轉(zhuǎn)基因水稻品系kmd的lamp檢測引物組、試劑盒及檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測引物組、試劑盒及檢測方法，其中，LAMP檢測引物組包括下列引物：外引物F3：GGTTCATCTCACT?TCCCAATC；外引物B3：GCCCATCTCGGGATTATTAGT；內(nèi)引物FIP：GCCCC?AGCTGGCGTATTACTTATTGCCGATTTCGGATCCT；內(nèi)引物BIP：AGGCGGT?GTAGGGCTTACTATTTTCACTTAGCGGACGT。LAMP檢測引物組對轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD具有良好的特異性。
【專利說明】轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測引物組、試劑盒及檢測方法
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明屬于食品安全領(lǐng)域，涉及環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)，具體涉及轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測引物組、試劑盒及檢測方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]轉(zhuǎn)基因作物是指利用重組DNA技術(shù)將外源基因整合于受體植物基因組、改變其遺傳組成后產(chǎn)生的植物及其后代，也稱為遺傳修飾生物體(Genetically modifiedorganisms, GMOs)。自1983年首例轉(zhuǎn)基因植物問世以來,全球轉(zhuǎn)基因作物的種植面積和銷售收入均以倍數(shù)增長。但從嚴肅的科學(xué)意義上說，轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的生物安全性目前尚無確定的結(jié)論。雖然我國規(guī)定自2002年3月20日起，所有轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物及其副產(chǎn)品都應(yīng)加以標志，但是在進口轉(zhuǎn)基因水稻數(shù)量不斷增長的形勢下，仍然很少見到加注轉(zhuǎn)基因字樣的農(nóng)產(chǎn)品。因此開發(fā)簡便的轉(zhuǎn)基因大豆檢測技術(shù)并對相關(guān)產(chǎn)品進行檢測勢在必行。
[0003]目前普遍應(yīng)用基于DNA的檢測技術(shù)對轉(zhuǎn)基因作物進行檢測。該類技術(shù)主要包括傳統(tǒng)定性PCR和定量PCR 。這些檢測技術(shù)都需要特殊的DNA擴增儀(PCR儀)才能夠完成。而環(huán)介導(dǎo)的等溫基因擴增技術(shù)(Loop-Media tedLsothcrmal AmpliFication, LAMP)依賴于能夠識別靶序列上6個特異區(qū)域的引物和一種具有鏈置換特性的DNA聚合酶，利用鏈置換DNA聚合酶在恒溫條件保溫幾十分鐘，完成核酸擴增反應(yīng)；可以在I小時之內(nèi)，將靶基因DNA片段擴增109-1010倍，并且只要用肉眼觀察白色混濁沉淀，就能鑒定是否擴增，不需要電泳檢測過程。
[0004]查閱轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD相關(guān)文獻，了解轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD關(guān)于外源基因和大豆基因組插入處接頭序列信息，部分序列信息具體為:
[0005]TGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGC CGATTTCGGAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGAC CGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCCGTCTC ACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCCAGTACATTAAAAACGTCCGCAATGTGTTATTAAG TTGTCTAAGCGTCAATTTGTTTACACCACAATATATCCCGAGATGGGCAGGCATATCGG CGTACGCACGCAGCCCGGTGAGACCCGCCGCAGTTGGAGCGCGCATCGCCATCGCCGC GAGCCCGCGAAGTCCACGGCGCCCTCGTCGGCGGAACACCCCAGTTGCTGACGAGACT GACAGGTGACAGCCGAGACAGCCAGMAAGAAAAACGAAGCCGGCTGTACTAACGAC ATCAAAAAGAAATGGGAGCCCCGTCTGTTTCAGACGTAATGGCAATGGTAATACTAATTAGTAATAAGATAAGCTCCCAGTTGACGCTCCACA。
[0006]經(jīng)序列分析，確定了上述下劃線部分的序列為水稻基因組和外源插入序列的接頭部分(簡稱，KMD品系接頭序列)。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0007]本發(fā)明要解決的第一個技術(shù)問題是提供一種轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測引物組，其對轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD具有良好的特異性。[0008]本發(fā)明要解決的第二個技術(shù)問題是提供一種轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測試劑盒，其便于對轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD進行LAMP檢測。
[0009]本發(fā)明要解決的第三個技術(shù)問題是提供一種轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測方法，其具有靈敏較高、特異性良好、檢測快速可靠、操作簡單的特點。
[0010]上述第一個技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案實現(xiàn):
[0011]一種轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測引物組，其特征在于，包括下列引物:
[0012]外引物F3:GGTTCATCTCACTTCCCAATC ；
[0013]外引物B3:GCCCATCTCGGGATTATTAGT ；
[0014]內(nèi)引物FIP:
[0015]GCCCCAGCTGGCGTATTACTTATTGCCGATTTCGGATCCT ；
[0016]內(nèi)引物BIP:
[0017]AGGCGGTGTAGGGCTTACTATTTTCACTTAGCGGACGT。
[0018]通過實驗證明，本發(fā)明提供的LAMP檢測引物組對轉(zhuǎn)基因水稻科豐6號、科豐8號、BT63、非轉(zhuǎn)基因豇豆、四季豆、大豆、玉米、紅皮花生、白云豆、豌豆、綠豆、燕麥、蕎麥、土豆、扁豆、番茄、苦蕎麥、羽扇豆、小麥、蠶豆均無非特異擴增。因此，本發(fā)明提供的LAMP檢測引物組對轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD具有良好的特異性，該LAMP檢測引物組針對的靶基因片段是【背景技術(shù)】中所述的89788品系接頭序列；。
[0019]上述第二個技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案實現(xiàn):
[0020]轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，包括以下成分:
[0021]
【權(quán)利要求】
1.轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測引物組，其特征在于，包括下列引物:
外引物 F3:GGTTCATCTCACTTCCCAATC ；
外引物 B3:GCCCATCTCGGGATTATTAGT ； 內(nèi)引物FIP:
GCCCCAGCTGGCGTATTACTTATTGCCGATTTCGGATCCT ； 內(nèi)引物BIP:
AGGCGGTGTAGGGCTTACTATTTTCACTTAGCGGACGT。
2.轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，包括以下成分:
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，還包括顯色劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，所述顯色劑為熒光染料SYBR Green I。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，還包括對照物:陽性對照為純度為100%、DNA濃度為100ng/ul的轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的標準DNA溶液，陰性對照為ddH20。
6.轉(zhuǎn)基因水稻品系KMD的LAMP檢測方法，其特征在于，包括以下步驟: (101)對待檢樣品提取待檢模板DNA； (102)進行環(huán)介導(dǎo)等溫基因擴增反應(yīng): 配置LAMP反應(yīng)體系,每25 μ L體積的LAMP反應(yīng)體系具體為:
【文檔編號】C12Q1/68GK103436528SQ201310157394
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年4月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月29日
【發(fā)明者】鄺筱珊, 劉李登, 王小玉, 馮家望, 胡松楠, 唐食明 申請人:鄺筱珊, 劉李登, 王小玉