脫色飲料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種包含miRNA或植物提取物的、用來使皮膚(尤其是人體皮膚)脫色的飲料。本發(fā)明的主題也涉及用來制備植物提取物的方法，也稱作“提取”。本發(fā)明的主題也涉及根據(jù)本發(fā)明的脫色飲料用于使皮膚(尤其是人體皮膚)脫色的用途。
【專利說明】脫色飲料
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種包含miRNA或植物提取物的、用于使皮膚、尤其是人體皮膚脫色的飲料。
【背景技術(shù)】
[0002]皮膚的色素沉著尤其對女人而言是個美學(xué)問題，但相當(dāng)多的男人也對該問題變得愈發(fā)敏感。例如，不均勻的色素沉著可能以老年斑的形式或以色素沉著不規(guī)則性的形式出現(xiàn)。
[0003]三種色素通過它們的表面分布而造成皮膚顏色:胡蘿卜素、血紅素和黑色素。
[0004]在這三種色素中，黑色素是皮膚中最豐富的色素:它在皮膚中的含量水平和確切組成(真黑素或褐黑素)決定其顏色。在參與黑素生成的各種酶(包括酪氨酸酶)的幫助下，黑色素從酪氨酸產(chǎn)生。
[0005]為了使膚色均一，現(xiàn)在已知將脫色化妝品組合物應(yīng)用于皮膚，例如美白霜。這些乳霜尤其包含脫色活性劑。
[0006]這些活性劑的例子有氫醌、曲酸或壬二酸。
[0007]然而，依然需要提供更有效的和更易于施用的用于皮膚脫色的新型產(chǎn)品。
[0008]此外，考慮到消費者對無毒的、非免疫原性的和生物可降解的產(chǎn)品的不斷增加的需求，以及對于源自化學(xué)工業(yè)的化合物的日益嚴格的監(jiān)管約束，理想的是這些產(chǎn)品是天然來源的。
[0009]已經(jīng)證實，某些人類miRNA能夠減少參與黑色素生成的酶的黑色素產(chǎn)生(FR1161950)。
[0010]此外，aang等人已經(jīng)證實，小鼠中的某些基因的表達可以用植物miRNA來調(diào)節(jié)(Zhang 等.Exogenous plant MIR168a specifically targets mammalian LDLRAPI:evidence of cross-kingdom regulation by microRNA.CellRes.2012Jan ；22(1):107-26)。
[0011] 申請人:現(xiàn)已證實，當(dāng)用植物產(chǎn)生的人類miRNA的模擬物處理人黑色素細胞時，該細胞的黑色素水平下降；并且口服特定的植物miRNA改變了皮膚的人黑色素細胞中的黑色素水平。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]因此，本發(fā)明的主題是一種尤其針對人類皮膚的脫色飲料，其包含選自ppt-miR1039_5p、zma_miR528a*、osa-miR4128e_5p 以及 hsa_mir330 的至少一種植物miRNA。
[0013]詞語“微RNA(miRNA) ”理解為指長度約為21個核苷酸的非編碼RNA。已經(jīng)證實它們在基因表達的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，例如通過影響翻譯的水平或使目標mRNA失穩(wěn)定(Friedman RC Most mammalian mRNAs are conserved targets of microRNAs.Genome Res.2009,19:92-105)。
[0014]目前知道的miRNA被特別地記錄在www.mirbase.0rg中。
[0015]ppt-miR1039_5p 是存在于小立碗蘚(Physcomitrella patens)( 一種北半球常見的苔蘚物種)的整個植株(尤其是假根、葉、莖和分生組織)的提取物中的miRNA。miRNAppt-miR1039-5p 在mirbase 中的登記號是MIMAT0005148，且其序列為 5’-UCU UUG GGU CUUUCU CUC CUG-3’ (SEQ ID NO:1)。
