鹿茸加工、提取制備方法及其在醫(yī)藥食品領(lǐng)域的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】鹿茸具有提高人體免疫力、促進(jìn)造血功能、促進(jìn)傷口愈合、改善心血管系統(tǒng)，增強(qiáng)性功能、延年益壽、補(bǔ)血養(yǎng)顏、強(qiáng)身健體的作用，除此之外，鹿茸及其醇提物還具有抗肥胖作用。體外實(shí)驗(yàn)表明，鹿茸醇提取物能夠有效地抑制胰脂肪酶的活性，鹿茸醇提取物對胰脂肪酶抑制率依次是蠟片＞粉片＞血片。鹿茸醇提取物可以促進(jìn)離體脂肪組織分解，鹿茸醇提取物對脂肪分解的作用依次是蠟片＞粉片＞血片。動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)表明鹿茸具有降低脂肪作用，減少腎周及子宮周圍脂肪，降低血清甘油三脂、總膽固醇、低密度脂蛋白（LDL-C）水平等作用。鹿茸可應(yīng)用于預(yù)防及治療肥胖。
【專利說明】鹿茸加工、提取制備方法及其在醫(yī)藥食品領(lǐng)域的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種鹿茸加工、提取制備方法及其在抗肥胖方面的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]超重，肥胖及相關(guān)性疾病近些年來不僅在西方發(fā)達(dá)國家乃至其它發(fā)展中國家都急劇增加，成為了整個(gè)世界的一種流行性疾病。據(jù)估計(jì)，在美國的八分之一的青少年都患有肥胖，這從長遠(yuǎn)來看可能會(huì)降低人口的預(yù)期壽命。肥胖不僅使人們對自己的外觀產(chǎn)生不滿，而且能夠引發(fā)多種疾病的產(chǎn)生。據(jù)報(bào)道除了心血管疾病(如高血壓，中風(fēng)，冠狀動(dòng)脈心臟疾病)與肥胖有關(guān)外，某些腫瘤(如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌)和腎臟疾病也被證明與肥胖有關(guān)的[1_3]。肥胖的產(chǎn)生與遺傳、中樞神經(jīng)攝食功能異常、微量營養(yǎng)物質(zhì)缺乏、脂肪組織功能異常、內(nèi)分泌功能紊亂相關(guān)。除遺傳因素外，肥胖多由食物誘導(dǎo)產(chǎn)生[4]，目前控制食物脂肪攝取的藥物主要有抑制中樞神經(jīng)的藥物(如芬特明、吲哚)和非中樞神經(jīng)藥物(脂肪酶抑制劑:奧利司他)，但市場上的芬特明、奧利司他等減肥藥物多屬于半合成制劑，常出現(xiàn)藥物成癮、血壓升高、心跳加快等副作用；促進(jìn)脂肪分解的藥物主要有麻黃堿、咖啡因等。目前抑制脂肪酶在胃腸道中的吸收的藥物，脂肪酶抑制劑奧利司他屬半合成藥物，副作用較多，所以從天然植物中尋找高效的脂肪酶抑制劑成便為研究者的研究重點(diǎn)。已有多篇文獻(xiàn)記載植物藥中的生物堿類、皂苷類、多糖類成分具有抑制脂肪酶活性的作用。但從動(dòng)物中得到的天然物質(zhì)尚少報(bào)道，因此，本專利公開著名保健藥物鹿茸的抗肥胖作用，揭示了鹿茸的新的醫(yī)療保健價(jià)值。
[0003]市場上銷售的減肥藥種類繁多，最著名的是Servier公司的左旋酚氟拉明，1996年上市后引起媒體的關(guān)注并帶來巨大銷售額，后因報(bào)告有嚴(yán)重的副作用(心臟閥門問題和初期的肺部高血壓)，該藥在1997年9月被撤銷。1997年，美國食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)鹽酸西布曲明上市，該藥可通過其次級(Ml)和初級(M2)胺類代謝產(chǎn)物抑制去甲腎上腺素、多巴胺和5-羥色胺的再攝取，增加飽食感。2001年在我國進(jìn)行的西步曲明上市前臨床驗(yàn)證結(jié)果顯示:經(jīng)過24周的治療，患者體重可降低(6.52±3.95 ) kg,并能夠顯著降低空腹和餐后Ih血糖。但大量臨床研究發(fā)現(xiàn)，服用此類藥物較易出現(xiàn)頭痛、頭暈、口干、口苦、便秘和失眠等不良反應(yīng)，特別是關(guān)于西布曲明對心血管事件的影響一直存有爭議。2010 年，SCOUTs ( Sibutramine Card1vascular Outcomes Trial)公布了其研究結(jié)果，這是納入患者最多、研究時(shí)間最長的有關(guān)西步曲明心血管安全性的隨機(jī)雙盲安慰劑對照研究，近10000例患者納入本研究，平均隨訪3-4年，它評價(jià)了已經(jīng)存在心血管高危因素的肥胖癥患者使用西步曲明減重對心血管問題的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與安慰劑組相比，西步曲明組患者主要終點(diǎn)事件(包括非致死性心肌梗死、非致死性腦卒中、心臟驟停復(fù)蘇等)的主要的風(fēng)險(xiǎn)增加了 16%，并由此推斷體重下降并未降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。鑒于此結(jié)果，西步曲明被宣布撤市，我國食品藥品監(jiān)督管理局也在2010年底宣布停止西步曲明的生產(chǎn)和臨床使用[5]。
