組、Cl組比C2組腹瀉程度明顯緩解,血便也明顯減少;光學(xué)顯微鏡下,與A組相比較,B1、C1組空?qǐng)鼋q毛水腫,炎性細(xì)胞浸潤,部分絨毛上皮細(xì)胞脫落及糜爛,絨毛高度和隱窩深度降低,腸隱窩內(nèi)細(xì)胞有絲分裂相減少。其中Cl空腸絨毛最為稀疏,脫落最為嚴(yán)重,BI組較Cl組輕。而B2、C2組絨毛較完整,絨毛高度和隱窩深度較大,隱窩內(nèi)細(xì)胞有絲分裂相多見,少量炎性細(xì)胞浸潤。B2組較BI組、C2組較Cl組細(xì)菌移位率顯著降低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,用脆弱擬桿菌灌胃的大鼠一般情況明顯好于不灌胃組,死亡率也低于不灌胃組,病理情況好于不灌胃組。這說明了脆弱擬桿菌對(duì)于急性放射性腸炎有很好的治療效果。
權(quán)利要求
1.脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用,其特征在于:所述組合物為至少含有能治療急性放射性腸炎的脆弱擬桿菌的食品或藥物組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用,其特征在于:所述組合物選自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基發(fā)酵食品、發(fā)酵谷類食品中的任意一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用,其特征在于:所述組合物為丸劑、片劑、顆粒制劑、膠囊、口服液或者管飼制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用,其特征在于:所述組合物為含有所述脆弱擬桿菌的液體細(xì)菌懸浮液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用,其特征在于:所述脆弱擬桿菌在所述組合物中的含量為IO8IOiciCfu /ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及脆弱擬桿菌的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及脆弱擬桿菌在制備治療急性放射性腸炎組合物中的應(yīng)用,實(shí)驗(yàn)證明,脆弱擬桿菌安全無毒,藥理作用強(qiáng),對(duì)于急性放射性腸炎有很好的治療效果,從而預(yù)示了脆弱擬桿菌具有很好的食療和藥用前景。本發(fā)明發(fā)掘了脆弱擬桿菌新的用途,開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域,脆弱擬桿菌作為一種益生菌,可用于制備治療急性放射性腸炎的食品或藥物組合物。
文檔編號(hào)A23C9/13GK103142658SQ20131008574
公開日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2013年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月18日
發(fā)明者智發(fā)朝, 白楊, 劉洋洋 申請(qǐng)人:廣州知光生物科技有限公司