專利名稱：一株土地類芽孢桿菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種類芽孢桿菌。
背景技術(shù)：
類芽胞桿菌屬(PaenibacillusAsh, Priest&Collin, 1994)屬于厚壁菌門，桿菌綱，芽胞桿菌目，類芽胞桿菌科。細(xì)胞呈桿狀，革蘭氏染色陽性、陰性或可變，以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)。在膨大胞囊內(nèi)有橢圓形芽孢，在營養(yǎng)瓊脂上無可溶性色素。兼性厭氧或嚴(yán)格好氧。目前已至少記錄了 39個(gè)種，類芽胞桿菌在自然界中分布廣泛。對已知類芽胞桿菌的研究發(fā)現(xiàn)其具有極高的應(yīng)用價(jià)值。例如，多粘類芽孢桿菌(P.polymyxa)能防治病原細(xì)菌、病原真菌、根結(jié)線蟲等多種有害微生物，既能分泌多種肽類抗菌物質(zhì)(如多粘菌素、粘菌素、環(huán)桿菌素、喬利肽菌素、多肽菌素、谷纈菌素、殺鐮孢菌素等)，又能直接作用于細(xì)菌菌體，并能誘導(dǎo)宿主植物產(chǎn)生抗病性，還能通過固氮和溶解有機(jī)磷為宿主植物提供營養(yǎng)，促進(jìn)植株生長。固氮類芽胞桿菌(P.azotofixans)對棒桿菌(Corynebacterium fimi)具有明顯的抑制作用，并對重金屬及抗生素具有較強(qiáng)的耐受能力。而且近幾年還發(fā)現(xiàn)了一些具備新功能的類芽胞桿菌新種，Aguilera等2001年在橄欖壓榨廢料堆制的稻桿堆肥中發(fā)現(xiàn)了一株具有產(chǎn)生胞外多糖功能的新種P.s jamiIae ；Daane等于2002年在鹽沼植物根際發(fā)現(xiàn)一株能夠降解萘的新種P.naphthalenovorans ；Yoon等2003年發(fā)現(xiàn)了兩株能夠產(chǎn)生高效絮凝海藻的絮凝劑的新種P.kribbensis和P.terrae ；Horn等2005年在蟲丘蝴內(nèi)臟中發(fā)現(xiàn)了一株能產(chǎn)生N2O的新種P.anaericanus。土地類芽胞桿菌(P.s terrae)是2003年在印度發(fā)現(xiàn)的新種，目前有3個(gè)土地類芽胞桿菌菌株被做為功能菌株進(jìn)行報(bào)道，分別是Paenibacillus terrae AM141菌株、HPL-003菌株和MH72菌株。Paenibacillus terrae AM141菌株可作為水藻收獲的絮凝劑,HPL-003菌株可以產(chǎn)木聚糖酶，MH72菌株能產(chǎn)生N20`。氮、磷、鉀是植物生長必需的大量營養(yǎng)元素，土壤耕作層中全磷含量為0.1
2.0g/kg，其中無機(jī)磷占全磷總量的15% 80%，其中大部分是難溶性的無機(jī)磷化合物，很難被植物直接利用；土壤耕作層中全鉀含量為0.5 45g/kg，其中礦物性鉀占全鉀的90% 98%，很難被植物直接利用；農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上施用的磷肥和鉀肥的利用率只有40% 60%，其余部分被土壤重新固定，由于作物對其利用率低、容易流失、造成嚴(yán)重的浪費(fèi)和環(huán)境污染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一株土地類芽孢桿菌本發(fā)明土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4菌株,保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號為CGMCC N0.7011。本發(fā)明土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4屬于類芽孢桿菌屬(PaenibacillusAsh, Priest&Collin, 1994),保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期為2012年12月17日，保藏號為CGMCC N0.7011。土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4為革蘭氏陽性菌，菌體為桿狀，1.0 1.2 μ mX 3 4 μ m,能形成芽胞，形成芽胞時(shí)菌體近端膨大，胞囊明顯膨脹，芽胞橢圓形，位于胞囊一端(如

圖1所示)。土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4在娃酸鹽鹿糖無氮培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)5 7天形成直徑為I 2_左右的圓形菌落，單菌落中間隆起，邊緣不整齊，表面濕潤，半透明，菌苔濃稠，易挑起(如圖2所示)。土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae)NK3-4在鉀長石酵母粉培養(yǎng)基上菌落呈乳白色，半個(gè)玻璃珠狀，圓形菌落，菌苔量多而粘，培養(yǎng)至后期菌落邊緣不整齊，生長物可生長至培養(yǎng)基內(nèi)部，使培養(yǎng)基裂開。土地類芽抱桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4通過16S rDNA序列比對分析，與Paenibacillus terrae AM141菌株(登錄號為AF391124)親緣關(guān)系最為接近，相似性為99%ο 土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4 的 16S rDNA 如 SEQ ID NO:1 所示。土地類芽抱桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4 又與 Paenibacillus terraeAM141相比存在明顯的不同。土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae)NK3_4為革蘭氏染色陽性，菌體長度為1.0 1.2μπιΧ3 4μπι，不能利用甘露醇，在2%NaCl中不生長；而Paenibacillus terrae AM141革蘭氏染色可變，菌體長度為1.3 1.8 μ mX4 7 μ m,能利用甘露醇，在2%NaCl中生長。因此，判定土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae)NK3_4為土地類芽孢桿菌種的一株新菌株。本發(fā)明土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4革蘭氏染色為陽性,卩引哚反應(yīng)為陰性，M.R試驗(yàn)為陰性，V.P試驗(yàn)為陽性；在硅酸鹽蔗糖無氮培養(yǎng)基上生長良好。土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4菌株能很好的利用葡萄糖、鹿糖、乳糖、羧甲基纖維素鈉、腐殖 酸等作為碳源，能水解淀粉，不利用甘露醇；利用葡萄糖和蔗糖時(shí)產(chǎn)酸產(chǎn)氣，利用乳糖、羧甲基纖維素鈉、腐殖酸時(shí)產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般培養(yǎng)后基質(zhì)PH值降低0.8 1.5。土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4能利用大多數(shù)氨基酸中的氮,能使明膠液化、使牛奶胨化，在l%NaCl中生長，在2%NaCl中不生長；最適生長溫度為30 32°C，生長最適pH值為6.5 7.5。土地類芽抱桿菌(Paenibacillus terrae) NK3-4生理生化性狀及對碳、氮源的利用情況如表I所示。表I
權(quán)利要求
1.一株土地類芽孢桿菌，其為土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae)NK3_4，保藏在中國微生物菌種保藏管 理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號為CGMCC N0.7011。
全文摘要
一株土地類芽孢桿菌。它涉及一種類芽孢桿菌。土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae)NK3-4，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.7011。NK3-4具有固定空中的氮、分解礦物磷、礦物鉀、難溶性硅和抑制植物病原菌的功能。土地類芽孢桿菌(Paenibacillus terrae)NK3-4在減少化肥施用量的情況下，仍可使水稻、玉米、大豆等作物增產(chǎn)，特別是與硅肥配合使用，水稻增產(chǎn)幅度更為顯著。本發(fā)明用于農(nóng)業(yè)領(lǐng)域。
文檔編號C12R1/01GK103146622SQ201310097450
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月25日
發(fā)明者于文清, 劉文志, 李鵬, 胡廣民, 隋文志, 趙曉鋒, 田艷洪 申請人:黑龍江省農(nóng)墾科學(xué)院農(nóng)畜產(chǎn)品綜合利用研究所, 黑龍江農(nóng)墾三龍生物科技有限公司