[0016]zma_miR528a*是存在于玉米(Maize)的整個植株(尤其是根、葉、莖、分生組織、種子、花和果實)的提取物中的miRNA。miRNA zma_miR528a*在mirbase中的登記號是MIMAT0015362，且其序列為 5，-CCU GUG CCU GCC UCU UCC AUU-3，(SEQ ID NO:2)。
[0017]osa-miR1428e_5p是存在于水稻(Oryza sativa)( 一種原產(chǎn)于亞洲的稻物種)的整個植株(尤其是根、葉、莖、分生組織、種子、花和果實)的提取物中的miRNA。miRNAosa-miR4128e-5p 在 mirbase 中的登記號是 MIMAT0007784，且其序列為 5’ -AAU UCA CAGGCC CUA UCU UGU G_3’ (SEQ ID NO:3)。
[0018]miRNA hsa_mir330 是存在于人 RNA 中的 miRNA。miRNA hsa_mir330 在 mirbase 中的登記號是 M10000803，且其序列為 5’ -CUU UGG CGA UCA CUG CCU CUC UGG GCC UGU ⑶CUUA GGC UCU GCA AGA UCA ACC GAG CAA AGC ACA CGG CCU GCA GAG AGG CAG CGC UCUGCC C-3，(SEQ IDNO:4)。
[0019]本發(fā)明的飲料可以有利地包含占飲料總重量的0.0001 %到10%重量、優(yōu)選0.001%到1%重量比例范圍的所述miRNA。
[0020]本發(fā)明的主題也涉及一種包含至少一種選自小立碗蘚、玉米和水稻的植物提取物的脫色飲料。
[0021]本發(fā)明的飲料可以有利地包含三種植物提取物:小立碗蘚、玉米和水稻。
[0022]本發(fā)明的飲料可以有利地包含占飲料總重量的0.0001 %到10%重量、優(yōu)選
0.001%到I %重量比例范圍的所述植物提取物。
[0023]可用于本發(fā)明的植物提取物可以源自整個植株，尤其是根、葉、莖、分生組織、種子、花和果實。
[0024]所述提取物可以在任何溶劑的幫助下，優(yōu)選使用水性溶劑、醇溶劑或油溶劑得到。
[0025]詞語“水性溶劑”被理解為指主要含水的溶劑。
[0026]詞語“醇溶劑”被理解為指任選地在水的存在下，選自一元醇類(如甲醇、乙醇或異丙醇)以及二醇類(如丙二醇或二丙二醇)的溶劑。
[0027]詞語“油溶劑”被理解為指選自食用油的溶劑。
[0028]除前述miRNA之外，本發(fā)明的飲料也可以包含至少一種食品領(lǐng)域中的常用添加劑。
[0029]特別地，根據(jù)優(yōu)選實施方式，本發(fā)明的飲料可以包含，但不限于下述一種或多種添加劑:
[0030]-一種或多種甜味劑，例如葡萄糖和/或甜味劑替代品如阿斯巴甜、三氯蔗糖、山梨糖醇、其他多元醇或乙?；前匪徕洝Ｋ鎏鹞秳┖?或甜味劑替代品可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于飲料中；
[0031]-一種或多種質(zhì)構(gòu)劑和/或膠凝劑，例如黃原膠、角叉菜膠、果膠或纖維素化合物。所述質(zhì)構(gòu)劑和/或膠凝劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于飲料中；
[0032]-一種或多種營養(yǎng)物質(zhì)，例如礦物質(zhì)(Ca2+，Mg2+...)、維生素(A, B, C，D，K...)、益生菌、果汁和花蜜、椰汁，或抗氧化劑如石榴提取物。所述營養(yǎng)物質(zhì)可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于飲料中；
[0033]-一種或多種乳化劑。所述乳化劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于飲料中；
[0034]-一種或多種防腐劑，例如交聯(lián)酚類或殺生物劑(山梨酸酯、丙酸酯或苯甲酸酯)。所述防腐劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于飲料中；