[0004]立莫納班是第I個(gè)選擇性大麻素受體I阻斷劑，能夠通過抑制食欲并增加外周脂肪組織脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)來改善肥胖相關(guān)的胰島素抵抗等，被認(rèn)為是具有良好臨床應(yīng)用前景的減重藥物，但由于其中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不良反應(yīng)，如抑郁和自殺傾向等，始終未能在美國和中國獲準(zhǔn)入市，僅從2006年起在56個(gè)歐洲等國家上市，并于2009年撤市
[5]
O
[0005]由于這些藥品有著的嚴(yán)重副作用，包括涉及到主動(dòng)脈閥門泄漏和二尖瓣閥門泄漏的心臟閥門損壞。其它更嚴(yán)重的副作用包括呼吸短促，頭暈眼花和死亡，這些副作用的嚴(yán)重性，已促使在2000年歐洲委員會(huì)決定從2001年4月開始在歐盟禁止銷售食欲抑制劑藥物。這已明顯地減少了世界范圍對抗肥胖藥物的接受。
[0006]新的觀點(diǎn)認(rèn)為，肥胖是一種有著復(fù)雜病理生理原因并需要長期用藥才能適當(dāng)控制的慢性疾病，這樣就為新藥帶來安全性問題。關(guān)于目前減肥藥不對癥的問題，有關(guān)專家認(rèn)為主要是這些藥無助于多數(shù)病人長期減肥，而且僅有少數(shù)病人從其原來的體重減了 5% —10%。毫不奇怪，肥胖藥物的研究與開發(fā)愈來愈強(qiáng)大，目前在開發(fā)中的抗肥胖制劑就有200多種，但多數(shù)都處在早期階段。所以，開發(fā)出一種安全和真正有效的減肥藥將會(huì)得到巨大的回報(bào)。根據(jù)抗肥胖藥研究專家的觀點(diǎn)，從減肥藥市場的發(fā)展來看，減肥藥有著較大的發(fā)展空間，并且需要多種減肥藥。
[0007]由于減肥藥物越來越多的出現(xiàn)毒副作用的問題，人們也在尋找能代替藥物的天然健康的產(chǎn)品，所以市面出現(xiàn)的一些減肥茶等產(chǎn)品，但此類產(chǎn)品減肥的效果不是很理想。人們對減肥產(chǎn)品的需求迫切，本研究旨在應(yīng)用天然藥物生產(chǎn)無毒副作用的減肥產(chǎn)品，達(dá)到讓人們輕松減肥，健康瘦身的目的。
[0008]鹿鸞(Cornucervi pantotrichum)為鹿科動(dòng)物梅花鹿 iGervus NipponTemminch)或馬鹿iforvus elaphus Linaeus)的雄鹿未骨化密生鸞毛的幼角，為我國傳統(tǒng)名貴中藥，已有2000多年的入藥歷史。古典醫(yī)籍《神農(nóng)本草經(jīng)》對其功能和主治就有詳細(xì)記載:“味甘、性溫，主漏下惡血、寒熱驚癇、益氣強(qiáng)志、生齒不老”[6]。明代李時(shí)珍在《本草綱目》中記載:“鹿鸞，生精補(bǔ)髓，養(yǎng)血益陽，強(qiáng)筋健骨，治一切虛損，耳聾、目暗、眩暈、虛痢”。鹿茸作為鹿體最活躍的生長點(diǎn)，在骨化之前貯存了大量的生長因子，這是鹿茸具有廣泛生物活性的基礎(chǔ)[7]。鹿茸中含有脂類、多糖、多胺、蛋白質(zhì)及多肽、激素樣物質(zhì)、生物堿等多種化學(xué)成分，使其具有抗化學(xué)藥物損傷、抗?jié)儭⑻岣吣土?、增?qiáng)記憶力、抑制單胺氧化酶活性、抗衰老和抗氧化等多種藥理作用。