[0035]-一種或多種酸，例如檸檬酸。所述酸可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于飲料中；
[0036]-一種或多種著色劑和/或食用調(diào)味劑。所述著色劑和/或食用調(diào)味劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于飲料中；
[0037]-一種或多種香料和/或口味增強劑。所述香料和/或口味增強劑可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于飲料中；
[0038]-一種或多種氨基酸和/或蛋白質(zhì)，例如膠原蛋白或彈性蛋白。所述氨基酸和/或蛋白質(zhì)可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于飲料中；
[0039]-咖啡因，其可以以飲料總重量的大約0.001%到30%重量的量存在于本飲料中；
[0040]-及其混合物，但不限于該列舉的種類。
[0041]上述添加劑的實例被特別引述于“食品與飲料添加劑一美國工業(yè)研究和對2014年、2019 年的預(yù)測(Freedonia 集團)(Food and Beverage Additives-US Industry Studywith Forecasts for2014&2019 (Freedonia group)) ” 中，其描述了通常用于食品工業(yè)的廣泛食品添加劑，這些食品添加劑適合被用作本發(fā)明的脫色飲料的附加成分。
[0042]本發(fā)明的主題也涉及本發(fā)明的脫色飲料用于使皮膚(尤其是人體皮膚)脫色的用途。
[0043]例如，本發(fā)明的飲料可以每天飲用一次或兩次，在飯前和/或飯后飲用。
[0044]該飲料可以以多種方式提供給消費者，例如易拉罐、瓶子或紙盒。
附圖簡要說明
圖1顯示了用ppt-miR1039-5p或?qū)φ誱iR處理的MNTl細胞的酪氨酸酶的蛋白質(zhì)印跡分析。
實施例
[0045]實施例1:ppt-miR1039_5p 的處理
[0046]材料和方法
[0047]細胞
[0048]在37°C以及5% 二氧化碳的潮濕氣氛中，在含10%胎牛血清(#10270，Gibco)、I %青霉素-鏈霉素(#15140, Gibco)和1% L-谷氨酰胺(#25030, Gibco)的RPMI1640培養(yǎng)基(#21875, Gibco)中培養(yǎng)人黑素瘤MNT-1色素細胞(Reish等，1995)。
[0049]miRNA的模擬物
[0050]第-1日，在六孔板(#353046，F(xiàn)alcon)的每個孔中接種4X IO5的MNT-1細胞。[0051]第零日，利用5 微升的 Lipofectamine2000 (#1668-019, Invitrogen),用 50 和IOOnM 的 miRNA 模擬物(ppt-miR1039_5p，Qiagen MSY0005148)轉(zhuǎn)染細胞。
[0052]第一日，更換培養(yǎng)基。
[0053]第三日，細胞被胰蛋白酶化，并以每個孔4 X IO5細胞接種。
[0054]第四日，用50nM的miRNA模擬物(見第零日)再次轉(zhuǎn)染細胞。
[0055]第五日，更換培養(yǎng)基。[0056]第七日，細胞被胰蛋白酶化，并以每個孔4 X IO5細胞接種。
[0057]第八日，一個六孔板用于RNA的細胞裂解，另一個用于蛋白質(zhì)的細胞裂解。
[0058]蛋白質(zhì)印跡
[0059]用75微升的放射免疫沉淀(RIPA)緩沖液(1% NP40、0.5%脫氧膽酸鈉、PBS中的
0.1% SDS)以及蛋白酶抑制劑(Roche)在4°C下從六孔板提取蛋白質(zhì)30分鐘。蛋白質(zhì)溶解產(chǎn)物在4°C下和以HOOOrpm離心30分鐘。上清液被轉(zhuǎn)移至預(yù)冷卻的1.5毫升微量離心管中，并被置于冰上。蛋白質(zhì)濃度用BCA蛋白分析法(ThermoFisher)測定。在10% SDS-聚丙烯酰胺凝膠上分離蛋白質(zhì)(50微克)，并在室溫下以100伏特下一小時將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到ProTron硝酸纖維素膜(Whatman)上。所述膜在緩沖Tris鹽溶液(SCT)中用5%的脫脂奶粉飽和。在0.5% (v/v)的Tween/SCT(TTBS)中用稀釋的第一抗體(見下)探測所述薄膜過夜，然后將所述薄膜在TTBS中洗滌三次，每次5分鐘。第二抗體在TTBS中以1: 10，000稀釋，并在室溫下應(yīng)用一小時。之后，所述薄膜在TTBS中洗漆三次,每次10分鐘,并利用AmershamHyperfiIm (GE Healthcare)以化學(xué)發(fā)光溶液 SuperSignal WestPico (Thermoscientific)顯影。
[0060]使用的第一抗體如下:
[0061]-山羊多克隆抗Tyr(C_19)，SC-7833 (Santa Cruz)，稀釋 1/1000
[0062]-小鼠單克隆抗β_肌動蛋白(CA_15)，A5441(Sigma)，稀釋1/7500
[0063]使用的第二抗體如下:
[0064]-抗小鼠IgG HRP, W402B (Promega)，稀釋 1/10000
[0065]-抗山羊IgG HRP, 705-035-147 (Jackson ImmunoResearch),稀釋 1/10000。
[0066]結(jié)果
[0067]應(yīng)注意到,添加50nM的ppt-miR1039_5p相對于對照分析降低了酪氨酸酶的量,且在加入IOOnM的ppt-miR1039-5p的情況下觀察到的酪氨酸量的更多下降(圖1)。這些結(jié)果顯示，ppt-miR1039-5p降低MNTl細胞中的酪氨酸酶量。
[0068]實施例2:脫色飲料的組合物
[0069]制得具有下述組成a)或b)的脫色飲料:
[0070]miRNA(ppt-miR1039_5p)0.1 %
[0071]組成a)
[0072]椰汁25%
重構(gòu)乳(reconstituted whey)25%
石才留和軟果汁5°/。
穩(wěn)定劑:果股0.1%
脧化劑:檸檬酸0.1%
水足量至100毫升
[0073]組成b)
[0074]
咖p非因80毫克
?；撬?000毫克
D-葡萄糖醛酸內(nèi)酯600毫克
維生素B21.5毫克
維生素B320.5毫克
維生素B55毫克
維生素B65毫克
維生素BI25微克水 足量至100毫升
【權(quán)利要求】
1.包含至少一種選自小立碗蘚(Physcomitrellapatens)、玉米(Maize)和水稻(Oryza sativa)的植物提取物的脫色飲料。
2.權(quán)利要求1的飲料，其特征在于其包含三種植物提取物:小立碗蘚、玉米和水稻。
3.權(quán)利要求1或2的飲料，其特征在于其包含占飲料總重量的0.0001%到10%重量比例范圍的所述植物萃取物。
4.權(quán)利要求1-3任一項的飲料，其特征在于所述植物提取物是水性提取物、醇提取物或油性提取物。
5.包含選自ppt-miR1039-5p、zma-miR528a*、osa-miR4128e-5p 和 hsa_mir330 的至少一種miRNA的脫色飲料。
6.權(quán)利要求5的飲料，其特征在于其包含占飲料總重量的0.0001%到10%重量比例范圍的所述miRNA。
7.權(quán)利要求1-6任一項的飲料，其特征在于其另外包含選自以下的至少一種添加劑:數(shù)種甜味劑、甜味劑替代品、質(zhì)構(gòu)劑、膠凝劑、營養(yǎng)物質(zhì)、乳化劑、防腐劑、酸、著色劑、食用調(diào)味劑、香料、口味增強劑、氨基酸、蛋白質(zhì)、咖啡因及其混合物。
8.權(quán)利要求1-7任一項的飲料用于使皮膚脫色的用途。
【文檔編號】A23L2/38GK103478826SQ201310240319
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年6月9日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月13日
【發(fā)明者】G·圣蒂尼, C·馬埃, L·拉呂, F·朗博夫 申請人:香奈兒香水美妝品公司, 居里研究所, 國家科學(xué)研究中心