[0009]鹿茸加工是鹿產(chǎn)品加工中的重要環(huán)節(jié)。加工的好壞直接關(guān)系到產(chǎn)品質(zhì)量和經(jīng)濟(jì)效益。目前各種加工方法的技術(shù)環(huán)節(jié)、工藝流程都有很大差異。近年隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，涌現(xiàn)出不少鹿茸加工新技術(shù)，如微波能與遠(yuǎn)紅外線綜合加工方法、雙電子自動(dòng)控制遠(yuǎn)紅外線烘干箱加工鹿茸方法、低溫真空冷凍加工方法[文獻(xiàn)]。例如，秦榮前等公開的“鹿茸加工技術(shù)與設(shè)備”(中國專利88101148.7);王振林公開的“鹿茸酒加工方法”(中國專利200410013504.3)；唐新宇公開的“鹿茸酒”(中國專利03118267.4);以及劉國榮的“鮮鹿茸片、塊、段的加工方法”(中國專利200510070723.X)。Ryu ShiHoon公開的“鹿茸片加工方法”(韓國專利1020010009454);韓國Byoung-Tae Jeon公開的“鹿茸糖果和甜餅干的制造方法”(W02003061398 Al)報(bào)道，鹿茸糖具有恢復(fù)體力，防止衰老和減少壓力的作用。本發(fā)明采用采用傳統(tǒng)鹿茸加工與現(xiàn)代技術(shù)結(jié)合的方法，尤其對鹿茸蠟片、粉片與血片進(jìn)行了定量劃分，并揭示它們的生物活性有很大差異。
[0010]鹿茸化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展
1.鹿茸化學(xué)成分文獻(xiàn)報(bào)道始于1974年，蘇聯(lián)學(xué)者在鹿茸提取物中利用薄層層析分析法分離出四種化學(xué)成分，經(jīng)過理化性質(zhì)鑒定得出該四種化學(xué)成分主要為軟脂酸、硬脂酸、月旨肪族醇、脂肪酸M。此后中國、前蘇聯(lián)、日本等國的學(xué)者對鹿茸的化學(xué)成分作了廣泛研究，分別取得了巨大成就。鹿茸的化學(xué)成分復(fù)雜，到目前已從梅花鹿、馬鹿、麋鹿等鹿茸中分離提取出上百種化學(xué)成分，主要包括氨基酸類、核酸類、固醇類、硫酸軟骨素類、多胺類、堿基成分、脂質(zhì)類、芳香族化合物類、蛋白質(zhì)、多肽類、激素、維生素、生長因子及無機(jī)元素等多種類型化學(xué)成分，這些化學(xué)成分可能是鹿茸多種生物活性的物質(zhì)基礎(chǔ)[9]。
[0011]2.鹿茸的藥理活性
2.1創(chuàng)傷作用
早年鹿茸血研究組對家兔背部進(jìn)行人工創(chuàng)傷手術(shù)，而后給予相同劑量的茸血精和鹿茸精，通過稱重，血紅蛋白含量、紅血球計(jì)數(shù)值變化觀察鹿茸精、茸血精對家兔創(chuàng)傷愈合作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)各項(xiàng)指標(biāo)均有所增加，二者均能促進(jìn)家兔的新陳代謝，且二者的理化性狀和藥理作用極其相似。因此我們認(rèn)為鹿茸血可以制備鹿茸精或代替鹿茸精使用[1°]。翁梁等研究發(fā)現(xiàn)鹿茸多肽能促進(jìn)實(shí)驗(yàn)性大鼠表皮細(xì)胞分裂，加速皮膚損傷修復(fù)能力[11]。
[0012]2.2對性腺作用
1981年文獻(xiàn)記載，從西伯利亞斑鹿的鹿茸中抽提出的鹿茸精Pantocrinum含有雄性內(nèi)分泌素，經(jīng)臨床應(yīng)用，對治療陽痿、滑精療效十分明顯[12]。
[0013]劉仲康等在正常公鹿的長茸期內(nèi)投給小劑量的雄激素，有促進(jìn)鹿茸生長的作用，可提高產(chǎn)茸量10.5%，但投給大劑量雄激素又能抑制鹿茸的生長；在發(fā)情期內(nèi)投給雄激素，對次年的鹿茸生長沒有作用[13]。
[0014]高云端等將大鼠兩側(cè)睪丸切除，次日皮下注射鹿茸精注射液。稱取給藥組、對照組、陽性藥對照組的前列腺和精囊重(mg)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鹿茸精組重量與對照組有明顯差異，說明鹿茸精注射液對去除睪丸的大鼠前列腺和精囊有促進(jìn)作用。同時(shí)也觀察了鹿茸精注射液對小鼠子宮發(fā)育的影響，結(jié)果表明鹿茸精注射液即有雄性激素樣作用又有雌性激素樣作用，進(jìn)一步說明鹿茸具有提高性功能作用[14]。2011年黎同明研究發(fā)現(xiàn)鹿茸及鹿鞭能改善性激素水平，增加頂體酶水平，能夠治療不孕不育癥大鼠[15]。
[0015]2.3對骨細(xì)胞，骨骼及骨質(zhì)密度的影響
張志平等_體外研究也證實(shí)，鹿茸多肽能促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖，對正常軟骨細(xì)胞及凋亡軟骨細(xì)胞的蛋白多糖合成有促進(jìn)作用，并在一定程度上促進(jìn)凋亡狀態(tài)下軟骨細(xì)胞的合成代謝。
[0016]趙文海等[17]通過對大鼠進(jìn)行皮下注射鹿茸生長素，研究其對維甲酸造成的大鼠骨密度、骨重、骨長、骨直徑、抗彎強(qiáng)度、骨鈣含量的影響。結(jié)果表明，注射鹿茸生長素的大鼠骨密度、骨重、骨長均升高，但其升高程度不盡相同，抗彎強(qiáng)度和骨鈣含量也明顯升高，具有一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而與密鈣息組相比則沒有顯著性差異。
[0017]Y.K.Kim等_研究發(fā)現(xiàn)鹿茸水提液通過針灸療法能夠抑制膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎，減少骨吸收，對治療關(guān)節(jié)炎和防治骨質(zhì)疏松有很好的效果。
[0018]蒙海燕等[19]研究發(fā)現(xiàn)鹿茸及鹿角膠能明顯提高去卵巢大鼠骨密度、鈷礦物質(zhì)含量及BGP，增加成骨細(xì)胞數(shù)，降低破骨細(xì)胞數(shù)，對去卵巢所致的大鼠骨質(zhì)疏松癥具有拮抗作用。
[0019]張春霞等[2°]采用Hulth法給大白兔造膝骨性關(guān)節(jié)炎模型，通過注射鹿茸多肽稀釋液，比較鹿茸多肽和對照組在給藥7天、15天、30天后軟骨基質(zhì)中的糖胺多糖和II型膠原表達(dá)量是否減少，結(jié)果顯示鹿茸多肽在給藥15天時(shí)即有明顯效果，并且隨著給藥時(shí)間的延長表達(dá)量逐漸減少，在一定程度上起到保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨的作用。
[0020]2.4對心腦血管系統(tǒng)的作用
毛鳳志等[21]人通過鹿茸精對大鼠離體心臟冠脈流速的影響、對實(shí)驗(yàn)性心律失常的影響、對耐缺氧力的影響、對急性失血性低血壓的影響分別通過觀察給藥前后的冠脈流速、心電圖變化、真空和常壓缺氧狀態(tài)下小鼠存活時(shí)間以及失血情況下的血壓示數(shù)證實(shí)鹿茸精具有增加心臟血液供給、強(qiáng)心肌收縮力，減慢心率，具有強(qiáng)心作用。而后陳曉光等[22]采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈制備大鼠心肌缺血損傷模型，給予不同劑量灌胃，通過測定心肌梗死范圍、CK、LDH、AST、S0D、MDA、心肌組織MDA、S0D，并記錄心電圖S-T段，結(jié)果顯示鹿茸多肽可明顯抑制心肌缺血大鼠血清LDH、AST、CK的增加，同時(shí)改善心電圖損傷變化，抑制S-T段的抬高，對心肌缺血、損傷有一定的保護(hù)作用。
[0021]2.5對免疫的作用
鹿茸能增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫能力，具有明顯的免疫促進(jìn)功能[23]。林培英等人[24]采用單向免疫擴(kuò)散測定技術(shù)法測定了鹿茸精對小鼠血清IgG含量的影響。結(jié)果表明鹿茸精均能提高正常小鼠、免疫抑制狀態(tài)的小鼠和用綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠血清IgG的含量。之后孫曉波參照Halpern墨汁法測定了正常小鼠的吞噬活性，及對氫化可的松、環(huán)磷酰胺所致的免疫功能的拮抗作用，進(jìn)一步說明鹿茸精對機(jī)體有免疫調(diào)節(jié)作用[25]。金光湖[26]通過灌胃比較含有鹿茸提取物和含有提取物并加入氨甲喋呤的兩組小鼠，用綿羊血紅細(xì)胞引發(fā)免疫后測定細(xì)胞免疫和體液免疫，均證明鹿茸能增強(qiáng)體液免疫反應(yīng)。趙磊等[27]通過模擬體外胃腸消化模型得出鹿茸水提物能夠抑制刀豆蛋白A誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖，再次證明鹿茸具有免疫調(diào)節(jié)作用。
[0022]2.6抗?jié)冏饔?br> 王本祥等_對胃潰瘍老鼠喂食鹿茸多糖提取物，發(fā)現(xiàn)鹿茸多糖對多種類型胃潰瘍均有明顯治療作用。鹿茸多糖灌胃給藥，對雄性大鼠胃潰瘍有顯著保護(hù)作用，還能增強(qiáng)腸道的運(yùn)動(dòng)和分泌機(jī)能，其抗?jié)冏饔弥饕谴龠M(jìn)PGE2的合成[29]。2012年趙磊等[3°]初步研究了鹿茸糖胺聚糖、鹿茸水提物能夠保護(hù)由鹽酸-乙醇誘導(dǎo)的小鼠胃黏膜損傷作用，研究指出二者均有較好的保護(hù)作用，其中鹿茸探案聚糖保護(hù)效果較為顯著。
[0023]2.7對記憶功能的影響
徐惠波等[31]對小鼠進(jìn)行皮下注射鹿茸神經(jīng)節(jié)苷酯，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其對小鼠記憶獲得、再現(xiàn)、鞏固三個(gè)記憶階段都有明顯的促進(jìn)作用。趙玉紅等[32]研究證實(shí)鹿茸醇提物能延長小鼠跳臺的潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)、縮短水迷宮進(jìn)出時(shí)間和錯(cuò)誤次數(shù)，進(jìn)一步說明鹿茸醇提物能夠改善小鼠記憶功能。
[0024]2.8肝損傷保護(hù)作用
余明澤等[33]對鹿茸酒和白酒對比進(jìn)行了一般毒理性研究，結(jié)果表明酒精對肝有直接殺傷力，可使肝、脂肪變性甚至壞死。鹿茸對酒精引起的肝損傷有一定的保護(hù)作用。李夏等
[34]建立CCl4肝損傷小鼠模型，對肝損傷小鼠給予鹿茸多肽，考察血清中的生化指標(biāo)得出鹿茸多肽可使血清中的ALT、AST明顯降低，同時(shí)降低肝組織中MDA含量，由此可知鹿茸多肽對CCl4所致小鼠肝損傷有明顯保護(hù)作用。齊艷平等[35]用撲熱息痛建立肝損傷模型，研究了鹿茸粉和鹿茸醇提物對藥物性小鼠肝損傷保護(hù)的作用，結(jié)果均說明鹿茸制品可以阻止肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，降低MDA和NO的產(chǎn)生，減少肝細(xì)胞損傷，從而起到保護(hù)肝臟的作用。
[0025]2.9抗氧化作用
徐惠波等[36]通過灌服鹿茸磷脂，發(fā)現(xiàn)鹿茸磷脂可明顯抑制老年小鼠血、腦、肝組織MAO-B活性，增強(qiáng)腦和肝組織SOD活性，減少褐素含量，從而延緩衰老。陳曉光等[37]研究表明，鹿茸提取物能明顯提高小鼠體內(nèi)SOD，CAT等氧化酶水平，降低體內(nèi)MDA水平，說明了鹿茸提取物具有一定的提高機(jī)體抗氧化作用。另外，研究表明，鹿茸提取物對由CCl4和乙醇誘發(fā)的肝損傷具有一定的保護(hù)作用。2009年周冉等[38]首次研究了鹿茸超臨界提取物在鄰二氫菲-Fe2+體系產(chǎn)生的羥基自由基體系、脫氧核糖-鐵體系產(chǎn)生的羥基自由基體系中的體外抗氧化活性，結(jié)果表明鹿茸超臨界提取物具有明顯的抑制作用，且后者體系的抑制作用大于前者，并且都呈一定的量效關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)鹿茸水提物、正丁醇提物、乙醚提取物均具有抑制MAO-B作用并能顯著增加腦內(nèi)5-羥色胺和多巴胺含量[39]。鹿茸多胺也具有很好的抗氧化作用[4°]。
[0026]2.10 抗疲勞
羅翔丹等[41]研究表明鹿茸多肽能延長小鼠爬桿時(shí)間和負(fù)重游泳時(shí)間，說明鹿茸多肽具有抗疲勞的能力。張馨文等[42]研究表明鹿茸脂溶性成分可以提高小鼠的抗疲勞時(shí)間，隨著鹿茸劑量的增加小鼠抗疲勞時(shí)間變長，不同劑量組都表現(xiàn)出顯著的差異(/X0.01)。2011年張睿等[43]發(fā)現(xiàn)鹿茸水提物能延長小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間，能降低BLA、BUN的含量，提高小鼠體內(nèi)糖原的儲備能量，對小鼠有明顯的抗疲勞作用。另有研究報(bào)道鹿茸系列產(chǎn)品如鹿茸酒、鹿茸保健品(鹿茸、人參、杜仲、五味子等十余種中藥)均有很好的抗疲勞作用[44]。
[0027]2.11其它作用
I)對血流動(dòng)力學(xué)的影響
日本學(xué)者久保道德等[45]研究發(fā)現(xiàn)鹿茸乙醇浸提物和馬鹿茸乙醇浸提物具有抑制紅細(xì)胞凝集和促進(jìn)纖維蛋白溶解的作用。吳勃巖[46]對環(huán)磷酰胺誘發(fā)的小鼠灌胃鹿茸精來觀察對遺傳物質(zhì)損傷保護(hù)作用，研究結(jié)果表明鹿茸精具有抗誘變作用，調(diào)節(jié)和恢復(fù)機(jī)體失調(diào)的能力。
[0028]2)抗腫瘤作用
范玉林等將小鼠接種S180腫瘤，腹腔注射鹿茸蛋白進(jìn)行了抗腫瘤初步研究，結(jié)果表明鹿茸蛋白具有抗腫瘤作用[47]。此外也有研究證明鹿茸角Folch試劑提取液和水提液能保護(hù)動(dòng)物對抗結(jié)腸癌[48]。
[0029]3)糖尿病
研究發(fā)現(xiàn)鹿茸提取物能降低四氧嘧啶誘導(dǎo)糖尿病小鼠的血糖、血脂水平、MDA濃度，提高麥芽糖活力，調(diào)節(jié)糖尿病小鼠的飲食水平[49]。
[0030]本發(fā)明鹿茸加工技術(shù)采用采用傳統(tǒng)鹿茸加工與現(xiàn)代技術(shù)結(jié)合；本專利對鹿茸蠟片、粉片與血片進(jìn)行了定量劃分，并揭示它們的生物活性有很大差異。
[0031]本發(fā)明以乙醇為溶劑，通過閃式提取制備鹿茸醇提物作為原料，首次揭示了次黃嘌呤具有抑制胰脂肪酶和促進(jìn)腎上腺素誘導(dǎo)的離體脂肪組織分解活性，體外實(shí)驗(yàn)表明鹿茸提取物、次黃嘌呤具有抗肥胖作用。
[0032]本發(fā)明利用HPLC方法分析了鹿茸各組切片中次黃嘌呤的含量。
[0033]本發(fā)明通過小鼠的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明鹿茸具有降血脂、抗肥胖作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0034]本發(fā)明提供了鹿茸加工方法及蠟片、粉片和血片的劃分，鹿茸醇提取物的制備方法。本發(fā)明揭示鹿茸具有顯著的抗肥胖的作用。它能夠抑制脂肪的增加，起到預(yù)防和治療肥胖的作用。
[0035]本發(fā)明揭示鹿茸能夠有效的抑制胰脂肪酶的活性，促進(jìn)鹽酸腎上腺素誘導(dǎo)的離體脂肪組織分解；動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)表明鹿茸抑制體重增長，減少腎周及子宮周圍脂肪，降低血清甘油三脂、總膽固醇、低密度脂蛋白(LDL-C)水平等作用。本發(fā)明所提供的鹿茸可以在抗肥胖藥品、食品中應(yīng)用。
[0036]本發(fā)明提供了該鹿茸加工方法及鹿茸提取物的制備方法如下:
I)鹿茸加工方法:取新鮮鹿茸將其表面的不潔物洗去，并排除血液，將鹿茸浸入沸水中煮炸，然后于烘箱(73-80°C )中烘烤2-4h，反復(fù)進(jìn)行多次循環(huán)，然后置風(fēng)干室中風(fēng)干(約30天)。即得到加工好的鹿茸。
[0037])鹿茸蠟片、粉片、血片和骨片的劃分:取上述加工的梅花鹿二杠茸去毛皮，劃分成蠟片、粉片、血片和骨片，以二杠茸為例，按照鹿茸的長度蠟片占1/60-1/30，粉片占1/2-2/3，血片占1/6-1/5，1/12-1/10，分別截成4個(gè)不同部位，切片，備用。
[0038])鹿茸提取物的制備方法:將上述鹿茸蠟片、粉片、血片分別粉碎過80目篩，精密稱取1g分別置于三角瓶中，加入10倍量75%乙醇，浸泡12h。然后用閃式提取器，室溫(1.4萬轉(zhuǎn))提取3次，每次lOmin，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，過濾，濾液真空冷凍干燥。分裝、包裝即得各鹿茸提取物。
[0039]2本發(fā)明揭示鹿茸醇提取物能夠有效地抑制胰脂肪酶的活性眾所周知食物脂肪不能被腸道直接吸收，必須經(jīng)過脂肪酶水解成單酰甘油和脂肪酸后才能吸收，胰脂肪酶是水解膳食脂肪的最重要的酶，可水解50-70%的食物脂肪，因此通過抑制胰脂肪酶的活性，就可以控制由高脂飲食引起的肥胖。鹿茸醇提取物對胰脂肪酶抑制率依次是蠟片 > 粉片>血片。
[0040]3本發(fā)明揭示鹿茸醇提取物明顯促進(jìn)脂肪分解預(yù)防肥胖有兩個(gè)基本點(diǎn):第一脂肪合成的速度快是脂肪蓄積的直接原因，因此要控制脂肪合成，我們所能做到的只有通過飲食，這就是限食。其次脂肪分解速度下降不會(huì)引起肥胖，但是分解速度上升，例如增加運(yùn)動(dòng)促進(jìn)脂肪分解或者采用藥物干預(yù)促進(jìn)脂肪分解。鹿茸醇提取物對脂肪分解的作用依次是臘片>粉片>血片。
[0041]4本發(fā)明揭示了次黃嘌呤具有抑制胰脂肪酶和促進(jìn)腎上腺素誘導(dǎo)的離體脂肪組織分解活性，體外實(shí)驗(yàn)表明次黃嘌呤具有抗肥胖作用。
[0042]5本發(fā)明利用HPLC方法分析了鹿茸各組切片中次黃嘌呤的含量。
[0043]6本發(fā)明揭示鹿茸醇提取物能明顯促進(jìn)鹽酸腎上腺素誘導(dǎo)的離體脂肪組織分解；動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)表明鹿茸具有減肥作用，能減少腎周及子宮周圍脂肪，降低血清甘油三脂、總膽固醇、低密度脂蛋白(LDL-C)水平等作用。
[0044]本發(fā)明提供了一種具有抗肥胖作用的鹿茸的提取物的制備方法。本發(fā)明揭示鹿茸具有顯著的抗肥胖的作用。它能夠抑制體重增加，起到預(yù)防和治療肥胖疾病的作用。
[0045]本發(fā)明進(jìn)一步公開了鹿茸在抗肥胖藥品食品中的應(yīng)用。
[0046]本發(fā)明可以用在抗肥胖類藥品食品可接受的載體中。
[0047]本發(fā)明的積極效果在于:
鹿茸具有提高人體免疫力、促進(jìn)造血功能、促進(jìn)傷口愈合、改善心血管系統(tǒng)，增強(qiáng)性功能、延年益壽、補(bǔ)血養(yǎng)顏、強(qiáng)身健體的作用。本發(fā)明鹿茸加工采用傳統(tǒng)鹿茸加工與現(xiàn)代技術(shù)結(jié)合的方法，尤其對鹿茸蠟片、粉片與血片進(jìn)行了定量劃分，并揭示它們的胰脂肪酶抑制活性與脂肪分解作用有很大差異。
[0048]應(yīng)用鹿茸醇提取物，使得鹿茸提取物中含有鹿茸的有效成分。該鹿茸提取物具有抗肥胖的作用，可以在藥品食品的制備中起到抗肥胖的作用。該鹿茸提取物有能夠有效的抑制胰脂肪酶的活性，促進(jìn)鹽酸腎上腺素誘導(dǎo)的離體脂肪組織分解；鹿茸抑制脂肪的增加，減少腎周及子宮周圍脂肪，降低甘油三脂、總膽固醇、低密度脂蛋白(LDL-C)水平等作用，應(yīng)用在藥品食品中具有抗肥胖的作用。
[0049]實(shí)驗(yàn)例一鹿茸加工方法及鹿茸提取物的制備方法
I鹿茸加工方法:取新鮮二杠鹿茸用2%堿水洗刷茸表，將其表面的不潔物洗去，并排除血液，將鹿茸浸入沸水中煮炸，第一個(gè)循環(huán)每次沸水中煮炸30秒，然后置冰箱中4分鐘放涼，再次煮炸，放涼，如此重復(fù)10次，煮炸結(jié)束后，通風(fēng)吹干，然后于烘箱(70-80度)中烘烤3h，第一個(gè)循環(huán)結(jié)束。反復(fù)進(jìn)行4次循環(huán)，然后置風(fēng)干室中風(fēng)干(約30天)。即得到加工好的鹿鸞。
[0050]2將上述加工好的二杠茸按長度比劃分成蠟片、粉片、血片和骨片。按照鹿茸的長度蠟片占1/30，粉片占2/3，血片占1/5，骨片占1/10，分別截成4個(gè)不同部位，切片，備用。
[0051]3鹿茸提取物的制備方法:將上述鹿茸蠟片、粉片、血片分別粉碎過80目篩，精密稱取1g分別置于三角瓶中，加入10倍量75%乙醇，浸泡12h。然后用閃式提取器，室溫(1.4萬轉(zhuǎn))提取3次，每次lOmin，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，過濾，濾液真空冷凍干燥。分裝、包裝即得各鹿茸提取物。
[0052]實(shí)驗(yàn)例二鹿茸提取物中次黃嘌呤含量的比較測定
1.材料
鹿茸提取物:以實(shí)施例1中的方法加工而成二杠鹿茸切片為原材料(蠟片、粉片、血片)，甲醇(色譜純)、水(杭州娃哈哈有限公司)、乙醇(分析純)、次黃嘌呤純度> 99.0%，購自楷洋生物技術(shù)有限公司。
[0053]2.儀器
電子天平(十萬分之一)，德國sartorius公司；FS_2型高速分散勻質(zhì)機(jī)，江蘇金壇金城國盛實(shí)驗(yàn)儀器廠；離心機(jī)(GL-21LM)，湖南星科科學(xué)儀器有限公司；FW135粉碎機(jī)(帶100目篩)，天津泰斯特儀器有限公司‘EYELA系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，東京理化器械株式會(huì)社；KQ-250DB數(shù)控超聲清洗器，昆山超聲波儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(EYELA-DPE2110)，東京理化器械株式會(huì)社；高效液相色譜儀(Shimadzu LC-20A),日本島津公司。
[0054]3.方法 HPLC法測定鹿茸中次黃嘌呤含量 3.1色譜分析條件
選擇色譜柱:大連依利特 HypersilODS2 (250mmX4.6mm, 5Mm)。
[0055]柱溫:30°C 檢測波長:254nm 流動(dòng)相:甲醇-水10:90 流速:0.6mT ,/mi η 進(jìn)樣量:20 μ L
3.2樣品前處理
取蠟片、粉片、血片，備用。將上述鹿茸片分別粉碎過100目篩，精密稱取2g分別置于三角瓶中，加入75%乙醇，浸泡12h。室溫閃式(1.4萬轉(zhuǎn))提取3次，每次lOmin，離心，收集上清液，用蒸餾的方法回收乙醇，真空冷凍干燥即得鹿茸醇提物。置于_20°C保存，待用。
[0056]3.3供試品溶液制備
精密稱取上述方法制備的乙醇提取物50mg，用50%乙醇定容于50mL容量瓶中，0.45 μ m濾膜過濾，待高效液相分析。
[0057]3.4標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備
精密稱取次黃嘌呤10.0Omg,加50%乙醇50mL于10mL容量瓶中超聲使其溶解，待完全溶解后用50%乙醇定容。得到濃度為100 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，備用。
[0058]3.5線性關(guān)系考察
將上述濃度為ΙΟΟμ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液分別稀釋成濃度為50 μ g/mL，25 μ g/mL，10 μ g/mL, 5 μ g/mL次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品溶液，0.45 μ m濾膜過濾，按上述色譜條件進(jìn)行HPLC分析。以次黃嘌呤的峰面積y為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度X (μ g/mL)為橫坐標(biāo)，作線性回歸方程曲線，得到次黃嘌呤的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y = 27421 x + 1643762 ,R2 = 0.9997，說明次黃嘌呤在100μ g/mf5y g/ml范圍內(nèi)峰面積都有良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線附圖1所示。
[0059]3.6穩(wěn)定性考察
精密稱取次黃嘌呤20.0Omg,用50%乙醇超聲溶解并定容至200mL容量瓶中，配制成100 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，并按照上述色譜條件每隔3個(gè)小時(shí)用HPLC分析一次，計(jì)算12h內(nèi)次黃嘌呤所對應(yīng)的峰面積RSD值為0.147% (/?二5)。
[0060]3.6.1重復(fù)性考察
取同一鹿茸樣品5分，按照2.2.2節(jié)方法處理，并按照2.2.1節(jié)色譜條件分析平行測定，計(jì)算 RSD 值為 1.03% (/?=5)。
[0061]3.6.2加樣回收率考察
精密稱取已知次黃嘌呤含量(2.72%)的鹿茸提物6份，每份1.0g，準(zhǔn)確加入次黃嘌呤10mg，按照供試品溶液方法及相同色譜條件平行操作5次。計(jì)算次黃嘌呤的回收率為103.2%, RSD 為 1.27%。
[0062]3.6.3樣品含量測定
分別取整體鹿茸和不同部位鹿茸醇提物，按照上述方法制備供試品溶液并按照相同色譜條件進(jìn)樣，測定含量，結(jié)果如表I所示。
[0063]4.結(jié)果

【權(quán)利要求】
1.一種具有抗肥胖作用的鹿茸加工及其提取物的制備方法 具體方法: (1)鹿茸加工方法:取新鮮鹿茸將其表面的不潔物洗去，并排除血液，將鹿茸浸入沸水中煮炸，然后于烘箱(73-80°C)中烘烤2-4h，反復(fù)進(jìn)行多次循環(huán)，然后置風(fēng)干室中風(fēng)干，SP得到加工好的鹿茸； (2)鹿茸蠟片、粉片、血片和骨片的劃分:取上述加工的梅花鹿二杠茸去毛皮，劃分成蠟片、粉片、血片和骨片，以二杠茸為例，按照鹿茸的長度蠟片占1/60-1/30，粉片占1/2-2/3，血片占1/6-1/5，1/12-1/10，分別截成4個(gè)不同部位，切片，備用； (3)鹿茸提取物的制備方法:將上述鹿茸蠟片、粉片、血片分別粉碎過80目篩，精密稱取1g分別置于三角瓶中，加入10倍量75%乙醇，浸泡12h;然后用閃式提取器，室溫(1.4萬轉(zhuǎn))提取3次，每次lOmin，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，過濾，濾液真空冷凍干燥。分裝、包裝即得各鹿茸提取物；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所得的鹿茸醇提取物能夠有效地抑制胰脂肪酶的活性；鹿茸醇提取物對胰脂肪酶抑制率依次是蠟片>粉片>血片
3.根據(jù)權(quán)利要求1所得的鹿茸醇提取物明顯促進(jìn)脂肪分解；鹿茸醇提取物能明顯促進(jìn)鹽酸腎上腺素誘導(dǎo)的離體脂肪組織分解；鹿茸醇提取物對脂肪分解的作用依次是蠟片>粉片>血片；
4.根據(jù)權(quán)利要求1所制得的鹿茸具有減肥作用，能減少腎周及子宮周圍脂肪，降低血清甘油三脂、總膽固醇、低密度脂蛋白(LDL-C)水平等作用；
5.利用HPLC方法檢測并定量分析鹿茸各組切片中次黃嘌呤的含量；次黃嘌呤具有抑制胰脂肪酶和促進(jìn)腎上腺素誘導(dǎo)的離體脂肪組織分解的作用，體外實(shí)驗(yàn)表明次黃嘌呤具有抗肥胖作用，次黃嘌呤是鹿茸抗肥胖活性因子之一；
6.根據(jù)權(quán)利要求1所得的鹿茸可以制成抗肥胖膠囊、減肥片劑、減肥泡騰片劑、減肥顆粒劑、減肥保健茶等具有抗肥胖作用的藥品及功能性食品。
【文檔編號】A23F3/34GK104173379SQ201310193870
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2013年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月23日
【發(fā)明者】鄭毅男, 高暢, 張傳奇, 王全凱, 李慧萍, 胡同童, 李偉 申請人:鄭毅男